Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung. DLA 33/ Nahrungsergänzungsmittel II. Waldemar-Bonsels-Weg Ahrensburg, Germany

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1 DLA Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung DLA 33/2015 Nahrungsergänzungsmittel II: Biotin, Niacin, Pantothensäure und Vitamin C in Multivitamin-Kapselpulver Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Waldemar-Bonsels-Weg Ahrensburg, Germany proficiency-testing@dla-lvu.de Koordinator der LVU: Dr. Matthias Besler Seite 1 von 26

2 Inhalt / Content 1. Einleitung Durchführung Untersuchungsmaterial Homogenität Untersuchung Ergebnisübermittlung Auswertung Bezugswert (zugewiesener Wert) Standardabweichung Ausreißer Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Allgemeines Modell nach Horwitz Auswertung eines Versuchs zur Präzision Werte aus Erkenntnissen z-score z'-score Quotient Standardunsicherheit Ergebnisse Biotin in µg/100g Niacin in mg/100g Pantothensäure in mg/100g Vitamin C in mg/100g Dokumentation Primärdaten Homogenität Analytische Methoden Verzeichnis der teilnehmenden Institute Verzeichnis relevanter Literatur...25 Seite 2 von 26

3 1. Einleitung Die Teilnahme an Laborvergleichsuntersuchungen (LVU) ist ein unverzichtbarer Baustein für das Qualitäts-Management-System eines jeden, mit der Untersuchung von Lebensmitteln, Futtermitteln, Kosmetik und Bedarfsgegenständen befassten Labors. Die Durchführung von Laborvergleichsuntersuchungen ermöglicht den teilnehmenden Instituten die eigene analytische Kompetenz unter realen Bedingungen nachzuweisen. Gleichzeitig erhalten sie wertvolle Daten zur Validität der durchgeführten Untersuchungsmethode. Das Ziel von DLA ist es, LVU für ausgesuchte Parameter in praxisrelevanten Konzentrationen anzubieten. Durchführung und Auswertung der vorliegenden Laborvergleichsuntersuchung erfolgten nach den technischen Anforderungen der DIN EN ISO/IEC (2010) und DIN ISO Durchführung 2.1 Untersuchungsmaterial Bei dem Untersuchungsmaterial handelt es sich um eine Mischung von zwei handelsüblichen Nahrungsergänzungsmitteln "Multivitamin-Kapseln" und Lactose als Füllstoff von Europäischen Anbietern. Die Kapselhüllen der Materialien wurden entfernt und die Pulver zusammengegeben und homogenisiert. Anschließend wurde in Portionen zu ca. 25 Gramm lichtgeschützt abgepackt. Die Portionen wurden chronologisch nummeriert. Die Zusammensetzung (Verzeichnis der Zutaten) und die Gehalte an Vitaminen wurden aufgrund der Herstellerangaben berechnet und sind in Tabelle 1 bzw. 2 angegeben. Tabelle 1: Zusammensetzung der DLA-Probe Multivitamin-Kapseln Zutaten ohne Kapselhülle (1. Nahrungsergänzungsmittel): Calciumcarbonat, Magnesiumoxid, Vitamin C, Kaliumchlorid, Nicotinamid, Vitamin-E- Acetat, Maltodextrin, Eisensulfat, Trennmittel Magnesiumstearat, Vitamin-A-Acetat, Calcium-D-Pantothenat, Zinkoxid, Vitamin B6, Vitamin B1, Vitamin B2, Kupferoxid, Chromchlorid, Folsäure, Biotin, Kaliumjodid, Natriumselenit, Ammoniummolybdat, Vitamin K1, Vitamin D3, Vitamin B12. Zutaten ohne Kapselhülle (2. Nahrungsergänzungsmittel): Füllstoff Lactose, Vitamin C, Nicotinamid, Vitamin E-Acetat, Calcium-D-Pantothenat, Vitamin B6, Vitamin B2, Vitamin B1, Trennmittel: Magnesiumsalze von Speisefettsäuren, Siliciumdioxid, Beta-Carotin, Biotin, Folsäure, Vitamin B12. weitere Zutat: Lactose Seite 3 von 26

4 Tabelle 2: Aus den Angaben der Hersteller (deklarierte Gehalte) berechnete Gehalte an Vitaminen Vitamin Biotin Niacin Pantothensäure Vitamin C Gehalt pro 100 g µg mg mg mg Homogenität Die Homogenität der DLA-Probe wurde anhand einer 5 fach Bestimmung von Vitamin C mittels Enzym-UV/VIS-Test geprüft. Mit einer Wiederholstandardabweichung von 1,6 % wurde die Homogenität als hinreichend gesichert angesehen. Die Ergebnisse der Homogenitätsuntersuchung sind in der Dokumentation angegeben. Die Berechnung der Wiederholstandardabweichung der Doppelbestimmungen der Teilnehmer wurde ebenfalls als Homogenitätskriterium für diese LVU herangezogen. Sie lag für Pantothensäure bei 6,4 % und für Vitamin C bei 2,6 % im Bereich üblicher relativer Wiederholstandardabweichungen von Methoden für wasserlösliche Vitamine (13-16). Die Wiederholstandardabweichung der Teilnehmer ist für die beiden Vitamine in der Dokumentation angegeben. In der Dokumentation sind zudem die Portionsnummern graphisch den Messwerten für Niacin gegenübergestellt. Es ist keinerlei Instituts-unabhängige Tendenz in den Messergebnissen erkennbar, die Inhomogenitäten nahelegen könnte. 2.2 Untersuchung An jedes teilnehmende Institut wurden in der 35. Woche 2015 zwei Portionen Untersuchungsmaterial verschickt. Das Untersuchungsverfahren wurde freigestellt. Die Untersuchungen waren durchzuführen bis spätestens 9. Oktober Ergebnisübermittlung Die Ergebnisabgabe erfolgte einheitlich mittels, an die teilnehmenden Institute übergebenen, Übermittlungstabellen (per ). Zur statistischen Auswertung kamen die abschließend berechneten Gehalte der Analyten, soweit vom Teilnehmer übermittelt, als Mittelwert einer Doppelbestimmung der beiden nummerierten Proben. Abgefragt und dokumentiert wurden Einzelergebnisse, Wiederfindungsraten und Angaben zu den durchgeführten Methoden. Alle Teilnehmer haben fristgerecht ihre Ergebnisse abgegeben. Seite 4 von 26

5 3. Auswertung 3.1 Bezugswert (zugewiesener Wert) Da es sich bei dem untersuchten Material nicht um zertifiziertes Referenzmaterial handelt wird als Bezugswert (X) für die Auswertung der robuste Mittelwert der eingesandten Ergebnisse verwendet. Eine Prüfung der Verteilung der eingesandten Ergebnisse ergab keine Hinweise für unvorhergesehene Quellen von Variabilität, wie z.b. eine bimodale Verteilung der Ergebnisse. Die statistische Auswertung erfolgt für alle Parameter, für die mindestens 7 Werte vorliegen. Dies war für Niacin und Vitamin C der Fall. Für die Parameter Biotin und Pantothensäure konnten jeweils nur 5 bzw. 6 quantitative Ergebnisse berücksichtigt werden, hier wurde die statistische Auswertung lediglich zur Information angegeben. Einzelergebnisse die außerhalb des angegebenen Messbereiches eines teilnehmenden Labors liegen (z.b. mit der Angabe > 25 mg/kg oder < 2,5 mg/kg) werden für die statistische Auswertung berücksichtigt, sofern eine Angabe mit > oberhalb und eine Angabe mit < unterhalb des Zielbereichs liegt. 3.2 Standardabweichung Zum Vergleich mit der Zielstandardabweichung wird ebenfalls die robuste Standardabweichung (S x ) berechnet (6). 3.3 Ausreißer Auf Ausreißer wird mittels Mandel s-h-statistik Signifikanz-Niveau 95% geprüft (5). Ermittelte Ausreißer werden informativ genannt sofern gleichzeitig der z-score des Instituts < -2 oder > 2 ist. 3.4 Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Die Zielstandardabweichung des Bezugswertes wird nach unten dargestellten, unterschiedlichen Verfahren bestimmt. Für die Eignungsbeurteilung wird, sofern ein akzeptabler Quotient S x / σ vorliegt, bevorzugt die Zielstandardabweichung des allgemeinen Modells nach Horwitz verwendet, da diese in der Regel für Auswertungen von Laborvergleichsuntersuchungen, bei denen von den Teilnehmern unterschiedliche Analysenmethoden eingesetzt werden können, geeignet ist. Die Zielstandardabweichung aus der Auswertung von Präzisionsdaten eines Versuchs leitet sich dagegen aus Ringversuchen mit vorgegebener Analysenmethode ab. Zur Information wurden, sofern verfügbar, jeweils die z-scores beider Modelle in der Auswertung angegeben. Zur Bewertung der Ergebnisse wurde für alle Parameter die Zielstandardabweichung nach dem allgemeinen Modell nach Horwitz herangezogen (s ). Zusätzlich wurde für Biotin, Pantothensäure und Vitamin C die Seite 5 von 26

6 Standardunsicherheit berücksichtigt und mittels z'-score bewertet (s. 3.6) Allgemeines Modell nach Horwitz Die relative Zielstandardabweichung in % des Bezugswertes wird i.d.r. nach folgender Gleichung (Horwitz) berechnet σ (%) = 2 (1-0,5logX) hieraus wird die Zielstandardabweichung berechnet σ = X *σ (%) / Auswertung eines Versuchs zur Präzision Aus der Vergleichstandardabweichung σ R und der Wiederholstandardabweichung σ r eines Versuchs zur Präzision einer Methode (Ringversuch oder LVU) wird die Standardabweichung zwischen Laboratorien σ L berechnet: L = R 2 r 2. Aus den obigen Größen und der Anzahl der Wiederholmessungen n der laufenden Vergleichsuntersuchung wird nun die Zielstandardabweichung berechnet: σ= (σ L 2 +(σ r 2 /n)). Aus den Präzisionsdaten des jeweils relevanten Amtlichen Untersuchungsverfahrens wird die Zielstandardabweichung für den betreffenden Parameter berechnet und zur Beurteilung herangezogen. Die in Tabelle 3 angegebenen Zielstandardabweichungen wurden aus den Präzisionsdaten der angegebenen Methoden berechnet. Seite 6 von 26

7 Tabelle 3: Zielstandardabweichung Auswertung eines Versuchs Methode HPLC HPLC- MS/MS Protein Binding Assay HPLC HPLC Parameter (pro 100 g) Biotin ( µg) Matrix Müsli-Pulver Milchpulver Orangensaft Hühnersuppe getr. relative Zielstandardabweichung σ 17,0 % 28,1 % 19,7 % 14,2 % Literatur EN 15607:2009 Biotin Futtermittel 7,0-20,9 % EURL (2011) Biotin Niacin (17-21 mg) Vitamin C ( mg) Angereicherte Lebensmittel Milchpulver Schokomüsli Müsli-Pulver Milchpulver Orangensaft Suppe getr. HPLC Vitamin C Fruchtsaft und Kindernahrungsmittel HPLC (Multi- Methode) Biotin, Vitamin C, Nicotinamid, Pantothensäure Multivitamin- Vormischungen 5,6-18,6 % AOAC Performance Test (in: Rychlik 2011) 3,6 % / 3,5 % 4,2 % / 4,4 % nach Säure- / enzym. Hydrolyse 17,3 % 10,0 % 19,4 % 13,5 % EN 15652:2009 EN 14130:2003 3,9-33,1 % Brause et al. (2003) < 8,0 % Heudi et al. (2005) Seite 7 von 26

8 3.4.3 Werte aus Erkenntnissen Die Zielstandardabweichung kann für die Eignungsbeurteilung auf einen Wert festgesetzt werden, der dem Leistungsfähigkeitsniveau entspricht, das der Koordinator für ein wünschenswertes Ziel für die teilnehmenden Laboratorien hält (6). Zur Bewertung der Ergebnisse wurde für alle Parameter die Zielstandardabweichung nach Horwitz verwendet (3.4.1) und für Biotin, Pantothensäure und Vitamin C zusätzlich die Standardunsicherheit berücksichtigt und mittels z'-score bewertet (s. 3.6). 3.5 z-score Der z-score wird herangezogen zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute. Er besagt um welches Vielfache der Zielstandardabweichung ( σ ) das Ergebnis (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) abweicht (6). Die Berechnung erfolgt nach z = (x X) / σ ; die Anforderungen an die Analytik gelten im Allgemeinen als erfüllt, wenn -2 z z'-score Der z'-score kann zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute herangezogen werden, wenn die Standardunsicherheit berücksichtigt werden muss (s. 3.8). Der z'-score drückt das Verhältnis der Abweichung des Ergebnisses (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) zur Wurzel aus der Quadratsumme von Zielstandardabweichung ( σ ) und Standardunsicherheit (Ux) aus (6). Die Berechnung erfolgt nach als Zielstandardab- Im Folgenden haben wir den Ausdruck im Nenner weichung σ ' definiert. Die Anforderungen an die Analytik gelten im Allgemeinen als erfüllt, wenn -2 z' 2. Der z'-score wurde für die Parameter Biotin, Pantothensäure und Vitamin C herangezogen (s. auch 3.7 u. 3.8). Seite 8 von 26

9 3.7 Quotient S x / σ In Anlehnung an den Horrat-Wert kann die Bewertung einer Laborvergleichsuntersuchung als aussagekräftig gelten, wenn der Quotient von robuster Standardabweichung und Zielstandardabweichung nicht über 2 liegt. Ein über 2 liegender Wert bedeutet, dass die Präzision nicht zufriedenstellend ist, d.h., dass die Präzision aus analytischen Gründen zu variabel ist oder die festgestellte Variation höher ist als für die angewandte Methode geschätzt wurde. Somit ist eine Vergleichbarkeit der Messergebnisse nicht gewährleistet (11). In der vorliegenden Vergleichsuntersuchung lag der Quotient S x / σ für Niacin unter 2,0. Für Biotin, Pantothensäure und Vitamin C wurden Quotienten S x / σ von deutlich über 2 erhalten. Daher wurde die Bewertung nach für diese Parameter nach 3.6 z'-score durchgeführt. Die Quotienten S x / σ ' lagen dann bei 1,5 bis 1, Standardunsicherheit Jeder Bezugswert ist mit einer Standardunsicherheit behaftet, die von der Analysenmethode, Unterschieden der eingesetzten Analysenmethoden, dem Probenmaterial und der Anzahl der Teilnehmer (P) einer LVU beeinflußt wird. Die Standardunsicherheit (U x ) wird für die vorliegende LVU wie folgt berechnet (6). u X =1,25 S x / p Ist u X 0,3 muss die Standardunsicherheit des Bezugswertes nicht berücksichtigt werden (6). Ein deutliches Überschreiten des Wertes von 0,3 ist ein Hinweis darauf, dass die Zielstandardabweichung ggf. zu gering für die Standardunsicherheit des Bezugswertes gewählt wurde. In der vorliegenden LVU wurde für Niacin ein Quotient U x / σ von 0,52 und für Biotin, Pantothensäure und Vitamin C zwischen 1,2 und 1,9 erhalten. Da der Quotient S x / σ für Biotin, Pantothensäure und Vitamin C gleichzeitig deutlich über 2,0 lag, wurde für die Bewertung der Ergebnisse der Teilnehmer für diese Parameter der z'-score unter Berücksichtigung der Standardunsicherheit herangezogen (s. 3.6). Seite 9 von 26

10 4. Ergebnisse Alle folgenden Tabellen sind anonymisiert. Den teilnehmenden Instituten wird mit dem Versand dieser Auswertung ihre individuelle Auswertenummer mitgeteilt. In der oberen Tabelle sind die Kenndaten aufgeführt: Kenndaten Anzahl der Messergebnisse Anzahl der Ausreißer Mittelwert Median Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ oder σ ' Zielstandardabweichung zur Information untere Grenze des Zielbereichs (X - 2 σ ) oder (X - 2 σ ') * obere Grenze des Zielbereichs (X + 2 σ ) oder (X + 2 σ ') * Quotient S x / σ oder S x / σ ' Standardunsicherheit u X Quotient u X / σ oder u X / σ ' Ergebnisse im Zielbereich * Zielbereich aus z-score oder z'-score berechnet In der unteren Tabelle sind die Einzelergebnisse der teilnehmenden Institute aufgeführt : Auswertenummer Parameter Evaluation [Einheit / Unit] number Abweichung [Einheit / Unit] Deviation [Einheit / Unit] z-score σ z-score (Info) Hinweis Remark Seite 10 von 26

