IRT Neonatal Luminescence Immunoassay

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1 Arbeitsanleitung IRT Neonatal Luminescence Immunoassay Luminescence Immunoassay for quantitative determination of immunoreactive trypsin (IRT) in human newborn blood spot samples. RE68015/ RE / C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. ZWECKBESTIMMUNG Lumineszenz Immunoassay zur quantitativen Bestimmung von immunreaktivem Trypsin (IRT) in Trockenblutproben von humanen Neugeborenen. Für das Neugeborenenscreening auf Mukoviszidose (zystische Fibrose, ZF). 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Zystische Fibrose (ZF) ist eine der meist verbreitesten autosomal rezessiven Erkrankungen, die durch Mutation des CFTR Gens (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) verursacht wird. ZF kann zum frühen Tode führen, vor allem durch fortgeschrittene Lungenkrankheit, aber oftmals auch durch zahlreiche andere betroffene Organe. ZF tritt mit einer Inzidenz von ca. 1:2000 1:5000 Lebendgeburten in Europa und Nordamerika auf. Die ersten Fälle von zystischer Fibrose bei der Untersuchung von Neugeborenen in Europa wurden in den frühen siebziger Jahren beschrieben, als die ersten Programme den Albumingehalt im Mekonium untersuchten. Die Erhöhung von immunreaktivem Trypsin (IRT) im Blut von Neugeborenen mit ZF und seine Bestimmung aus Trockenblutproben wurde zum ersten Mal 1979 beschrieben. Im folgenden Jahrzehnt wurde die Bestimmung der IRT-Konzentration in Fersenblut in mehreren Ländern eingeführt. Weitere Verbesserungen wurden nach dem Klonen des CFTR Gens 1989 erreicht. Die anschließende Identifizierung der am meisten verbreiteten CFTR Genmutationen ermöglichte zudem die Einführung von DNA-Untersuchungen in das Neugeborenenscreening. Studien haben gezeigt, dass die frühe Diagnose der ZF in Kombination mit einer radikalen Ernährungstherapie den langfristigen Ernährungszustand signifikant verlängern kann. Die am weitesten verbreiteten Verfahren für das ZF-Screening sind (a) die Messung von IRT in zunächst einer und dann einer weiteren Probe, und (b) die Messung von IRT mit anschließender DNA- Mutationsanalyse in derselben Probe [1, 2, 3]. 3. TESTPRINZIP Stanzling (3 mm Ø) aus Trockenblutproben, die auf einem speziellen Filterpapier gesammelt wurden, werden ausgestanzt. Diese Stanzlinge werden zusammen mit Assaypuffer und dem Enzymkonjugat (Anti- Trypsin 1 und Anti-Trypsin 2 Antikörper) in die entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte gegeben. Nach der Inkubation wird der Assaypuffer und die eluierten Trockenblutproben abgesaugt, die Wells gewaschen und Chemilumineszenz Substrat in die Wells gegeben. Die Singnalintensität (RLU) wird nach 45 Minuten gemessen. Die Trypsinkonzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf anti-hcv, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Version / 8

3 Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 10. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid (NaN 3) als Konservierungsmittel. Bei Kontakt mit den Augen oder der Haut gründlich mit Wasser abspülen. NaN 3 kann mit Blei und Kupfer explosive Azide bilden. Bei Entsorgung über das Abwasser gut spülen, um Azidanreicherung zu vermeiden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zum Verfallsdatum des Kits haltbar, wenn der Beutel sorgfältig wieder verschlossen und bei 2-8 C gelagert wird. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Trockenblutproben Blut aus der Ferse des Neugeborenen sollte entweder am medialen oder lateralen Bereich der Fußsohle entnommen werden. Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Der erste Blutstropfen sollte mit einem sterilen Tupfer entfernt werden. Die Probenkarte ist an einen großen freihängenden Blutstropfen zu bringen. Es ist darauf zu achten, dass ohne Unterbrechung eine ausreichende Menge Blut auf die Karte aufgetragen wird, um die markierte Fläche vollständig auszufüllen. Dieses Verfahren ist zu wiederholen um alle benötigten Flächen der Sammelkarte auszufüllen. Die Trockenblutproben sollten für 3 Stunden bei Raumtemperatur luftgetrocknet werden. Direkte Sonneneinstrahlung vermeiden. Da die im Kit enthaltenen Standards sich auf Karten von Schleicher & Schuell No. 903 befinden, und die Messwerte durch verschiedene Kartenmaterialien beeinflusst werden (siehe GRENZEN DES VERFAHRENS), sollten diese Karten auch für die Proben verwendet werden. Den Blutfluss nicht durch Drücken verstärken, da dies zu Hämolyse bzw. zum Verdünnen durch Gewebsflüssigkeit führen kann. Blut nicht auf bereits benutzte Flächen der Karte tropfen. Die Trockenblutproben nicht berühren oder verstreichen. Die Trockenblutproben müssen visuell einwandfrei sein (z.b. keine verstrichenen Spots, keine Gerinnsel im Blut, keine Fingerabdrücke auf den Spots). Das Screening auf zystische Fibrose erfordert keine Änderung der gängigen Blutprobenentnahme Praxis. Der häufigste Blutentnahmezeitpunkt ist am vierten oder fünften Tag nach der Geburt [2]. Nationale und länderspezifische Vorgaben zum Entnahmezeitpunkt müssen berücksichtigt werden. Lagerung: 2-8 C Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Haltbarkeit: bis zu 4 Monate [1] Version / 8

4 7. KOMPONENTEN DES KITS RE68015 RE68019 Symbol Komponente 5 x 12 x 8 25 x 12 x 8 MTP 1 x 350 µl 5 x 350 µl ENZCONJ CONC 1 x 6 x 15 DBS 1 x 2 x 15 DBS 2 x 6 x 15 DBS 4 x 2 x 15 DBS CAL A-F CONTROL x 6 ml 4 x 6 ml ASSAYBUF CONC 5 x 5.5 ml 6 x 21.5 ml LUMINREAG 2 x 100 ml 4 x 100 ml WASHBUF CONC 10 x 30 x FOIL Mikrotiterplatte Streifen einzeln abbrechbar. Beschichtet mit anti-human Trypsin Antikörper (Kaninchen). Enzymkonjugat Konzentrat (321x) Enthält: Antikörper Alkalische Phosphatase-Konjugat. Standard A-F Gebrauchsfertig. Enthält: Humanblut. Schleicher & Schuell Papier Nr Trockenblutproben / Karte. Genaue Konzentrationen siehe Etiketten oder QC Zertifikat. Kontrolle 1+2 Kontrolle 1: mittel Kontrolle 2: hoch Gebrauchsfertig. Enthält: Humanblut. Schleicher & Schuell Papier Nr Trockenblutproben / Karte. Konzentrationen / Akzeptanzbereiche siehe Etiketten oder QC Zertifikat. Assaypuffer Konzentrat (20x) Enthält: PBS Puffer, Tween, Protease Inhibitor, Casein, Konservierungsmittel. Chemilumineszenzreagenz AP Gebrauchsfertig. Waschpuffer Konzentrat (10x) Enthält: Tris Puffer, Tween, < 0.1 % NaN3. Haftklebefolie schwarz 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 50; ; 1000 µl 2. Orbitalschüttler ( U/min) 3. Vortex-Mischer 4. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 5. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 6. Disc remover (optional) Gerät zum Entfernen von eluierten Filterpapierplättchen 7. Lumineszenz Immunoassay-Messgerät (z.b. Berthold Mikrotiterplatten Luminometer) 8. Bidest. oder deionisiertes Wasser 9. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr 10. Karten für Blutproben (Schleicher & Schuell 903 empfohlen) 11. Trockenblutproben-Stanze, 3 mm (z.b. Sauer, Hannover, Deutschland) 12. Mikrotiterplatte (Rundboden), wird nur für die alternative 2-Stufen Testdurchführung mit externer Verdünnung benötigt. Kann bei IBL separat bestellt werden unter REF ZL HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. Version / 8

5 4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipittierfehler zu erkennen. 5. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der Platte sicherzustellen. 6. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 7. Beim Ausstanzen der für die Bestimmung benötigten Proben (Trockenblutproben) müssen die folgenden Dinge beachtet werden: 1. Es dürfen nur Trockenblutproben verwendet werden, die beidseitig ausreichend mit Blut durchtränkt sind. 2. Bei Doppelbestimmungen dürfen nur Stanzlinge verwendet werden, die aus einer Trockenblutprobe ausgestanzt wurden und direkt nebeneinander liegen, um einem potentiellen chromatografischen Effekt und somit ggf. auftretender Inhomogenität entgegenzuwirken. 3. Hinweis: Nicht zu nah am Rand der Trockenblutprobe ausstanzen (1mm vom Rand entfernt)! 8. Die Trockenblutproben müssen visuell einwandfrei sein (z.b. keine verstrichenen Trockenblutproben, keine Gerinnsel im Blut, keine Fingerabdrücke auf den Trockenblutproben). 9. Nicht benötigte Wells/Röhrchen und getrocknete Trockenblutproben sofort in den wiederverschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. 10. Vor dem Waschen der Mikrotiterplatte muss sichergestellt werden, dass ausnahmslos alle Stanzlinge aus den Kavitäten entfernt worden sind. 10. TESTVORBEREITUNGEN Vorbereitung konzentrierter Komponenten (unten angegebene Volumina für 1 Platte) Vor der Vorbereitung der Lösungen sollten die Reagenzien auf Raumtemperatur gebraucht und gründlich gemischt werden. Mögliche Fällungsprodukte im Assaypuffer lösen sich, sobald die Flüssigkeit Raumtemperatur erreicht. Verd. / rekonst. Komponente Diluent Verhältnis Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit 15 ml WASHBUF CONC ad 150 ml bidest. Wasser 1:10 Gründlich mischen. 2-8 C 4 Wochen 800 µl ASSAYBUF CONC ad 16 ml bidest. Wasser 1:20 Ohne Schaumbildung mischen. 2-8 C 24 Stunden 50 µl ENZCONJ CONC mit 16 ml Assaypuffer verdünnt 1:321 Ohne Schaumbildung mischen. Frisch herstellen und nur einmal verwenden. Version / 8

6 11. TESTDURCHFÜHRUNG PRIMÄRE TESTDURCHFÜHRUNG (1-SCHRITT-PROTOKOLL) 1. Die Trockenblutproben Standards, Kontrollen und Proben ausstanzen (je 3 mm Ø) und jeden Stanzling in die entsprechenden Wells der beschichteten Mikrotiterplatte legen. Standards und Kontrollen sollten in Doppelbestimmung getestet werden. Hinweis: Nicht zu nah am Rand des Trockenblutproben ausstanzen! 2. Je 150 μl frisch hergestelltes Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren. Jeder Stanzling muss vollständig von Enzymkonjugat umgeben sein. 3. Platte mit schwarzer Haftklebefolie abdecken. Die Trockenblutproben 2 Stunden bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) inkubieren. 4. Folie vorsichtig entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. Alternativ die Stanzlinge mit einem Disc remover entfernen. Platte 3-5 x mit je μl verdünntem Waschpuffer waschen. 5. Je 50 μl Chemilumineszenz Substrat in jedes Well pipettieren. Platte mit schwarzer Haftklebefolie abdecken. 45 min bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) inkubieren. 6. Folie vorsichtig entfernen. Die relativen Lumineszenzeinheiten (RLU) mit einem Luminometer messen ALTERNATIVE TESTDURCHFÜHRUNG (2-SCHRITT-PROTOKOLL; EXTERNE ELUTION) 1. Die Trockenblutproben Standards, Kontrollen und Proben ausstanzen (je 3 mm Ø) und jeder Stanzling in die entsprechenden Wells der unbeschichteten Rundboden-Mikrotiterplatte legen. Standards und Kontrollen sollten in Doppelbestimmung getestet werden. Hinweis: Nicht zu nah am Rand des Trockenblutproben ausstanzen! 2. Je 150 μl frisch hergestelltes Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren. Jeder Stanzling muss vollständig von Enzymkonjugat umgeben sein. 3. Die Trockenblutproben 30 min bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) eluieren µl der Flüssigkeit in die beschichtete Mikrotiterplatte transferieren (8-Kanal Pipette). Die Trockenblutproben nicht mit der Pipettenspitze berühren! 5. Platte mit schwarzer Haftklebefolie abdecken. 2 Stunden bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) inkubieren. 6. Folie vorsichtig entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. Platte 3-5 x mit je μl verdünntem Waschpuffer waschen. 7. Je 50 µl Chemilumineszenz Substrat in jedes Well pipettieren. Platte mit schwarzer Haftklebefolie abdecken. 45 min bei RT (18-25 C) auf einem Orbitalschüttler ( rpm) inkubieren. 8. Folie vorsichtig entfernen. Die Signalintensität (RLU) mit einem Luminometer messen. 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. Version / 8

7 13. TESTAUSWERTUNG Die erhaltenen RLU der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die 4-Parameter-Analyse (Lin-Log) oder die Lineare Regression (Lin-Lin) empfohlen. Zur Berechnung der Regression sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Regressionsfunktion abgelesen werden. Typische Standardkurve (Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!) Standard Trypsin (ng/ml) RLU RLU/RLUmax (%) A % B % C % D % E % F % (RLU) IRT Neonatal Luminescence Immunoassay (ng/ml) 14. NORMWERTE Basierend auf der Annahme, dass die IRT Werteverteilung unter Screeningbedingungen eine Normalverteilung ergibt, ist es allgemein akzeptiert den Cut-off anhand eines gewählten Perzentils der Verteilung festzulegen (gleitender Cut-off). Dies ist bedingt durch ethnische oder saisonale Variationen in den IRT Werten. Im Hinblick auf das zu wählende Perzentil des initialen Cut-offs gibt es verschiedene Optionen (z.b.97%, 99% oder 99,4%). Probenwerte oberhalb des Cut-offs (positiv) sind durch eine wiederholte Messung in Doppelbestimmung zu bestätigen. Eine weitergehende Bestätigungsdiagnostik (Mutationsanalyse oder PAP) und Schweißtest sind unerlässlich. Nachfolgend ist die Werteverteilung für die primäre Testdurchführung (1-Schritt-Protokoll) exemplarisch für 471 Trockenblutproben von zufällig ausgewählten Neugeborenen dargestellt. Proben verschiedener Populationen können sich auch in den IRT Werten unterscheiden. Es ist daher dringend empfohlen, dass jedes Labor seinen eigenen Normalbereich/ Cut-off etabliert. Weiter sollten die Empfehlungen lokaler Gesellschaften (z.b. DGNS in Deutschland) beachtet werden. Beide genannten Testdurchführungen (1-Schritt und 2-Schritt-Protokoll mit externer Elution) sind nicht austauschbar. Aus diesem Grund müssen die Normwerte für das weitere Screening mit der entsprechenden Methode ermittelt werden. Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer Diagnostik. Version / 8

8 15. GRENZEN DES VERFAHRENS Die korrekte Durchführung der Probengewinnung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG. Jede Probe mit einer erhöhten Konzentration muss als vermutlich positiv betrachtet und durch weitere Probenahmen und Messungen bestätigt werden. Ein falsch negatives Ergebnis mit diesem Assay kann nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Es wird empfohlen, S&S 903 Karten für die Blutproben zu verwenden. Mögliche Ursachen für anormale Testergebnisse sind: - Probe nicht gleichförmig mit Blut getränkt - Proben-Plättchen zu nah am Rand der Trockenblutproben ausgestanzt - Nicht konforme Probennahme und ungenügend getrocknete Proben - Nicht-eluierte Trockenblutproben durch den Einfluss von Hitze und Feuchtigkeit - Kontamination des Trockenblutproben Filterpapiers mit Fäkalien Angaben zu Kreuzreaktivitäten sind im Kapitel TESTCHARAKTERISTIKA zu finden. Die folgenden Blutbestandteile haben bis zu den angegebenen Konzentrationen keinen signifikanten Einfluss auf die Testergebnisse: Bilirubin Triglyceride 5 mg/ml 91 mg/ml 16. TESTCHARAKTERISTIKA Analytische Spezifität (Kreuzreaktivität) Analytische Sensitivität (Nachweisgrenze des Blank) Präzision Methodenvergleich versus Methoden / Assays Die folgenden Substanzen zeigten eine Kreuzreaktivität niedriger als <0.01 %: Pepsinogen II PGC; alpha2-macroglobulin; alpha-1-antitrypsin; alpha-chrymotrypsin; Gamma-Globulin 0.3 ng/ml Mittleres Signal (Nullstandard) + 2SD Bereich (ng/ml) VK (%) (1-Schritt- Protokoll) Bereich (ng/ml) Intra-Assay Inter-Assay Inter-Lot VK (%) (2-Schritt- Protokoll) IBL-Assay LUM = 0.97 (IBL IRT neonatal screening ELISA)+13.3 r = 0.89; n = 376 IBL-Assay LUM = 1.42 (IRT Fluorometric Assay) r = 0.79; n = 471 IBL-Assay LUM = 0.86 (IRT Colorimetric ELISA) r = 0.89; n = 169 Version / 8

9 17. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Li L et al. Development and characterization of dried blood spot materials for the measurement of immunoreactive trypsinogen. J Med Screen 13:79-84 (2006) 2. Castellani C et al. European best practice guidelines for cystic fibrosis neonatal screening. Journal of Cystic Fibrosis (2009) 3. Crossley JR et al. Dried-blood spot screening for cystic fibrosis in the newborn. Lancet 1: (1979) 4. Stopsack M et al. Neonatal screening for cystic fibrosis. Pros and cons. Monatsschr Kinderheilkd (2009) 5. Salvatore D et al. An overview of international literature from cystic fibrosis registries 2. Neonatal screening and nutrition/growth. Review. Journal of Cystic Fibrosis (2009) 6. Southern W et al. Newborn screening programmes for cystic fibrosis. Paediatric respiratory reviews 4, (2003) 7. Heeley A F et al. Screening for cystic fibrosis by dried blood spot trypsin assay. Archives of Disease in Childhood, 57, (1982) 8. Rodrigues R et al. Cystic fibrosis and neonatal screening. Review. Cad. Saúde Pública, Rio de Janeiro, 24 Sup 4, (2008) Version / 8

10 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /