Escherichia coli ein Keim mit vielen Gesichtern

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1 Klinische Diagnostik November 2011 Titelthema Escherichia coli ein Keim mit vielen Gesichtern Helmut Leidinger Die im Mai und Juni 2011 grassierende EHEC-Infektionswelle in Deutschland hat große Aufmerksamkeit auf dieses weit verbreitete Bakterium gezogen. Escherichia coli gilt als der wohl bekannteste Darmkeim. Er gehört zur nützlichen Standortflora von Mensch und Tier. Außerhalb des Darmes jedoch ist E. coli als Infektionserreger bekannt; er verusacht Harnwegsinfekte und ist an Wundinfektionen und Septikämien beteiligt. 49 Todesfälle weiter auf Seite meldepflichtige Erkrankungsfälle 850 HUS-Patienten Die weiteren Themen: S.3 RIDA GENE Clostridium difficile: Hohe Qualität durch das unabhängige QCMD 2011 Clostridium Panel bestätigt Dr. Andreas Simons S.4 RIDA GENE Norovirus I & II LC2.0: Norovirus-Diagnostik jetzt auch auf dem Lightcycler 2.0 von Roche Dr. Andreas Simons S.5 S.6 RIDA GENE EAEC R-Biopharm AG erweitert das Produkt-Portfolio zum Nachweis pathogener E. coli Dr. Andreas Simons Entzündungen im Darm früher erkennen mit RIDASCREEN Calprotectin Dr. Andrea Lennerz RIDA LINE Helicobacter IgG RIDA LINE Helicobacter IgA Dr. Johanna Endt Erweiterte Möglichkeiten der In-vitro- Allergiediagnostik Joachim Zehender Messen und Tagungen

2 Fortsetzung von Seite 1 Escherichia coli ein Keim mit vielen Gesichtern Helmut Leidinger Es existiert jedoch auch eine Vielzahl von Durchfall-auslösenden E. coli-varianten, welche nicht zur intestinalen Standortflora zählen und die die unterschiedlichsten pathogenen Eigenschaften entfalten, wenn sie in den Darm des Menschen gelangen. Je nach Ausstattung mit Pathogenitätsfaktoren teilt man diese E. coli in verschiedene Pathotypen ein (ETEC, EPEC, EIEC, EAEC, DAEC, STEC und EHEC). Hauptmerkmale für die Einteilung in Pathotypen stellen dabei die einzelnen Pathogenitätsfaktoren wie Entero- und Zytotoxinbildung, Invasivität, Adhärenz und aggregative Eigenschaften dar. Das komplette Virulenzprofil wird durch weitere, nur molekularbiologisch zu identifizierende Merkmale vervollständigt. Dabei ist kein Typ in seiner genetischen Konstitution statisch: Durch horizontalen Gentransfer wie Konjugation und Phagenaustausch kann sich die Virulenz eines bestimmten Pathotypen verändern. Durch Kumulation mehrerer enteropathogener Eigenschaften und weiterer differenzierender Virulenzfaktoren können E. coli-bakterien mit immensem Unheilpotenzial entstehen. Der Auslöser des jüngsten Ausbruchstamms in Deutschland, der in hohem Maße mit dem hämolytisch urämischen Syndrom (HU-Syndrom) assoziiert war, ist Beispiel dieser unheilvollen Rekombination und Ansammlung von Virulenzeigenschaften. So besitzt der isolierte Ausbruchsstamm HUSEC 0104:H4 Eigenschaften von enteroaggregativen E. coli (EAEC) und Shigatoxin-produzierenden enterohämorrhagischen E. coli (EHEC). Diese zeigen gegenüber den normalen EHEC-Keimen eine verstärkte Adhärenz zu Darmepithelzellen. Hierbei handelt es sich jedoch nicht um einen komplett neuen Stamm, sondern um einen besonders pathogenen Klon eines Hybridstammes, der aus den beiden genannten Pathotypen entstanden ist und durch schrittweisen Austausch chromosomal- und plasmidkodierter Virulenzfaktoren diese hohe Virulenz erlangt hat. Eine weitere Besonderheit und Erfahrung des jüngsten Ausbruchs war die Feststellung, dass sich unter den über mehr als 4300 meldepflichtigen Erkrankungsfällen mit über 850 HUS-Patienten und 49 Todesfällen überwiegend junge Erwachsene (> 20 Jahre) befanden. Dies zeigt einmal mehr, dass die häufig praktizierte Beschränkung der EHEC-Diagnostik auf Kinder unter 6 Jahren oder ältere Personen über 65 Jahren eine große Gefahr der Unterdiagnostizierung von prinzipiell sehr gefährlichen Erregern bedeutet. Zusätzlich zeigte sich, dass die Erkrankung durch EHEC bzw. STEC anfänglich nicht immer von blutigem Durchfall begleitet ist und sich trotzdem das gefährliche und lebensbedrohliche HU-Syndrom entwickeln kann. Eine breiter greifende und frühzeitige Differentialdiagnostik mit Hilfe schnell und einfach durchzuführender Nachweise von Shigatoxin als wichtigem Marker einer STEC/EHEC-Infektion in Stuhlproben von Patienten aller Altersgruppen kann das Risiko für schwere Krankheitsverläufe reduzieren. HUSEC O104:H4 war nur eine wenn auch von dramatischer Mortalität begleitete Rarität unter den HUS-auslösenden EHEC- Vertretern. Produkte für den spezifischen Shigatoxin/EHEC-Nachweis: Produkte Tests Art.Nr. RIDASCREEN Enzymimmunoassay zum Antigennachweis RIDASCREEN Verotoxin 96 C2201 RIDA QUICK Schnelltests zum Antigennachweis RIDA QUICK Verotoxin/0157 Combi 25 N2202 RIDA QUICK Verotoxin/0157 Combi 20 Kassetten N2203 RIDA Anreicherungsbouillon 100 Röhrchen Z1000 Anreicherungsbouillon 25 Röhrchen Z1003 RIDA GENE real-time PCR RIDA GENE EHEC/EPEC 100 Best. PG2205 RIDA GENE STEC 100 Best. PG2205 Seite 2

3 RIDA GENE Clostridium difficile: Hohe Qualität durch das unabhängige QCMD 2011 Clostridium difficile Panel bestätigt Die R-Biopharm AG hat erfolgreich mit den drei Produkten RIDA GENE Clostridium diffcile & Toxin A/B, RIDA GENE CD Toxin A/B und RIDA GENE Clostridium diffcile Hypertox am externen internationalen 2011 Clostridium difficle NA-Qualitätsbeurteilungsprogramm (EQA) von QCMD (QUALITY CONTROL for MOLECULAR DIAGNOSTICS) teilgenommen. QCMD ist eine externe internationale Ringversuchorganisation, die Qualitätsbeurteilungen der molekularen Diagnostik durchführt. Das QCMD EQA-Panel ist aus verschiedenen Proben zusammengestellt, um die Leistungsfähigkeit eines Assays beurteilen zu können. Einige Proben des Panels werden als Kern-Leistungsproben bezeichnet. Hierbei handelt es sich um Proben, wie sie im Hinblick auf Konzentration und Diversität bei klinischen Fällen erwartet werden können und daher durch die Routinediagnostik nachgewiesen werden sollten. Es wird erwartet, dass Labore die Kern-Leistungsproben richtig nachweisen. Weitere Proben erlauben die Beurteilung der Nachweisgrenze des Assays, die unter bestimmten Umständen relevant sein könnte. Das 2011 Clostridium difficile EQA-Panel besteht aus zwei negativen Proben (eine davon C. sordellii), 5 Proben des C. difficile Ribotyps 027 und 3 Proben des C. difficile Ribotyps 017 in unterschiedlichen Konzentrationen. Die R-Biopharm AG berichtet 8/8 (100,0 %) der Kern-Proben und die beiden zusätzlichen Proben richtig. Von allen Teilnehmern berichteten 91,3 % das korrekte Ergebnis für die Kern-Leistungsproben. Nur 71 % aller Teilnehmer konnten alle Proben korrekt nachweisen. Die Ringversuchsergebnisse können bei der R-Biopharm AG angefordert werden. RIDA GENE EAEC R-Biopharm AG erweitert das Produkt-Portfolio zum Nachweis pathogener E. coli Enteroaggregative E. coli (EAEC) sind die Ursache von akutem und chronischem (d.h. länger als 14 Tage andauernden) Durchfall bei Kindern, Erwachsenen und HIV-infizierten Personen sowohl in Entwicklungs- als auch in Industrieländern. 1 Sie sind nach enterotoxischen E. coli die zweithäufigsten Erreger einer Reisediarrhoe. EAEC sind für 15 % aller akuten Diarrhoen bei Kindern in Entwicklungsländern und für 4 % in Industrieländern verantwortlich. 2 Die R-Biopharm AG hat eine real-time PCR zum schnellen und spezifischen Nachweis von EAEC-Bakterien entwickelt. Mit dem neuen RIDA GENE EAEC-Assay kann eine Infektion mit dem EHEC-Erreger in weniger als 2 Stunden direkt aus Stuhl nachgewiesen werden. Die real-time PCR kann auf den gängigen real-time PCR-Geräten (LightCycler 480II, SmartCyler, ABI7500, Rotor-Gene Q und MxSerie) verwendet werden. Bei der real-time PCR werden spezifische Pathogenitätsgene für EAEC nachgewiesen. Dadurch kann in Proben mit negativem Befund das Vorhandensein von EAEC ausgeschlossen werden. Die Vorteile des RIDA GENE EAEC: Direktnachweis aus Stuhl- und Kulturproben Ergebnisse in weniger als 2 Stunden Real-time PCR Verwendbar auf den gängigen real-time PCR Geräten 1. Kaper JM, et al. PATHOGENIC ESCHERICHIA COLI. Nature Reviews Microbiology 2004; 2: Huang DB et al. A review of an emerging enteric pathogen: Enteroaggretative Escherichia coli. Journal of Medical Microbiology 2006, 55: Seite 3

