Varizella-Zoster Virus

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1 Varizella-Zoster Virus VZV-Serologie und Serum-Liquor-Diagnostik von medac Kompetenz-Qualität-Kontinuität medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh GE Diagnostika Theaterstrasse 6 Telefon 04103/ Fax 04103/ D Wedel

2 VZV-Serologie von medac Bedeutung Krankheitsbilder Antikörperdiagnostik Das Varizella-Zoster-Virus (VZV) gehört zur Familie der Herpesviridae. Es besteht aus einem doppelsträngigen DNA-Genom, dem Nukleokapsid, dem Tegument und der Virushülle. Primärinfektionen (Varizellen) erfolgen in der Regel im Kindesalter. Bei immunkompetenten Patienten ist die Symptomatik der Primärerkrankung meist moderat. Bei Immunsupprimierten kann die Infektion zu ernsthaften Komplikationen wie ZNS-Symptomatik, Pneumonie und sekundäre bakterielle Infektionen führen. Die Seroprävalenz bei erwachsenen Personen liegt bei etwa 95%. Typisch für Varizella-Zoster-Viren ist, dass sie nach einer Primärinfektion lebenslang in den sensorischen Nervenganglien des Dorsalstammes persistieren und eine latente Infektion der neuronalen Zellen verursachen. Durch endogene Reaktivierung des Virus kann es daher zur Ausprägung des Sekundärkrankheitsbildes Herpes Zoster kommen. Varizellen (Windpocken) Komplikationen: - perinatale Varizellen-Infektion des Neugeborenen - kongenitale Varizellen-Infektion - Varizellen-Meningitis - Varizellen-Pneumonie Zoster (Gürtelrose) Komplikationen: - generalisierter Zoster bei Immunsupprimierten - postzosterische Neuralgie - Enzephalitis, Enzephalomyelitis - Zoster oticus mit Fazialisparese Die Diagnose der Varizellen und des Zoster erfolgt in erster Linie durch das typische klinische Bild. Atypische Krankheitsbilder bei Patienten mit Immundefizienz, bei Infektionen in der Schwangerschaft, bei ZNS-Erkrankungen und Pneumonien erfordern jedoch eine spezifische Labordiagnostik unter Berücksichtigung der VZV-Serologie. Während der Nachweis von VZV-IgM und -IgG eine Primärinfektion anzeigt, sind Reaktivierungen häufig durch VZV-IgA und einen deutlichen Anstieg des VZV-IgG charakterisiert. 2 Ziele von VZV-Antikörperbestimmungen bei immunkompetenten Patienten sind: Klärung der Immunität Überprüfung des Impferfolgs Bestätigung bei Verdacht auf Varizellen bzw. Zoster Abklärung von Infektionen mit ZNS-Beteiligung (Serum-Liquor-Diagnostik)

3 VZV-Serologie von medac Varizellen können durch Impfungen verhindert werden. Die Ständige Impfkommission (STIKO) empfiehlt die Varizellen-Schutzimpfung für alle Kinder, vorzugsweise im Alter von Monaten, und für Jugendliche ohne Varizellenanamnese. Darüber hinaus wird die aktive Immunisierung definierter Risikogruppen (u.a. seronegative Frauen mit Kinderwunsch, seronegative Patienten vor Organtransplantation bzw. immunsuppressiver Therapie) empfohlen. Die auf dem Markt befindlichen Impfstoffe sind hinsichtlich der Prävention einer VZV-Primärinfektion hocheffizient. - Der VZV-IgG-ELISA PKS medac ist ein Nachweissystem zur quantitativen Bestimmung von spezifischen IgG-Antikörpern. Prophylaxe medac- Testvorteile - Durch Verwendung von Testkontrollen, die am internationalen Referenzpräparat der WHO kalibriert sind, ist es möglich, eine Bewertung des spezifischen Anti-VZV-IgG-Spiegels in miu/ml vorzunehmen. - Der VZV-IgA-ELISA PKS medac ist ein Nachweissystem zur quantitativen Bestimmung von spezifischen IgA-Antikörpern (mau/ml). - Durch eine IgG-/RF-Absorption für alle Proben vor IgA-Bestimmung werden Interferenzen mit hohen IgG-Titern und Rheumafaktoren vermieden. - Bei dem VZV-IgG-ELISA PKS medac und dem VZV-IgA-ELISA PKS medac wurde das Prinzip der Einpunktquantifizierung umgesetzt. - Der VZV-IgG-ELISA PKS medac und der VZV-IgA-ELISA PKS medac sind für die Serum-Liquor-Diagnostik evaluiert. Die Tests ermöglichen den Nachweis einer VZV-spezifischen intrathekalen Antikörpersynthese über die Ermittlung eines erregerspezifischen Antikörperindex in Serum-Liquor- Paaren. - Der VZV-IgM-ELA Test PKS medac basiert auf dem μ-capture Prinzip und arbeitet mit einem Enzym-markierten Antigen. Diese Testkonzeption gewährleistet einen hochspezifischen und sensitiven IgM-Nachweis. - Die Tests sind gemäß der europäischen Richtlinie 98/79 EG über In-vitro- Diagnostika CE-zertifiziert. Die medac-tests erfüllen alle Anforderungen an eine zuverlässige Routinediagnostik. Anforderungen - Einfaches Handling - einheitliche Abarbeitung und Inkubationsbedingungen - Gebrauchsfertige Reagenzien - Brechbare Mikrotiterstreifen (Einzelkavitäten) - Einsetzbar auf offenen Mikrotiterplatten-Automatensystemen - Pipettierkontrollsystem (Indikatorsystem zur Vermeidung von Pipettierfehlern) 3

4 VZV-Serologie von medac Sensitivität und Spezifität Sensitivität und Spezifität der medac-tests wurden im Vergleich zur Vorbefundung aus der diagnostischen Routine von Referenzlaboren ermittelt und sind in den folgenden Neun-Felder-Tafeln dargestellt: VZV-IgG Vorbefundung (n=142) medac negativ grenzwertig positiv negativ grenzwertig positiv Sensitivität: 98,9% Übereinstimmung: 99,3% Spezifität: 100% VZV-IgM Vorbefundung (n=150) medac negativ grenzwertig positiv negativ grenzwertig positiv 1* 0 45 * Probe eines Patienten mit gesicherter frischer VZV-Infektion Sensitivität: 90,0% Übereinstimmung: 96,0% Spezifität: 99,0% VZV-IgA Vorbefundung (n=161) medac negativ grenzwertig positiv negativ grenzwertig positiv Sensitivität: 98,1% Übereinstimmung: 97,5% Spezifität: 98,2% Die medac-tests ermöglichen eine hochspezifische und sensitive VZV-Antikörper-Bestimmung und gewährleisten in Kombination eine zuverlässige Interpretation des VZV-Serostatus. 4

5 Kurz-Arbeitsanleitung für: VZV-IgM-ELA Test PKS medac VZV-IgA-ELISA PKS medac VZV-IgG-ELISA PKS medac Waschpuffer 1: ml Kat.-Nr. 101-PKS Kat.-Nr. 102-PKS Kat.-Nr. 103-PKS VZV-IgM-ELA 3ml Ansatz Waschpuffer (10x) 900 ml Aqua ad iniectabilia Antigenverdünnungspuffer 3,0 ml ELA Probenverdünnung für Serum: IgM/-IgG für Serum- Liquor: IgG Probenverdünnung für Serum: IgA für Serum- Liquor: IgA +10 Vol% +10 Vol% IgM = 1:100 IgG = 1:200 Serum 1:200 1:1000 Liquor 1:5 1:200* Probenverdünnungspuffer Probenverdünnungspuffer Probenverdünnungspuffer RF- Absorbens Serum 1:200* 1:880 Probenverdünnungspuffer RF- Absorbens Liquor 1:5 * Endverdünnung 1:220 Endverdünnung 1:5,5 IgG, IgA: Kontrollen, Kalibrator, verdünnte Proben IgM: Kontrollen, verdünnte Proben Inkubation bei 37 C, feuchte Kammer Platte 3 x waschen je 200 μl Testablauf je 50 μl 60 min entleeren und ausklopfen IgM: ELA je 50 μl* IgA: Konjugat je 50 μl* IgG: Konjugat je 50 μl* Inkubation bei 37 C, feuchte Kammer 60 min * Bei automatisierter Abarbeitung 60 μl Platte 3 x waschen je 200 μl TMB-Substrat je 50 μl Inkubation bei 37 C, im Dunkeln, feuchte Kammer 30 min entleeren und ausklopfen Stopplösung (0,5 M H2SO 4) je 100 μl Photometrieren O.D. 450 nm Referenz nm 5

6 VZV-Serologie von medac Auswertung Die photometrische Auswertung erfolgt bei 450 nm als Messwellenlänge ( nm als Referenzwellenlänge). Die OD des Leerwertes wird von allen OD-Werten subtrahiert. VZV-IgG/ VZV-IgA Der OD-Mittelwert der Negativen Kontrolle muß < 0,150 betragen. Der OD-Mittelwert des Kalibrators muß oberhalb des Grenzwertes und der Unit-Wert der Positiven Kontrolle muß innerhalb des Sollwertbereiches gemäß chargenspezifischem Datenblatt liegen. Korrektur der Meßergebnisse: OD korrigiert OD-Sollwert des Kalibrators = OD-Meßwert des Kalibrators Quantifizierung der Meßergebnisse: a VZV-IgG Konzentration miu/ml = b / -1 OD korrigiert Cut-off = 180 miu/ml xod gemessen ( ) Grenzbereich = Cut-off 10% ( miu/ml) VZV-IgA Konzentration mau/ml = b / Cut-off = 250 mau/ml a ( -1 OD korrigiert ) Grenzbereich = Cut-off 10% ( mau/ml) VZV-IgM Der OD-Mittelwert der Negativen Kontrolle muß < 0,150 betragen. Der OD-Mittelwert der Positiven Kontrolle muß > 0,600 betragen. Cut-off = OD-Mittelwert der Negativen Kontrolle + 0,140 Grenzbereich = Cut-off 10% Interpretation 6 Proben mit Werten unterhalb des Grenzbereiches werden als bewertet. Proben mit Werten innerhalb des Grenzbereiches werden als GRENZWERTIG bewertet. Werte im Grenzbereich sollten kontrolliert werden, indem nach 14 Tagen eine zusätzliche Patientenprobe entnommen wird, die zusammen mit der ersten Probe auf eine Titerbewegung untersucht wird. Proben mit Werten oberhalb des Grenzbereiches werden als bewertet. NEGATIV POSITIV

7 VZV-Serum-Liquor-Diagnostik Berechnung der miu-werte wie unter VZV-IgG beschrieben. Auswertung Berechnung der mau-werte wie unter VZV-IgA beschrieben. Berechnung des erregerspezifischen IgG- bzw. IgA-Quotienten (Q ): spez Q = spez miu/mau Liquor x Verdünnung Liquor miu/mau Serum x Verdünnung Serum Berechnung des Antikörperindex (AI): 1. AI = Q / Q (für Q < Q ) spez ges ges lim 2. AI = Q / Q (für Q > Q ) spez lim ges lim Q = 0,93 x Q +6x10-1,7x10 fürigg lim Q = 0,77 x Q + 23 x 10-3,1 x 10 für IgA lim alb alb AI-Werte von 0,6-1,3 gelten als normal. Interpretation AI-Werte > 1,3 und 1,5 gelten als grenzwertig. AI-Werte < 0,6 weisen auf analytische Fehler hin und sind nicht interpretierbar. Der pathologische Bereich ist festgelegt mit AI > 1,5. Erhöhte AI allein sind kein sicherer Beweis für die akute Phase einer infektiösen ZNS-Erkrankung, da Antikörper auch intrathekal über längere Zeiträume persistieren und polyspezifische ZNS-eigene Antikörpersynthesen vorkommen können. Gegebenenfalls ist eine signifikante Änderung des AI-Wertes über die Bestimmung nachfolgend entnommener Serum-Liquor-Paare für die Beurteilung einer ZNS- Infektion sinnvoll. 7

8 Literatur de Ory, F. et al.: European seroepidemiology network 2; assays for seroepidemiology of varicella zoster virus. J. Clin. Virol. 36, (2006) Standardisation of Gross, G., Doerr, H. W. (Hrsg.): Herpes Zoster. Monogr. Virol. Vol. 26, 13-19, Karger Basel (2006) Heininger, U., Seward, J.F.: Varicella. Lancet 368, (2006) Mertens, Th., Haller, O., Klenk, H.-D. (Hrsg.): Diagnostik und Therapie von Viruskrankheiten. Urban & Fischer Verlag, (2004) Reiber, H., Felgenhauer, K.: Protein transfer at the blood cerebrospinal fluid barrier and the quantitation of the humoral immune response within the central nervous system. Clin Chim Acta, (1987) Reiber, H.: Liquordiagnostik, in: Klinische Neurologie. Berlit, P. (Hrsg.): Springer Verlag, Heidelberg, (1999) Sauerbrei, A., Wutzler, P.: Herpes simplex and varicella zoster virus infections during pregnancy: current concepts of prevention, diagnosis and therapy. Part 2: Varicella-zoster virus infections. J. Clin. Microbiol. 44 (9), (2006) Wutzler, P., Färber, J., Wagenpfeil, S. Bisanz, H., Tischer, A.: Seroprevalence of varicella-zoster virus in the German population. Vaccine 21, (2002) 8 Stand 03/2011 VZV 1