Melatonin direct Serum/Plasma/Saliva RIA
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- Erich Leander Abel
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1 Arbeitsanleitung Melatonin direct Serum/Plasma/Saliva RIA Radioimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Melatonin in humanem Serum und Plasma. Für Forschungzwecke können auch Salivaproben eingesetzt werden. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)
2 1. ZWECKBESTIMMUNG Radioimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Melatonin in humanem Serum und Plasma. Für Forschungzwecke können auch Salivaproben eingesetzt werden. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Das Neurohormon Melatonin gehört zu den Indolaminen und wird im Pinealorgan (= Zirbeldrüse) aus der Aminosäure Tryptophan hergestellt. Die Melatonin-Biosynthese unterliegt einem zirkadianen Rhythmus mit hohen Werten in der Nacht und niedrigen am Tage. Im Dunkeln erfolgt die Ausschüttung von Noradrenalin und dessen Bindung an β-noradrenerge Rezeptoren auf der Pinealocyten-Membran. Da die Enzyme der Melatoninsynthese auch in anderen Geweben auftreten, kann eine Synthese andernorts nicht ausgeschlossen werden. Dennoch wird angenommen, dass der größte Teil des im menschlichen Blut vorliegenen Melatonins aus dem Pinealorgan stammt. Die Melatoninkonzentration sowie Störungen der Melatonin-Rhythmik werden mit psychischen und Schlafstörungen während Schichtarbeit, jet lag, Depression, Schizophrenie, Anorexia nervosa, malignen Tumoren (Brust-, Blasen- und Prostatakrebs, Zirbeldrüsengeschwulst, Leukämie) sowie der Kontrolle der sexuellen Reifung in der Pubertät in Verbindung gebracht. Das Hormon wird in der Leber hydroxyliert und als 6-Hydroxymelatonin (-sulfat oder -Glucuronid) im Urin ausgeschieden, wobei auch eine geringe Menge unverändert im Urin nachweisbar ist. Die Konzentration des Melatoninsulfats im Urin korreliert gut mit der Konzentration von Melatonin im Blut. 3. TESTPRINZIP Kompetitiver Radioimmunoassay (RIA). Eine begrenzte Menge des spezifischen Antikörpers (Ab) reagiert mit dem entsprechenden 125 I-radiomarkierten Antigen (*Ag). Bei Hinzufügen einer ansteigenden Menge an Ag (Probe) wird eine entsprechend sinkende Fraktion an *Ag an den Antikörper gebunden. Nach der Trennung des gebundenem vom freien *Ag durch Ausfällen und Zentrifugieren wird die Menge an gebundener Radioaktivität des Präzipitats in einem Gamma counter gemessen. Die Ergebnisse der Proben können direkt anhand der Standardkurve bestimmt werden. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Für den Umgang mit radioaktiven Stoffen gelten die Vorschriften der Strahlenschutzverordnung. Radioaktive Reagenzien dürfen nur an Personen abgegeben werden, die im Besitz einer gültigen Umgangsgenehmigung sind. 10. Radioaktives Material sollte nur in besonders gekennzeichneten, regelmäßig überwachten Bereichen des Labors, die nur befugtem Personal zugänglich sind, gehandhabt werden. Einmal-Geschirr und - Abdeckmaterial verwenden. Die übliche Schutzausrüstung ist zu tragen (Laborkittel, Einmal- Handschuhe und Dosimeter). Verschüttete Tropfen sofort aufnehmen und kontaminierten Bereich mit Version / 7
3 einem Dekontaminierungsmittel reinigen. Jegliches kontaminierte Material ist als radioaktiver Abfall zu behandeln. 11. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf anti-hcv, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Serum, Plasma (EDTA, Heparin) Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen. Saliva Der Patient sollte vor der Probenahme 30 min nicht essen, trinken, Kaugummi kauen oder Zähne putzen. Andernfalls 5 min vor der Probenahme den Mund gründlich mit kaltem Wasser spülen. Salivaproben sollten nicht bei Krankheiten, Entzündungen oder Verletzungen der Mundhöhle genommen werden (Blutkontamination). Salivaproben können in geeigneten Sammelgefäßen gesammelt werden. Es sollten mindestens 0.5 ml Flüssigkeit gesammelt werden. Der Speichelfluss kann durch Kauen auf Parafilm stimuliert werden. Es wird empfohlen, die Salivaproben vor der Testdurchführung bei 20 C einzufrieren und nach dem Auftauen zu mischen und bei x g zu zentrifugieren (um Partikel zu entfernen). Die Salivaproben müssen visuell einwandfrei sein (rötliche Färbung deutet auf Kontamination mit Blut hin). Die Verwendung von Sarstedt Salivetten (REF ) ohne Additive ist auch möglich. Lagerung: 2-8 C -20 C -70 C (aliquotiert) (aliquotiert) Haltbarkeit: 24 h 3 Monate 12 Monate 7. KOMPONENTEN DES KITS 7.1. Gemeinsame Reagenzien für Serum, Plasma und Saliva Anzahl / Menge Symbol 1 x 5.5 ml TRACER LYO 2 x ANTISERUM LYO 1 x 50 ml PREC ANTISERUM 1 x 2.5 ml CAL A 1 x 6 x 0.25 ml CAL B-G 1 x 2 x 0.25 ml CONTROL x 10 ml ASSAYBUF Komponente Melatonin 125 I-Tracer lyophilisiert Aktivität: < 200 kbq Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden. Melatonin Antiserum lyophilisiert Enthält: anti-melatonin Antiserum (Kaninchen, polyklonal). Präzipitierendes Antiserum Gebrauchsfertig. Enthält: anti-kaninchen IgG (Ziege), PEG, Phosphatpuffer. Standard A Gebrauchsfertig. Enthält: Melatonin. Genaue Konzentrationen siehe Etiketten oder QC-Zertifikat. Standard B-G Gebrauchsfertig. Enthält: Melatonin. Genaue Konzentrationen siehe Etiketten oder QC-Zertifikat. Kontrolle 1+2 Gebrauchsfertig. Enthält: Melatonin, Konzentrationen / Akzeptanzbereiche siehe QC-Zertifikat. Assaypuffer Gebrauchsfertig. Vorsicht! Reizend.. Version / 7
4 7.2. Material für Serum und Plasma ( nicht für Speichel verwenden) Anzahl / Menge Symbol Komponente 2 x 3 ml ENZ LYO Enzym lyophilisiert 1 x 6 ml ENZBUF 2 x 5 ml DILUENT LYO Enzympuffer Gebrauchsfertig. Vorsicht! Ätzend. Diluent lyophilisiert Enthält: Plasma-serummatrix 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 50; 200; 500; 1000 µl 2. Polystyrolröhrchen, Rundboden (12 x 75 mm) 3. Reagenzglasgestell 4. Geeignete Probenabnahmegefäße verwenden. 5. Vortex-Mischer 6. Wasserbad, 37 C 7. Zentrifuge (vorzugsweise mit Kühlung); 3000 x g 8. Gammacounter 9. Bidest. oder deionisiertes Wasser 10. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen. 5. Alle Röhrchen sollten eindeutig beschriftet werden. 6. Die Erdbeschleunigung einer Zentrifuge (g) entspricht nicht der Umdrehungszahl (U/min), sondern muss in Abhängigkeit vom Rotordurchmesser der verwendeten Zentrifuge berechnet werden. 10. TESTVORBEREITUNGEN Vorbereitung lyophilisierter oder konzentrierter Komponenten Verd. / rekonst. mit Diluent Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit Komponente ENZ LYO (Serum/Plasma) allein DILUENT LYO (Serum/Plasma) allein TRACER LYO ANTISERUM (bitte auf das richtige Volumen des bidest. Wassers achten) 3 ml ENZBUF 5 ml 5.5 ml Saliva: 6 ml Serum/Plasma: 2.75 ml bidest. Wasser bidest. Wasser bidest. Wasser 30 min auf einem Rollmischer mischen. 30 min auf einem Rollmischer mischen. 15 min stehen lassen. Ohne Schaumbildung mischen. 15 min stehen lassen. Ohne Schaumbildung mischen. Frisch herstellen und nur einmal verwenden. Frisch herstellen und nur einmal verwenden. -20 C (aliquotiert) Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden. bis Verfalldatum Version / 7
5 10.2. Probenverdünnung Serum/Plasma Proben mit Konzentrationen höher als der höchste Standard, müssen mit Diluent verdünnt werden Saliva Proben mit Konzentrationen höher als der höchste Standard können mit bidest. oder deionisiertem Wasser verdünnt werden. 11. TESTDURCHFÜHRUNG Durchführung für Serum und Plasma Enzymatische Behandlung der Standards, Kontrollen und Proben 1. Je 20 µl Standard A in die B 0 -Röhrchen, NSB-Röhrchen und in die Patientenröhrchen pipettieren. Je 20 µl von jedem Standard B - G, und jeder Kontrolle in die entsprechenden Röhrchen pipettieren. 2. Je 200 µl Diluent in die B 0 -, NSB -, Standard B-G - und in die Kontroll-Röhrchen pipettieren. Je 200 µl Patientenprobe in die entsprechenden Röhrchen pipettieren. 3. Je 50 µl frisch hergestellte Enzymlösung in jedes Röhrchen pipettieren. Vortexen. 4. Alle Röhrchen 1 min bei 500 x g zentrifugieren h bei 37 C oder 3 h bei RT (18-25 C) inkubieren Assay µl Assaypuffer in jedes Röhrchen pipettieren. Vortexen. 2. Je 50 µl 125 I-Tracer in jedes Röhrchen pipettieren. Zwei Röhrchen für die Totalaktivität (T) vorsehen. 3. Je 50 µl aufgelöstes Antiserum in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T, ausser NSB). Vortexen. 4. Alle Röhrchen 1 min bei 500 x g zentrifugieren. 5. Röhrchen abdecken h bei RT (18-25 C) inkubieren. 6. Je 500 µl Präzipitierendes Antiserum in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T). Vortexen min bei RT (18-25 C) inkubieren. 8. Alle Röhrchen 15 min bei 3000 x g zentrifugieren. Die Temperatur des Rotors sollte 25 C nicht überschreiten. 9. Alle Röhrchen in Über-Kopf-Stellung für 3-5 min dekantieren (ausser T). 10. Radioaktivität in einem Gammacounter 1 min messen Saliva Assay (enzymatische Vorbehandlung ( ) nicht nötig) µl Standard A in die B 0 -Röhrchen pipettieren, ebenso in die NSB und die Patienten-Röhrchen. 20 µl von jedem Standard B - G, und jeder Kontrolle in die entsprechenden Röhrchen pipettieren µl bidest.- oder deionisiertes Wasser in die B 0 -Röhrchen, NSB-Röhrchen, Standard B G- Röhrchen und Kontroll-Röhrchen pipettieren. 500 µl Patientenprobe in die entsprechenden Röhrchen pipettieren. 3. Je 50 µl Assaypuffer in jedes Röhrchen pipettieren. Vortexen. 4. Je 50 µl 125 I-Tracer in jedes Röhrchen pipettieren. 2 zusätzliche Röhrchen für die Totalaktivität (T) vorsehen. 5. Je 50 µl aufgelöstes Antiserum in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T, ausser NSB). Vortexen. 6. Alle Röhrchen 1 min bei 500 x g zentrifugieren. 7. Röhrchen abdecken h bei RT (18-25 C) inkubieren. 8. Je 500 µl Präzipitierendes Antiserum in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T). Vortexen min bei RT (18-25 C) inkubieren. 10. Alle Röhrchen 15 min bei 3000 x g zentrifugieren. Die Temperatur des Rotors sollte 25 C nicht überschreiten. 11. Röhrchen vorsichtig absaugen (ausser T). 12. Radioaktivität in einem Gamma counter 1 min messen. Version / 7
6 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG B/B 0 % für jeden Standard, jede Kontrolle und Probe wie folgt berechnen: CPM (Standard / Probe) CPM ( NSB) B/B 0 % = x 100 CPM ( Bo) CPM ( NSB) CPM ( Bo) CPM ( NSB) CPM ( NSB) B 0 /T und NSB/T berechnen: B 0 /T% = x 100 NSB/T = x 100 CPM (Totalakt.( T )) CPM (Totalakt.( T )) Die erhaltenen %B/B 0 der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen. Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Die Werte von verdünnten Proben müssen mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden. Proben, die oberhalb des höchsten Standards gemessen werden, müssen wie in TESTVORBEREITUNGEN beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden. Umrechnung: Melatonin (pg/ml) x 4.30 = pmol/l Version / 7
7 Typische Standardkurve (Serum/Plasma) (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard Melatonin Mittelwert B/T B/B 0 (pg/ml) cpm (%) (%) T NSB A B C D E F G % B/Bo Melatonin (pg/ml) Typische Standardkurve Saliva (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard Melatonin Mittelwert B/T B/B 0 (pg/ml) cpm (%) (%) T NSB A B C D E F G NORMWERTE Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer diagnostischer Mittel. Augenscheinlich gesunde Spender zeigten die folgenden Normwerte: Die Melatoninkonzentrationen bei Menschen in Serum, Plasma und Speichel weisen einen circadianen Rhythmus auf, der durch sehr niedrige Werte während des Tags (bis zu 30 pg/ml für Serum/Plasma und < 5 pg/ml für Saliva) und hohe Werte in der Nacht (bis zu 150 pg/ml für Serum/Plasma und > 10 pg/ml für Saliva) gekennzeichnet ist. Die Melatoninkonzentration ist zudem abhängig vom Lebensalter. Bei Säuglingen und Kleinkindern (bis 3 Jahre) wurden die höchsten Konzentrationen festgestellt. Der nächtliche Melatonin-Peak ist auch bei gesunden Menschen starken Schwankungen unterworfen. Jedes Labor sollte unter Berücksichtigung regionaler Gegebenheiten eigene Normalwertbereiche erstellen. 15. GRENZEN DES VERFAHRENS Die korrekte Durchführung der Probengewinnung und Aufbewahrung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG. Angaben zu Kreuzreaktivitäten sind im Kapitel TESTCHARAKTERISTIKA zu finden. Die folgenden Blutbestandteile haben bis zu der angegebenen Konzentration keinen signifikanten Einfluss auf die Testergebnisse (+/-20 %): Hämoglobin 8.0 mg/ml Bilirubin 0.36 mg/ml Triglyceride 3.8 mg/ml % B/Bo Melatonin (pg/ml) Version / 7
8 16. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Spezifität (Kreuzreaktivität) Analytische Sensitivität (Nachweisgrenze) Substanz Kreuzreaktivität (%) N-Acetyl-Serotonin Methoxy-Tryptophol Methoxy-Tryptamin 2.5 Serotonin 0.02 Serum/Plasma: 0.9 pg/ml Saliva: 0.3 pg/ml Kreuzreaktivität aller anderen getesteten Substanzen < 0.01 % Mittleres Signal (Nullstandard) - 2SD Präzision Probenart Bereich (pg/ml) VK (%) Intra-Assay Serum/Plasma Saliva Inter-Assay Serum/Plasma Saliva Linearität Probenart Bereich (pg/ml) Höchste Verdünnungsstufe Bereich (%) Serum/Plasma : Saliva : Wiederfindung Probenart Mittlere Wiederfindung nach spiken (%) Bereich (%) Serum/Plasma Saliva Methodenvergleich versus RIA IBL-Assay = 0.97 x RIA (commercially available RIA) r = 0.97; n = LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Römer, H.C., Griefahn, B., Blazkewicz, M., Keith, G., Gerngroß, H. Melatonin und Schichtarbeit. Wehrmed. Mschr. 46, Heft 9-10/2002, (2002). Artikel in German. Address: H. C. Römer University of Dortmund, Germany 2. Mann, K, Wagner, P, Hiemke, Ch, Frank C, Röschke J. Nocturnal Hormone Profiles in Healthy Humans under the Influence of Pulsed High-Frequency Electromagnetic Fields. In: The Pineal Gland and Cancer. Springer-Verlag, Eds. Bartsch C. et al. (2001). Address: J. Röschke. University of Mainz, Germany 3. Barriga C, Marchena JM, Ortega E, Martín MI, Rodríguez AB. Melatonin levels and exercise in adolescent boys and girls. Biogenic Amines, 15 (6): (2000). Address: C. Barriga, University of Extremadura, Spain 4. Follenius M, Weibel L, Brandenberger G. Distinct modes of melatonin secretion in normal men. J. Pineal Res., 18: (1995) Address: M. Follenius, Laboratoire de Physiologle et de Physiologie Environnementales, Strasbourg, France 5. Dubbels R, Reiter RJ, Klenke E, Goebel A, Schnakenberg E, Ehlers C, Schiwara HW, Schloot W. Melatonin in edible plants identified by radioimmunoassay chromatography-mass spectrometry. J. Pineal Res., 18: (1995) Address:R. Dubbels, University of Bremen, Bremen, Germany 6. Czeisler CA, Shanahan TL, Klerman EB, Martens H, Brotman DJ, Emens JS, Klein T, Rizzo III JF. Supression of Melatonin secretion in some blind patients by exposure to bright light. New England J. of Medicine, 332: 6-11 (1995) Address: Ch. A. Czeisler, Harvard Medical School, Boston, U.S.A. Version / 7
9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /
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