VORBEMERKUNGEN ZUR SICHERHEIT IM LABORATORIUM

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1 5 VORBEMERKUNGEN ZUR SICHERHEIT IM LABORATORIUM Im Praktikum gilt absolutes Rauchverbot. Es ist ebenfalls verboten, im Labor zu essen und zu trinken. Manche Lösungen sind gesundheitsschädlich; diese sind in den Vorschriften besonders gekennzeichnet. Unnötiger Hautkontakt mit diesen Lösungen sollte vermieden werden. Außerdem ist zum Schutz der eigenen Kleidung ein Kittel (geschlossen!) zu tragen. Alle Lösungen, die in den Versuchen eingesetzt werden, müssen mit mechanischen Pipettierhilfen (Eppendorf, Finnpipette oder Pasteur-Pipetten) dosiert werden. Einige Laborgeräte sind aus Glas und müssen entsprechend sorgsam behandelt werden. Zerbrochene Glasware ist sofort in einen separat aufgestellten Abfallbehälter zu tun. Die Bedienung von empfindlichen Geräten (Spektrophotometer, Laborzentrifugen, Elektrophorese Apparaturen) wird vom Kursassistenten erklärt und vorgeführt. Es sollte nicht versucht werden, unbeaufsichtigt eigene Erfahrungen zu sammeln! Besonders große Sorgfalt ist auf die Sauberkeit der Messgeräte zu verwenden: insbesondere müssen Küvettenhalter und Deckelinnenflächen der Küvettengehäuse des Spektrophotometers trocken bleiben; eventuelle Feuchtigkeit muss sofort mit Papiertüchern abgetrocknet werden. Im Labor vorhandene automatische Pipetten sind Präzisionsinstrumente und müssen mit großer Sorgfalt behandelt werden. Die Handhabung dieser Pipetten ist ausführlich im nächsten Kapitel dargestellt.

2 6 HYGIENEVORSCHRIFTEN Behandeln Sie Blut, Seren, Urin und alle Sekrete als infektiös. Tragen Sie flüssigkeitsdichte Einweghandschuhe bei allen Verrichtungen, bei denen ein direkter Kontakt mit Blut, Seren und Urin möglich ist. Tragen sie Handschuhe und Kittel bei der Bearbeitung der Proben. Verschüttete Proben von Blut, Seren und Urin auf Tischflächen oder Fußboden müssen sofort mit einem Desinfektionsmittel desinfiziert und mit Zellstoff aufgewischt werden. Nach Abschluss der Arbeit waschen und desinfizieren Sie Ihre Hände. Die größte Infektionsgefahr besteht, wenn Sie sich mit kontaminierten Kanülen stechen, schneiden oder kratzen. Deswegen stecken Sie Kanülen niemals in ihre Schutzhülle zurück. Hierbei besteht hohe Gefahr der Stichverletzung. VERHALTEN BEI VERLETZUNGEN 1. Wunde desinfizieren (70-80%iger Äthylalkohol) 2. wenn möglich, Blut auspressen 3. Wunde erneut desinfizieren 4. Unfallhergang melden und protokollieren 5. HIV- und Hepatitis-Status des Probanden feststellen 6. Arzt aufsuchen 7. Antikörperstatus sofort, nach 3, 6 und 12 Monaten überprüfen.

3 7 HANDHABUNG DER AUTOMATISCHEN PIPETTEN Eine wichtige Voraussetzung für gutes Gelingen aller Versuche ist das richtige Pipettieren. Die Dosierung von Flüssigkeiten im Mikroliter-Bereich wird mit mechanischen Pipettierhilfen (Eppendorf-, und/oder Finn-Pipetten) durchgeführt. Beachten Sie die folgenden Regeln und üben Sie den Umgang mit den Pipettierhilfen vor dem Versuch mit destilliertem Wasser. EPPENDORF-PIPETTEN Kolbenhubpipetten mit fest eingestellten Volumina von 50 µl und 100 µl sind im Praktikum vorhanden. Die Pipettengrößen unterscheiden sich äußerlich durch einen farbigen Typenring mit aufgedrucktem Pipettiervolumen. 50 µl +100 µl Pipetten: gelber Typenring Nur vorgeschriebene Pipettenspitzen dürfen verwendet werden, die dem Arbeitskonus angepasst sind, sonst ist einwandfreies Dichten nicht gewährleistet. 10 µl -100 µl gelbe Spitzen für Pipetten mit gelbem Typenring

4 8 FÜLLEN Abb. 1: Arbeitshaltung Wichtig: Niemals ohne Spitze Flüssigkeit pipettieren! Pipettenspitze fest aufstecken. Pipette annähernd senkrecht halten (Abb. 1) Bedienungsknopf bis zum ersten Anschlag drücken Pipettenspitze 2-3 mm in die Flüssigkeit eintauchen Bedienungsknopf langsam bis zum Anschlag zurückgleiten lassen, während des Ansaugens der Flüssigkeit Pipettenspitze immer in der Flüssigkeit belassen Pipette unter Abstreifen der Spitze an der Gefäßwand herausziehen ENTLEEREN Wichtig: Pipetten mit gefüllter Spitze niemals hinlegen! Pipettenspitze gegen die Gefäßwand halten Bedienungsknopf langsam bis zum ersten Anschlag drücken 2-3 sec halten Bedienungsknopf bis zum Endanschlag drücken zur vollständigen Entleerung der Spitze Pipette nach vollständiger Entleerung zurückziehen und den Bedienungsknopf erst loslassen, wenn sich die Pipettenspitze wieder in der Luft befindet.

5 9 Abb. 2: Füllen und Entleeren Für jedes Reagenz sollte eine neue Spitze benutzt werden. Pipetten niemals mit gefüllter Spitze waagerecht halten oder hinlegen! FINN-PIPETTEN Die Finn-Pipette ist ein volumetrisches Gerät zur genauen und sicheren Messung und Aufgabe von Flüssigkeiten. Je nach Modell können Volumina von 0,1 µl bis 5000 µl gemessen und dosiert werden. Die Finn-Pipette hat ein digitales Mikrometer, das das Volumen angibt. Das Volumen wird durch Drehen der farblich geriffelten Einstellschraube eingestellt und ist innerhalb des Einstellbereiches der Pipette kontinuierlich einstellbar. Das höchste Volumen steht auf der Seite der Abwurfvorrichtung und entspricht der Nummer des Pipettenmodells. Im Praktikum werden die folgenden Pipettenmodelle verwendet: Modell Rändelschraube grau Rändelschraube gelb Rändelschraube blau Rändelschraube grün Einstellbereich (µl) Die Finn-Pipette wird mit Einwegpipettenspitzen aus Polypropylen benutzt. Die Einwegspritzen stellen die höchste Sicherheit für den Anwender dar und verhindern die Kontami-

6 10 nation zwischen den Proben. Um den Anwender vor einer Kontamination durch die Spitzen zu schützen, verfügt die Finn-Pipette über einen eingebauten Spitzenabwerfer. EINSTELLEN DES VOLUMENS Die Digitalanzeige besteht aus drei Ziffern und wird von oben nach unten abgelesen. Die drei Ziffern geben das gewählte Volumen an. Bei den mit orangenen, gelben und blauen markierten Pipetten bedeuten Ziffern Mikroliter (µl) Bei der grünen Pipette bedeuten die Ziffernangaben ml. Das Volumen der Pipette wird durch Drehen der schwarzen, geriffelten Einstellschraube eingestellt. Um höchste Genauigkeit beim Wechsel der Volumeneinstellung zu erzielen, sollten die folgenden Empfehlungen befolgt werden: Wird die Volumeneinstellung vermindert, die Einstellschraube dann langsam drehen, bis die gewünschte Einstellung erreicht ist; dabei sicherstellen, dass die Einstellung nicht überschritten wird. Wird die Volumeneinstellung erhöht, die Einstellschraube drehen, bis ein Drittel Umdrehung über der gewünschten Einstellung erreicht wird. Die Einstellschraube dann langsam drehen, bis die gewünschte Einstellung erreicht ist, dabei sicherstellen, dass die Einstellung nicht überschritten wird. Diese Verfahren stellen die höchste Genauigkeit der Pipette sicher. PIPETTIERUNG Die passende Spitze auf den Schaft der Pipette aufstecken. Die Spitze dabei mit leichtem Drehen fest andrücken, um absolute Dichtheit zu gewährleisten. Pipetten orange und gelb Pipette blau Pipette grün gelbe Pipettenspitzen blaue Pipettenspitzen weiße Pipettenspitzen Anmerkung: Niemals Flüssigkeiten mit einer Finn-Pipette ohne Spitze aufnehmen!

7 11 FÜLLEN Den Druckknopf bis zum ersten Druckpunkt eindrücken (Abb. 3A). Die Pipette senkrecht halten, und die Spitze in die Probenflüssigkeit ca. 1cm eintauchen. Den Druckknopf langsam loslassen, um die Probe aufzusaugen (Abb. 3B). Eine Sekunde warten, und dann die Spitze aus der Flüssigkeit herausnehmen. Achtung: die Öffnung der Spitze nicht berühren! ENTLEEREN Das Ende der Spitze in einem Winkel von 10 bis 40 Grad gegen die Innenwand des Gefäßes halten. Den Druckknopf langsam bis zum ersten Druckpunkt herunterdrücken (Abb. 3C). Eine Sekunde warten. Den Druckknopf bis zum zweiten Druckpunkt herunterdrücken, um restliche Flüssigkeit auszustoßen (Abb. 3D). Die Pipette mit ganz gedrücktem Druckknopf herausnehmen, indem die Spitze an der Innenwand des Gefäßes entlang gezogen wird. Den Druckknopf loslassen (Abb. 3E). Die Spitze durch Drücken des Spitzenabwerfers abwerfen. Die Spitze muss nur gewechselt werden, wenn eine andere Flüssigkeit aufgegeben oder die Volumeneinstellung geändert wird.

8 12 Abb.: 3A-E PIPETTENSPITZEN Pipettenspitzen werden aus hochwertigem Polypropylen hergestellt. Die Spitzen sind farbig und entsprechen der Farbe auf dem Druckknopf. Gelbe Spitzen Diese Spitzen werden für Volumen zwischen 0,5 µl bis 200 µl verwendet. Blaue Spitzen Diese Spitzen werden für Volumen zwischen 200 µl und 1000 µl verwendet. Weiße Spitzen Diese Spitzen werden für Volumen von 1ml bis 5ml verwendet.