11 4.1 Biotin in µg/100g Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 5 * Anzahl der Ausreißer 0 Mittelwert Median Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) 5500 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 3500 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 1630 Untere Grenze des Zielbereichs Obere Grenze des Zielbereichs Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1, ,88 Ergebnisse im Zielbereich 4 Prozent im Zielbereich 80 * ohne Ergebnisse der Teilnehmer 6 und Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Biotin [µg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 1: Ergebnisse Biotin Fig. 1: Results total biotin Seite 11 von 26

12 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Biotin [µg/100g] Abweichung z'-score z-score Hinweis [µg100g] σ (Info) Deviation Remark [µg/100g] , ,5-1, ,5-1, , ,6-3, ,1 4, ,5 1, Ergebnis ausgeschlossen / Result excluded Ergebnis ausgeschlossen / Result excluded 3 z'-score Abb. 2: Fig. 2: Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Biotin Z'-Scores biotin Seite 12 von 26

13 4.2 Niacin in mg/100g Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 7 * Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 3070 Median 3080 Robuster Mittelwert (X) 3100 Robuste Standardabweichung (S x ) 115 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ 104 Untere Grenze des Zielbereichs 2890 Obere Grenze des Zielbereichs 3300 Quotient S x / σ Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ 1,1 54 0,52 Ergebnisse im Zielbereich 6 Prozent im Zielbereich 86 * ohne Ergebnis von Teilnehmer 10 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Niacin [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 3: Ergebnisse Niacin Fig. 3: Results niacin Seite 13 von 26

14 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Niacin [mg/100g] z-score σ Hinweis Remark ,9 93 0, , , , , , ,6 Ausreisser / Outlier , , Abweichung [mg100g] Deviation [mg/100g] Ergebnis ausgeschlossen / Result excluded 3 z-score Abb. 4: Fig. 4: Auswertenummer / evaluation number Z-Scores Niacin Z-Scores niacin Seite 14 von 26

15 4.3 Pantothensäure in mg/100g Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 6 * Anzahl der Ausreißer 0 Mittelwert 1060 Median 1060 Robuster Mittelwert (X) 1060 Robuste Standardabweichung (S x ) 99 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 66 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 42 Untere Grenze des Zielbereichs 930 Obere Grenze des Zielbereichs 1190 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1,5 50 0,77 Ergebnisse im Zielbereich 5 Prozent im Zielbereich 83 * ohne Ergebnis von Teilnehmer 10 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Pantothensäure / Pantothenic Acid [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 5: Ergebnisse Pantothensäure Fig. 5: Results total pantothenic acid Seite 15 von 26

16 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Pantothensäure / Pantothenic Acid [mg/100g] z'-score σ ,1 3, , ,4-0, ,3 0, , ,5-2, , ,2-1, ,8 1, Abweichung [mg100g] Deviation [mg/100g] z-score (Info) Hinweis Remark Ergebnis ausgeschlossen / Result excluded 3 z'-score Abb. 6: Fig. 6: Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Pantothensäure Z'-Scores pantothenic acid Seite 16 von 26

17 4.4 Vitamin C in mg/100g Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 9 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert Median Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) 951 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 503 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 310 Untere Grenze des Zielbereichs Obere Grenze des Zielbereichs Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1, ,79 Ergebnisse im Zielbereich 7 Prozent im Zielbereich Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Vitamin C [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 7: Ergebnisse Vitamin C Fig. 7: Results vitamin C Seite 17 von 26

18 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Vitamin C [mg/100g] Abweichung [mg100g] Deviation [mg/100g] z'-score σ z-score (Info) Hinweis Remark , ,2-1, ,2 2, , ,8-1, ,2 1, ,0-1, , ,9 14, ,9 95 0,2 0, ,4 0, ,5-33,3 Ausreisser / Outlier Abb. 8: Fig. 8: z'-score > < Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Vitamin C Z'-Scores vitamin C Seite 18 von 26

19 Mai Dokumentation 5.1 Primärdaten Parameter Teilnehmer Einheit Proben-Nr. A Proben-Nr. B Ergebnis (Mittel) Ergebnis A Ergebnis B inkl. WF Analyte Participant Unit Sample No. A Sample No. B Result (Mean) Result A Result B incl. RR Biotin / biotin Nicotinsäureamid / nicotinamide Wiederfindungsrate [%] Recovery rate [%] 1 µg/100g µg/100g µg/100g , , ,51 4 µg/100g n/a n/a n/a n/a n/a 5 µg/100g nein µg/100g ,4 648,4 nein 7 µg/100g µg/100g nein 9 µg/100g nein - 10 µg/100g ,08 344,4 nein nein 1 mg/100g ,9 3169,6 3208,2 nein 2 mg/100g ,4 3088,7 ja 109,6%/108,3% 3 mg/100g , , ,56 4 mg/100g n/a n/a n/a n/a n/a 5 mg/100g nein mg/100g ,6 2716,6 nein 7 mg/100g mg/100g nein 9 mg/100g nein - 10 mg/100g nein nein Seite 19 von 26

