Institut für Parasitologie der Vetsuisse und der Medizinischen Fakultät der Universität Bern (IPB) VADEMECUM

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1 Institut für Parasitologie der V und der Medizinischen Fakultät der Universität B ()

2 Seite 2 von 21 vademecum EV Inhaltsverzeichnis 1. Organisation Organigramm des Instituts für Parasitologie Anschrift Dienstzeiten Telefonverzeichnis Kurierdienst von Versandmaterial und Untersuchungsantragsformularen Annahme von Untersuchungsmaterial / Terminvereinbarungen Allgemeine Informationen Rechnungswesen Qualitätskontrolle Status und Aufgaben im Bereich "Öffentliche Gesundheit" Allgemeine Richtlinien Entnahme von Untersuchungsmaterial Untersuchungsformulare / Kennzeichnung Versandmaterial / Transport Ablehnung einer Untersuchung Berichterstattung und Rechnungsstellung Aufbewahrung von Untersuchungsmaterial Rückmeldungen durch Kunden Humanparasitologie über Parasitenkultur DNA-Nachweis Antikörper-Nachweis (Serologie) Veterinärparasitologie Indirekte und direkte Nachweisverfahren bei einzelnen Erkrankungen Erläuterungen zu einzelnen Untersuchungsmethoden Antikörpachweis (Serologie) Antigennachweis DNA-Nachweis Kultur Messgenauigkeit der Prüfmethoden Dokumentencode: vademecum Version: 006 Ersetzt Dokument: vademecum2009 Dieses Dokument unterliegt dem Änderungsdienst: x Ja Nein Erstellt Geprüft Freigegeben durch: CF NM BG am:

3 Seite 3 von 21 vademecum EV 1. Organisation 1.1. Organigramm des Instituts für Parasitologie Institutsleitung Sekretariat Informatikdienste Technischer Dienst Post/Botendienste QS-Leitung Lehre Forschung Diagnostik Laborleitung Humanmedizin Laborleitung Veterinärmedizin Laborpersonal Laborpersonal Schnittstellen akkreditierter Arbeitsbereich STS-Nummer: 175; ISO Anschrift Institut für Parasitologie der V und der Medizinischen Fakultät der Universität B Länggass-Strasse 122 CH-3012 B TEL (Sekretariat, nur nachmittags) FAX Intet URL

4 Seite 4 von 21 vademecum EV 1.3. Dienstzeiten Montag Freitag / Uhr 1.4. Telefonverzeichnis Institutsleitung Fax Institutsleitung Sekretariat (nur nachmittags bedient) Fax Sekretariat Diagnostik Veterinärparasitologie Diagnostik Medizinische Parasitologie Rechnungswesen Kurierdienst Gemeinsam mit den Instituten für Veterinärbakteriologie und Tierpathologie ist die Veterinärdiagnostik des Instituts für Parasitologie an einen Kurierdienst angeschlossen. Dieser bedient Tierarztpraxen, die Proben an die drei Institute senden wollen. Um eine Probe anzumelden, wenden Sie sich bitte direkt an den Kurier: Meier Express, Tel: von Versandmaterial und Untersuchungsantragsformularen Untersuchungsantragsformulare können schriftlich oder telefonisch unter den Numm (Veterinärparasitologie) oder (Med.-Parasitologie) beim Institut für Parasitologie bestellt und gratis bezogen werden. Altativ können sie unter der Rubrik Diagnostik unter als PDF-Dokument geladen werden. Das Institut für Parasitologie stellt auf Anfrage kostenlos SAF-Lösungen in Versandbehält zur Verfügung. Ebenfalls erhältlich sind Medien zum Versand von Leishmania- Untersuchungsmaterial. Bedingt durch die beschränkte Haltbarkeit des Leishmania-Mediums (max. 6 Wochen) ist eine Bestellung erst kurz vor Probenentnahme empfehlenswert. Anfragen sind an oben genannte Stellen zu richten Annahme von Untersuchungsmaterial / Terminvereinbarungen Zustellung von Untersuchungsmaterial per Post an folgende Adresse: Institut für Parasitologie Universität B Diagnostik Postfach 8466 CH 3001 B

5 Seite 5 von 21 vademecum EV Abgabe von Untersuchungsmaterial direkt an Mitarbeiter des Instituts für Parasitologie, Länggass-Strasse 122 (siehe Hinweisschilder beim Eingang und im Gebäude) Zugang via Bremgartenstrasse Bremgartenstrasse Länggass-Strasse 122 Zugang via Busendstation Linie 12 Länggass-Strasse Tierspital-int kann die Zusendung von diagnostischem Untersuchungsmaterial (inkl. Untersuchungsantrag) mittels Rohrpost oder durch Ablage im Proben-Kühlschrank erfolgen. Für spezielle Analysen oder umfangreiche Sammelproben erbitten wir eine vorgängige telefonische Anmeldung bzw. Terminvereinbarung Allgemeine Informationen Informationsblätter zu diversen Parasitosen (Veterinärparasitologie und Med.-Parasitologie) sind auf Anfrage erhältlich ( bruno.gottstein@v.unibe.ch) Rechnungswesen Die Preise für humanparasitologische Untersuchungen richten sich nach der Eidgenössischen Analysenliste (AL). Unsere ZSR-Nummer (Zahlstellennummer, Konkordatsnummer, Rechnungsstellummer) der KSK/CAMS ist Y Qualitätskontrolle Die human- wie auch die veterinärparasitologische Diagnostik sind unter der STS-Nummer 175 akkreditiert nach ISO Alle MitarbeiterInnen sind bestrebt, durch korrekte Laborbefunde zur ärztlichen Diagnose oder Beurteilung des Therapieerfolges beizutragen. Die dazugehörende Qualitätssicherung und Qualitätsverbesserung erfolgt auf verschiedenen Ebenen:

6 Seite 6 von 21 vademecum EV Methodische Qualität: Erfahrung und permanente Weiterbildung der Verantwortlichen, kontrollierter Einsatz bewährter Methoden, laufende Evaluierung neuer Technologien sowie Investition in modste Analysengeräte Analytische Qualität: Inte und exte Überwachung (Audits) der Präzision und Richtigkeit sowie EDV-unterstützte Validierung von Laborresultaten Ringversuche: Das Institut nimmt regelmässig an intationalen Ringversuchen zur Leistungs- und Qualitätskontrolle teil. 2. Status und Aufgaben im Bereich "Öffentliche Gesundheit" Der Diagnostiksektor des Instituts für Parasitologie erfüllt neben der normalen diagnostischen Tätigkeit die Funktion eines nationalen Referenzl für folgende Tierseuchen: Tritrichomonose des Rindes Beschälseuche des Pferdes Toxoplasmose Neosporose Trichinellose Besnoitiose Nebst diverser diagnostischer Tests (s. 5.2) bieten wir für diese Erkrankungen Beratung im Rahmen einer potentiellen Tierseuchenproblematik in Funktion unserer Referenzlabortätigkeit an (Tel: ). Bezüglich humanparasitologischer Diagnostik ist das ein durch das BAG anerkanntes Labor für Serologie und Parasitologie. 3. Allgemeine Richtlinien 3.1. Entnahme von Untersuchungsmaterial Untersuchungsmaterial sollte fachlich korrekt durch geschultes Personal entnommen werden. Grundsätzlich sind Kontaminationen zu vermeiden und das Material sollte so frisch wie möglich an das Institut für Parasitologie gelangen. Die benötigten Materialien für die einzelnen Untersuchungen können aus den Kapiteln 4 und 5 ersehen werden. Zu einzelnen Parasiten (-Gruppen) bietet das Institut für Parasitologie Merkblätter an, welche auch Informationen zur Probenentnahme enthalten. Diese können über das Institut bezogen werden (siehe 1.8.).

7 Seite 7 von 21 vademecum EV 3.2. Untersuchungsformulare / Kennzeichnung Das eingesandte Untersuchungsmaterial muss einwandfrei identifiziert werden können und zu diesem Zweck wasserfest derart beschriftet sein (bitte Blockschrift), dass es dem Untersuchungsantrag eindeutig zugeordnet werden kann. Das Antragsformular muss folgende Angaben enthalten: - eindeutige Identifikation des Patienten - Besitzer (Veterinärparasitologie) - Einsender, Arzt, Tierarzt (Name, Adresse, Telefonnummer, Telefax, ggf. ) - Datum der Probenentnahme - Materialart (evt. Entnahmeort) - Anamnese / Verdachtsdiagnose - Vorbehandlungen - Untersuchungsauftrag Folgende Antragsformulare werden aktuell verwendet: Veterinärparasitologie Med.-Parasitologie blau lachsrot Wir bitten, die Formulare in Druckschrift vollständig auszufüllen. Fehlende Angaben können zu einer Verzögerung der Untersuchung führen. Antragsformulare (Deutsch und Französisch) können auch als pdf-dokument aus unserer Homepage heruntergeladen werden (siehe 1.6) Versandmaterial / Transport Untersuchungsmaterial ist sauber und dicht in geeignete bruchsichere Behältnisse zu verpacken und mit einer eindeutigen Identifikation zu versehen. Erfolgt der Versand per Post oder Botendienst, so sollte das Material so schnell wie möglich am Institut eintreffen (A-Post). Müssen Proben gelagert werden, so sollte dies bei Temperaturen unter 10 C (jedoch über 0 C) geschehen. Material für Kulturen muss immer unmittelbar nach Probenentnahme an das Institut für Parasitologie weitergeleitet werden. Der Versand sollte daher, wenn möglich, nicht kurz vor oder über das Wochenende erfolgen Ablehnung einer Untersuchung In folgenden Fällen wird Untersuchungsmaterial zurückgewiesen: Proben mit ungenauer oder fehlender Kennzeichnung (u.u. telefonische Abklärung) ausgelaufene Materialien in undichten oder zerbrochenen Gefässen Eingetrocknetes oder ungünstigen Transportbedingungen ausgesetztes Material kein klarer Untersuchungsauftrag (u.u. telefonische Abklärung) Einsendung von humanparasitologischem Material durch Privatpersonen Die Meldung erfolgt unverzüglich telefonisch an den Einsender der entsprechenden Probe.

8 Seite 8 von 21 vademecum EV 3.5. Berichterstattung und Rechnungsstellung Die Berichterstattung erfolgt an den Einsender des Materials und/oder an amtliche Behörden bzw. die medizinisch verantwortliche Fachperson. Der definitive Prüfbericht wird schriftlich nach Freigabe durch den verantwortlichen Laborleiter via A-Post (oder inte Post Tierspital) übermittelt. Auf Wunsch kann die Berichterstattung auch per oder Fax erfolgen (sof ein Datenschutz bezüglich humanmedizinischer und tierseuchenrelevanter Daten garantiert werden kann). Telefonische Resultatübermittlungen werden immer von einem schriftlichen Prüfbericht ergänzt, und erfolgen nur an uns bekannte Vertrauenspersonen, evt. nach Rückruf (Datenschutz). Prüfberichtskopien an Drittpersonen sind möglich und müssen klar im Antragsformular angefordert werden. Änderungen oder Ergänzungen des Prüfberichts erfolgen in Form eines korrigierten oder geänderten Prüfberichts. Alle MitarbeiterInnen des Instituts unterstehen der medizinischen Schweigepflicht. Prüfberichte werden mindestens 10 (Med.-Parasitologie) bzw. 5 Jahre (Veterinärparasitologie) aufbewahrt. Die Rechnungsstellung erfolgt grundsätzlich an den Einsender oder direkt an den Patienten (Humanparasitologie). Ausnahmsweise kann, aufgrund eines Antrages durch den Einsender, auch Rechnung an Dritte gestellt werden. Dieser Antrag muss als entsprechender Vermerk auf dem Antragsformular ersichtlich sein Aufbewahrung von Untersuchungsmaterial Grundsätzlich wird folgendes Untersuchungsmaterial während mindestens 3 Jahren aufbewahrt: Seren und andere Körperflüssigkeiten für immunologische Nachweisverfahren Material für DNA-Nachweis Das übrige Untersuchungsmaterial wird nach Abschluss der Analyse entsorgt. Ausnahmen können Proben darstellen, die von wissenschaftlichem oder didaktischem Interesse sind. Diese werden ebenfalls aufbewahrt, und können - unter Wahrung der Vertraulichkeit - zu Unterrichtszwecken verwendet werden Rückmeldungen durch Kunden Einsender von Prüfmaterial haben die Möglichkeit, in Prüfungsdokumentationen Einsicht zu nehmen. Dies ist jedoch nur im Rahmen der Wahrung der Vertraulichkeit gegenüber Dritten zu gewährleisten. Reklamationen oder Beschwerden können mündlich oder schriftlich eingereicht werden. Wird ein Beschwerdeverfahren am Institut für Parasitologie eingeleitet, so wird dieses immer schriftlich dokumentiert. Fachliche Fragen oder Beschwerden sind grundsätzlich direkt an die veterinärparasitologische oder medizinische Diagnostik oder an den Institutsleiter zu richten. Rückmeldungen bezüglich Rechnungen werden an das Rechnungsbüro weitergeleitet.

