TESTBERICHT. über die bakterizide Wirksamkeit des chemischen Desinfektionsmittels VENNO VET 1 SUPER

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1 JUSTUS-L1EBIG ~ \1/ GIESSEN UNIVERSITÄT Klinik für Vöqel, Rep!.. Amph. u. Fische: Frankfurter Slr.:91-93: Giessen Menno Chemie-Vertrieb GmbH Langer Kamp Norderstedt Fachbereich 10 KLINIKUM Veterinärmedizin Klinik für Vögel, Reptilien, Amphibien und Fische Kra Prof. Dr. med. veto Martin mer (kommissarischer Direktor) Dr. med. veto Thomas (leitender Tierarzt) Tel.: +49 (0)641/ Fax: +49 (0)641/ Frankfurter Str Giessen Redmann ÄT GIESSEN 22. September 2008 TESTBERICHT über die bakterizide Wirksamkeit des chemischen Desinfektionsmittels VENNO VET 1 SUPER der Firma Menno Chemie-Vertrieb GmbH, Langer Kamp 104, Norderstedt, Deutschland. Das genannte Präparat wurde von der Menno Chemie-Vertrieb GmbH in einem ungeäffneten Originalkanister zugestellt. Als Testkeim wurde ein MRSA-Stamm (Methicillin-resistenter Staphylococcus aureus) verwendet.

2 2 Die gesamte Prüfung erfolgte gemäß den "Richtlinien für die Prüfung von Desinfektionsverfahren und chemischen Desinfektionsmitteln" (4. überarbeitete Auflage, 2007) der Deutschen Veterinärmedizinischen Gesellschaft e. V. (DVG), Gießen, als Eckwertprüfung (Kapitel V: Methoden der Prüfung von chemischen Desinfektionsmitteln für die Tierhaltung, Abschnitt A: Prüfung an Bakterien und Pilzen). Die Untersuchungen fanden zwischen dem und statt. 1 Material und Methoden 1.1 Material Desinfektionsmittel: VENNO VET 1 SUPER Verpackung: Kunststoffflasche mit Schraubverschluss Menge: 2 kg Lagerung: bei Zimmertemperatur, Inhalt: dünnflüssig, klar, gelb Geruch: stechend im Dunkeln ph-wert: nicht im messbaren Packungsangaben: Bereich Chargenbezeichnung: Zusammensetzung: Haltbarkeit: g/1 00 g Ameisensäure Gefahrenzeichen: C (ätzend) Testkeim: MRSA (Methicillin-resistenter Staphylococcus aureus): Erhalten von Herrn Prof. Dr. Lothar H. Wieler aus dem Institut für Tier- und Umwelthygiene der Freien

3 3 Universität Berlin, ein klinisches Isolat von einem Hund mit Arthritis, Isolat-Nr: Nährmedien: Caseinpepton-Sojabohnenmehlpepton-Lösung (CSL) (BBL Tripticase Soy Broth, Beeton, Dickinson and Company, Sparks, USA) Caseinpepton-Sojabohnenmehlpepton-Agar (CSA) (CASO-Agar, Oxoid, Wesei, Germany) Verdü nnunqsflüssiqkeit: Wasser standardisierter Härte nach DVG-Richtlinien Eiweißbelastunq: 20 % steriles, bei 56 C 30 min inaktiviertes Rinderserum Inaktivierunqsmittel nach DVG: 1. CSL + 0,1 mol/l Dinatriumhydrogenphosphat 2. CSL + 0,05 mol/l Dinatriumhydrogenphosphat 3. CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin 4. CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat 5. CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat + 0,01 mol/l Dinatriumhydrogenphosphat 6. CSL + 1 % Polysorbat Methoden: Die Prüfung des Desinfektionsmittels erfolgte bei 20 C und umfasste folgende Untersuchungen: - Bestimmung der bakteriostatischen Wirkung - Ermittlung geeigneter Inaktivierungsmittel

4 4 - Bestimmung der bakteriziden Wirkung im Suspensionstest (als Eckwertprüfung) - Bestimmung der bakteriziden Wirkung im Keimträgertest (als Eckwertprüfung) Die Detailbeschreibungen der hier verwendeten Untersuchungsmethoden für die Keimträgerversuche sind der Neufassung der DVG-Richtlinien zur Prüfung chemischer Desinfektionsmittel aus dem Jahre 2007 zu entnehmen. Geprüft und beurteilt wurde das Präparat in einer Konzentration von 1,0 % (viv). 2 Ergebnisse 2.1 Ergebnisse der Prüfungen zur Bestimmung der bakteriostatischen Wirkung (s. Tabelle 1) Die minimale Hemmkonzentration (MHK) liegt bei 0,016 % für Venno Vet 1 super und bei 0,25 % für Phenol. Von getrübten Medien im Grenzbereich wurden Subkulturen auf CSA zur Wachstumkontrolle angelegt. Schon nach einer Inkubation von 24 h wurde Vermehrung mit der Bildung charakteristischer Kolonien (kleine, runde, gewölbte, grau-weiße Kolonien mit glatter Oberfläche und deutlich abgrenzendem, glattem Rand) des Testkeimes festgestellt. 2.2 Ergebnisse der Prüfungen zur Ermittlung geeigneter Inaktivierungsmittel (5. Tabelle 1) Die CSL mit 0,1 und 0,05 mol/l Na2HP04 zeigten sich zur Enthemmung des Venno Vet 1 super als ungeeignet. Die weiteren drei Inaktivierungsmittel mit polyvalenten Enthemmer-Kombinationen (s. Punkt 1.1 Material und Methode)

5 5 haben die minimale Hemmkonzentration sehr deutlich erhöht, wobei die Inaktivierungsmittel-Kombinationen 3 und 5 einen besseren Enthemmungseffekt hervorbrachten. Da das zu prüfende Präparat ein saures Mittel ist, wurde bei weiteren Untersuchungen die Inaktivierungsmittel-Kombination 5 (CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat + 0,01 mol/l Dinatriumhydrogenphosphat) verwendet. Das Inaktivierungsmittel 6 hat nicht zur Erhöhung der Hemmkonzentration des Phenols geführt. Die Kombinationen 3 und 4 erhöhten die Hemmkonzentration dagegen um zweifachen. Bei weiteren Untersuchungen mit Phenol wurde die Inaktivierungsmittel-Kombination 4 (CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat) verwendet. 2.3 Ergebnisse der Prüfungen zur Bestimmung der bakteriziden Wirkung im Suspensionstest (s. Tabelle 2) Die Desinfektion des MRSA (Methicillin-resistenter Staphylococcus aureus) erforderte 30 min Einwirkung des 1,0 % Phenol ohne Proteinbelastung. Mit Protein (20 % FKS) war die 1,0 %ige Lösung erst nach 60 min desinfizierend. Eine Konzentration von 1,0 % des Venno Vet 1 super führte schon innerhalb von 5 min sowohl ohne als auch mit Proteinbelastung zur Desinfektion des MRSA in Suspension. 2.4 Ergebnisse der Prüfungen zur Bestimmung der bakteriziden Wirkung im Keimträgertest (s. Tabelle 3) 30 Minuten Einwirkung des 1,0 % Venno Vet 1 super und 3,0 % Formalins resultierte in Desinfektion des MRSA. Nach 72 h Inkubation wurden alle Röhrchen der Venno Vet 1 super- und Formalin-Ansätze noch mit 0,05 ml der

6 6 Bakterienkultur (3,5 x 108 KBE/ml) beimpft. Bereits nach 24 h Inkubation wurde in allen Röhrchen eine deutliche Trübung beobachtet. 3 Schlussfolgerung In der,,12. Desinfektionsmittelliste der Deutschen Veterinärmedizinischen Gesellschaft (DVG) für die Tierhaltung" (Gießen, Mai 2003) wird Venno Vet 1 super sowohl zur vorbeugenden (Spalte 4b) als auch zur speziellen Desinfektion von Bakterien (Spalte 4a) in einer Konzentration von 1,0 % empfohlen. Maßgebend für die Eintragung in die Spalte 4a ist das Ergebnis des Keimträgertestes, maßgebend für die Eintragung in die Spalte 4b sind die Ergebnisse der Suspensionstests (DVG-Richtlinien, 2007). Bei uns wurde eine Eckwertprüfung durchgeführt, um festzustellen, ob mit dieser Konzentration auch Methicillin-resistente Staphylokokken erfasst werden können. Die Ergebnisse zeigen, dass der getestete MRSA durch die Verwendung einer Konzentration von 1,0 % innerhalb von 5 min in Suspension und innerhalb von 30 min auf und in Holzkeimträgern sicher desinfiziert werden kann. Aufgrund dieses Ergebnisses kann man erwarten, dass die Anwendungsempfehlungen der DVG für Venno Vet 1 super (vorbeugende Desinfektion: 1,0 % für 0,5 h, spezielle Desinfektion: 1,0 % für 2 h) auch die Desinfektion der MRSA bei 20 oe sicherstellt.

7 II Tab. I: 0,0160,008 0,016n. 0,125 IM-lI IM-44 0,008 IM-22 IM33 IMS5 66Venno Desinfektions- Ergebnisse 5,3 Test Vet I 0,25 8 5,3 x 10 0,25n. 0,5 d. d. 3,6II x der super InaktivierungsmittelKeimzahl/ml Bakteriostase-Prüfung und Prüfungen (Ausgangskultur) zur Ermittlung geeigneter Inaktivierungsmittel aus zwei unabhängigenderversuchen MHK-Werte(I und in Vol. 11) ohne 3,6 x 108 rüfstamm (Angaben %) 1 CSL + 0,1 molll Dinatriumhydrogenphosphat 2 CSL + 0,2 molll DinatTiumhydrogenphosphat 3 CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin 4 CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat 5 CSL + 3 % Polysorbat ,3 % Lezithin + 3 % Saponin + 0,1 % Histidin + 0,3 % Natriumthiosulfat + 0,01 molll Dinatriumhydrogenphosphat 6 CSL + 1 % Polysorbat 80

8 Prüf- - - Tab. II 2: I I Ph.1% Bakterizidie-Prüfung - + Konz v-% Zeit ohne in Minuten Eiweiß von Venno ohne Zeit in Eiweiß Minuten Vet 1 super im Suspensionstest (Endpunktmethode -resistent) 6,2 (I und ) II ohne = unabhängige und mit Eiweißbelastung Ansätze) bei 20 oe X Die Vermehrung war in WSH in allen Fällen positiv + + = Wachstum in allen Ansätzen + - = Wachstum in mind. einem Ansatz, - - = Wachstum in keinem Ansatz % Tab. 3: Ergebnisse Fo.3 + 1% 120' Einwirkungszeit 60' Konz + WSH + % der Bakterizidie-Prüfung auf Holzkeimträger von Venno Vet 1 super im Keimträgertest resistent) bei 20 30' oe 3,6 X 108 Prüfstamm + + = Wachstum in allen Ansätzen, + - = Wachstum in mind. einem Ansatz, -- = Wachstum in keinem Ansatz