Scl-70-Ab ELISA. Enzymimmunoassay zur qualitativen und quantitativen Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen Scl-70 in humanem Serum.

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1 Arbeitsanleitung Scl-70-Ab ELISA Enzymimmunoassay zur qualitativen und quantitativen Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen Scl-70 in humanem Serum. RE x8 2-8 C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. ZWECKBESTIMMUNG Enzymimmunoassay zur qualitativen und quantitativen Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen Scl-70 in humanem Serum. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Die systemische Sklerodermie (auch progressive systemische Sklerodermie, PSS) ist eine chronischentzündliche Autoimmunerkrankung des Bindegewebes. Ihre Hauptmanifestation besteht in Verdickungen und Verhärtungen der Haut, es können aber auch innere Organe betroffen sein. Autoantikörper gegen das im Zellkern lokalisierte Enzym DANN-Topoisomerase I (= Scl-70-Antigen) stellen mit einer Spezifität von über 90 % einen zuverlässigen Marker für diese Erkrankung dar. Ihr Vorhandensein weist auf die Beteiligung innerer Organe wie Lunge, Nieren oder Herz hin, während bei Patienten mit dem CREST- Syndrom, der auf die Hauterscheinungen limitierten, abgeschwächten Form der Sklerodermie, nur selten Scl-70 Antikörper zu finden sind. 3. TESTPRINZIP Sandwich-Enzymimmunoassay (ELISA). Die Wells der Mikrotiterstreifen sind mit Antigen beschichtet. Die spezifischen Antikörper der Probe binden an die Antigen-beschichteten Wells und werden von einem zweiten enzymmarkierten Antikörper (E-Ab), der gegen humanes IgG gerichtet ist, detektiert. Die Intensität der gebildeten Farbe nach der Substratreaktion ist proportional zur IgG-Konzentration. Die Ergebnisse der Proben können direkt anhand der Standardkurve bestimmt werden. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Kontakt mit Stopplösung vermeiden. Kann Hautreizungen und Verätzungen hervorrufen. 9. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid (NaN 3 ) als Konservierungsmittel. Bei Kontakt mit den Augen oder der Haut gründlich mit Wasser abspülen. NaN 3 kann mit Blei und Kupfer explosive Azide bilden. Bei Entsorgung über das Abwasser gut spülen, um Azidanreicherung zu vermeiden. 10. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf HBsAg sowie Antikörper gegen HCV und gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zum Verfallsdatum des Kits haltbar, wenn sie im sorgfältig verschlossenen Beutel zusammen mit dem Trockenmittel bei 2-8 C gelagert wird. V / 7

3 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Serum Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen. Lagerung: 2-8 C -20 C Vor Hitze und Sonneneinstrahlung schützen. Haltbarkeit: 3 d > 3 d Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden. 7. KOMPONENTEN DES KITS Anzahl / Menge 1 x 12 x 8 Symbol MTP Komponente Mikrotiterplatte Wells einzeln abbrechbar. Beschichtet mit humaner, rekombinanter DNA-Topoisomerase I. 1 x 14 ml ENZCONJ IgG Enzymkonjugat IgG Gebrauchsfertig, rot gefärbt. Enthält: anti-humanes IgG, konjugiert mit Peroxidase, Protein-Puffer, Stabilisatoren. 1 x 6 x 2 ml CAL A F Kalibrator A-F 0; 0.6; 2.0; 6.0; 20; 60 U/mL. Gebrauchsfertig, graduell blau gefärbt. Enthält: IgG Antikörper gegen Scl-70, TBS, Stabilisatoren. 1 x 2 ml Positive Kontrolle CONTROL + Gebrauchsfertig, rot gefärbt. Enthält IgG-Antikörper gegen Scl-70, TBS und Stabilisatoren. 1 x 2 ml Negative Kontrolle CONTROL - Gebrauchsfertig, grün gefärbt. Enthält TBS und Stabilisatoren. 1 x 100 ml SAMPLEDIL Verdünnungspuffer Gebrauchsfertig, orange gefärbt. Enthält: TBS Puffer und Stabilisatoren. 1 x 14 ml TMB SUBS TMB Substratlösung Gebrauchsfertig, farblos. Enthält: TMB, H 2O 2. 1 x 100 ml WASHBUF CONC Waschpuffer, Konzentrat (10x) Blau gefärbt, enthält: TBS Puffer und Stabilisatoren. 1 x 14 ml STOP TMB Stopplösung Gebrauchsfertig, farblos. 0.2 M H 2SO ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Mikropipetten (Multipette Eppendorf oder ähnliche, < 3% VK). Volumina: 5; 100; 500 µl 2. Messzylinder 3. Röhrchen (1 ml) zur Probenverdünnung 4. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 5. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 6. Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) 7. Bidest. Wasser 8. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr V / 7

4 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden, um die Identifikation der Kalibratoren und Proben auf der Platte sicherzustellen. 5. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 6. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt. 7. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wiederverschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. 10. TESTVORBEREITUNGEN Vorbereitung der Komponenten Verd. / rekonst. Komponente Diluent Verhältnis Lagerung Haltbarkeit 100 ml WASHBUF CONC ad 1000 ml bidest. Wasser 1: C 4 Wochen Probenverdünnung Probe zu verdünnen mit Verhältnis Bemerkungen Serum immer SAMPLEDIL 1:101 z.b. 5 µl µl Proben mit Konzentrationen über dem höchsten Kalibrator müssen weiter verdünnt werden. V / 7

5 11. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Unmittelbar vor Beginn des Tests die zu verwendenden Wells der Mikrotiterplatte einmal vorwaschen: Wells mit 300 µl Waschpuffer füllen, ca. 10 Sek. einwirken lassen und Puffer entfernen. 2. Je 100 µl von jedem Kalibrator, Kontrolle und jeder verdünnten Probe in die entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte pipettieren. Die Zuverlässigkeit der Analyse kann durch Doppelbestimmungen gesteigert werden min bei Raumtemperatur (18-25 C) inkubieren. 4. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 300 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen µl Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren min bei Raumtemperatur (18-25 C) inkubieren. 7. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 300 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 8. Substrat- und Stopplösung möglichst mit einer 8-Kanal-Pipette pipettieren und Substrat- und Stopplösung in denselben Zeitintervallen zugeben. Mit positivem Vorhub pipettieren, um die Bildung von Luftbläschen zu vermeiden µl TMB Substratlösung in jedes Well pipettieren min bei Raumtemperatur (18-25 C) inkubieren (vor direktem Sonnenlicht schützen). 11. Die Substratreaktion durch Zugabe von 100 µl TMB Stopplösung in jedes Well stoppen. Platte kurz schütteln. Die Farbe wechselt von blau nach gelb. 12. Die optische Dichte mit einem Photometer innerhalb von 30 min nach Zugabe der Stopplösung bei 450 nm messen (Referenzwellenlänge: nm). 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) und andere einschlägige Normen und Gesetze beachten. Alle Kontrollen des Kits müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG Für die quantitative Auswertung die erhaltenen OD der Kalibratoren (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die 4-Parameter- Analyse (lin-log) oder Cubic-Spline-Methode empfohlen. Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Die standardmäßig durchzuführende Verdünnung ist in dem oben beschriebenen Auswerteverfahren bereits berücksichtigt. Wenn Proben anders oder weiter verdünnt wurden, müssen die Ergebnisse mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden. Proben, die oberhalb des höchsten Kalibrators gemessen werden, müssen wie in TESTVOR- BEREITUNGEN beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden. V / 7

6 Typische Standardkurve (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Kalibrator U/mL Mittelwert OD A B C D E F mod 450 nm U Scl-70-Ab / ml Der Test kann auch qualitativ ausgewertet werden. Dazu wird nur die Positive Kontrolle benötigt, die zusätzliche Messung der Negativen Kontrolle wird jedoch empfohlen (s. Qualitätskontrolle). Bei der qualitativen Auswertung werden die Messwerte für die optische Dichte (OD) der Proben mit einem Cut-Off verglichen. Die OD des Cut-Off wird wie folgt ermittelt: OD Cut-Off = OD Pos. Kontrolle x Faktor Der Faktor ist chargenspezifisch und auf dem jeweils mitgelieferten QC-Zertifikat angegeben. Beispiel: OD Pos. Kontrolle = Faktor = 0.35 OD Cut-Off = x 0.35 = Um die Reaktivität einer Probe abzuschätzen, kann der Quotient zwischen der OD der Probe und des Cut- Off ermittelt werden. Quotient = OD Probe / OD Cut-Off Beispiel: OD Cut-Off = OD Probe = Quotient = / = INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Interpretation Quantitative Auswertung U/mL Qualitative Auswertung Quotient Negativ < 3.2 < 0.85 Cut-Off Grenzwertig Positiv > 5.0 > 1.17 Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer diagnostischer Mittel. 15. NORMWERTE Diese wurde bestimmt in einem Blutspender-Serenkollektiv, gleichmäßig nach Alter und Geschlecht verteilt, und einem Kollektiv von Seren, die in einem CE-konformen Referenz-ELISA für Scl-70 Autoantikörper (IgG) positiv gefunden worden oder klinisch definiert waren. Folgende Verteilung des Analyten wurde beobachtet: Blutspender Seren (n=160) positive Seren (n=12) Mittelwert: 1.4 U/mL Mittelwert: 79 U/mL Mittelwert + 2 s: 4.3 U/mL Mittelwert + 2 s: < 0 U/mL Median: 1.1 U/mL Median: 60 U/mL 95 % Perzentile: 2.4 U/mL 5 % Perzentile: 13 U/mL V / 7

7 16. GRENZEN DES VERFAHRENS Die korrekte Durchführung der Probengewinnung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe PROBENGEWINNUNG UND -LAGERUNG. Azid und Thimerosal in Konzentrationen > 0.1 % stören im Assay und führen evtl. zu falschen Ergebnissen. 17. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Sensitivität Untere Nachweisgrenze (3 x s des Verdünnungspuffers) < 0.2 U/mL (n = 24) Analytische Spezifität Spezifisch für humanes IgG gegen Scl-70 Intra-assay Variabilität (n = 24) Inter-assay Variabilität (n = 72) Mittelwert (U/mL) % VK Mittelwert (U/mL) % VK Präzision Variabilität zw. 3 Laboranten (n = 12) Variabilität zwischen 2 Chargen (n = 6) Mittelwert (U/mL) % VK Mittelwert (U/mL) % VK Linearität Bereich [Ab] / IU/mL= Höchste Verdünnungsstufe = 1:128 n = AUTOMATISIERUNG Manuell gegen Dynex DS2 Variabilität: Mit Hilfe von Proben, die aus derselben Kitcharge stammen, wurde die Variabilität von Assayergebnissen bei manueller Durchführung und bei Verwendung des Dynex DS2 automatisierten ELISA-Systems verglichen: Intra-Assay Variabilität (n = 8) VK Mittelwert manuelle Durchführung Probe Dynex DS2 Probe 3.3 % 4.9 % Inter-Assay Variabilität (n = 24) VK Mittelwert 5.4 % 7.2 % V / 7

8 19. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Mierau, R., Genth, E.: Autoantikörper bei systemischer Sklerose und verwandten Erkrankungen. In: Thomas, L. (Ed.): Labor und Diagnose (5th ed., 1998), , TH-Books Verlagsges. MbH, Frankfurt/Main 2. Randone, S., et al.: Topoisomerase-I (Scl-70) autoantibodies. In: Shoenfeld, Y., et al.: Autoantibodies (2007), , Elsevier, Amsterdam 3. Kuwana, M., et al.: An immunodominant epitope on DNA Topoisomerase I is conformational in nature. Arthritis Rheum 42 (1999), Aeschlimann, A., et al.: Anti-Scl-70 antibodies detected by immunoblotting in progressive systemic sclerosis: specificity and clinical correlations. Ann Rheum Dis 48 (1989), Von Mühlen, C. A., Tan, E. M.: Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases. Semin Arthritis Rheum 24 (1995), Sommer, R., and Eitelberger, F.: Wertigkeit der Gliadin-Antikörper im Serum zur Diagnose der Zöliakie. Wien Klin Wochenschr 104/4 (1992), V / 7

9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /