Free Testosterone ELISA

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1 Arbeitsanleitung Free Testosterone ELISA Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von freiem Testosteron in humanem Serum. DB C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. ZWECKBESTIMMUNG Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von freiem Testosteron in humanem Serum. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Testosteron gehört zu den Steroidhormonen mit 19 Kohlenstoffatomen und ist das wichtigste Hormon der Gruppe der Androgene. Bei Männern wird es hauptsächlich von den Leydig-Zellen der Hoden produziert. In deutlich geringeren Mengen kommt Testosteron auch aus der Nebennierenrinde und aus den Ovarien. Erwachsene Männer haben 10- bis 20fach höhere Testosteron-Konzentrationen im Plasma als Frauen. Im Blut zirkuliert der größte Teil des Testosterons gebunden an Plasmaproteine wie Sexualhormonbindendes Globulin (SHBG) und Albumin. Testosteron ist verantwortlich für die Bildung sekundärer männlicher Geschlechtsmerkmale und hilfreich bei der Diagnose von Hypogonadismus. Frauen mit Hirsutismus und Virilisierung, polyzsystischem Ovarialsyndrom, Tumoren in den Eierstöcken, Nebennierentumoren und androgenitalem Syndrom haben im Allgemeinen hohe Testosteronspiegel. Bei Männern stehen hohe Testosteronspiegel in Zusammenhang mit Störungen der Hirnanhangsdrüse, Tumoren in den Hoden, androgenitalem Syndrom, sowie Prostatakrebs. Patienten mit folgenden Krankheitsbilder hingegen haben niedrige Testosteronspiegel: Hypophyseninsuffizienz, Klinefelter-Syndrom, kompletter Androgenresistenz, Orchiektomie und Lageanomalie des Hodens, Enzymdefekten, sowie einigen Autoimmunerkrankungen. Im Blut zirkuliert Testosteron gebunden an drei Proteine: SHBG (60 80 %), Albumin und Cortisol-binding globulin (CBG). Nur 1-2 % des gesamten zirkulierenden Testosterons bleibt ungebunden, dieses freie Testosteron stellt jedoch die eigentliche biologisch aktive Fraktion dar. Die Bestimmung des freien Testosterons empfiehlt sich, um Einflüsse durch Veränderungen in den Transportproteinen auf die gesamte Testosteron-Konzentration zu umgehen. 3. TESTPRINZIP Kompetitiver Enzymimmunoassay (ELISA). Die unbekannte Menge an Antigen in der Probe und eine bekannte Menge an enzymmarkiertem Antigen (E-Ag) konkurrieren um die Bindungsstellen des an die Wells der Mikrotiterstreifen gebundenen Antikörpers. Nach der Inkubation wird nicht gebundenes E-Ag durch Waschen entfernt. Die Intensität der gebildeten Farbe nach der Substratreaktion ist umgekehrt proportional zur Antigen-Konzentration in den Proben. Die Ergebnisse der Proben können direkt anhand der Standardkurve bestimmt werden. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid (NaN 3 ) als Konservierungsmittel. Bei Kontakt mit den Augen oder der Haut gründlich mit Wasser abspülen. NaN 3 kann mit Blei und Kupfer explosive Azide bilden. Bei Entsorgung über das Abwasser gut spülen, um Azidanreicherung zu vermeiden. Version / 7

