Lipoprotein (a) ELISA

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1 Arbeitsanleitung Lipoprotein (a) ELISA Enzymimmunoassay für die quantitative Bestimmung von Lipoprotein a [Lp(a)] in humanem Serum, Citrat und EDTA Plasma. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. ZWECKBESTIMMUNG Enzymimmunoassay für die quantitative Bestimmung von Lipoprotein a [Lp(a)] in humanem Serum, Citrat und EDTA Plasma. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Lipoprotein(a) [Lp(a)] ist ein genetisch determinierter, unabhängiger Risikofaktor für Arteriosklerose. Über die physiologische Funktion und den Metabolismus von Lp(a) ist wenig bekannt. Die Serumkonzentration dieses Lipoproteins liegt zwischen 0 und 200 mg/dl. Konzentrationen von über 30 mg/dl erhöhen das Risiko der Arterioskleroseentstehung deutlich, insbesondere bei gleichzeitiger Erhöhung des LDL-Cholesterins. Die Struktur des Lp(a) lässt sich vom Aufbau des LDL-Partikels ableiten. Lp(a) ist ein LDL-Partikel, das über Disulfidbrücken mit dem hochglykosilierten Apo-Lipoprotein(a) [Apo(a)] verbunden ist. Sequenzhomologien von Apo(a) mit Plasminogen deuten auf einen Zusammenhang von gerinnungsphysiologischen und artheriosklerotischen Prozessen hin. Lp(a) weist sowohl eine inter- als auch eine intraindividuelle Heterogenität in seiner Protein- und Lipidzusammensetzung auf. Bisher konnten mehr als 30 Isoformen charakterisiert werden. Ob diese Heterogenität Einfluss auf das relative Risiko der Arterioskleroseentstehung hat, ist nicht bekannt. Im Gegensatz zu anderen Lipoproteinen kann die Lp(a)-Konzentration nicht diätetisch beeinflusst werden. Lipidsenker, die die LDL-Konzentration senken, beeinflussen Lp(a) nicht. 3. TESTPRINZIP Der Lp(a) ist ein Einschritt-Sandwich-ELISA. Vertiefungen der ELISA-Teststreifen sind mit spezifischen, polyklonalen Antikörpern gegen Apo(a) beschichtet. Im ersten Inkubationsschritt (Proben- und Konjugatinkubation) werden verdünnte Serum- bzw. Plasmaproben zusammen mit dem Konjugat inkubiert. Das Konjugat besteht aus einem spezifischen, monovalenten, gegen Apo(a) gerichteten Fab-Fragment, das mit Peroxidase gekoppelt ist (Anti-Apo(a)-Peroxidase-Konjugat). Während der Inkubationszeit werden die Apo(a)-haltigen Partikel an die Festphase gebunden und gleichzeitig durch das Konjugat markiert. Unspezifische Probenbestandteile und ungebundenes Konjugat werden in einem Waschschritt entfernt. Im zweiten Inkubationsschritt erfolgt die Substratreaktion, wobei die Peroxidase des Konjugats das Substrat Tetramethylbenzidin (TMB) zu einer blau gefärbten Substanz oxidiert. Durch anschließende Zugabe von Schwefelsäure wird diese Reaktion gestoppt, und es erfolgt ein Farbumschlag nach gelb. Die Farbintensität ist der Lp(a)-Konzentration direkt proportional. Bei einer Wellenlänge von 450 nm wird die Extinktion in einem ELISA-Reader gemessen. Über eine Bezugskurve wird die Lp(a)-Konzentration in der Probe quantitativ bestimmt. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Kontakt mit Stopplösung vermeiden. Kann Hautreizungen und Verätzungen hervorrufen. Version / 7

