Bestimmung der Salmonellenantikörperkonzentration. Serumproben. Dr. Simone Jäsert

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1 Zentrallabor des Landeskontrollverbandes Sachsen Anhalt Bestimmung der Salmonellenantikörperkonzentration in Fleischsaft- und Serumproben Dr. Simone Jäsert

2 Das Zentrallabor Zentral labor I Referenzlabor Milchlabor ATS Labor Mikrobiologisches Labor Parasitologisches Labor Serologisches Labor

3 Das Zentrallabor Akkreditierung des Labors nach der DIN ISO seit 1994 routinemäßige Reakkreditierungen wurden seit dem ohne größere Auflagen bestanden Neben den turnusäßigen Ringanalysen für die Milch erfolgt auch die Teilnahme an dem jährlichen Ringversuch der QS im Rahmen des Salmonellenmonitorings Die Erfolgreiche Teilnahme ist die Voraussetzung im QS als zugelassenes Labor gelistet zu sein LKV Sachsen-Anhalt e.v. Zentrallabor Angerstraße Halle/S. Telefon: 0345 / Telefax: 0345 /

4 Situation der Salmonellosen in Deutschland In Deutschland erkranken immer weniger Menschen an Salmonellen. Nach dem Bericht des Bundesinstituts für Risikobewertung (BfR) über die Erreger von Zoonosen in Deutschland im Jahr 2009 gab es in Deutschland einen Rückgang der Salmonelloseerkrankungen beim Menschen um 27 Prozent. Gemeldet wurden Fälle, im Jahr 2010 nur noch Dieser Rückgang der Salmonellosefälle entspricht dem allgemeinen EU-Trend. Ein Grund für den Rückgang der Erkrankungen sind die verbesserten Kontrollen in der Geflügel- und Schweinehaltung Teilnahme am Salmonellenmonitoring-Programm

5 Salmonellenerkrankung beim Schwein Salmonellen sind Krankheitskeime, die mit den Colikeimen vergleichbar sind Salmonellen sind gram-negative Stäbchen und gehören zu den obligat pathogenen Enterobakterien. Es handelt sich um Zoonoseerreger die zu lebensgefährlichen Durchfallerkrankungen, den sog. Lebensmittelvergiftungen führen Beim Schwein selbst läuft die Erkrankung meist symptomlos ab Symptome können aber sein: - gelber Durchfall wird nach etwa einer Woche blutig/schleimig - fieberhafte Allgemeinerkrankungen mit Husten - Co-Infektion bei anderen Darmerkrankungen beobachtet Hohe ausgeschiedene Erregermengen können weitere Schweine anstecken, vor allem wird dadurch ein hoher Infektionsdruck im Stallabteil aufrechterhalten.

6 Möglichkeiten zur Untersuchung auf Salmonellen Direkter Nachweis: Bakteriologische Untersuchung Kotproben oder Sektionsmaterial Erregernachweis durch Anzucht einer Kultur des Erregers in einer Nährlösung oder auf einer Agarplatte Indirektrer Nachweis: Serologische Untersuchung Fleischsaftproben oder Serumproben Nachweis von Antikörpern mittels ELISA

7 Indirekter Nachweis-serologische Untersuchungen Testverfahren zur quantitativen Bestimmung von Antikörpern in Fleischsaft- und Serumproben erfolgt über ein Enzymimmunoassay- der ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) bezeichnet ein antikörperbasiertes Nachweisverfahren (Assay). Auch der ELISA gehört zur Gruppe der Immunassay- Verfahren und basiert auf einer enzymatischen Farbreaktion und gehört somit zu den enzymatischen Immunadsorptionsverfahren (EIA). Ziel der Nachweis der gebildeten Antikörper gegen Salmonellen in Folge einer stattgefundenen Infektion

8 ELISA Nachweis Prinzip des ELISA Voraussetzung eine Salmonellenantigen beschichtete Mikrotitterplatte die spezifischen Antikörper bilden ein Komplex mit dem Antigen Hinzugefügte Antikörper- Enzymkonjugat bindet an die antigengebundenen Proben Antikörper Zugabe einer Enzymsubstrat Lösung erfolgt eine Farbreaktion Korrelation der Farbreaktion mit der der Salmonellenantikörper in der Probe

9 Ablauf im Labor Anlieferung der Proben als Fleischsaftproben (Zwerchfellpfeiler) oder als Serumproben Sortierung und Dokumentation der Proben Gewinnung des Fleischsaftes ( Auftauen der Fleischproben im Kollektor) Einsortierung in den Dynexpipetierautomat Automatische Belegung der Mikrotiterplatten mit den Proben (Vorverdünnung je nach Untersuchungsmaterial) Vorgabe Negativ und Positivstandard (Doppelbestimmung) 60 min Inkubation bei RT Waschschritt, danach Zugabe Konjugatlösung 30 min Inkubation bei RT Waschschritt, danach Zugabe Substratlösung 10 min Inkubation bei RT Beenden der Reaktion mit einer Stopplösung Messung der optischen Dichte im Photometer bei 450 nm LKV Sachsen-Anhalt e.v. Zentrallabor Angerstraße Halle/S. Telefon: 0345 / Telefax: 0345 /

10 Auswertung der Ergebnisse Voraussetzung für korrekten Ablauf des Testes: P/N-Quotient der MW OD der P-Kontrolle dividiert durch den MW OD der Negativkontrolle > 4 Berechnung des Wertes: Proben-OD%-Wert= OD(Probe) MW OD(NK) x 72,1 OD% MW OD(PK) MW OD (NK) OD% < 40 % = Negativ OD% > 40 % = Positiv nach Ermittlung der Werte erfolgt der Eintrag in die QS Datenbank Einteilung in die Kategorie von QS

11 Dienstleistung des Labors Probentransport: Kostenlose Abholung der tiefgekühlten Proben im Schlachthof oder der LKV Aussenstellen innerhalb Sachsen Anhaltes Länderübergreifend über den Postversand Bereitstellung der Fleischsaftkollektoren Untersuchung und Datenbereitstellung Untersuchung innerhalb von 2 Werktagen Tagfertiger Eintrag der Ergebnisse in die QS Datenbank Zusätzliche Übermittlung der Ergebnisse wenn gewünscht per Fax oder Untersuchung je Probe 1,05 Datenbankeintrag je Probe 0,35 Anzahl des zu untersuchtem Stichprobenumfang richtet sich nach der Anzahl der Schlachttiere pro Jahr des Betriebes LKV Sachsen-Anhalt e.v. Zentrallabor Angerstraße Halle/S. Telefon: 0345 / Telefax: 0345 /

12 Entwicklung Probenzahlen Entwicklung Untersuchungen Salmonel lenantikörper 11_ '.000 '.000 '.000 '000 Jahr1007 Jahr 1008 Jahr 2009 Jahr 2010 Jahr 1011 Jahr2<l12

13 Entwicklung Probenzahlen Bei uns in der Beprobung sind: 3 Schlachthöfe (1 in SA und 2 in Thüringen) 5 Selbstvermarkter (2 ins SA und 3 in Sachsen) 1 Labor im Unterauftrag Generelles Ziel sollte sein, die Beprobung schon mehr im lebenden Bestand zu forcieren um so schneller auf eventuelle Infektionsgeschehen zu reagieren LKV Sachsen-Anhalt e.v. Zentrallabor Angerstraße Halle/S. Telefon: 0345 / Telefax: 0345 /

14 Vielen Dank für die Aufmerksamkeit