20 Mai 2016 Parameter Teilnehmer Einheit Proben-Nr. A Proben-Nr. B Ergebnis (Mittel) Ergebnis A Ergebnis B inkl. WF Wiederfindungsrate [%] Analyte Participant Unit Sample No. A Sample No. B Result (Mean) Result A Result B incl. RR Recovery rate [%] 1 mg/100g mg/100g ,8 1205,1 ja 98,7%/98,0% 3 mg/100g , , ,26 Pantothensäure / pantothenic acid Vitamin C / vitamin C 4 mg/100g n/a n/a n/a n/a n/a 5 mg/100g nein mg/100g ,4 961,4 nein 7 mg/100g mg/100g ,8 901,3 1064,3 nein 9 mg/100g nein - 10 mg/100g nein nein 1 mg/100g , nein 2 mg/100g , ,9 ja 98,4%/97,0% 3 mg/100g , , ,82 4 mg/100g nein mg/100g nein mg/100g , ,9 nein 7 mg/100g mg/100g , , ,3 nein 9 mg/100g nein - 10 mg/100g ,37 811,9 nein nein Seite 20 von 26

21 5.2 Homogenität Homogenitätsuntersuchung des Materials vor der LVU Homogenitätsprüfung anhand der Bestimmung von Vitamin C mittels enzymatischem UV/VIS-Test: Wiederholmessungen mg/100g Allgemeiner Mittelw ert 8066 Wiederholstandardabw eichung 130 1,6% Wiederholstandardabweichung der Doppelbestimmungen der Teilnehmer Die Wiederholstandardabweichung wurde aus den Daten wie unter 5.1 dokumentiert berechnet. Sie beträgt 67,5 mg/100g = 6,36 % von X für Pantothensäure. Sie beträgt 285 mg/100g = 2,56 % von X für Vitamin C Gegenüberstellung der aufsteigenden Probennummern und der betreffenden Einzel-Messwerte Homgenität / homogeneity Niacin / niacine DLA-Nr. / No. Ergebnis /50 Seite 21 von 26

22 Mai Analytische Methoden Angaben der Teilnehmer Parameter Analyte Biotin / biotin Teilnehmer Methodenbeschreibung Wiederfindung mit Methode ist gleicher Matrix akkreditiert Sonstige Hinweise Participant Method description Recovery with same matrix Method accredited Further remarks USP ja 4 n/a n/a n/a n/a 5 HPLC-DAD nein nein 6 LC-MS/MS nein nein 7 mikrobiologischer Mikrotiterplatten-Test ja 8 LC-MS/MS nein nein 9 HPLC-UV nein ja - 10 HPLC-RP mit SPE Proben-Cleanup (USP Methode 3) nein ja Nicotinsäureamid / nicotinamide 1 HPLC-DAD ja 2 HPLC-DAD ja ja 3 USP ja 4 n/a n/a n/a n/a 5 HPLC-DAD nein nein 6 mikrobiologisch nein ja 7 8 HPLC-FLUO nein ja 9 HPLC-UV nein ja - 10 HPLC-RP (USP Methode) nein ja Seite 22 von 26

23 Mai 2016 Parameter Analyte Pantothensäure / pantothenic acid Vitamin C / vitamin C Teilnehmer Methodenbeschreibung Wiederfindung mit Methode ist gleicher Matrix akkreditiert Sonstige Hinweise Participant Method description Recovery with same matrix Method accredited Further remarks 1 2 HPLC-DAD ja ja 3 USP ja 4 n/a n/a n/a n/a 5 HPLC-DAD nein nein 6 mikrobiologisch nein ja 7 8 HPLC-UV nein nein 9 HPLC-UV nein ja - 10 HPLC-RP (USP Methode) nein ja 1 Reflektometrie ja 2 HPLC-DAD ja ja 3 USP ja 4 Vitamin C (Ascorbinsäure) nein nein n/a 5 Titration nein nein 6 HPLC nein ja 7 8 HPLC-UV nein ja 9 HPLC-UV nein ja - 10 Titration (USP) nein ja Seite 23 von 26

24 Mai Verzeichnis der teilnehmenden Institute in alphabetischer Reihenfolge Teilnehmer / Participant Ort / Town Land / Country FRANKREICH Deutschland DÄNEMARK Deutschland Deutschland Deutschland Deutschland Deutschland USA Deutschland [Die Adressdaten der Teilnehmer wurden für die allgemeine Veröffentlichung des Auswerte-Berichts nicht angegeben.] [The address data of the participants were deleted for publication of the evaluation report.] Seite 24 von 26

25 7. Verzeichnis relevanter Literatur 1. DIN EN ISO/IEC 17043:2010; Konformitätsbewertung Allgemeine Anforderungen an Eignungsprüfungen / Conformity assessment General requirements for proficiency testing 2. Verordnung / Regulation 882/2004/EU; Verordnung über amtliche Kontrollen / Regulation on official controls 3. DIN EN ISO/IEC 17025:2005; Allgemeine Anforderungen an die Kompetenz von Prüf- und Kalibrierlaboratorien / General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 4. Richtlinie / Directive 1993/99/EU; über zusätzliche Maßnahmen im Bereich der amtlichen Lebensmittelüberwachung / on additional measures concerning the official control of foodstuffs 5. ASU 64 LFGB : Planung und statistische Auswertung von Ringversuchen zur Methodenvalidierung 6. DIN ISO 13528:2009; Statistische Verfahren für Eignungsprüfungen durch Ringversuche / Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons 7. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Laboratories ; J.AOAC Int., 76(4), (1993) 8. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Chemistry Laboratories ; Pure Appl Chem, 78, (2006) 9. Evaluation of analytical methods used for regulation of food and drugs;w. Horwitz; Analytical Chemistry, 54, (1982) 10.A Horwitz-like funktion describes precision in proficiency test; M. Thompson, P.J. Lowthian; Analyst, 120, (1995) 11.Protocol for the design, conduct and interpretation of method performance studies; W. Horwitz; Pure & Applied Chemistry, 67, (1995) 12.Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing; M. Thompson; Analyst, 125, (2000) 13.EURL Evaluation Report on Analytical Methods D(+)Biotin, European Reference Laboratory Feed Additives, Rychlik M, Fortified Foods with Vitamins: Analytical Concepts to Assure Better and Safer Products, John Wiley & Sons, Brause et al., Determination of Total Vitamin C in Fruit Juices and Related Products by Liquid Chromatography: Interlaboratory Study, J AOAC Int 86(3): , Heudi et al., Separation of water-soluble vitamins by reversed-phase high performance liquid chromatography with ultra-violet detection: application to polyvitaminated premixes, J Chromatogr A. 1070(1-2):49-56 (2005) 17.Ministry of Health and Welfare, JSM, Japan Blake CJ (2007), Analytical procedures for water-soluble vitamins in foods and dietary supplements: a review. Anal Bioanal Chem 389(1): Blake CJ (2007) Status of methodology for the determination of fat-soluble vitamins in foods, dietary supplements, and vitamin premixes. J AOAC Int 90(4): EN 14130:2003; Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Vitamin C mit HPLC (zurückgezogen) / Foodstuffs. Determination of vitamin C by HPLC (withdrawn) 21.EN 15607:2009; Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von D-Biotin mit HPLC / Foodstuffs. Determination of d-biotin by HPLC 22.EN 15652:2009; Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Niacin mit HPLC / Foodstuffs. Determination of niacin by HPLC Seite 25 von 26

26 Alle 10 Teilnehmer haben mindestens ein Ergebnis eingereicht. Die Auswertung erfolgte hinsichtlich der Parameter Biotin, Niacin, Pantothensäure und Vitamin C. Die Ergebnisse wurden quantitativ ausgewertet. Es lagen 80, 86, 83 und 78 % der Ergebnisse der Teilnehmer im jeweiligen Zielbereich. Details zu den einzelnen Parametern sind dem Auswertebericht zu entnehmen. 2 Teilnehmer hatten ihren Sitz im Europäischen Ausland (Dänemark, Frankreich) und ein Teilnehmer in den USA. Seite 26 von 26