Tabellen- und Abbildungsverzeichnisverzeichnis. Abkürzungsverzeichnis

Transkript

1 Inhaltsverzeichnis I Inhaltsverzeichnis verzeichnis Abkürzungsverzeichnis Seite V VIII 1. Einleitung 1 2. Material und Methoden Versuchsaufbau und erfaßte Parameter Durchführung der Fütterungsversuche Zusammensetzung der Diät Charakterisierung der Diäten Tiermaterial und Haltung der Versuchstiere Gewinnung des Probenmaterials Analytische Methoden Bestimmung der Konzentration an α-tocopherol Bestimmung der scheinbaren Verdaulichkeit von Vitamin E Bestimmung der Konzentration an Ascorbinsäure (Vitamin C) Bestimmung der Enzymaktivitäten antioxidativer Enzyme und 14 der Konzentration an Glutathion Superoxiddismutase Glutathionperoxidase Katalase Glutathion Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase Oxidationsempfindlichkeit der Lipoproteine geringer Dichte Bestimmung der Marker der Lipidperoxidation Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen Konzentration an 7-ß-Hydroxycholesterol Bestimmung der Hämolyseneigung der Erythrozyten in vitro und 20 in vivo Bestimmung der osmotischen Hämolyseresistenz der 20 Erythrozyten Freies Hämoglobin im Plasma Laktatdehydrogenase im Plasma Saure Phosphatase im Plasma 22

2 Inhaltsverzeichnis II Bindungskapazität des Haptoglobins Bestimmung von Parametern des Lipidstoffwechsels Extraktion der Gesamtlipide Analytik der Fettsäuren Bestimmung der Konzentration an Triglyceriden und an 24 Cholesterin Trennung der Phospholipide Proteinbestimmung Charakterisierung der Diäten Bestimmung der Peroxidzahl Bestimmung des Trockensubstanzgehaltes Statistische Auswertung und Ergebnisdarstellung Ergebnisse Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art 29 der Diätfette auf Futteraufnahme und Lebendmassezunahme der Tiere 3.2 Charakterisierung des antioxidativen Schutzsystems Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art 29 der Diätfette auf die Konzentration an α-tocopherol in verschiedenen Geweben Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art 33 der Diätfette auf die Konzentration an α-tocopherol im Kot und die scheinbare Verdaulichkeit von Vitamin E Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art 35 der Diätfette auf die Konzentration an Ascorbinsäure (Vitamin C) im Plasma Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art der 35 Diätfette auf die Enzyme des antioxidativen Schutzsystems und auf die Konzentration an Glutathion Aktivität der Enzyme Superoxiddismutase, Glutathionperoxidase 35 und Katalase in der Leber Konzentration an Glutathion in der Leber Aktivität der Glutathionperoxidase im Plasma 38

3 Inhaltsverzeichnis III Aktivität der antioxidativen Enzyme Superoxiddismutase, 39 Glutathionperoxidase und Katalase im Erythrozytencytosol Aktivität der Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase im 39 Erythrozytencytosol Konzentration an Glutathion im Erythrozytencytosol Lag-Time und maximale Konzentration an konjugierten Dienen 42 nach Kupfer-induzierter Oxidation der Lipoproteine geringer Dichte 3.3 Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen der Diät und der Art der 44 Diätfette auf Marker der Lipidperoxidation Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen im 44 Plasma Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen in der 44 Leber Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen im 45 Erythrozytencytosol Konzentration an 7-ß-Hydroxycholesterol in der Leber Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen und der Art der Diätfette 47 auf die Hämolyseneigung der Erythrozyten Hämolyseneigung der Erythrozyten in hypotonen 47 Kochsalzlösungen Konzentration der Hämolysemarker im Plasma Einfluss der Vitamin E-Konzentrationen und der Art der Diätfette 50 auf Parameter des Lipidstoffwechsels Konzentration an Triglyceriden in verschiedenen Geweben Konzentration an Cholesterin in verschiedenen Geweben Konzentration an Cholesterin in der Erythrozytenmembran Konzentration an Triglyceriden im Kot und scheinbare 54 Verdaulichkeit der Triglyceride Konzentration an Cholesterin im Kot Fettsäurenzusammensetzung der Neutrallipid-, Phosphatidyl- 56 ethanolamin- und Phosphatidylcholinfraktion in der Leber Fettsäurenzusammensetzung der Erythrozytenmembran Diskussion 63