3 10. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf anti-hcv, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte, das TMB Substrat und der Puffer sind auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zu 6 Monate haltbar, wenn sie sorgfältig wieder verschlossen (MTP in einem Beutel) bei 2 8 C gelagert werden. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Serum, Plasma (EDTA, Citrat) Proben sollten zur Lp(a)-Bestimmung möglichst frisch eingesetzt werden. Bei mindestens -20 C können sie mehrere Monate aufbewahrt werden. Die Proben dürfen nicht mehrfach aufgetaut und wieder eingefroren werden. Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen. Bitte beachten: Eine Erhöhung der Ca 2+ -Konzentration und Einfrieren/Auftauen führt zur Aggregatbildung der LDL-Partikel und beeinflusst den Messwert. 7. KOMPONENTEN DES KITS Anzahl / Menge Symbol 1 x 12 x 8 MTP 1 x 1.3 ml ENZCONJ LYO 1 x 5 x 0.2 ml CAL 1-5 LYO 1 x 2 x 0.2 ml CONTROL LL LYO CONTROL HL LYO 2 x 100 ml CONC 2 x 15 ml TMB SUBS 1 x 15 ml TMB STOP Komponente 2 x FOIL Haftklebefolie Mikrotiterplatte Gebrauchsfertig. Wells einzeln abbrechbar. Beschichtet mit affinitätsgereinigtem, spezifischen, polyklonalem Anti-Apo(a)-Antikörper vom Schaf. Enzymkonjugat lyophilisiert Blau gefärbt. Enthält: Anti-Apo(a)-Fab-Peroxidase, spezifische, polyklonale Fab-Fragmente vom Schaf. CAL 1-5 lyophilisiert Enthält: Humanserum, Stabilisatoren, Konservierungsmittel. Genaue Konzentrationen siehe Etiketten oder QC-Zertifikat. Control LL+HL lyophilisiert Positivkontrolle Serum, LL, Low Level, HL, High Level. Enthält: Humanserum, Stabilisatoren, Konservierungsmittel. Akzeptanzbereiche siehe Fläschchenetiketten oder QC Zertifikat. Puffer Konzentrat (10x) Enthält: Detergenzien, Stabilisatoren, 0.01 % (w/v) Thimerosal, 0.4 M Tris/HCl; ph 8.4. TMB Substratlösung Gebrauchsfertig. Enthält: TMB (Tetramethylbenzidine). TMB Stopplösung Gebrauchsfertig. Enthält: 0.5 M H 2SO 4. Version / 7

4 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 5, 50, 100, 200, 1000 µl 2. Vortex-Mischer 3. Röhrchen zur Probenverdünnung 4. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 5. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 6. Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) 7. Bidest. oder deionisiertes Wasser 8. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen. 5. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der Platte sicherzustellen. 6. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 7. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt. 8. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wieder verschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. Version / 7

5 10. TESTVORBEREITUNGEN Vorbereitung konzentrierter Komponenten Verd. / rekonst. Komponente mit Diluent Verhältnis Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit 100 ml CONC 900 ml bidest. Wasser Vorbereitung lyophilisierter Komponenten Verd. / rekonst. 1 Fl. 1:10 Gründlich mischen. 2-8 C 2 Monate Komponente mit Diluent Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit CAL 1-5 Control LL Control HL 200 µl 1 Fl. ENZCONJ 1.30 ml 15 Min. bei Raumtemperatur (18-25 C) stehen lassen, dann 10 s auf einem Probenmischer mischen (Schaumbildung vermeiden). Nach dem Rekonstituieren sind die Kalibratoren und Kontrollseren klar oder leicht trüb Verdünnung von Standards, Kontrollen und Proben CAL 1-5 Control LL Control HL zu verdünnen mit Verhältnis Bemerkungen immer 1: C 2 Wochen -20 C 6 Monate 2-8 C 1 Woche -20 C 6 Monate z.b. 5 µl CAL + 10 ml z.b. 5 µl Control + 10 ml Serum, Plasma immer 1:2001 z.b. 5 µl + 10 ml DILBU( ENZCONJ immer 1:11 z.b. 400 µl ENZCONJ + 4 ml Haltbarkeit: 60 min (18-25 C). 11. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Je 100 μl Konjugatlösung in allen benötigten Wells vorlegen. Dazu 100 µl verdünnte Kalibratoren, verdünnte Kontrollseren und oder verdünnte Proben pipettieren (Kalibratoren sollten in die Streifen 1 und 2 pipettiert werden). 2. Platte mit Haftklebefolie abdecken. Bei RT (18-25 C) 120 min inkubieren. 3. Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit 250 µl verdünntem Puffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 4. Substrat- und Stopplösung möglichst mit einer 8-Kanal-Pipette pipettieren und Substrat- und Stopplösung in denselben Zeitintervallen zugeben. 5. Je 200 μl TMB Substratlösung in das Well pipettieren. 6. Bei RT (18-25 C) 30 min inkubieren. 7. Die Substratreaktion durch Zugabe von 50 µl TMB Stopplösung in jedes Well stoppen. Platte kurz schütteln. 8. Die optische Dichte mit einem Photometer bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) innerhalb 10 min nach dem Pipettieren der Stopplösung messen. Version / 7

6 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG Die erhaltenen OD der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen. Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. Die standardmäßig durchzuführende Verdünnung ist in dem oben beschriebenen Auswerteverfahren bereits berücksichtigt. Wenn Proben anders oder weiter verdünnt wurden, müssen die Ergebnisse mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert werden. Proben, die oberhalb des höchsten Standards gemessen werden, müssen wie in TESTVORBEREITUNGEN beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden. Die Umrechnung von Citrat-Plasmawerten in Serumwerte erfolgt durch Multiplikation der abgelesenen Konzentration mit dem Faktor 1.1. Typische Standardkurve (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard mg/dl OD Mittelwert CAL CAL CAL CAL CAL (OD) Lipoprotein (a) ELISA (mg/dl) 14. INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Die Interpretation der Messwerte wird erschwert durch den Einfluss genetischer Faktoren (z.b. Polymorphismus, geschlechtsspezifische und ethnische Unterschiede) sowie durch die asymmetrische Häufigkeitsverteilung der Lp(a) Werte: z.b. liegt der Median für Mitteleuropäer bei ca. 10 mg/dl, für Chinesen bei 7 mg/dl und für Sudanesen bei 40 mg/dl. Für Mitteleuropäer wurden für % der Probanden mit einem Plasmaspiegel von ca % mg/dl ein erhöhtes artheriosklerotisches Risiko festgestellt. Die Bewertung der Messergebnisse erfolgt anhand folgender Tabelle: Beurteilung Lp(a) [mg/dl] Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund Normalbereich <25 der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, Risikobereich sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Pathologischer Bereich >35 Beobachtungen und weiterer diagnostischer Mittel. Jedes Labor sollte unter Berücksichtigung regionaler Gegebenheiten eigene Normalwertbereiche erstellen. Version / 7

7 15. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Spezifität (Kreuzreaktivität) Kreuzreaktionen mit Plasminogen und LDL liegen unterhalb der Nachweisgrenze. Die verwendeten Antikörper erfassen alle bekannten Apo(a)-Isoformen. Präzision Bereich (mg/dl) VK Bereich (%) Intra-Assay Inter-Assay Verdünnung Gemessen (mg/dl) Linearität (%) 1: : : : : Linearität 1: : : : : : : Analytische Sensitivität <5 mg/dl Methodenvergleich IBL-ELISA = x LEIA r = Standardisierung: Für die Bestimmung von Lp(a) gibt es keine anerkannte Standardmethode und keinen etablierten Standard. Methodenvergleich: Der Lipoprotein (a) ELISA lieferte im Methodenvergleich mit turbidimetrischen Messungen eine gute Korrelation (s. Abbildung). 100 Regression Plot 90% Confidence Bands Batch 0115 values found (mg/dl) Expected values (mg/dl) Y = 4, ,052 * X; R^2 =,95 Abbildung 2: Korrelationskurve ELISA/LEIA Version / 7

8 16. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Berg, K.: A new serum type system in man - the Lp system; Acta Pathol. Microbiol. Scand. 59, (1963) 2. Dagen, M.M., Packard, C.J., Shepherd, J.: A comparison of commercial kits for the measurement of lipoprotein(a); Ann. Clin. Biochem. 28, (1991) 3. Dahlen, G.H.: Lipoprotein(a), Atherosclerosis and Thrombosis; Prog. Lipid. Res. 30/2+3, (1991) 4. Dahlen, G.H., Guyton, J.R., Attar, M., Farmer, J.A., Kautz, J.A., Gotto, A.M.: Association of levels of lipoprotein Lp(a), plasma lipids and other lipoproteins with coronary artery disease documented by angiography; Circulation 74, (1986) 5. Eaton, D.L., Fless, G.M., Kohr, W.J., McLean, J.W., Xu, Q-T., Miller, C.G., Lawn, R.M., Scanu, A.M.: Partial amino acid sequence of apolipoprotein(a) shows that it is homologous to plasminogen; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, (1987) 6. Edelberg, J.M., Pizzo, S.V.: Lipoprotein(a): The Link Between Impaired Fibrinolysis and Atherosclerosis; Fibrinolysis 3, (1991) 7. Kostner, G.M.: Immunochemische Bestimmung von Lipoprotein (a); Berichte der ÖGKC, Jg. 15, (1992) 8. Lawn, R.M.: Lipoprotein A und Herzinfarkt; Spektr. Wiss. 78 (08/1992) 9. Rhoads, G.G., Dahlen, G., Berg, K., Horton, N.E., Danneberg, A.L.: Lp(a) lipoprotein as a risk factor for myocardial infarction; JAMA 256, (1986) 10. Scanu, A.M.: Update on lipoprotein(a); Curr. Opin. Lipidol. 2, (1991) 11. Scanu, A.M.: Lipoprotein(a): A Genetic Risk Factor for Premature Coronary Heart Disease; JAMA 267/24, (1992) 12. Scanu, A.M. and Fless G.M.: Lipoprotein (a), heterogeneity and biological relevance; J. Clin. Invest. 85, (1990) 13. Steinmetz, A., Utermann, G.: Lipoprotein(a) als Risikofaktor für Arteriosklerose; Internist 33, (1992) 14. Utermann, G., Menzel, H.J., Kraft, H.G., Duba, H.C., Kemmler, H.G., Seitz, C.: Lp(a) glycoprotein phenotypes: inheritance and relation to Lp(a) concentrations in plasma; J. Clin. Invest. 80, (1987) 15. Utermann, G., Kraft, H.G., Menzel, H.J., Hopferweise, T., Seitz, C.: Genetics of the quantitative Lp(a) lipoprotein trait. I. Relation of Lp(a) glycoprotein phenotypes to Lp(a) lipoprotein concentrations in plasma; Hum. Genet. 78, (1988) Version / 7

9 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /