Technischer Anhang. Qualitätsstandards bei Greiner Bio-One. Qualitätsstandards bei Greiner Bio-One A I 2. Katalogübersicht Microplatten A I 3

Transkript

1 Technischer Anhang Qualitätsstandards bei Greiner BioOne A I Katalogübersicht Microplatten A I Allgemeine Laborinformationen A I 6 Beständigkeit diverser Materialien: Chemische Beständigkeit A I 6 Physikalische Eigenschaften A I 0 Manuelle Berechnung: Variationskoeffizient (VK, CV) A I Volumen diverser Körper A I Übersicht: Metrische Vorsilben A I Laborinformation für das Liquid Handling A I Kompatibilität Pipettenspitzen / Pipettoren A I Kompatibilität Sapphire Pipettenspitzen / Pipettoren A l Laborinformation für die Zentrifugation A I 6 Zentrifugation Prinzip und Berechnung der RCF A I 6 Nomogramm A I 7 Max. Zentrifugierbarkeit von Röhrchen, Reaktionsgefäßen und Microplatten A I 7 Laborinformation für die Probenlagerung A I 0 Protokoll für das Einfrieren und Auftauen von Zellen A I 0 Laborinformation für die Immunologie A I Benetzung der Näpfchenoberfläche von verschiedenen immunologischen Produkten in Abhängigkeit des Füllstandvolumens A I Abkürzungsverzeichnis A I Glossar A I Artikelnummerverzeichnis A l Stichwortverzeichnis A l 8 Qualitätsstandards bei Greiner BioOne Greiner BioOne ist nach den internationalen Richtlinien ISO 900 und ISO 85 für Medizinprodukte zertifiziert. Nebenstehend finden Sie die entsprechenden Zertifikate für beide Qualitätsstandards. ISO 900 Zertifikat ISO 85 Zertifikat A

2 Katalogübersicht Microplatten Untenstehend finden Sie alle in diesem Katalog aufgeführten Greiner BioOne Microplatten mit der entsprechenden Seitenzahl. 96 Well Microplatten Boden Farbe Näpfchengeometrie Optischer Boden Oberflächeneigenschaften µclear Glas TC Advanced Steril Nicht Med. High PolyL Non Strepta PolyD Kollagen Boden boden behandelt, TC TM, steril binding binding, binding vidin Lysin Lysin Typ I steril steril steril besch. Polystyrol transp. UBoden l l, l 7 l 7 l 5 l 5 l VBoden l l 7 l 7 l 5 l 5 l FBoden/Standard l 7 l 7 l 5 l 5 FBoden/Kaminform l l 0 l l 5 l 5 l l 5 l 6 l FBoden/Half Area l 5 l 9 l 9 l 5 l 5 fest weiß CBoden FBoden/Kaminform l l 8 l 8 l l FBoden/Half Area l 5 l 9 l 9 CBoden l schwarz FBoden/Kaminform l l 8 l 8 l FBoden/Half Area l 5 l 9 l 9 CBoden l weiß FBoden/Kaminform l 5 l 0 l 8 l 8 l l 5 optisch FBoden/Half Area schwarz FBoden/Kaminform FBoden/Half Area l 5 l 5 l 5 l 0 l 0 l 0 l 9 l 8 l 9 l 9 l 8 l 9 l l 5 l 6 l FBoden/Kaminform l 5 UVStar optisch transp. FBoden/Kaminform FBoden/Half Area schwarz FBoden/Kaminform l 7 l 7 I 7 Polypropylen fest, Standard Microplatte weiß UBoden/Kaminform FBoden/Kaminform VBoden/Kaminform UBoden/Kaminform FBoden/Kaminform VBoden/Kaminform schwarz UBoden/Kaminform FBoden/Kaminform VBoden/Kaminform l l l l l l l l l l fest, MASTERBLOCK ml ml 0,5 ml gelb rot blau grün gelb rot VBoden UBoden UBoden UBoden UBoden UBoden VBoden VBoden VBoden l l l l l l l l l l 5 l l l l l l blau VBoden l grün VBoden l A

3 8 Well Microplatten Boden Farbe Näpfchengeometrie Optischer Boden Oberflächeneigenschaften µclear Glas TC Advanced Steril Nicht Med. High PolyD PolyL Non Strepta Kollagen Boden boden behandelt, TC TM, steril binding binding, binding vidin Lysin Lysin Typ I Polystyrene fest optisch transp. weiß schwarz weiß schwarz FBoden Small Volume TM HiBase Small Volume TM LoBase FBoden Small Volume TM HiBase Small Volume TM LoBase FBoden Small Volume TM HiBase Small Volume TM LoBase FBoden Small Volume TM LoBase FBoden Small Volume TM HiBase Small Volume TM LoBase FBoden Small Volume TM LoBase FBoden extra LoBase steril l 6 l 6 I 7 l 7 l 6 I 7 l 7 l 7 l 7 l 7 l 7 steril l 0 l 0 l 0 l 0 l l 7 l 5 l 5 l l 7 l 7 l 5 l l 7 l 7 l l 7 l 7 l l 7 l l 7 steril l l l l l I l l l l l l besch. l l l l 5 I 5 I 5 l 5 l 5 l 6 l 6 l l UVStar fest, fest, Standard MASTERBLOCK Microplatte optisch transp. schwarz Polypropylen weiß schwarz FBoden Small Volume TM LoBase FBoden VBoden Deep Well Small Volume TM FBoden VBoden FBoden VBoden VBoden, Deep Well l 6 l 7 I 7 l 5 l 5 l 8 l 5 l 5 l 5 l 5 l 6 fest, deionisierte Lagerungsplatte FBoden I 9 Cycloolefin transp. Small Volume TM I 9 fest A