4 Inhaltsverzeichnis IV 4.1 Futteraufnahme und Gewichtsentwicklung der Tiere Charakterisierung des antioxidativen Schutzsystems Vitamin E-Status und Stoffwechsel Konzentration an Ascorbinsäure (Vitamin C im Plasma) Aktivität antioxidativer Enzyme in der Leber bzw. im Plasma Konzentration an Glutathion in der Leber Lag-Time nach Kupfer-induzierter Oxidation der Lipoproteine 73 geringer Dichte und maximale Konzentration an konjugierten Dienen 4.3 Parameter der Lipidperoxidation Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen in Leber und Plasma Konzentration an 7-ß-Hydroxycholesterol in der Leber Fettsäurenzusammensetzung der Neutrallipid-, Phosphatidylethanolamin- 79 und Phosphatidylcholinfraktion der Leber 4.4 Einfluss der Vitamin E-Zulagen und der Diätfette auf die 80 Hämolyseneigung der Erythrozyten Osmotische Hämolyseresistenz der Erythrozyten in hypotonen 81 Kochsalzlösungen Hämolysemarker im Plasma Aktivität antioxidativer Enzyme und Konzentration an Glutathion 86 im Erythrozytencytosol Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen im 89 Erythrozytencytosol Fettsäurenzusammensetzung der Erythrozytenmembran Parameter des Lipidstoffwechsels Konzentration an Triglyceriden und Cholesterin im Plasma, in 93 den Lipoproteinfraktionen und in der Leber 5. Schlussfolgerung und Ausblick Zusammenfassung Summary 100 Literaturverzeichnis 103

5 V Nr. Titel Seite Tab. 1 Versuchsdesign des ersten Versuches 4 Tab. 2 Versuchsdesign des zweiten Versuches 4 Tab. 3 Zusammensetzung der Rattendiäten 6 Tab. 4 Cellulose- und Vitamin E-Gehalte der verwendeten Diäten 7 Tab. 5 Zusammensetzung der Mineralstoffzulage 7 Tab. 6 Zusammensetzung der Vitaminzulage 7 Tab. 7 Fettsäurenzusammensetzung und Vitamin E-Konzen- 9 tration der Futterfette im ersten und zweiten Versuch Tab. 8 Konzentrationen an α-tocopherol in der Diät im 9 ersten Versuch Tab. 9 Konzentrationen an α-tocopherol in der Diät im 10 zweiten Versuch Tab. 10 Lebendmassezunahme und Futteraufnahme der Tiere im 30 ersten Versuch Tab. 11 Lebendmassezunahme der Tiere im zweiten Versuch 30 Tab. 12 α-tocopherolkonzentrationen verschiedener Gewebe im 32 ersten Versuch Tab. 13 α-tocopherolkonzentrationen verschiedener Gewebe im 32 zweiten Versuch Tab. 14 α-tocopherolkonzentration im Kot und scheinbare Verdaulichkeit 34 von Vitamin E im zweiten Versuch Tab. 15 Vitamin C-Konzentration im Plasma im zweiten Versuch 36 Tab. 16 Aktivität antioxidativer Enzyme und Konzentration von 36 Glutathion in der Leber und Aktivität der Glutathionperoxidase im Plasma im ersten Versuch Tab. 17 Aktivität antioxidativer Enzyme und Konzentration von 41 Glutathion im Erythrozytencytosol Tab. 18 Lag-Time und maximale Konzentration der konjugierten Diene nach Kupfer-induzierter Oxidation der Lipoproteine geringer Dichte im ersten Versuch 43

6 VI Tab. 19 Tab. 20 Tab. 21 Tab. 22 Tab. 23 Tab. 24 Tab. 25 Tab. 26 Tab. 27 Tab. 28 Tab. 29 Tab. 30 Tab. 31 Lag-Time und maximale Konzentration der konjugierten Diene nach Kupfer-induzierter Oxidation der Lipoproteine geringer Dichte im zweiten Versuch Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen im Plasma im ersten Versuch Konzentration an Thiobarbitursäure-reaktiven Substanzen in der Leber und in den Erythrozyten und an 7-ß- Hydroxycholesterol in der Leber im zweiten Versuch Hämolyseresistenz der Erythrozyten in hypotonen Natriumchloridlösungen im ersten Versuch Konzentration der Hämolysemarker im Plasma im zweiten Versuch Konzentration der Triglyceride im Plasma, in den Lipoproteinfraktionen und in der Leber im ersten Versuch Konzentration der Triglyceride im Plasma, in den Lipoproteinfraktionen und in der Leber im zweiten Versuch Konzentration an Cholesterin im Plasma, in den Lipoproteinfraktionen und in der Leber im ersten Versuch Konzentration an Cholesterin im Plasma, in den Lipoproteinfraktionen und in der Leber im zweiten Versuch Konzentration an Triglyceriden und Cholesterin im Kot und scheinbare Verdaulichkeit der Triglyceride im ersten Versuch Konzentration an Triglyceriden und Cholesterin im Kot und scheinbare Verdaulichkeit der Triglyceride im zweiten Versuch Fettsäurenzusammensetzung der Neutrallipidfraktion in der Leber im ersten Versuch Fettsäurenzusammensetzung der Leberphosphatidylethanolaminfraktion im ersten Versuch

7 VII Tab. 32 Fettsäurenzusammensetzung der Leberphosphatidylcholinfraktion 60 im ersten Versuch Tab. 33 Fettsäurenzusammensetzung der Erythrozytenmembran 62 Abbildung Nr. Titel Seite Abb. 1 Kinetik der Oxidation der Lipoproteine geringer Dichte bei 234 nm 19

8 VIII Abkürzungsverzeichnis AIN aqua dest. ß-HMG-Co A- Reduktase BSA BSTFA Cu-Zn-SOD DGE DNA δ E EC EC-SOD EDTA FAME FID GC-MS GSH GSH-Px GSSG G-6-P-DH Hb Hb-Hp-Komplex Hp HDL HPLC IE KGW LDL American Institute of Nutrition destilliertes Wasser ß-3-Hydroxy-3-methyl-glutary-Coenzym A-Reduktase Bovines Serum Albumin bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamid Kupfer-Zink-haltige Superoxiddismutase Deutsche Gesellschaft für Ernährung Desoxyribonucleinsäure Plasmadichte Extinktionsänderung Enzym Nomenklatur (Enzyme Nomenclature) extrazelluläre Superoxiddismutase Ethylendiamintetraessigsäure Fettsäurenmethylester (Fatty Acid Methyl Esters) Flammenionisationsdetektor Gaschromatographie-Massenspektrometrie Glutathion Glutathionperoxidase oxidiertes Glutathion Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase Hämoglobin Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex Haptoglobin Lipoproteine hoher Dichte (High Density Lipoprotein) Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (High Performance Liquid Chromatograpy) Internationale Einheiten ( 1 IE Vitamin E= 1 mg DL-α- Tocopherylacetat= 0,67 mg RRR-α-Tocopherol) Körpergewicht Lipoproteine geringer Dichte (Low Density Lipoprotein)

9 IX LDH MetHb meqo 2 MDA Mn-SOD mrna MUFA n-6-fettsäuren n-3-fettsäuren NaCl NAD + NADH+ NADPH NADPH-Oxidase NADP + p PBS PC PE PH-GSH-Px POZ P/S PUFA SFA SIM SOD TBARS TBA TEP TMB U V s Laktatdehydrogenase Methämoglobin Milliäquivalente aktiver Sauerstoff Malondialdehyd Mangan-haltige Superoxiddismutase Messanger Ribonucleinsäure einfachungesättigte Fettsäuren (Monounsaturated Fatty Acids) omega-6-fettsäuren omega-3-fettsäuren Natriumchloridlösung oxidiertes Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid reduziertes Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid reduziertes Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-Phosphat Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-Phosphat-Oxidase oxidiertes Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-Phosphat Signifikanzniveau Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (Phosphate Buffered Saline) Phosphatidylcholin Phosphatidylethanolamin Phospholipid-Hydroperoxid-Glutathionperoxidase Peroxidzahl mehrfachungesättigte/gesättigten Fettsäuren (Polyunsaturated/ Saturated) mehrfachungesättigte Fettsäuren (Polyunsaturated Fatty Acids) gesättigte Fettsäuren (Saturated Fatty Acids) Selected Ion Monitoring Superoxiddismutase Thiobarbitursäurereaktive Substanzen Thiobarbitursäure 1,1,3,3- Tetraetoxypropan 3-,3`-,5-,5`-Tetramethylbenzidin Unit scheinbare Verdaulichkeit

10 X VLDL 7-ß-OH- Cholesterol Lipoproteine sehr geringer Dichte (Very Low Density Lipoprotein) 7-ß-Hydroxycholesterol