9 Seite 9 von 21 vademecum EV 4. Humanparasitologie 4.1. Stuhluntersuchungen (Humanparasitologie): Erreger Verfahren Material Methode Darmprotozoen (ohne Kryptosporidien!), Eier von Bandwürm (Zestoden ausser Diphyllobothrium) und Rundwürm (Nematoden) Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF 1) oder 10% Formalinlösung Stuhlausstrich oder Flotation Kryptosporidien, Cyclospora Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF 1) oder 10% Formalin-Lösung Stuhlausstrich, modifizierte Ziehl-Neelsen-Färbung Mikrosporidien Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF 1) oder 10% Formalin-Lösung Stuhlausstrich, Trichrome- Färbung nach Weber 2) Protozoen Stuhl (1g) nativ oder fixiert in 10ml SAF 1) oder 10% Formalin-Lösung SAF Wurm-Eier von Trematoden (Schistosomen, Leberegel etc.) und Diphyllobothrium Stuhl (10-20g) nativ oder fixiert in 10ml SAF 1) oder 10% Formalin-Lösung Sedimentation Eier von Oxyuren Perianalabstrich, Klebestreifenmethode Mikroskopie Larven von Strongyloides und Hakenwürm Stuhl (10-20g) nativ, ungekühlt Larvenkultur oder Baermann-Trichter Urinuntersuchung (Humanparasitologie): Mikrosporidien 24h-Urinsediment, nativ ohne Zusatz Ausstrich des Sediments und Trichrome-Färbung nach Weber 2) Eier von Schistosomen 24h-Urinsediment, nativ ohne Zusatz Mikroskopie 1) 2) SAF-Lösung kann von der Prüfstelle bezogen werden Methode nicht akkreditiert

10 Seite 10 von 21 vademecum EV Nachweis von Blutparasiten (Humanparasitologie): Erreger Verfahren Material Methode Mikrofilarien EDTA-Blut (5-10ml per Express schicken), Zeitpunkt der Blutentnahme: In der Nacht bei Verdacht auf Befall mit Wuchereria bancrofti, am Tag bei vermuteter Infektion mit Brugia malayi, Mansonella perstans oder Loa loa Blutausstrich und "Dicker Tropfen mit Giemsa- Färbung, Difil-Test Plasmodien (Malaria) und andere intrazelluläre Protozoen EDTA-Blut (5-10ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken), Blutentnahme sollte vor Beginn einer Malaria-Therapie erfolgen Blutausstrich und "Dicker Tropfen mit Giemsa- Färbung Trypanosomen EDTA-Blut (5-10ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken) Blutausstrich und "Dicker Tropfen mit Giemsa-Färbung Nachweis von Parasiten in Liquor (Humanparasitologie): Trypanosomen (bei Verdacht auf zerebrale Form) Liquor nativ (0.5ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken) Sedimentausstrich mit Giemsa-Färbung Freilebende Amöben (Naegleria, Acanthamoeba) Liquor nativ (0.5ml, nach Voranmeldung sofort überbringen oder per Express schicken) real-time PCR 4) Nachweis von Parasiten in Konjunktival-/Linsenflüssigkeit (Humanparasitologie): Acanthamöben Konjunktival-, Linsenflüssigkeit, nativ real-time PCR 4) Methode für Naegleria nicht akkreditiert

11 Seite 11 von 21 vademecum EV Nachweis von Parasiten in Exzisat/Biopsie- und Operationsmaterial (Humanparasitologie): Für dringende Fälle: Tel. Anmeldung über Nummer Erreger Verfahren Material Methode Scabies (Krätze), Sandfloh und Arthropodenlarven Hautbiopsiematerial oder Resektate aus der Haut. Mikroskopie, evt. Histologie Echinokokken Parasiten-Identifizierung Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis) nativ. Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Alles Material zuvor nicht einfrieren! (per Express schicken) Mikroskopie, ggf. direkte Immunfluoreszenz 2) PCR Amoebom (Entamoeba histolytica) Leberabszesspunktat (randständig) nativ (>0.5ml) und zusätzlich fixiert (>0.5ml) mit SAF 1) Mikroskopie PCR 5) Bestimmung von Endoparasiten (Humanparasitologie): Bandwürmer (Zestoden) (z.b. Proglottiden), Saugwürmer (Trematoden), Rundwürmer (Nematoden), Arthropodenlarven Exemplare nativ oder in physiologischer Kochsalzlösung Mikroskopie, evt. PCR Bestimmung von Ektoparasiten (Humanparasitologie): Ektoparasiten Exemplare nativ od. fixiert 70%EtOH Mikroskopie 4.2. über Parasitenkultur (Humanparasitologie) Nur nach Vorankündigung: Leishmanien über Kultur Knochenmarkaspirat (nativ in Heparin oder EDTA), Lymphknotenpunktat (alle >0.2ml), Hautbiopsie, (alles nativ, nicht gefroren!); Heparin oder EDTA-Blut (1ml) bei Immungeschwächten; Material kann auch in Leishmanien- Kulturmedium 3) geschickt werden. in vitro Kultivierung 2) 3) 5) Methode nicht akkreditiert Das Kulturmedium kann von der Prüfstelle nach Voranmeldung bezogen werden. Unterauftrag (Test wird im akkreditierten Labor des Schweizerischen Tropen- und Public Health Instituts durchgeführt)

12 Seite 12 von 21 vademecum EV 4.3. DNA-Nachweis Test auf einzelne Parasiteninfektionen (Humanparasitologie): Erreger Verfahren Material Methode Leishmanien DNA-Nachweis Knochenmarkaspirat (nativ in Heparin oder EDTA), Lymphknotenpunktat (alle >0.2ml), Hautbiopsie, (alles nativ, nicht gefroren!); Histologische Präparate Heparin oder EDTA-Blut (1ml) bei Immungeschwächten Histologische Präparate Toxoplasma DNA-Nachweis Plazenta (10-50g), Fruchtwasser, Liquor, Bronchiallavage (alle 0.5ml), Augenkammerwasser (>100µl), Hirngewebe (alle nativ); Heparin oder EDTA-Blut (1ml) (bei Immungeschwächten) Histologische Präparate real-time PCR real-time PCR Freilebende Amöben (Naegleria, Acanthamoeba) DNA-Nachweis Konjunktival- und Linsenflüssigkeit, nativ; Liquor nativ (0.5 ml); Hirngewebe nativ real-time PCR 4) Test auf einzelne Parasiteninfektionen (Humanparasitologie): Echinokokken/ Taenia sp. Art-Differenzierung durch spezifischen DNA- Nachweis Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis) nativ, Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Histologische Präparate. Alles Material zuvor nicht einfrieren! (per Express schicken) PCR Trichinella sp. Art-Differenzierung durch spezifischen DNA- Nachweis Muskelbiopsie PCR 4) Methode für Naegleria nicht akkreditiert

13 Seite 13 von 21 vademecum EV 4.4. Antikörper-Nachweis (Serologie) Test auf einzelne Parasiteninfektionen (Humanparasitologie): Erreger Verfahren Material Methode Anisakis Antikörper- Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 2) Ascaris AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 2) Clonorchis sinensis AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 2) Echinoccocus granulosus AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor 2) (0.5ml) ELISA, West Blot Echinococcus multilocularis AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor 2) (0.5ml) ELISA, West Blot Echinoccocus vogeli AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor 2) (0.5ml) ELISA 2), West Blot 2) Entamoeba histolytica AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA, IFAT Fasciola hepatica AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 2) Filarien AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA Leishmanien AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA Plasmodium falciparum AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT Schistosomen AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA Strongyloides AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA Taenia solium (Zystizerkose) AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor (0.5ml) ELISA, West Blot 2) Methode nicht akkreditiert

14 Seite 14 von 21 vademecum EV Test auf einzelne Parasiteninfektionen (Humanparasitologie): Erreger Verfahren Material Methode Toxocara AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Augenkammerwasser (>100µl) ELISA Trichinella AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA Trypanosoma cruzi (Südamer. Trypanosomose; Chagas Disease) Trypanosoma gambiense spp. (Afrik. Trypanosomose; Schlafkr.) AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT 5) AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) IFAT 5) Helminthensuchtest ohne Tropenaufenthalt (Humanparasitologie): Echinokokken, Fasciola hepatica, Strongyloides, Toxocara, Trichinella AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 4) Helminthensuchtest mit Tropenaufenthalt (Humanparasitologie): Echinokokken, Fasciola hepatica, Filarien, Schistosomen, Strongyloides, Toxocara, Trichinella AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) ELISA 4) Echinokokken-Screening (Humanparasitologie): Echinokokken (alle Arten) AK-Nachweis Vollblut nativ (5ml) oder Serum (2ml) oder ggf. Liquor (0.5ml) ELISA 4) 5) Methode für Fasciola hepatica nicht akkreditiert Unterauftrag (Test wird im akkreditierten Labor des Schweizerischen Tropen- und Public Health Instituts durchgeführt)

15 Seite 15 von 21 vademecum EV 5. Veterinärparasitologie 5.1. Kotuntersuchung (Veterinärparasitologie): Erreger Tierart Verfahren Material Methode Darmprotozoen (ohne Kryptosporidien!), Zestoden, Nematoden diverse Kot nativ: Rind, Pferd, Esel: 20-30g Schaf, Ziege, Schwein: 10-20g Hund, Katze, Kaninchen: 3-5g Kleine Heimtiere: 1-2g Flotation Leberegel, Eimeria leuckarti, E. macusaniensis, Diphyllobothrium sp. diverse Siehe Darmprotozoen Sedimentation Lungenwürmer diverse Siehe Darmprotozoen Baermann- Trichter Protozoen diverse 2g Kot in 7ml SAF-Lösung 1) SAF Kryptosporidien diverse Kot nativ: 2-5g Kotausstrich, modifizierte Ziehl-Neelsen- Färbung Oxyuren, Bandwürmer diverse Perianalabstrich, Klebeband; Kot nativ Mikroskopie Magen-Darm-Nematoden Wiederkäuer, Pferd Erregerdifferenzierung Kot nativ 10-30g Larvenkultur Magen-Darm-Nematoden diverse Erregerquantifizierung (Eier pro Gramm Kot) Kot nativ: 10-30g McMaster 2) Echinokokken Hund, Katze Antigennachweis Kot nativ 10-20g Echinotest 7) (Ag-ELISA) Echinokokken Hund, Katze Erregerdifferenzierung Kot nativ 10-20g PCR 1) 2) 7) SAF-Lösung kann von der Prüfstelle bezogen werden Methode nicht akkreditiert Unterauftrag (Untersuchung wird im akkreditierten Labor der Parasitologie Universität Zürich (IPZ) durchgeführt)

16 Seite 16 von 21 vademecum EV Harnuntersuchung (Veterinärparasitologie): Erreger Tierart Verfahren Material Methode Capillaria plica Hund Harnsediment einige ml Sedimentation Nachweis von Parasiten in Organen (Veterinärparasitologie): Protozoen, Bandwurmfinnen, Nematoden, Arthropodenlarven diverse Organe oder Teile davon (nicht einfrieren!) Mikroskopie, z.t. PCR Nachweis von Trichinella sp. (Veterinärparasitologie): Trichinella sp. diverse 4x4 cm grosse Stücke von Zwerchfellpfeiler oder anderer gut durchbluteter Muskulatur (nicht gefroren, nicht fixiert) Verdauung Trichinella sp. diverse Art-Differenzierung durch spezifischen DNA- Nachweis id oder isolierte Trichinella-Larven fixiert in 70% EtOH 6) PCR Trichinella sp. diverse AK-Nachweis 1ml Serum und/oder Fleischsaft ELISA 2), WB 2) Bestimmung von Endoparasiten (Veterinärparasitologie): Rundwürmer diverse Exemplare in physiologischer NaCl- Lösung Mikroskopie Bandwurmglieder und Trematoden diverse Exemplare in Wasser Mikroskopie z.t. PCR Hautproben (Veterinärparasitologie): Arthropoden diverse Tiefe, blutige Hautgeschabsel; Hautbiopsien, Exzisate und Exstirpate KOH-Methode, Mikroskopie Bestimmung von Ektoparasiten (Veterinärparasitologie): Ektoparasiten diverse Exemplare nativ oder fixiert in 70% EtOH Mikroskopie 2) 6) Methode nicht akkreditiert Anleitung zum Versand der Trichinella-Larven kann von der Prüfstelle bezogen werden

17 Seite 17 von 21 vademecum EV Nachweis von Blutparasiten (Veterinärparasitologie): Erreger Tierart Verfahren Material Methode Protozoen, Mikrofilarien diverse 2ml EDTA-Blut (peripheres Kapillarblut). Altativ 3 dünne Blutausstriche (luftgetrocknet, nicht fixiert), dazu jedoch immer noch zusätzlich 1ml EDTA-Blut. Blutausstrich, Difil -Test z.t. PCR 5.2. Indirekte und direkte Nachweisverfahren bei einzelnen Erkrankungen Piroplasmose (Veterinärparasitologie): T. equi, B. caballi Pferd AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT B. canis Hund AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT 2) B. divergens Rind AK-Nachweis 2-5ml Vollblut oder 1ml Serum IFAT 2) Babesia sp. Theileria sp. diverse 1ml EDTA-Blut (peripheres Kapillarblut). Altativ 3 dünne Blutausstriche (luftgetrocknet, nicht fixiert) Blutausstrich, real-time PCR Leishmaniose (Veterinärparasitologie): Leishmania sp. Hund AK-Nachweis 2ml Vollblut oder 0.5-1ml Serum ELISA Leishmania sp. diverse Kultur (nur nach Voranmeldung!) Lymphknotenpunktat, Hautbiopsie, (beides nicht fixiert). Material kann auch in Leishmanien- Kulturmedium 3) geschickt werden. in vitro Kultivierung Leishmania sp. diverse DNA-Nachweis Hautbiopsie, Lymphknotenpunktat, (nicht fixiert oder fixiert in 70% EtOH) Histologische Präparate real-time PCR 2) 3) Methode nicht akkreditiert Das Kulturmedium kann von der Prüfstelle nach Voranmeldung bezogen werden. Nur beschränkt haltbar!

18 Seite 18 von 21 vademecum EV Echinokokkose (Veterinärparasitologie): Erreger Tierart Verfahren Material Methode Echinococcus multilocularis (Endwirt) Hund, Katze u.a. Erregerdifferenzierung 10-20g Kot, nativ Echinotest 7) (AG-ELISA), PCR diverse Echinococcus sp. (Zwischenwirt) Art-Differenzierung durch spezifischen DNA- Nachweis Operationsmaterial (wenn möglich ganze Zysten bei E. granulosus oder Organteile mit alveolärem Gewebe bei E. multilocularis), nativ. Biopsien (Feinnadel) und Punktate, nativ. Alles Material zuvor nicht einfrieren! (per Express schicken) Histologische Präparate PCR Hund AK-Nachweis 2ml Vollblut oder 0.5-1ml Serum ELISA 2) Toxoplasmose (Veterinärparasitologie): Toxoplasma (Endwirt) Katze (Oozysten) 2g Kot nativ oder in 7ml SAF Echinococcus sp. (Zwischenwirt) Flotation/SAF- Methode, realtime PCR Toxoplasma (Zwischenwirt) diverse AK-Nachweis 2ml Vollblut (nativ) oder 0.5-1ml Serum ELISA, IFAT Toxoplasma diverse DNA-Nachweis Abortmaterial oder Material von akut erkrankten Tieren (Plazenta, Organe, Hirn, Exsudat); Histologische Präparate real-time PCR Neosporose (Veterinärparasitologie): Neospora (Endwirt) Hund (Oozysten) 2g Kot nativ oder in 7ml SAF Flotation/SAF- Methode, Realtime PCR Neospora (Zwischenwirt) diverse AK-Nachweis 2ml Vollblut (nativ) oder 0.5-1ml Serum Neospora diverse DNA-Nachweis Abortmaterial (Hauptsächlich Hirn) oder Material von akut erkrankten Tieren ELISA, IFAT Real-time PCR 2) 7) Methode nicht akkreditiert Unterauftrag (Untersuchung wird im akkreditierten Labor des IPZ durchgeführt)

19 Seite 19 von 21 vademecum EV Dirofilariose (Herzwurmerkrankung) (Veterinärparasitologie): Erreger Tierart Verfahren Material Methode Dirofilaria sp. Hund, Katze der Mikrofilarien 2-5ml EDTA-Blut Difil Test, zur Artbestimmung Saure Phosphatase- Färbung Dirofilaria immitis Hund, Katze Antigennachweis 2 ml Vollblut oder ml Serum Idexx Antigen- Test Dourine (Beschälseuche) (Veterinärparasitologie): Trypanosoma equiperdum Pferd Serologie 2-5 ml Vollblut oder 1 ml Serum KBR Tritrichomonose (Veterinärparasitologie): Tritrichomonas sp. Rind, Katze Kultur Präputialspülprobe, Vaginaltupfer oder spülprobe (Rind), Kot 8 (Katze) (ggf. bereits im InPouch TM TF-Kulturbeutel). InPouch TM TF Tritrichomonas sp. Rind, Katze DNA-Nachweis Präputialspülprobe, Vaginaltupfer oder spülprobe (Rind) Kot (Katze) real-time PCR 8) Kot zur Untersuchung auf Tritrichomonose ungekühlt und frisch versenden. Besnoitiose (Veterinärparasitologie): Besnoitia besnoiti Rind AK-Nachweis 2-5 ml Vollblut oder 1 ml Serum IFAT, WB DNA-Nachweis Biopsiematerial real-time PCR Fasciolose (Veterinärparasitologie): Fasciola hepatica diverse Kot nativ Sedimentation Fasciola hepatica Rind AK-Nachweis 4-5 ml Tankmilch (Bestandesdiagnose) oder 1 ml Serum (Einzeltier) ELISA 2) Ostertagiose (Veterinärparasitologie): Ostertagia ostertagi Rind AK-Nachweis 4-5 ml Tankmilch (Bestandesdiagnose) oder 1 ml Serum (Einzeltier) ELISA 2) 2) Methode nicht akkreditiert

20 Seite 20 von 21 vademecum EV 6. Erläuterungen zu einzelnen Untersuchungsmethoden 6.1. Hierzu werden direktmikroskopische Verfahren gezählt. Die Sensitivität der Untersuchung wird durch Anreicherungsverfahren und Färbetechniken gesteigert. Wird eine Quantifizierung der Parasitenstadien gewünscht (selektive Entwurmung, Therapieerfolgskontrolle, Resistenzbeurteilung) wird das McMaster-Zählverfahren durchgeführt Antikörpachweis (Serologie) Grundsätzlich wird der Antikörpachweis nur mit Serum (nicht Plasma!) und Liquor durchgeführt. Dazu stehen mehrere Methoden zur Verfügung: IFAT (Indirekter-Fluoreszenz-Antikörper-Test) Die Ergebnisse sind nur bedingt normierbar und unterliegen einer subjektiven Beurteilung. Der Test kann jedoch eine hohe Sensitivität erreichen. Die Resultate werden in Form von Probenverdünnungen (Titerstufen) angegeben. Routinemässig werden bei veterinärparasitologischen Untersuchungen 3 Titerstufen untersucht. Eine Endtiterbestimmung muss zusätzlich beantragt werden. Humanparasitologische Untersuchungen werden immer bis zum Endtiter durchgeführt. ELISA Der ELISA zeichnet sich im Allgemeinen durch eine hohe Sensitivität aus. Die Resultate werden als Prozentwerte einer mitgeführten positiven Kontrolle ausgedrückt (AE). Zusätzliche Kontrollen erfolgen durch Negativseren und mittelstarke Positivseren, deren Werte innerhalb eines definierten Bereichs liegen müssen, damit der Test freigegeben wird. KBR Die KBR eignet sich besonders zur Erkennung gewisser Infektionen im Frühstadium, wenn hohe Konzentrationen von erregerspezifischem IgM im Serum gefunden werden. Die Sensitivität ist im Vergleich zu and Methoden eher gering. West Blot Der West Blot zeichnet sich durch eine hohe Spezifität aus, ist jedoch nur bedingt normierbar. Er wird daher nur im Zusammenhang mit anderen serologischen Methoden (ergänzend) verwendet Antigennachweis Der Antigennachweis wird an unserem Institut mit kommerziell erhältlichen Kits durchgeführt. Diese zeichnen sich durch eine hohe Sensitivität und Spezifität aus.

21 6.4. DNA-Nachweis Seite 21 von 21 vademecum EV Der DNA-Nachweis erfolgt mittels (real-time) PCR (Polymerase-Chain-Reaction). Diese Methode erlaubt den Nachweis von kleinsten Parasitenmengen (DNA) im Probenmaterial und zeichnet sich somit durch eine sehr hohe Sensitivität aus. Die Spezifität ist ebenfalls sehr hoch und kann in Zweifelsfällen sowie zur Artdifferenzierung durch Zusatzuntersuchungen noch gesteigert werden Kultur Kulturen werden mit Selektivmedien durchgeführt, welche dem jeweiligen Parasiten angepasst sind. Die Sensitivität hängt sehr stark von der Probenentnahme und der Zeit bis zum Eintreffen der Probe am Institut ab Messgenauigkeit der Prüfmethoden Die im akkreditierten Bereich zum Einsatz kommenden Prüfmethoden basieren auf Standardverfahren oder wurden am validiert. Es stehen somit Dokumentationen mit Angaben über die Messgenauigkeit und Messunsicherheit zur Verfügung. Diese können auf Anfrage eingesehen werden.