4 56 Well Microplatten Boden Farbe Näpfchengeometrie Optischer Boden Oberflächeneigenschaften µclear Boden Glasboden TCbehandelt, steril Steril Nicht steril Med. binding High binding, steril nonbinding PolyD Lysin Polystyrol transp. FBoden HiBase I 8 I 0 I 0 FBoden LoBase I optisch fest Polypropylen fest weiß FBoden HiBase I 8 I 0 I 0 I FBoden LoBase I schwarz FBoden HiBase I 8 I 0 I 0 I FBoden LoBase I weiß FBoden HiBase I 8 I 0 I 0 FBoden LoBase I 9 I schwarz FBoden HiBase I 8 I 0 I 0 I 5 FBoden LoBase I 9 I FBoden HiBase I 5 FBoden LoBase I 5 FBoden extra LoBase I 5 VBoden, Deep Well I 7 I 7 Cycloolefin optisch fest transp. FBoden I 9 Fbottom (Novartis Design) I 9 schwarz FBoden COFolie I 0 A 5

5 A 6 Allgemeine Laborinformationen Chemische Beständigkeit diverser Materialien Aceton Acetonitril Ameisensäure % Ammoniak 5 % Ammoniumacetat Amylalkohol Ascorbinsäure Benzol Benzylalkohol Borsäure 0 % Chloroform 00 % Cyclohexanol Detergenzien Dichloressigsäure Diethylether Dimethylacetamid Dimethylsulfoxid (DMSO) Emulgator Essigsäure 0 % Essigsäure % Essigsäure 90 % Ethanol % Ethanol 96 % Ether Formaldehyd 0 % Formaldehyd 0 % Formamid Glucose Glycerol Harnsäure Harnstoff Heptan Hexanol Hydrochinon Isoamylalkohol Isobutylalkohol Isopropylacetat Isopropylalkohol Isopropylbenzol Isopropylether Kaliumcarbonat Kaliumchromat Kaliumpermanganat Kohlensäure Methanol Methylacetat Methylamin % Methylenchlorid Methylphenylether 00 % Methylpropylketon = beständig = eingeschränkt beständig = mäßig beständig = nicht beständig Für die Eignung des jeweiligen Materials können diese Tabellen grundsätzlich nur als Orientierungshilfe dienen, da das Verhalten gegen Chemikalien von der Gestalt des Erzeugnisses und der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. PS 0 ºC PS ºC PP 0 ºC PP ºC HDPE 0 ºC HDPE ºC LDPE 0 ºC LDPE ºC

6 Chemische Beständigkeit diverser Materialien Milchsäure % Milchsäure 85 % Naphthalin Natriumacetat Natriumchlorid Natriumhypochlorid Natriumpermanganat Natriumthiosulfat Natronlauge 0 % Natronlauge 5 % Natronlauge 60 % Nitrobenzol Oxalsäure Ozon Palmitinsäure Paraffinöl Phenol 0 % Phenol 00 % Phosphorsäure 5 % Phosphorsäure 85 % Phthalsäure Propanol Salzsäure 0 % Salzsäure konz. Schwefelsäure 6 % Schwefelsäure 60 % Schwefelsäure konz. Stearinsäure Tanninsäure Terpentin Tetrachlormethan Tetrahydrofuran Toluol Trichloressigsäure Urin Wasserstoffperoxid % Xylen Zitronensäure 0 % PS 0 ºC PS ºC PP 0 ºC PP ºC HDPE 0 ºC HDPE ºC LDPE 0 ºC LDPE ºC = beständig = eingeschränkt beständig = mäßig beständig = nicht beständig Für die Eignung des jeweiligen Materials können diese Tabellen grundsätzlich nur als Orientierungshilfe dienen, da das Verhalten gegen Chemikalien von der Gestalt des Erzeugnisses und der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. Chemische Beständigkeit von Cycloolefin Microplatten Aceton Ammoniak % Benzaldehyd Benzin Benzol Butanol Chloroform Detergenzien Cycloolefin DMSO Essigsäure 99 % Ethanol % Ethanol 96 % Fettsäure Heptan (nheptan) Hexan Isopropylalkohol Cycloolefin Methanol Methylenchlorid Natronlauge (NaOH %) Pentan Salpetersäure (HNO) Salzsäure (HCl) 6 % Schwefelsäure (HSO) 0 % Cycloolefin = beständig = eingeschränkt beständig = mäßig beständig = nicht beständig Für die Eignung des jeweiligen Materials können diese Tabellen grundsätzlich nur als Orientierungshilfe dienen, da das Verhalten gegen Chemikalien von der Gestalt des Erzeugnisses und der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. A 7

7 Chemische Beständigkeit von UVStar Microplatten Aceton Ammoniak % Benzaldehyd Benzin Benzol Butanol Chloroform Detergenzien UVStar DMSO Essigsäure 99 % Ethanol % Ethanol 96 % Fettsäure Heptan (nheptan) Hexan Isopropylalkohol UVStar Methanol Methylenchlorid Natronlauge (NaOH %) Pentan Salpetersäure (HNO) Salzsäure (HCl) 6 % Schwefelsäure (HSO) 0 % UVStar = beständig = eingeschränkt beständig = mäßig beständig = nicht beständig Für die Eignung des jeweiligen Materials können diese Tabellen grundsätzlich nur als Orientierungshilfe dienen, da das Verhalten gegen Chemikalien von der Gestalt des Erzeugnisses und der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. Chemische Beständigkeit der Polyethylenterephthalat (PET) KapillarporenMembran (ThinCert TM Zellkultur Einsätze) Acetaldehyd Aceton Ameisensäure ( %) Ammoniumhydroxid (5 %) Amylacetat Amylalkohol Anilin Benzol Benzylalkohol Benzylbenzoat Borsäure (5 %) Butanol Butylacetat Butylcellusolve Chloroform Cyclohexan Cyclohexanon Dekaline Dimethylacetamid Dimethylformamid Dimethylsulfoxid Dioxin Essigsäure (0 %) Essigsäure (00 %) Ethanol Ethylacetat Ethylendichlorid Ethylenglycol Ethylether Fluorsäure (5 %) Formaldehyd Freon Glutaraldehyd Glycerin Halogenierte Phenole Hexan IsoPropanol Isopropylmyristat Kaliumhydroxid Konz. starke Säuren Methanol Methylacetat Methylcellusolve Methylenchlorid Methylethylketon Methylglycolacetat Methylisobutylketon Mineralöle Monochlorbenzol Natriumhydroxid Nitrobenzol Nitropropan npropanol Pentan Perchlorethylen Petroleumether Phorsphorsäure (85 %) Propylacetat Pyridin Salpetersäure (0 %) Salzsäure (0 %) Schwefelsäure (5 %) Silikon Terpentin Tetrachlorkohlenstoff Tetrahydrofuran Tetralin Toluol Trichlorbenzol Trichlorethylen Triethanolamin Trikresylphosphat Wasserstoffperoxid (0 %) Xylen Da die Chemikalienbeständigkeit von Kunststoffen leicht schwanken kann, sollte die Beständigkeit unter den jeweiligen Anwendungsbedingungen geprüft werden. Alle Tests wurden bei Raumtemperatur durchgeführt. Bitte beachten Sie, dass ThinCert TM Zellkultur Einsätze aus einer PET Membran bestehen, die auf ein PolystyrolGehäuse aufgeschweißt ist. D. h., die oben aufgeführten Beständigkeiten mit PET sind eventuell nicht kompatibel mit dem PolystyrolGehäuse. Bitte Chemikalienbeständigkeit mit Polystyrol prüfen A I 6 f. Beständigkeitsskala von bis = beständig = eingeschränkt beständig = mäßig beständig = nicht beständig Der Kunststoff kann bei Raumtemperatur mit der Substanz über hre behandelt werden, ohne Einfluss auf die physikalischen, optischen und chemischen Eigenschaften Der Kunststoff kann bei Raumtemperatur mit der Substanz über Wochen behandelt werden, ohne Einfluss auf die physikalischen, optischen und chemischen Eigenschaften Der Kunststoff kann mit der Substanz bei Raumtemperatur kurze Zeit (Minuten oder eine Stunde) behandelt werden, ohne Einfluss auf die physikalischen, optischen und chemischen Eigenschaften (Mischen und Messen ist möglich) Veränderungen in der physikalischen, optischen und chemischen Charakteristik des Kunststoffs können bei Behandlung mit der Substanz innerhalb von Sekunden hervorgerufen werden A 8

8 Chemische Beständigkeit der Abdeckfolien EASYseal (Kat.Nr ) VIEWseal (Kat.Nr ) AMPLIseal (Kat.Nr ) SILVERseal (Kat.Nr ) Aceton Acetonitril Chloroform DMSO Eisessig Essigsäure % Ethanol Isopropanol Methanol Phenol Schwefelsäure 0,5 M Salzsäure % = Stabil keine sichtbaren Veränderungen der Abdeckfolie nach einer Woche Inkubation = Mäßig stabil nach einer Woche sind optische und physikalische Veränderungen der Abdeckfolie sichtbar = Nicht stabil Klebstoff und Folie lösen sich auf; die Näpfchen sind nicht dicht Diese Tabelle kann nur als Orientierungshilfe für die Eignung der jeweiligen Abdeckfolie verwendet werden, da das Verhalten gegenüber Chemikalien von der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. Temperaturbeständigkeit der Abdeckfolien Temperaturbeständigkeit EASYseal 0 C bis + 60 C VIEWseal 80 C bis + 0 C AMPLIseal 80 C bis + 0 C SILVERseal 80 C bis + 0 C BREATHseal 80 C bis + 60 C Verdunstungsrate 00 g HO/m² in h Diese Tabelle kann nur als Orientierungshilfe für die Temperaturbeständigkeit der jeweiligen Abdeckfolie verwendet werden, da das Materialverhalten des Produkts von der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. A 9

9 Physikalische Eigenschaften diverser Materialien Material Polystyrol Polypropylen Trockene Hitze Gas* Sterilisation durch Gamma Chemisch Strahlen (Formalin, Ethanol) Autoklavierbarkeit Temperaturbeständigkeit [ C] 0 bis bis + Transparenz durchsichtig durchscheinend GasPermeabilität [cc x mm/m x h x bar] O N,7 85,7 7 CO 7,8, WVTR (bei 7 ºC, 90 % Luftfeuchtigkeit) [g x mm/m x h x bar] 08 55,9 HDPE LDPE UVStar PETG PET Cycloolefin Einige bis + 00 bis bis bis bis + 80 bis + 00 durchscheinend durchscheinend durchsichtig durchsichtig durchsichtig durchsichtig,9 7,8 88 6,5 65,8 55 0,9 9,9, 6,6 6, 5,5, Ausnahmen werden im jeweiligen Produktdatenblatt erwähnt. * Ethylenoxid, Formaldehyd Material Polystyrol UVStar Cycloolefin Glas Brechungsindex,59,5,5,5 Für die Eignung des jeweiligen Materials können diese Tabellen grundsätzlich nur als Orientierungshilfe dienen, da das Verhalten gegen Chemikalien von der Gestalt des Erzeugnisses und der jeweiligen Anwendung abhängt. In vielen Fällen sind Praxisversuche unerlässlich. A 0

10 Manuelle Berechnung Variationskoeffizient (VK,CV) Der Variationskoeffizient (Coefficient of Variation) vergleicht die Streuungen mehrerer Stichproben mit verschiedenen Mittelwerten unter Berücksichtigung der dabei unterschiedlich großen Mittelwerte: CV % = S 00 % I X I wobei S Standardabweichung und I X I Absolutbetrag des arithmetischen Mittels. Volumen diverser Körper Volumen eines Zylinders: V = π d h h = V π d Diese Formel kann für die Berechnung der Füllstandshöhe in Abhängigkeit des Füllvolumens bei einer 96 Well Microplatte mit zylindrischen Wells verwendet werden. Volumen eines Quaders: V = a b h h = V a b Diese Formel kann für die Berechnung der Füllstandshöhe in Abhängigkeit des Füllvolumens bei 8 und 56 Well Microplatten mit rechteckigen Wells verwendet werden. Übersicht Metrische Vorsilben G = giga = 0 9 M = mega = 0 6 k = kilo = 0 c = centi = 0 m = milli = 0 µ = micro = 0 6 n = nano = 0 9 p = pico = 0 f = femto = 0 5 a = atto = 0 8 z = zepto = 0 A

11 Laborinformation für das Liquid Handling Kompatibilitätstabelle für Pipettenspitzen und Pipettoren Volumen [µl] 0,5 0 0, ml Gel 0 Bezeichnung gelb gelb Gel blau blau blau EINKANALPIPETTOREN StandardPipettenspitzen FilterPipettenspitzen (steril) Biohit Proline (0,5 0 µl) Biohit eline (5 0 µl) Biohit eline ( 000 µl) Brand Transferpette ( 0 µl) Brand Transferpette (0 00 µl) Brand Transferpette ( µl) Eppendorf Reference (0,5 0 µl) Eppendorf Reference ( 0 µl) Eppendorf Reference ( µl) Eppendorf Reference (0 00 µl) Eppendorf Reference (00 µl) Eppendorf Reference ( 00 µl) Eppendorf Reference (0 µl) Eppendorf Reference ( µl) Eppendorf Reference (000 µl) Eppendorf Research (0 00 µl) Eppendorf Research ( µl) Eppendorf Research pro (0,5 0 µl) Eppendorf Research pro (5 00 µl) Eppendorf Research pro (0 00 µl) Eppendorf Research pro ( 000 µl) Finnpipette Digital 0 ( µl) Gilson Pipetman P (0,5 µl) Gilson Pipetman P0 ( 0 µl) Gilson Pipetman P0 ( 0 µl) Gilson Pipetman P00 (0 00 µl) Gilson Pipetman P00 ( 00 µl) Gilson Pipetman P000 ( µl) Gilson Pipetman P00 ( 5 ml) Gilson F5/F0/F0 (5/0/0 µl) Gilson F5/F (5/ µl) Gilson F00 (00 µl) Gilson F00 (00 µl) Gilson F/F00 (/00 µl) Gilson F0/F000 (0/000 µl) Gilson Pipetman U0 ( 0 µl) Gilson Pipetman U00 (0 00 µl) Gilson Pipetman U000 ( µl) Die Namensrechte der genannten Hersteller sind im Besitz der oben genannten Firmen. A

12 Kompatibilitätstabelle für Pipettenspitzen und Pipettoren Volumen [µl] 0,5 0 0, ml Bezeichnung gelb gelb Gel blau blau blau 90 EINKANALPIPETTOREN StandardPipettenspitzen Socorex Calibra 8 ( 0 µl) Socorex Calibra 8 ( 0 µl) Socorex Calibra 8 (0 00 µl) Socorex Calibra 8 (0 00 µl) Socorex Calibra 8 ( µl) Socorex Acura 85 (0,5 0 µl) Socorex Acura 85 ( 0 µl) Socorex Acura 85 (5 µl) Socorex Acura 85 (0 00 µl) Socorex Acura 85 (0 00 µl) Socorex Acura 85 ( µl) MEHRKANALPIPETTOREN StandardPipettenspitzen 8F Biohit Proline ( 00 µl) 8F Biohit Proline (5 µl) 8F Brand Transferpette (0 00 µl) 8F Eppendorf Research (0 00 µl) 8F Finnpipette Digital ( 00 µl) 8F Gilson Pipetman (0 00 µl) 8F Socorex Calibra 85 ( 0 µl) 8F Socorex Acura (5 µl) 8F Socorex Calibra 85 (0 00 µl) F Eppendorf Research (0, µl) F Socorex Calibra 85 (0 00 µl) Die Namensrechte der genannten Hersteller sind im Besitz der oben genannten Firmen FilterPipettenspitzen (steril) FilterPipettenspitzen (steril) 000 Gel A

13 Kompatibilitätstabelle für Sapphire Pipettenspitzen und Pipettoren Volumen [µl] Kat.Nr. 77 5X 78 5X 0 5X 77 6X 77 6X 78 6X 0 6X Pipettoren Standard Pipettenspitzen Filterpipettenspitzen (steril) Biohit M00 Biohit M00 Biohit Proline (0,5 0 µl) Biohit Proline ( µl) Biohit Proline Plus (0 00 µl) Biohit Proline Plus (0 00 µl) Biohit Proline Plus (00 µl) Brand Transferpette S (0,5 0 µl) Brand Transferpette S ( 0 µl) Brand Transferpette S (0 00 µl) Brand Transferpette S (0 00 µl) Brand Transferpette S ( µl) Brand Transferpette Electronic (5 00 µl) Brand Transferpette Electronic (0 00 µl) Capp (0,5 0 µl) Capp (5 µl) Capp (0 00 µl) Capp (0 00 µl) CLP BetaPette (0, µl) CLP BetaPette (0,5 0 µl) CLP BetaPette ( 0 µl) CLP BetaPette (0 00 µl) CLP BetaPette (0 00 µl) CLP BetaPette ( µl) CLP Poseidon (0, µl) CLP Poseidon (0,5 0 µl) CLP Poseidon (5 µl) CLP Poseidon (0 00 µl) CLP Poseidon (0 00 µl) CLP Poseidon (0 00 µl) CLP Poseidon ( µl) CLP Poseidon Electronic ( 0 µl) CLP Poseidon Electronic (0 00 µl) CLP Poseidon Electronic ( µl) Eppendorf Reference (0,,5 µl) Eppendorf Reference (0,5 0 µl) Eppendorf Reference ( 0 µl) Eppendorf Reference (0 00 µl) Eppendorf Reference ( 00 µl) Eppendorf Reference ( µl) Eppendorf Research (0,,5 µl) Eppendorf Research (0,5 0 µl) Eppendorf Research ( 0 µl) Eppendorf Research (0 00 µl) Eppendorf Research (0 00 µl) Eppendorf Research (0 00 µl) Eppendorf Research ( µl) Eppendorf Research Plus (0,,5 µl) Eppendorf Research Plus (0,5 0 µl) Eppendorf Research Plus ( 0 µl) Eppendorf Research Plus (0 00 µl) Die Namensrechte der genannten Hersteller sind im Besitz der oben genannten Firmen. A

14 Kompatibilitätstabelle für Sapphire Pipettenspitzen und Pipettoren Volumen [µl] Kat.Nr. 77 5X 78 5X 0 5X 77 6X 77 6X 78 6X 0 6X Pipettoren Standard Pipette Tips Filter Pipette Tips (sterile) Eppendorf Research Plus ( 00 µl) Eppendorf Research Plus ( µl) Finnpette (0,5 0 µl) Finnpette ( 0 µl) Finnpette (5 µl) Finnpette (0 00 µl) Finnpette (0 00 µl) Finnpette ( µl) Finnpette ( µl) Finnpette (00 00 µl) Finnpette Electronic ( 0 µl) Finnpette Electronic (0 00 µl) Finnpette F ( 0 µl) Gilson Pipetman P0 ( 0 µl) Gilson Pipetman P0 ( 0 µl) Gilson Pipetman P00 (0 00 µl) Gilson Pipetman P00 ( 00 µl) Gilson Pipetman P000 ( µl) Gilson Pipetman U0 ( 0 µl) Gilson Pipetman U00 (0 00 µl) Hamilton (0, µl) Hamilton ( 0 µl) Hamilton (,5 5 µl) Hamilton (0 00 µl) Hamilton (0 00 µl) Hamilton ( µl) Labnet Biopette E (00 00 µl) Nichiryo Nichipet EX (0,5 0 µl) Nichiryo Nichipet EX ( 0 µl) Nichiryo Nichipet EX (0 00 µl) Nichiryo Nichipet EX (0 00 µl) Nichiryo Nichipet EX ( µl) Nichiryo Oxford Benchmate (0, µl) Nichiryo Oxford Benchmate ( 0 µl) Nichiryo Oxford Benchmate ( 00 µl) Nichiryo Oxford Multimate (0,5 0 µl) Nichiryo Oxford Multimate (5 µl) Nichiryo Oxford Multimate ( 00 µl) Socorex Calibra 8 ( 0 µl) Socorex Calibra 8 (0 00 µl) Socorex Calibra 8 (0 00 µl) Socorex Calibra 8 ( µl) VWR Ergonomic High Performance ( 0 µl) VWR Ergonomic High Performance (0 00 µl) VWR Ergonomic High Performance ( µl) VWR Ultra High Performance (0, µl) VWR Ultra High Performance (0,5 0 µl) VWR Ultra High Performance ( 0 µl) VWR Ultra High Performance (0 00 µl) VWR Ultra High Performance (0 00 µl) VWR Ultra High Performance ( µl) Die Namensrechte der genannten Hersteller sind im Besitz der oben genannten Firmen. A 5

15 Laborinformationen für die Zentrifugation Zentrifugation Prinzip und Berechnung der RCF (Relative Centrifugal Force) Sedimentation von Partikeln in einem Schwerefeld Wird eine Mischung aus Sand und Wasser stark geschüttelt und anschließend stehen gelassen, so erfolgt die Sedimentation der festen Partikel entsprechend ihrer Größe. Aufgrund der Gravitationsbeschleunigung (g = 9,8 m/s ) befinden sich alle Partikel in einem Schwerefeld, unter dessen Einfluss sich die großen Sandpartikel zuerst am Boden sammeln, auf die sich später die kleineren Sandkörner absetzen. Nach ca. 0 0 Minuten ergibt sich folgende Schichtung (von unten nach oben): grobe Sandkörner feine Sandkörner Wasser. Andere Partikel (Proteine, Nukleinsäuren, Viren, pro oder eukaryontische Zellen) sedimentieren jedoch nicht ohne weiteres bzw. erst nach längerer Zeit oder nachdem höhere Kräfte als die aus der Gravitationsbeschleunigung resultierende Gewichtskraft auf sie wirken. Übersteigen diese Kräfte die u. a. aus der Konvektion (Wärmebewegung) und der Brownschen Molekularbewegung resultierenden Gegenkräfte, die eine ständige Durchmischung von Lösungen bzw. Suspensionen verursachen, so erfolgt die Sedimentation. Die Sedimentationsgeschwindigkeit lässt sich ausgehend vom Stokeschen Gesetz wie folgt berechnen: ν = d (ρ P ρ F ) g 8μ wobei ν = Sedimentationsgeschwindigkeit, ρ P = Dichte des Partikels, ρ F = Dichte der Flüssigkeit, g = 9,8 m/s, μ = Viskosität der Flüssigkeit Ein Partikel wird jedoch ausschließlich dann sedimentieren, wenn ρ P > ρ F. Ist ρ P < ρ F, so wird ν negativ, was bedeutet, dass das Partikel aufschwimmt anstatt zu sedimentieren. Einfluss der Zentrifugation und Berechnung der RCF bzw. U / min Mit Hilfe einer Zentrifuge lässt sich ein temporäres Schwerefeld aufbauen, unter dessen Einfluss die Sedimentation von Zellen, Zellbestandteilen und Makromolekülen erfolgt. In einer Zentrifuge rotiert eine in einem Zentrifugen röhrchen befindliche Suspension um eine Rotationsachse. Dabei erfährt jeder Partikel der Suspension eine Zentrifugalkraft, die es radial von der Rotationsachse wegbewegt. Die Zentrifugalkraft F Z berechnet sich wie folgt: F Z = m P ω r wobei m P = Masse des Partikels, ω = Winkelgeschwindigkeit (s ) und r = Abstand des Partikels von der Rotationsachse Die Kraft, die in einem Zentrifugalfeld auf ein Partikel einwirkt, wird relativ zur Erdbeschleunigung normalerweise als sog. Relative Centrifugal Force (relative Zentrifugalkraft; RCF) oder gforce (x g) angegeben. Sie berechnet sich folgendermaßen: U RCF =,8r ( ) 000 wobei U = Rotorumdrehungen / min und r = Entfernung des Partikels von der Rotationsachse (cm) Zur einfacheren Umrechnung der RCF oder gforce in Umdrehungen / min lässt sich die Gleichung wie folgt umformen: U = 99 RCF r A 6

16 Nomogramm RCF speed (rpm) Centimetre RCF Die jeweiligen Werte lassen sich in den Schnittpunkten einer durch zwei bekannte Punkte geführten Geraden ablesen. Maximale Zentrifugierbarkeit von Röhrchen, Reaktionsgefäßen und Microplatten In den folgenden Tabellen ist die maximale Zentrifugierbarkeit für Greiner BioOne Röhrchen, Reaktionsgefäße und Microplatten in Form des RCF aufgelistet. Messmethode: Alle Produkte wurden für die Zentrifugation mit Wasser befüllt, entsprechend ihrem maximalen Füllvolumen. Die Bestimmung der maximalen RCF im Ausschwingrotor, wurde in einer Thermo Scientific Zentrifuge (Heraeus Multifuge BSR Plus) durchgeführt. Die Bestimmung der maximalen RCF im Festwinkelrotor wurde in einer Sorvall Zentrifuge (Evolution RC) durchgeführt. Hierfür wurden spezielle Einsätze für die unterschiedlichen Gefäßformen und größen verwendet, die einen festumschlossenen Sitz ermöglichen. Reaktionsgefäße Kat.Nr. 66 XX 6 XX 667 XX 69 XX 76 XX 77 XX 7 XX 7 XX Volumen [ml],5, 0,5 0,5,5,5,0 0,7 max. RCF im Festwinkelrotor [g] A 7

17 Röhrchen aus Polystyrol Kat.Nr. Maße: ø [mm] x Höhe [mm] 0 XX 0,5 x 0 06 XX x 6 09 XX x 70 XX x 55 5 XX x 6 XX x 0 XX, x 5 XX x 00 6 XX x XX 6 x 00 6 XX 6 x 00 6 XX 6,8 x XX 6 x 0 7 XX 6,5 x 0 86 XX 7 x 0 87 XX 7 x XX 7 x 0 9 XX 8 x 95 0 XX x 90 ) Keine geeigneten RotorEinsätze verfügbar max. RCF im Ausschwingrotor [g] max. RCF im Festwinkelrotor [g] ) 600 ) 600 ) Röhrchen aus Polypropylen Kat.Nr. 0 XX XX 5 XX XX XX XX XX 6 XX 7 XX 60 XX XX XX 9 XX 0 XX 7 XX 7 8X Maße: ø [mm] x Höhe [mm] 8,5 x x 55 x,5 x 8,5 x 8,5 x,5 x 86, x 7, x 8 6 x 00 6 x 00 6 x 00 7 x 77 7 x 00 8 x 95 7 x 0 8 x 95 0 x 5 0 x 5 0 x 5 max. RCF im Ausschwingrotor [g] max. RCF im Festwinkelrotor [g] Röhrchen aus Polyethylen Kat.Nr. XX 5 XX 60 XX 87 XX Maße: ø [mm] x Höhe [mm] x 55 x 6 x 00 7 x 00 max. RCF im Ausschwingrotor [g] max. RCF im Festwinkelrotor [g] A 8

18 Röhrchen aus Polycarbonat Kat.Nr. 60 Maße: ø [mm] x Höhe [mm] 6 x 00 max. RCF im Ausschwingrotor [g] max. RCF im Festwinkelrotor [g] 000 Multiwell Platten Kat.Nr Multiwell Platten 6 Well, PS, transparent Well, PS, transparent Well, PS, transparent 8 Well, PS, transparent max. RCF im Ausschwingrotor [g] Microplatten Kat.Nr Microplatten 96 Well, PS, UBoden, transparent 96 Well, PS, VBoden, transparent 96 Well, PS, FBoden, transparent 96 Well, PP, UBoden, 96 Well, PP, VBoden, 96 Well, PP, FBoden, 96 Well, PP, UBoden, schwarz 96 Well, PS, FBoden, weiß 96 Well, PS, FBoden, schwarz 96 Well, PS, µclear, weiß 96 Well, PS, µclear, schwarz 96 Well, PS, UVStar 96 Well, PP, Masterblock ml 96 Well, PP, Masterblock ml 96 Well, PP, Masterblock 0,5 ml max. RCF im Ausschwingrotor [g] Well, PS, transparent 8 Well, PS, weiß 8 Well, PS, schwarz 8 Well, PS, µclear, weiß 8 Well, PS, µclear, schwarz 8 Well, PP, FBoden, 8 Well, PP, VBoden, 8 Well, PP, VBoden, Deep Well, 8 Well, PS, UVStar 8 Well, PS, Small Volume, transparent 8 Well, PS, Small Volume, weiß 8 Well, PS, Small Volume, schwarz 8 Well, PP, Small Volume, A 9

19 Microplatten Kat.Nr Microplatten 56 Well, PS, HiBase, transparent 56 Well, PS, HiBase, weiß 56 Well, PS, HiBase, schwarz 56 Well, PS, µclear, HiBase, weiß 56 Well, PS, µclear, HiBase, schwarz 56 Well, PP, VBoden, Deep Well, 56 Well, PS, LoBase, transparent 56 Well, PS, LoBase, weiß 56 Well, PS, LoBase, schwarz 56 Well, PS, µclear, LoBase, weiß 56 Well, PS, µclear, LoBase, schwarz max. RCF im Ausschwingrotor [g] PCR Platten Kat.Nr PCR Platten 96 Well, PP,, mit Rand 96 Well, PP,, mit Halbrand 96 Well, PP,, mit Halbrand, passend für ABI max. RCF im Ausschwingrotor [g] Well, PP,, mit Rand 8 Well, PP,, mit Rand, passend für ABI Für die Zentrifugation wurden die Platten wie folgt mit Wasser befüllt: 96 Well 00 µl 8 Well µl 56 Well 5 µl Laborinformation für die Probenlagerung Einfrierprotokoll. Die Zellen mit warmer PBSLösung waschen und danach mit einer TrypsinEDTALösung benetzen (ein dünner Flüssigkeitsfilm genügt).. Die Zellen bei 7 C für max. 5 min inkubieren.. Sobald die Zellen sich vom Untergrund ablösen, die Inkubation durch Zugabe von serumhaltigem Zellkulturmedium stoppen und die Zellen mit einer Pipette leicht suspendieren.. Die Zellsuspension zentrifugieren (0 x g, 5 min). Anschließend das Zellpellet in serumhaltigem Medium resuspendieren. 5. Die Zellzahl mittels einer NeubauerZählkammer ermitteln. 6. Die Zellen nochmals bei 0 x g für 5 min zentrifugieren und den Überstand abnehmen. Das Pellet in entsprechender Menge in serumhaltigem Zellkulturmedium resuspendieren. 7. Die Zellsuspension : mit Einfriermedium (60 % Medium, 0 % FCS, 0 % DMSO) mischen und in Cryo.s TM überführen. Die Zellkonzentration zum Einfrieren in Cryo.s TM sollte 5 x 0 6 Zellen/ml betragen. 8. Cryo.s, die Zellen enthalten, sollten mit einer Kühlrate von K/min eingefroren werden. Das kann erreicht werden, indem sie in einem mit Isopropanol gefüllten Gefäß bei 70 C abgekühlt werden. Sollten sie andere Proben als Zellen enthalten, können Cryo.s direkt bei 0 C, 70 C oder in der Gasphase von flüssigem Stickstoff eingefroren werden. Um ein gleichmäßiges Einfrieren zu gewährleisten, sollten die und 5 ml Cryo.s Gefäße bei 0 C über Nacht eingefroren werden, bevor sie bei 70 C oder in der Gasphase von flüssigem Stickstoff gelagert werden. 9. Danach werden die Cryo.s TM in den Stickstofftank überführt. Zur Vermeidung von Kontaminationen (z.b. Mykoplasmen) und aus Sicherheitsgründen empfiehlt es sich, die Cryo.s TM in der Gasphase des Stickstoffs aufzubewahren und nicht in der Flüssigphase. Auftauprotokoll. Die in den Cryo.s TM eingefrorenen Zellen werden sofort nach Entnahme für ca. min im Wasserbad bei 7 C aufgetaut. Das Auftauen sollte so schnell wie möglich erfolgen.. Die aufgetaute Zellsuspension in ein 5 ml Röhrchen überführen und mit reichlich serumhaltigem Zellkulturmedium vermischen.. Nach der Zentrifugation der Zellen (0 x g, 5 min) den Überstand entnehmen, das Zellpellet in geeignetem serumhaltigem Zellkulturmedium aufnehmen und in eine bzw. mehrere Zellkultur Flaschen überführen.. Empfohlene Zellkonzentration zur Aussaat beachten. 5. In den nächsten Stunden sollten die Zellen ruhen können. 6. Ein Mediumwechsel ist nach bzw. 8 Stunden zu empfehlen. Sicherheitshinweis für das Arbeiten mit Cryo.s TM Cryo.s TM sind ausschließlich für die Probenlagerung in der Gasphase von flüssigem Stickstoff oder in Gefrierschränken geeignet! Bei der Lagerung der Cryo.s TM in der Flüssigphase kann Stickstoff in das Röhrchen eindringen. Beim Auftauen kann der verdampfende Stickstoff zu einem Druckaufbau und letztendlich zur Explosion und zur Freisetzung von infektiösem Material führen. Tragen Sie bei dem Arbeiten mit Cryo.s TM immer entsprechende Sicherheitskleidung und arbeiten Sie an einer Sicherheitswerkbank. Cryo.s TM müssen gleichmäßig eingefroren werden. Ungleichmäßiges Einfrieren kann zur Bildung eines Eispfropfens im oberen Teil des Röhrchens führen, der die Ausdehnung der darunter befindlichen Flüssigkeit verhindert. Auf diese Weise kann sich ein hoher Druck aufbauen und das Cryo Röhrchen beschädigt werden. Die angegebenen Arbeitsvolumina für Cryo.s TM dürfen nicht überschritten werden Kapitel. A 0

20 Laborinformation für die Immunologie Benetzung der Näpfchenoberfläche von verschiedenen immunologischen Produkten in Abhängigkeit des Füllstandvolumens Volumen Bedeckte Höhe Verhältnis Fläche/ Flüssigkeit [µl] Fläche [mm ] Flüssigkeit [mm] Volumen [cm /cm ] 96 Well ELISA Microplatte, UBoden ,6 99 5, , ,7,6,,,9 5,7 6, 7, 7,8 8,5 9, 9,9,6 0, 9, 8,5 7,9 7,7 7, 7, 7, 7,0 6,9 6,8 96 Well ELISA Microplatte, VBoden ,6 7, 88,6 05,8 0,8 56,,, 5, 6, 7, 8, 8,9,0 0,9 9,7 8,9 8, 8, 8,0 7,8 96 Well ELISA Microplatte, FBoden/Standard , ,6 5, ,8,55,,0,8,5 5, 5,9 6,65 7,5 8,0 8,7 8,8, 0, 9, 8,6 8, 7,9 7,6 7,5 7, 7, 7, 96 Well ELISA Microplatte, FBoden/Kaminform ,5 9 08,6 7, ,7,5,,9,6, 5,0 5,7 6, 7, 7,8 8, 8,8,8 0,5 9, 8,6 8, 7,9 7,6 7, 7, 7, 7, 96 Well ELISA Microplatte, FBoden, Half Area ,65, 5,,0 Volumen Bedeckte Flüssigkeit [µl] Fläche [mm ] 8,5 00 0,6 5,5 65,8 00 8,7 C8 StreifenPlatte ,6 5 0, 0 6,5 00,8 5 65, F8 StreifenPlatte 5, 6 79,7 00 9,5 5 08, ,5 U8 StreifenPlatte ,6 5 9, F StreifenPlatte 5,8 60,6 76,8 00 9, 5 09 Höhe Flüssigkeit [mm] Volumen [cm /cm ],7 6, 7,6 8,9 0,,5,0,9,8,6, 5, 6,0 6,7 7, 8,5 8,85 9,55 0,8,5,,85,55,5,95 5,65 6, 7,0 7,65 8,5,7,6,,,95 5, 6,5 7,5 7,85 8,55 9,5 9,95 0,95,85,7,55,5 Verhältnis Fläche/ 0,9 0, 0,0 9,6 9,5 9, 5,6, 9,7 8,9 8, 8,0 7,8 7,5 7, 7, 7, 7,0 0,,8 0,6 9, 8,7 8, 7,9 7,7 7, 7, 7, 7,,6 0, 9, 8, 8,0 7,7 7, 7, 7, 7,0 6,9 6,8 7,5, 0, 9, 8,7 A

21 Volumen Bedeckte Flüssigkeit [µl] Fläche [mm ] 5, 00 55, U6 StreifenPlatte ,6 5 9, Höhe Verhältnis Fläche/ Flüssigkeit [mm] Volumen [cm /cm ] 5,5 8, 5,9 8, 6,65 7,8 7, 7,6 8, 7, 8,8 7, 9,5 7,,,0,6 0,, 9,, 8,,9 7,9 5,7 7,7 6, 7, 7, 7, 7,8 7, 8,5 7,0 9, 6,9 9,9 6,8 Volumen Bedeckte Flüssigkeit [µl] Fläche [mm ] F6 StreifenPlatte ,8 00 9, 5 08, Well Microplatte, FBoden 5 9,07 66,60 9,0 00 9,6 5 5,6 5,6 Höhe Verhältnis Fläche/ Flüssigkeit [mm] Volumen [cm /cm ] 0,8 9,6,5,6, 0,6,0 9,,7 8,6, 8, 5, 7,9 5,8 7,7 6,5 7,5 7, 7, 7,9 7, 8,6 7,, 5,6,8, 7,00,5 9,05,0,05,6,,6 Allgemeine Abkürzungen AB AB AB AG AGAB ANSI BHK Zellen cdna CHOZellen COC CV DMSO DNA DNase EIA ELRack ELISA EVA EZM FDA FIA FRack HDPE HEK9 Zellen HLA HTA HTS HUVEC IgG IDCard LAL LIA med. NIHT NMWCO PAGE PC PC Zellen PCR PDL PET Antikörper primärer Antikörper sekundärer Antikörper Antigen AntigenAntikörperKomplex American National Standards Institute Hamster Kidney Cells komplementäre DNA Chinese Hamster Ovary Cells Cycloolefine Variationskoeffizient (Coefficient of Variation) Dimethylsulfoxid Desoxyribonukleinsäure Desoxyribonuklease Enzyme Immuno Assay EasyLoad Rack Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay Ethyl Vinyl Acetat extrazelluläre Matrix Food and Drug Administration Fluorescence Immuno Assay FilterspitzenRack High Density Polyethylen Human Embryonal Kidney Cells Human Leukocyte Antigen HighThroughput microarraying HochdurchsatzScreening / HighThroughput Screening Humane NabelschnurEndothelzellen Imunglobulin G Identifikationskarte Limulus Amöbozyt Lysat Luminescence Immuno Assay medium Mouse Fibroblasts Nominal Molecular Weight Cutoffs PolyacrylamidGelelektrophorese Polycarbonat Rat Adrenal Pheochromocytoma Cells PolymeraseKettenreaktion PolyDLysin Polyethylenterephthalat PETG ph PLA PLL PP PS PTFE RCG Zellen RIA RNA RNase rrna RT SBS SDS SPA STRack TC USP UV Spektrum VIS Spektrum VK Einheiten C Da g Gy h l M m min Mol s Polyethylenterephthalat Glykolat phwert Polylactat PolyLLysin Polypropylen Polystyrol Polytetrafluorethylen Rat Cerebrallar Granule Cells Radio Immuno Assay Ribonukleinsäure Ribonuklease ribosomale RNA Raumtemperatur Society for Biomolecular Sciences Natriumdodecylsulfat Scintillation Proximity Assays Standard Rack Tissue Culture United States Pharmacopoeia Ultraviolettes Spektrum Sichtbares (visible) Spektrum Variationskoeffizient Grad Celsius Dalton, Einheit der molekularen Masse Gramm bzw. Erdbeschleunigung (ca. 9,8 m/s ) Gray, Energiedosis Stunde Liter Molarität, Mol des gelösten Stoffes auf einen Liter Lösungsmittel Meter Minute absolute Menge einer Substanz Sekunde A