Der Experimentator: Proteinbiochemie/Proteomics

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1 Experimentator Der Experimentator: Proteinbiochemie/Proteomics Bearbeitet von Hubert Rehm, Thomas Letzel 7., überarbeitete und aktualisierte Auflage Buch. XV, 406 S. Softcover ISBN Format (B x L): 16,8 x 24 cm Weitere Fachgebiete > Chemie, Biowissenschaften, Agrarwissenschaften > Biochemie > Proteinforschung Zu Leseprobe schnell und portofrei erhältlich bei Die Online-Fachbuchhandlung beck-shop.de ist spezialisiert auf Fachbücher, insbesondere Recht, Steuern und Wirtschaft. Im Sortiment finden Sie alle Medien (Bücher, Zeitschriften, CDs, ebooks, etc.) aller Verlage. Ergänzt wird das Programm durch Services wie Neuerscheinungsdienst oder Zusammenstellungen von Büchern zu Sonderpreisen. Der Shop führt mehr als 8 Millionen Produkte.

2 XI Inhaltsverzeichnis 1 Das tägliche Brot Puffer herstellen Protein bestimmen BCA-Test Bradford-Test Lowry-Test Starcher-Test Pilztest Weniger beliebte, aber gute Methoden Gele SDS-Gele Für Eilige: SDS-Elektrophorese ohne Sammelgel Native Gele Gele färben Fixieren Färben Trocknen Fällen und Konzentrieren Denaturierende Fällung Native Fällung Konzentrieren Blotten Proteinfärbung auf Blots Blocken Immunfärbung Ca 2+ -Bindung Ligandenfärbung Ablösen von Proteinen von Blots Autoradiographie von Gelen und Blots Autoradiographie mit Röntgenfilmen Phosphorimager...31 Literatur Ligandenbindung Radioaktive Ligandenmarkierung lodierung von Peptiden und Proteinen Iodierung von Molekülen mit niedrigem Molekulargewicht Isolierung einzelner iodierter Spezies Vor- und Nachteile des Iodierens Tritiieren Bindung Isolierung von Membranen Bindungstest...52

3 XII Inhaltsverzeichnis Bindungstests mit Membranen Entwicklung von Membranbindungstests Bindungstests mit Proteinen in Lösung Bindungstests ohne Modifikation der Liganden Wie entwickelt man einen Bindungstest für Proteine in Lösung? Keine Bindung, was tun? Auswertung von Bindungsdaten Die Bindung ist im Gleichgewicht Kinetik Vernetzen von Liganden Drei-Komponenten-Vernetzung (3K-Vernetzung) Photoaffinitätsvernetzung Kontrollen bei Vernetzungsversuchen Vernetzung nicht-radioaktiver Liganden Sinniges Literatur Membranproteine solubilisieren Seifen Saubere Begriffe Vom Umgang mit Seifen Solubilisieren Solubilisierungskriterien Physikalische Parameter solubilisierter Membranproteine Wie werde ich die Seife wieder los? Literatur Rekonstitution von Proteinen Rekonstitution der Tertiärstruktur löslicher Proteine Rekonstitution von Membranproteinen in Membranen Einleitung Liposomen Proteoliposomen Rekonstitution in Membranen Nachweis der Rekonstitution in Membranen durch Fluxtests Aufbauende Überlegungen Literatur Säubern und Putzen Putziges Proteinaggregation messen und verhindern Konventionelle Reinigungsmethoden Reinigung nach Hydophobizität Reinigung nach Größenunterschieden Reinigung nach Ladungsunterschieden Blaugel Zeolithchromatographie...179

4 Inhaltsverzeichnis XIII 5.3 Affinitätschromatographie Lektinchromatographie Liganden-Affinitätschromatographie Unkonventionelle Reinigungsmethoden Nicht-zerstörende präparative Massenspektrometrie Die Reinheitsprobe Ausschlachten Literatur Antikörper und Aptamere Herstellung von polyklonalen Antikörpern Antigen Adjuvans Injektion und Serumgewinnung Reinigung von Antikörpern Immunpräzipitation Immunpräzipitation mit immobilisiertem Protein A Immunpräzipitation mit immobilisiertem Antikörper Nachweis präzipitierter Antigene mit biotinylierten Antikörpern Immunaffinitäts chromato graphie Antikörper gegen ungereinigte Proteine Immunologische Nachweistechniken Dot-Blots ELISA Signalverstärkung bei Immunoassays Antikörperersatz: Aptamere und andere Bindungsmoleküle Aptamere Ribosomen-Display Literatur Proteomics Einführung Probennahme Mikrodissektion mit Lasererfassung D-Gelelektrophorese und andere mehrdimensionale Trenntechniken Probenvorbereitung in der 2DE Vorfraktionieren für die 2DE Die Technik der 2DE Proteine spalten Proteasenverdau Bromcyan- und Säurespaltung Massenspektrometrie von Proteinen und Peptiden Einführung lonenquellen und Probenvorbereitung Analysatoren und Detektoren MS-Parameter und Spektreninterpretation Peptidmassen-Fingerabdruck...295

5 XIV Inhaltsverzeichnis Peptidsequenzierung mit MS Möglichkeiten der MS mit ESI-Quellen Möglichkeiten der MS mit MALDI-Quellen Bildgebende Massenspektrometrie MS-Strategie Proteinchips Antikörperchips Aussterbende Dinosaurier? Blockierte N-Termini Edman-Abbau Carboxyterminale Sequenzierung Rehms Proteomics-Philosophie Letzels Proteomics-Philosophie Literatur Untereinheiten Stöchiometrie und Merigkeit Über die Schwierigkeiten bei Stöchiometriebestimmungen S & M mit Röntgenstrukturanalyse S & M mit Hybridisierungsexperimenten S & M mit Vernetzungsexperimenten S & M mit Aminosäureanalysen oder Antikörpern Was unsre Welt im Innersten zusammenhält Literatur Glykoproteine Wie, wo und wozu werden Proteine glykosyliert? Nachweis von Glykoproteinen in Gelen Nachweis von Glykoproteinen auf Blots Nicht-selektive Glykoproteinfärbung Selektive (Lektin-)Färbung Anreicherung von Glykopeptiden für die LC/MS Deglykosylierung Glykosylierungshemmer Endoglykosidasen Chemische Deglykosylierung Massenspektrometrische Deglykosylierung Zuckerketten Monosaccharid zusammensetzung Aufbau und Sequenz Literatur Der Schatz im Silbersee Vom Paper Vom Schreiben eines Papers Wie bringe ich andere dazu, mein Paper zu zitieren? Literatur...391

6 Inhaltsverzeichnis XV 11 Durch die Wüste Literatur Serviceteil Das Letzte Sachverzeichnis...399

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