4 RIDA GENE Norovirus I & II LC2.0: Norovirus-Diagnostik jetzt auch auf dem Lightcycler 2.0 von Roche Mit der Einführung der RIDA GENE Norovirus I & II LC2.0 RT-PCR ermöglicht die R-Biopharm AG den Nachweis und die Differenzierung von Noroviren der Genogruppen I und II in humanen Stuhlproben zur Verwendung auf dem LightCycler 2.0. Um den Assay auf dem Lightcyler 2.0 anwenden zu können, muss mit dem RIDA GENE Color Compensation Kit II (PG0002) ein gerätespezifisches Color Compensation File erstellt werden. Mit einem Kit können 100 Bestimmungen durchgeführt werden. Alle erforderlichen real-time RT-PCR-Komponenten sind im Kit entahlten. Die analytische Sensitivität des RIDA GENE Norovirus I & II LC2.0-Assays beträgt 50 RNA-Kopien pro Reaktion. Eine interne Amplifikationskontrolle gewährleistet zuverlässige Ergebnisse und schließt falsch negative Ergebnisse aus. Entzündungen im Darm früher erkennen mit RIDASCREEN Calprotectin Die einfache, nicht-invasive Bestimmung von Calprotectin im Stuhl ermöglicht die frühzeitige und zuverlässige Diagnose einer Entzündung im Darm. Mit der Messung der Calprotectin-Konzentration im Stuhl können Patienten mit Reizdarm- Syndrom sehr schnell von solchen mit. chronisch entzündlicher Darmerkrankung unterschieden und die erforderlichen Therapiemaßnahmen eingeleitet werden. Die R-Biopharm AG bietet mit dem RIDASCREEN Calprotectin einen ELISA-Test an, der präzise und zuverlässig die Calprotectin-Konzentration im Stuhl sowohl im Cut-off-Bereich (50 mg/kg) als auch über den gesamten Messbereich ermittelt. Die 1-Punkt-Kalibration ermöglicht auch bei geringem Probenaufkommen eine wirtschaftliche Diagnostik: Die Anzahl an Patientenproben pro Mikrotiterplatte ist deutlich höher als bei solchen Testen, welche zahlreiche Standards zur Erstellung einer Standardkurve mitführen müssen. Die Calprotectin-Konzentration im Stuhl ist bei entzündlichen Veränderungen im Gastrointestinaltrakt erhöht. Somit lassen sich nicht nur akute Entzündungsschübe im Darmtrakt frühzeitig erkennen; auch die Entzündungsaktivität im Verlaufe einer Therapie kann objektiv dokumentiert werden. Hierdurch verbessert sich die Chance auf eine schnelle und anhaltende Heilung des Darms ( mucosal healing ), da das Risiko für eine dauerhafte Beschädigung bzw. Zerstörung der Darmstrukturen durch die schnelle Einleitung einer effektiven Therapie vermieden werden kann. Einsatz des RIDASCREEN Calprotectin: Sichere Unterscheidung von chronischentzündlichen Darmerkrankungen und Reizdarm-Syndrom Kontrolle des Therapieverlaufs Frühzeitige Feststellung eines Rezidivs RIDASCREEN Calprotectin Art.Nr. G09036 Vorteile des RIDASCREEN Calprotectin: 1-Punkt-Kalibration Gebrauchsfertige Reagenzien RiliBÄK-konforme Kontrollen Seite 4

5 RIDA LINE Helicobacter IgG RIDA LINE Helicobacter IgA Neu! Neue Streifen-Immunoassays Zuverlässige Differenzierung von humanen IgG- und IgA-Antikörpern gegen Helicobacter pylori-stämme Typ I und II. Mehr als die Hälfte der Weltbevölkerung ist mit dem gramnegativen, spiralförmigen Bakterium Helicobacter pylori (H. pylori) infiziert. Eine H. pylori-infektion wird mit einem erhöhten Risiko für Magenkarzinome sowie mit fast allen Magenulzera in Verbindung gebracht. Wichtig bei der H. pylori-diagnostik ist die Unterscheidung der H. pylori-stämme Typ I und II. So führen Infektionen des Typ I-Stammes, die positiv für die Virulenzfaktoren CagA und VacA sind, zu einem ernsthafteren Krankheitsverlauf als die Infektionen mit dem Typ II-Stamm. R-Biopharm bietet nun, zusätzlich zu den beiden ELISA-Testsystemen RIDASCREEN Helicobacter IgG und RIDASCREEN Helicobacter IgA, zwei neue Lineblot- Testsysteme für die Detektion von H. pylori an. RIDA LINE Helicobacter IgG und RIDA LINE Helicobacter IgA ersetzen die bisherigen Western Blot-Testsysteme RIDA BLOT Helicobacter IgG und RIDA BLOT Helicobacter IgA. Im Vergleich zu den bisherigen Western Blots ermöglichen die beiden neuen RIDA LINE Tests aufgrund der Auswahl spezifischer rekombinanter Antigene einen zuverlässigen, differenzierten Nachweis der H. pylori- Stämme vom Typ I und II. Neben höchster Sensitivität und Spezifität ermöglichen leicht ablesbare Banden eine einfache und klare Interpretation. Mit der Kombination aus IgG- und IgA-ELISAs und den entsprechenden Line Blots bietet R-Biopharm nun ein umfangreiches Angebot für den Nachweis von sowohl akuten als auch chronischen H. pylori-infektionen an. Der neue RIDA LINE Helicobacter IgG ist unter der Artikelnummer LB2323 und RIDA LINE Helicobacter IgA unter LB2313 erhältlich. Produkte für den spezifischen Helicobacter pylori-nachweis: Produkte Tests Art.Nr. RIDASCREEN Enzymimmunoassays zum Antikörpernachweis RIDASCREEN Helicobacter IgG 96 K2321 RIDASCREEN Helicobacter IgA 96 K2311 RIDA LINE Line Blots RIDA LINE Helicobacter IgG 20 LB2323 RIDA LINE Helicobacter IgA 20 LB2313 Bei Interesse an unseren Produkten fordern Sie bitte das entsprechende Informationsmaterial unter der Telefonnummer an oder senden Sie eine an: info@r-biopharm.de. Seite 5

6 Erweiterte Möglichkeiten der In-vitro-Allergiediagnostik Durch die Übernahme der dänischen Firma RefLab im vergangenen Jahr konnte die R-Biopharm AG ihr Angebot zur In-vitro-Allergiediagnostik um die funktionelle, zelluläre Allergiediagnostik erweitern. Gerade bei Nahrungsmittel-, Medikamenten- und Insektengiftallergien sind die diagnostischen Möglichkeiten (bestehend aus Anamnese, Pricktest und Bestimmung des spezifischen IgE) oft limitiert. Ist der erhaltene Befund nicht eindeutig, kann der neue Histamin-Release-Test der R-Biopharm AG zur weiteren Diagnostik eingesetzt werden. Dieser zelluläre Test kann durch jeden Allergologen einfach durchgeführt werden. Die einzigartige Glasfibermatrix bindet das freigesetzte Histamin selektiv und stabil, so dass die anschließende Quantifizierung des gebundenen Histamins entweder im eigenen Labor oder, wenn kein eigener Histareader zur Verfügung steht, in einem externen Referenzlabor oder bei der R-Biopharm AG durchgeführt werden kann. Da bei positivem Testergebnis im HistaminRelease-Test die Patienten-eigenen basophilen Leukozyten bei Kontakt mit dem getesteten Allergen mit einer Histaminfreisetzung reagiert haben, ist die Wahrscheinlichkeit sehr hoch, dass auch der Patient bei Kontakt mit dem gleichen Allergen eine allergische Symptomatik zeigen wird. Neben den ca. 80 Standard-Allergenen können auch individuelle Allergenaufbereitungen eingesetzt werden. Bei Interesse am Histamin-Release-Test kontaktieren Sie uns am Stand auf der MEDICA in Düsseldorf vom 16. bis zum Messen und Tagungen th Chinese Lab oratory Medicine Conference Taipeh, Taiwan Medica Düsseldorf Delab-Tagung Mainz Klinisch-Mikrobiologisch-Infektiologisches Symposium (KMIS) Berlin Arab Health Dubai, UAE R-Biopharmnews herausgegeben von R-Biopharm AG Postanschrift: An der neuen Bergstraße 17, Darmstadt, Sitz: Pfungstadt Telefon: , Fax: Vorsitzender des Aufsichtsrats: Dietrich Mollat Vorstand: Dr. Ralf M. Dreher (Vors.), Dr. Carsten Bruns Reg.-Nr.: Amtsgericht Darmstadt, HRB 8321 Steuer-Nr.: / , USt.ID-Nr.: DE