3 10. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf anti-hcv, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zum Verfallsdatum des Kits haltbar, wenn der Beutel sorgfältig wieder verschlossen und bei 2-8 C gelagert wird. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Serum Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Es ist möglich, NaN 3, ProClin300 oder Thimerosal als Konservierungsmittel zu verwenden. Getrübte Proben sollten vor der Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen. Lagerung: 2-8 C -20 C (aliquotiert) Haltbarkeit: 48 Stunden 6 Monate 7. KOMPONENTEN DES KITS Anzahl / Menge Symbol 1 x 12x8 MTP 1 x 15 ml ENZCONJ 1 x 6 x 1.0 ml CAL A-F 1 x 2 x 1.0 ml CONTROL x 15 ml TMB SUBS 1 x 15 ml TMB STOP 1 x 100 ml WASHBUF CONC Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden. Zum Versand müssen die Proben eingefroren werden. Gefrorene Proben sollten langsam auf Raumtemperatur erwärmt werden und vor dem Pipettieren manuell gemischt werden. Tauen Sie keine Probe in einem 37 C warmen Wasserbad auf. Komponente Mikrotiterplatte Streifen einzeln abbrechbar. Beschichtet mit Maus anti-testosteron-antikörper (monoklonal). Enzymkonjugat Gebrauchsfertig. Enthält: Testosteron konjugiert mit HRP und Stabilisatoren. Standard A-F 0; 0.25; 2.5; 10; 25; 100 pg/ml Gebrauchsfertig. Enthält: Testosteron, Humanserum, < 0,1 % ProClin300 und Stabilisatoren. Kontrolle 1+2 Gebrauchsfertig. Enthält: Testosteron, Humanserum, < 0,1 % ProClin300 und Stabilisatoren. TMB Substratlösung Gebrauchsfertig. Enthält: TMB, Puffer und Stabilisatoren. TMB Stopplösung Gebrauchsfertig. 1 M H 2SO 4. Waschpuffer Konzentrat (10x) Enthält: Phosphatpuffer, Tween20 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 25; 50; 100; 150 und 250 µl 2. Vortex-Mischer 3. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 4. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 5. Inkubator, 37 C 6. Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) 7. Bidest. oder deionisiertes Wasser 8. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr Version / 7

4 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen. 5. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der Platte sicherzustellen. 6. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 7. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt. 8. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wieder verschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. 10. TESTVORBEREITUNGEN Der Inhalt des Kits für 96 Bestimmungen kann in drei einzelne Läufe unterteilt werden. Die unten angegebenen Volumina beziehen sich auf einen Lauf mit allen Mikrotiterstreifen (96 Bestimmungen) Vorbereitung konzentrierter Komponenten Verd. / Komponente mit Diluent Verhältnis Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit rekonst. Gründlich 100 ml WASHBUF 900 ml bidest. Wasser 1: C 8 Wochen mischen Probenverdünnung Probenvorbehandlung: keine. Proben, die höher als 100 pg/ml gemessen wurden, sollten nicht verdünnt werden. Verdünnung ändert das Gleichgewicht zwischen Freiem Testosteron und Serumproteinen. Version / 7

5 11. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Je 25 µl von jedem Standard, jeder Kontrolle und Probe in die entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte pipettieren. 2. Je 100 µl Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren. 3. Für 10 Sekunden gut schütteln h bei 37 C inkubieren (Platte nicht abdecken). 5. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 250 μl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 6. Je 100 μl TMB Substratlösung in jedes Well pipettieren min bei C (RT) inkubieren. 8. Die Substratreaktion durch Zugabe von 100 μl TMB Stopplösung in jedes Well stoppen. Platte kurz schütteln. Farbumschlag von blau nach gelb. 9. Die optische Dichte mit einem Photometer bei 450 nm (Referenzwellenlänge: nm) innerhalb von 15 min nach dem Pipettieren der Stopplösung messen. 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG Die erhaltenen OD der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen. Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Typische Standardkurve (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard Testosteron OD Mittelwert OD/OD max (%) (pg/ml) A B C D E F Version / 7

6 14. NORMWERTE Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer diagnostischer Mittel. Augenscheinlich gesunde Spender zeigten die folgenden Normwerte: Frauen Alter n Median Perzentile Absolut-Bereich (179) [pg/ml] [pg/ml] [pg/ml] < > Männer Alter n Median Perzentile Absolut-Bereich (179) [pg/ml] [pg/ml] [pg/ml] < > Jedes Labor sollte unter Berücksichtigung regionaler Gegebenheiten eigene Normalwertbereiche erstellen. 15. GRENZEN DES VERFAHRENS Die korrekte Durchführung der Probengewinnung und Aufbewahrung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG. Angaben zu Kreuzreaktivitäten sind im Kapitel TESTCHARAKTERISTIKA zu finden. Die folgenden Blutbestandteile haben bis zu der angegebenen Konzentration keinen signifikanten Einfluss auf die Testergebnisse (+/- 20%): Hämoglobin 5 mg/ml NaN % Bilirubin 5 mg/ml ProClin % Triglyceride 91 mg/ml Thimerosal 0.01 % Version / 7

7 16. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Spezifität (Kreuzreaktivität) Analytische Sensitivität (Nachweisgrenze) Substanz Kreuzreaktivität (%) Testosteron (4-Androsten-17β-ol-3-one) β-Hydroxy-Testosteron (4-Androsten-11β,17β-diol-3-one) α-Hydroxy-Testosteron (4-Androsten-11α,17β-diol-3-one) 3.24 Dihydrotestosteron (5α-Androstan-17ß-ol-3-one) 1.92 Androstendion (4-Androstene-3,17-dione) 0.83 Methyl-Testosteron (4-Androsten-17α-methyl-17ß-ol-3-one) pg/ml Mittleres Signal (Nullstandard) - 2SD Funktionelle Sensitivität 0.52 pg/ml Mittelwert Konz. < 20 % VK Kreuzreaktivität aller anderen getesteten Substanzen 0.1 % Präzision Mittelwert (pg/ml) SD (pg/ml) VK(%) n Intra-Assay Inter-Assay Methodenvergleich IBL-Assay = x RIA Assay r = n = 85 EINFLUSS VON SEX HORMONE BINDING GLOBULIN (SHBG) Mit diesem Versuch wurde ein möglicher Einfluss durch Bindung von SHBG an das Konjugat untersucht. Ein Serumpool wurde mit definierten SHBG-Mengen im Konzentrationsbereich von μg/ml gespikt und im vorliegenden ELISA getestet. Zugabe SHBG (μg/ml) OD 450 nm B/B0 (%) Die Ergebnisse zeigen auch bei sehr viel höheren SHBG-Werten als den normalen (0.5-5 μg/ml) Bindungswerte von % B/Bo (Bo=ungespiktes Serum). Dies bedeutet, dass die SHBG-Werte keinen signifikanten Einfluss auf die Testergebnisse haben. EINFLUSS VON HUMANEM SERUM ALBUMIN (HSA) Mit diesem Versuch wurde ein möglicher störender Einfluss durch Serumalbumin auf die Testdurchführung untersucht. Drei Patientenseren wurden mit definierten HSA-Mengen gespikt und im vorliegenden ELISA getestet (Angaben in pg/ml): Probe Zugabe HSA (g/dl) Die Ergebnisse zeigen, dass HSA keinen signifikanten Einfluss auf die Testergebnisse hat. Version / 7

8 17. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Andersen, O. M. (2003): Essential Role of the Apolipoprotein E Receptor 2 in Sperm Development. In Journal of Biological Chemistry 278 (26), pp , checked on 10/03/ Fritz, K. S.; McKean, A. J.; Nelson, J. C.; Wilcox, R. B. (2008): Analog based free testosterone test results linked to total testosterone concentrations, not free testosterone concentrations. In Clin Chem 54 (3), pp Nieschlag, E. (2005): Entwicklungsstand der hormonellen männlichen Kontrazeption. In Deutsches Ärzteblatt Selby, C. (1990): Sex hormone binding globulin: origin, function and clinical significance. In Ann. Clin. Biochem 27 (Pt 6), pp Swerdloff, R. S.; Wang, C. (2008): Free testosterone measurement by the analog displacement direct assay: old concerns and new evidence. In Clin Chem 54 (3), pp Vermeulen, A.; Stoïca, T.; Verdonck, L. (1971): The apparent free testosterone concentration, an index of androgenicity. In J. Clin. Endocrinol. Metab 33 (5), pp Wheeler, M. J. (1995): The determination of bio available testosterone. In Ann. Clin. Biochem 32 (Pt 4), pp Winters, S. J.; Kelley, D. E.; Goodpaster, B. (1998): The analog free testosterone assay: are the results in men clinically useful? In Clin. Chem 44 (10), pp Version / 7

9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /