Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung. DLA 9/ Lactose und Fructose. Waldemar-Bonsels-Weg Ahrensburg, Germany

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1 DLA Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Auswertungs-Bericht Laborvergleichsuntersuchung DLA 9/2015 Lactose und Fructose in "lactosefreiem" Lebensmittel Dienstleistung Lebensmittel Analytik GbR Waldemar-Bonsels-Weg Ahrensburg, Germany Koordinator der LVU: Dr. Matthias Besler Seite 1 von 47

2 Inhalt / Content 1. Einleitung Durchführung Untersuchungsmaterial Homogenität Untersuchung Ergebnisübermittlung Auswertung Bezugswert (zugewiesener Wert) Standardabweichung Ausreißer Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Allgemeines Modell nach Horwitz Auswertung eines Versuchs zur Präzision Werte aus Erkenntnissen z-score z'-score Quotient Standardunsicherheit Wiederfindungsraten: Dotierung Ergebnisse Fructose Fructose Probe A (in mg/100g) Fructose Probe B (in mg/100g) Fructose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Lactose Qualitative Auswertung Probe A und Probe B Lactose Probe B (in mg/100g) Lactose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Wiederfindungsraten für Lactose Galactose Galactose Probe A (in mg/100g) Galactose Probe B (in mg/100g) Galactose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Dokumentation Primärdaten Homogenität Analytische Methoden Verzeichnis der teilnehmenden Institute Verzeichnis relevanter Literatur...46 Seite 2 von 47

3 1. Einleitung Die Teilnahme an Laborvergleichsuntersuchungen (LVU) ist ein unverzichtbarer Baustein für das Qualitäts-Management-System eines jeden, mit der Untersuchung von Lebensmitteln, Futtermitteln, Kosmetik und Bedarfsgegenständen befassten Labors. Die Durchführung von Laborvergleichsuntersuchungen ermöglicht den teilnehmenden Instituten die eigene analytische Kompetenz unter realen Bedingungen nachzuweisen. Gleichzeitig erhalten sie wertvolle Daten zur Validität der durchgeführten Untersuchungsmethode. Das Ziel von DLA ist es, LVU für ausgesuchte Parameter in praxisrelevanten Konzentrationen anzubieten. Durchführung und Auswertung der vorliegenden Laborvergleichsuntersuchung erfolgten nach den technischen Anforderungen der DIN EN ISO/IEC (2010) und DIN ISO Durchführung 2.1 Untersuchungsmaterial Zur Untersuchung wurden zwei LVU-Proben für den Nachweis von Lactose/Galactose und Fructose sowie eine Dotierungsmaterialprobe zur Verfügung gestellt. Die Dotierungsmaterialprobe enthält die betreffenden Analyten im Bereich von 1-10 % und wurde der dotierten LVU-Probe zugesetzt. Die Untersuchungsergebnisse der Dotierungsmaterialprobe sollen im Vergleich zur dotierten LVU-Probe die Möglichkeit geben, die Nachweisbarkeit der Analyten ohne und mit Einfluss der Lebensmittelmatrix bzw. -prozessierung zu charakterisieren. Bei dem Untersuchungsmaterial handelt es sich um handelsübliche lactosefreie Kekse. Diese Kekse enthalten als Zutat u.a. lactosearmes Magermilchpulver, das abgebaute Lactose (freie Galactose) enthalten kann. Die Grundzusammensetzung war für beide Proben A und B gleich (s. Tabelle 1). Probe B wurde als weitere Zutat das Dotierungsmaterial zugesetzt, das Lactose und Fructose sowie Galactose aus lactosefreiem Trockenmilcherzeugnis enthält. Die Zusammensetzung der Dotierungsmaterialprobe und die entsprechenden Gehalte der Analyten in Probe B sind Tabelle 2 zu entnehmen. Die Proben wurden nach dem Homogenisieren zu Portionen von ca. 25 g abgefüllt. Seite 3 von 47

4 Tabelle 1: Zusammensetzung der DLA-Proben Zutaten Probe A Probe B Kekse, lactosefrei Zutaten: Zucker, Reismehl, Kochbananenmehl, Palmfett, Kartoffelstärke, Maismehl, Glucose, Maismehlgel, modifizierte Kartoffelstärke, Inulin, lactosearmes Magermilchpulver, Salz, Volleipulver, Aromen, Eiklarpulver, Zitrone, Backtriebmittel: Ammoniumhydrogencarbonat und Natriumhydrogencarbonat, Emulgator: Sojalecithine Nährwerte pro 100 g: Fett 16 g, Kohlenhydrate 77 g, Protein 3,1 g 100 g/100g 98 g/100g Dotierungsmaterialprobe - 1,98 g/100g Tabelle 2: Zugesetzte Mengen Lactose und Fructose Zutaten Dotierungsmaterialprobe Probe B Kartoffelmehl 60,5 % 1,20 % Lactose 6,33 % 125 mg/100g Fructose 13,3 % 263 mg/100g * Getränkepulver, lactosefrei Zutaten: Zucker, Maltodextrin, lactosefreies Trockenmilcherzeugnis, löslicher Kaffee, stark entöltes Kakaopulver, Glucosesirup, Pflanzenfett gehärtet, modifizierte Stärke, Salz, Lactase, Trennmittel: E551, Stabilisatoren: E415, E340, Milcheiweiß, Aroma 20,0 % 20,0 % * Probe B enthält zusätzlich Fructose aus der Keksmatrix Seite 4 von 47

5 2.1.1 Homogenität Die Homogenität der DLA-Proben wurde anhand von 5 fach Bestimmungen von Fructose mittels HPLC-RI geprüft. Mit einer Wiederholstandardabweichung von 5,8 % wurde die Homogenität als hinreichend gesichert angesehen. Die Validierungsdaten vergleichbarer Methoden für die Bestimmung von Monound Disacchariden lagen die relativen Wiederholstandardabweichungen bei 0,46 2,9 % und die relativen Vergleichsstandardabweichungen bei 2,5 7,0 % für milchprodukt-haltige Lebensmittel (18). Die Ergebnisse der Homogenitätsuntersuchung sind in der Dokumentation angegeben. In der Dokumentation sind zudem die Portionsnummern graphisch den Messwerten für Galactose (Probe A) und Lactose (Probe B und Dotierungsmaterialprobe) gegenübergestellt. Es ist keinerlei Instituts-unabhängige Tendenz in den Messergebnissen erkennbar, die Inhomogenitäten nahelegen könnte. 2.2 Untersuchung An jedes teilnehmende Institut wurden in der 18. Woche 2015 zwei Portionen Untersuchungsmaterial verschickt. Das Untersuchungsverfahren wurde freigestellt. Die Untersuchungen waren durchzuführen bis spätestens 12. Juni Ergebnisübermittlung Die Ergebnisabgabe erfolgte einheitlich mittels, an die teilnehmenden Institute übergebenen, Übermittlungstabellen (per Fax oder ). Zur statistischen Auswertung kamen die abschließend für die nummerierten Proben angegebenen Gehalte der Analyten. Abgefragt und dokumentiert wurden Einzelergebnisse, Wiederfindungsraten und Angaben zu den durchgeführten Methoden. Ein Teilnehmer hat keine Ergebnisse eingereicht. Alle anderen Teilnehmer haben fristgerecht ihre Ergebnisse abgegeben. Seite 5 von 47

6 3. Auswertung 3.1 Bezugswert (zugewiesener Wert) Da es sich bei dem untersuchten Material nicht um zertifiziertes Referenzmaterial handelt wird als Bezugswert (X) für die Auswertung der robuste Mittelwert der eingesandten Ergebnisse verwendet. Eine Prüfung der Verteilung der eingesandten Ergebnisse ergab keine Hinweise für unvorhergesehene Quellen von Variabilität, wie z.b. eine bimodale Verteilung der Ergebnisse. Die statistische Auswertung erfolgt für alle Parameter, für die mindestens 7 Werte vorliegen. Einzelergebnisse die außerhalb des angegebenen Messbereiches eines teilnehmenden Labors liegen (z.b. mit der Angabe > 25 mg/kg oder < 2,5 mg/kg) werden für die statistische Auswertung berücksichtigt, sofern eine Angabe mit > oberhalb und eine Angabe mit < unterhalb des Zielbereichs liegt. 3.2 Standardabweichung Zum Vergleich mit der Zielstandardabweichung wird ebenfalls die robuste Standardabweichung (S x ) berechnet (6). 3.3 Ausreißer Auf Ausreißer wird mittels Mandel s-h-statistik Signifikanz-Niveau 95% geprüft (5). Ermittelte Ausreißer werden informativ genannt sofern gleichzeitig der z-score des Instituts < -2 oder > 2 ist. 3.4 Zielstandardabweichung (für die Eignungsbeurteilung) Die Zielstandardabweichung des Bezugswertes wird nach unten dargestellten, unterschiedlichen Verfahren bestimmt. Für die Eignungsbeurteilung wird, sofern ein akzeptabler Quotient S x / σ vorliegt, bevorzugt die Zielstandardabweichung des allgemeinen Modells nach Horwitz verwendet, da diese in der Regel für Auswertungen von Laborvergleichsuntersuchungen, bei denen von den Teilnehmern unterschiedliche Analysenmethoden eingesetzt werden können, geeignet ist. Die Zielstandardabweichung aus der Auswertung von Präzisionsdaten eines Versuchs leitet sich dagegen aus Ringversuchen mit vorgegebener Analysenmethode ab. Zur Information wurden, sofern verfügbar, jeweils die z-scores beider Modelle in der Auswertung angegeben. Seite 6 von 47

7 3.4.1 Allgemeines Modell nach Horwitz Die relative Zielstandardabweichung in % des Bezugswertes wird i.d.r. nach folgender Gleichung (Horwitz) berechnet σ (%) = 2 (1-0,5logX) hieraus wird die Zielstandardabweichung berechnet σ = X *σ (%) / Auswertung eines Versuchs zur Präzision Aus der Vergleichstandardabweichung σ R und der Wiederholstandardabweichung σ r eines Versuchs zur Präzision einer Methode (Ringversuch oder LVU) wird die Standardabweichung zwischen Laboratorien σ L berechnet: L = R 2 r 2. Aus den obigen Größen und der Anzahl der Wiederholmessungen n der laufenden Vergleichsuntersuchung wird nun die Zielstandardabweichung berechnet: σ= (σ L 2 +(σ r 2 /n)). Aus den Präzisionsdaten des jeweils relevanten Amtlichen Untersuchungsverfahrens wird die Zielstandardabweichung für den betreffenden Parameter berechnet und zur Beurteilung herangezogen. Die in Tabelle 3 angegebenen Zielstandardabweichungen wurden aus den Präzisionsdaten der angegebenen Methoden berechnet. Tabelle 3: Relative Zielstandardabweichungen (RSD) gemäß Auswertungen von Versuchen zur Präzision (14, 15, 16, 17) Parameter Matrix RSD σ Methode / Literatur Fructose Zwieback 2,0 % UV-Test(14) Glucose Zwieback 1,9 % UV-Test(14) Lactose Lactose "lactosefreie" entrahmte Milch "lactosefreie" Milch (3 Proben) 24,5 % UV-Test (15) 9,2 % 3,7 % 4,9 % UV-Test (16) zur Bestimmung in Gegenwart von Glucose Lactose Milch 0,92 % HPLC-RI(17) Lactose Sahne 4,4 % HPLC-RI(17) Lactose Milchpulver 2,6 % HPLC-RI(17) Seite 7 von 47

8 3.4.3 Werte aus Erkenntnissen Die Zielstandardabweichung kann für die Eignungsbeurteilung auf einen Wert festgesetzt werden, der dem Leistungsfähigkeitsniveau entspricht, das der Koordinator für ein wünschenswertes Ziel für die teilnehmenden Laboratorien hält (6). Zur Bewertung der Ergebnisse wurde für alle drei Parameter Fructose, Lactose und Galactose die Zielstandardabweichung nach Horwitz verwendet. Für Fructose und Lactose wurde jeweils zusätzlich die Standardunsicherheit berücksichtigt und mittels z'-score bewertet (s. 3.6). 3.5 z-score Der z-score wird herangezogen zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute. Er besagt um welches Vielfache der Zielstandardabweichung ( σ ) das Ergebnis (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) abweicht (6). Die Berechnung erfolgt nach z = (x X) / σ ; die Anforderungen an die Analytik gelten im Allgemeinen als erfüllt, wenn -2 z z'-score Der z'-score kann zur Beurteilung der Ergebnisse der teilnehmenden Institute herangezogen werden, wenn die Standardunsicherheit berücksichtigt werden muss (s. 3.8). Der z'-score drückt das Verhältnis der Abweichung des Ergebnisses (x) des betreffenden teilnehmenden Instituts vom Bezugswert (X) zur Wurzel aus der Quadratsumme von Zielstandardabweichung ( σ ) und Standardunsicherheit (Ux) aus (6). Die Berechnung erfolgt nach als Zielstandardab- Im Folgenden haben wir den Ausdruck im Nenner weichung σ ' definiert. Die Anforderungen an die Analytik gelten im Allgemeinen als erfüllt, wenn -2 z' 2. Der z'-score wurde für die Parameter Fructose und Lactose herangezogen (s. auch 3.7 u. 3.8). Seite 8 von 47

9 3.7 Quotient S x / σ In Anlehnung an den Horrat-Wert kann die Bewertung einer Laborvergleichsuntersuchung als aussagekräftig gelten, wenn der Quotient von robuster Standardabweichung und Zielstandardabweichung nicht über 2 liegt. Ein über 2 liegender Wert bedeutet, dass die Präzision nicht zufriedenstellend ist, d.h., dass die Präzision aus analytischen Gründen zu variabel ist oder die festgestellte Variation höher ist als für die angewandte Methode geschätzt wurde. Somit ist eine Vergleichbarkeit der Messergebnisse nicht gewährleistet (11). In der vorliegenden Vergleichsuntersuchung lag der Quotient S x / σ für Fructose und Lactose teilsweise deutlich über 2. Daher wurde die Bewertung nach 3.6 z'-score durchgeführt. Die Quotienten S x / σ ' lagen dann für Fructose bei < 2,0 und für Lactose bei < 3,0. Für Galactose wurden zufriedenstellende Quotienten S x / σ < 2,0 erhalten. 3.8 Standardunsicherheit Jeder Bezugswert ist mit einer Standardunsicherheit behaftet, die von der Analysenmethode, Unterschieden der eingesetzten Analysenmethoden, dem Probenmaterial und der Anzahl der Teilnehmer (P) einer LVU beeinflußt wird. Die Standardunsicherheit (U x ) wird für die vorliegende LVU wie folgt berechnet (6). u X =1,25 S x / p Ist u X 0,3 muss die Standardunsicherheit des Bezugswertes nicht berücksichtigt werden (6). Ein deutliches Überschreiten des Wertes von 0,3 ist ein Hinweis darauf, dass die Zielstandardabweichung ggf. zu gering für die Standardunsicherheit des Bezugswertes gewählt wurde. In der vorliegenden LVU wurden Quotienten U x / σ zwischen 0,59 und 0,73 für Galactose und zwischen 1,1 und 1,8 für Fructose und Lactose erhalten. Da der Quotient S x / σ für Fructose und Lactose gleichzeitig deutlich über 2,0 lag, wurde für die Bewertung der Ergebnisse der Teilnehmer für diese Parameter der z'-score unter Berücksichtigung der Standardunsicherheit herangezogen (s. 3.6). 3.9 Wiederfindungsraten: Dotierung Für die Ergebnisse von Dotierungsmaterialprobe und dotierter Probe werden Wiederfindungsraten in Bezug auf die zugesetzte Menge Lactose von DLA berechnet. Die Bezugswerte ergeben sich aus den unter 2.1 Untersuchungsmaterial in Tabelle 1 angegebenen Gehalten. Als Akzeptanzbereich AB für die Bewertung der Teilnehmerergebnisse wurde in Anlehnung an veröffentlichte Methoden ein Bereich von % für die Wiederfindungsraten (15-19). Für die Lactose-Ergebnisse der Dotierungsmaterialprobe und der dotierten Probe wurden anhand der bekannten Zusammensetzung Wiederfindungsraten Seite 9 von 47

10 berechnet und zur Information angegeben. Hierbei erfolgte keine statistische Auswertung. Die angegebenen Wiederfindungsraten dienen ausschließlich einer Einschätzung von Matrix- und/oder Prozessierungseinflüssen. Seite 10 von 47

11 4. Ergebnisse Alle folgenden Tabellen sind anonymisiert. Den teilnehmenden Instituten wird mit dem Versand dieser Auswertung ihre individuelle Auswertenummer mitgeteilt. In der oberen Tabelle sind die Kenndaten aufgeführt: Kenndaten Anzahl der Messergebnisse Anzahl der Ausreißer Mittelwert Median Robuster Mittelwert (X) Robuste Standardabweichung (S x ) Zielkenndaten: Zielstandardabweichung zur Information Zielstandardabweichung σ oder σ ' untere Grenze des Zielbereichs (X - 2 σ ) oder (X - 2 σ ') * obere Grenze des Zielbereichs (X + 2 σ ) oder (X + 2 σ ') * Quotient S x / σ oder S x / σ ' Standardunsicherheit u X Quotient u X / σ oder u X / σ ' Ergebnisse im Zielbereich * Zielbereich aus z-score oder z'-score berechnet In der unteren Tabelle sind die Einzelergebnisse der teilnehmenden Institute aufgeführt : Auswertenummer Parameter Evaluation [Einheit / Unit] number Abweichung z-score z-score Hinweis σ (Info) Deviation Remark Seite 11 von 47

12 4.1 Fructose Fructose Probe A (in mg/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 8 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 897 Median 854 Robuster Mittelwert (X) 874 Robuste Standardabweichung (S x ) 90,5 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 53,6 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 35,7 Untere Grenze des Zielbereichs 766 Obere Grenze des Zielbereichs 981 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1,7 40,0 0,75 Ergebnisse im Zielbereich 7 Prozent im Zielbereich 88 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Fructose [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 1: Ergebnisse Probe A Fig. 1: Results Sample A Seite 12 von 47

13 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Fructose [mg/100g] Abweichung [mg/100g] Deviation [mg/100g] z'-score σ z-score (Info) ,51-1,5-2, ,49 0,4 0, ,51-1,3-2, ,51-1,2-1, ,51-0,5-0, ,49 1,8 2, ,49 6,1 9, ,51-0,3-0,4 Hinweis Remark Ausreisser / Outlier 3 z'-score > Abb. 2: Fig. 2: Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Probe A Z'-Scores Sample A Seite 13 von 47

14 4.1.2 Fructose Probe B (in mg/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 8 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 1153 Median 1114 Robuster Mittelwert (X) 1129 Robuste Standardabweichung (S x ) 122 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 69,7 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 44,3 Untere Grenze des Zielbereichs 990 Obere Grenze des Zielbereichs 1268 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1,7 53,8 0,77 Ergebnisse im Zielbereich 7 Prozent im Zielbereich 88 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Fructose [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 3: Ergebnisse Probe B Fig. 3: Results Sample B Seite 14 von 47

15 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Fructose [mg/100g] Abweichung [mg/100g] Deviation [mg/100g] z'-score σ z-score (Info) ,6-2, ,3 0, ,8-2, ,8-1, ,4 0, ,6 2, ,3 8, ,7-1,1 Hinweis Remark Ausreisser / Outlier 3 z'-score > Abb. 4: Fig. 4: Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Probe B Z'-Scores Sample B Seite 15 von 47

16 4.1.3 Fructose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 9 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 13,6 Median 13,4 Robuster Mittelwert (X) 13,6 Robuste Standardabweichung (S x ) 0,930 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 0,534 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 0,368 Untere Grenze des Zielbereichs 12,6 Obere Grenze des Zielbereichs 14,7 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 1,7 0,39 0,73 Ergebnisse im Zielbereich 7 Prozent im Zielbereich 78 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Fructose [g/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 5: Ergebnisse Dotierungsmaterialprobe Fig. 5: Results Spiking Material Sample Seite 16 von 47

17 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswerte- Fructose [g/100g] Abweichung z'-score z-score Hinweis nummer [g/100g] σ (Info) Evaluation Deviation Remark number [g/100g] 1 13,1-0,53-1,0-1,4 2 13,26-0,37-0,7-1,0 3 13,7 0,07 0,1 0,2 4 11,9-1,73-3,2-4, ,37-0,26-0,5-0, ,94 0,31 0,6 0, ,61 0,98 1,8 2, ,0 1,37 2,6 3, ,4-0,23-0,4-0,6 Ausreisser / Outlier Einheit korrigiert / units corrected 4 z'-score Abb. 6: Fig. 6: Auswertenummer / evaluation number Z'-Scores Dotierungsmaterialprobe Z'-Scores Spiking Material Sample Seite 17 von 47

18 4.2 Lactose Qualitative Auswertung Probe A und Probe B Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Auswertenummer Probe A Probe A Probe B Probe B Qualitative Hinweis Bewertung pos/neg [m g/100g] pos/neg [m g/100g] 1 positiv < 10 positiv 129 1/1 (100%) 2 negativ < 10 positiv 121 1/1 (100%) 3 positiv 4,04 positiv 134 1/1 (100%) 4 positiv < 50 positiv 145 1/1 (100%) 5 negativ < 50 positiv 62 1/1 (100%) 6 negativ < 0,04 positiv 0,125 1/1 (100%) 7 positiv 16 positiv 271 1/1 (100%) 8 positiv < 5 positiv 96,4 1/1 (100%) 9 positiv n.b. positiv 128 1/1 (100%) Probe A: 13 mg/100g 10 negativ positiv 115 1/1 (100%) 11 negativ n.n. positiv 125 1/1 (100%) 12 positiv < BG positiv 146 1/1 (100%) 13 positiv < 10 positiv 146 1/1 (100%) 14 positiv 7,39 positiv 17,291 1/1 (100%) 15 negativ < 10 positiv 100 1/1 (100%) 16 positiv < 10 positiv 120 1/1 (100%) Probe A Probe B Anzahl positiv Anzahl negativ 6 0 Prozent positiv Prozent negativ 38 0 Konsenswert keiner positiv Übereinstimmungen mit Konsenswerten Anmerkung: Für Probe B wurden 100% positive Ergebnisse erhalten. Ein Konsenswert von > 75% wurde für Probe A nicht erhalten. Für Probe A lagen soweit angegeben alle Ergebnisse < 50 mg/100g und davon 8 Ergebnisse < 10 mg/100g. 38% der Teilnehmer gaben Lactose als nachweisbar in Probe A an. Seite 18 von 47

19 4.2.2 Lactose Probe B (in mg/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 16 Anzahl der Ausreißer 2 Mittelwert 116 Median 123 Robuster Mittelwert (X) 116 Robuste Standardabweichung (S x ) 37,3 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 13,3 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 6,43 Untere Grenze des Zielbereichs 89,6 Obere Grenze des Zielbereichs 143 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 2,8 11,7 0,88 Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 56 Ergebnisse / Results > Auswertenummer / evaluation number Lactose [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 7: Ergebnisse Probe B Fig. 7: Results Sample B Seite 19 von 47

20 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswerte- Lactose [mg/100g] Abweichung z'-score z-score Hinweis nummer [mg/100g] σ (Info) Evaluation Deviation Remark number [mg/100g] ,71 1,0 2, ,71 0,4 0, ,71 1,3 2, ,71 2,2 4, ,29-4,1-8,4 6 0, ,16-8,7-18, ,71 11,6 24,1 8 96,4-19,89-1,5-3, ,71 0,9 1, ,29-0,1-0, ,71 0,7 1, ,71 2,2 4, ,71 2,2 4, , ,4-15, ,29-1,2-2, ,71 0,3 0,6 Ausreisser / Outlier; Einheitenfehler / unit error? Ausreisser / Outlier z'-score > < < Auswertenummer / evaluation number Abb. 10: Fig. 10: Z'-Scores Probe B Z'-Scores Sample B Seite 20 von 47

21 4.2.3 Lactose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 15 Anzahl der Ausreißer 2 Mittelwert 5,69 Median 6,22 Robuster Mittelwert (X) 5,96 Robuste Standardabweichung (S x ) 0,642 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ ' 0,276 Zielstandardabweichung Horwitz (zur Information) 0,182 Untere Grenze des Zielbereichs 5,41 Obere Grenze des Zielbereichs 6,52 Quotient S x / σ ' Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ ' 2,3 0,21 0,75 Ergebnisse im Zielbereich 10 Prozent im Zielbereich 67 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Lactose [g/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 11: Ergebnisse Dotierungsmaterialprobe Fig. 11: Results Spiking Material Sample Seite 21 von 47

22 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswerte- Lactose [g/100g] Abweichung z'-score z-score Hinweis nummer [g/100g] σ (Info) Evaluation Deviation Remark number [g/100g] 1 6,4 0,44 1,6 2,4 2 6,4 0,44 1,6 2,4 3 3,09-2,87-10,4-15,8 4 6,28 0,32 1,1 1,7 5 2,8-3,16-11,5-17, ,227 0,26 1,0 1,4 8 5,75-0,21-0,8-1,2 9 6,219 0,26 0,9 1,4 10 5,7-0,26-1,0-1,4 11 6,01 0,05 0,2 0,3 12 5,28-0,68-2,5-3,7 13 6,57 0,61 2,2 3,3 14 5,48-0,48-1,8-2,7 15 6,80 0,84 3,0 4,6 16 6,33 0,37 1,3 2,0 Ausreisser / Outlier Einheit korrigiert / units corrected 4 z'-score < < Auswertenummer / evaluation number Abb. 12: Fig. 12: Z'-Scores Dotierungsmaterialprobe Z'-Scores Spiking Material Sample Seite 22 von 47

23 4.2.4 Wiederfindungsraten für Lactose Nachstehend sind die von DLA berechneten Wiederfindungsraten der Teilnehmer-Ergebnisse gegenüber dem Zusatzniveau (Seite 4, Tab. 2) informativ angegeben. Dotierungsmaterialprobe und Probe B Probe B Auswertenummer Dotierungsmaterial Wiederfindungsrate Wiederfindungsrate [g/100g] [%] [m g/100g] [%] 1 6, , , , , ,125 0,10 7 6, , , , , , , , , , , , Hinweis AB* % AB* % Anzahl im AB 12 Anzahl im AB 7 Prozent im AB 80 Prozent im AB 44 * Akzeptanzbereich nach 3.9 Anmerkung: 80% der Teilnehmer haben in der Dotierungsmaterialprobe eine Wiederfindungsrate im Bereich von % erhalten. Bei der mit dem Dotierungsmaterial hergestellten Backwaren-Probe B lagen 44% der Wiederfindungsraten in diesem Bereich. Unter Berücksichtigung von möglichen Lactose-Gehalten in der Matrix im Bereich der Bestimmungsgrenzen der Methoden (vgl Probe A), kann das Zusatzniveau von Lactose um ca mg erhöht sein. Daher können Die Wiederfindungsraten der Teilnehmer 4, 12 und 13 für Probe B ebenfalls als akzeptabel angesehen werden. Seite 23 von 47

24 4.3 Galactose Galactose Probe A (in mg/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 10 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 274 Median 242 Robuster Mittelwert (X) 245 Robuste Standardabweichung (S x ) 18,2 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ 12,1 Untere Grenze des Zielbereichs 220 Obere Grenze des Zielbereichs 269 Quotient S x / σ Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ 1,5 7,2 0,59 Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 80 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Galactose [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 13: Ergebnisse Probe A Fig. 13: Results Sample A Seite 24 von 47

25 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Galactose [mg/100g] Abweichung [mg/100g] Deviation [mg/100g] z-score σ ,58-1, ,58 0, ,42 26, ,42 0, ,58-0, ,58-1, ,58-1, ,42 0, ,58-0, ,42 2,1 Hinweis Remark Ausreisser / Outlier 3 z-score > Auswertenummer / evaluation number Abb. 14: Fig. 14: Z-Scores Probe A Z-Scores Sample A Seite 25 von 47

26 4.3.2 Galactose Probe B (in mg/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 10 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 266 Median 247 Robuster Mittelwert (X) 249 Robuste Standardabweichung (S x ) 21,8 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ 12,3 Untere Grenze des Zielbereichs 224 Obere Grenze des Zielbereichs 274 Quotient S x / σ Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ 1,8 8,6 0,70 Ergebnisse im Zielbereich 8 Prozent im Zielbereich 80 Ergebnisse / Results Auswertenummer / evaluation number Galactose [mg/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 15: Ergebnisse Probe B Fig. 15: Results Sample B Seite 26 von 47

27 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Galactose [mg/100g] Abweichung [mg/100g] Deviation [mg/100g] z-score σ , , , , , , , , , ,5 Hinweis Remark Ausreisser / Outlier 3 z-score > Auswertenummer / evaluation number Abb. 16: Fig. 16: Z-Scores Probe B Z-Scores Sample B Seite 27 von 47

28 4.3.3 Galactose Dotierungsmaterialprobe (in g/100g) Vergleichsuntersuchung / Proficiency Test Kenndaten Anzahl der Messergebnisse 11 Anzahl der Ausreißer 1 Mittelwert 0,505 Median 0,470 Robuster Mittelwert (X) 0,478 Robuste Standardabweichung (S x ) 0,0352 Zielkenndaten: Zielstandardabweichung σ 0,0214 Untere Grenze des Zielbereichs 0,436 Obere Grenze des Zielbereichs 0,521 Quotient S x / σ Standardunsicherheit u x Quotient u x / σ 1,6 0,01 0,62 Ergebnisse im Zielbereich 9 Prozent im Zielbereich 82 Ergebnisse / Results 1,00 0,90 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0, Auswertenummer / evaluation number Galactose [g/100g] obere Grenze upper limit rob. Mittelwert robust mean untere Grenze lower limit Abb. 17: Ergebnisse Dotierungsmaterialprobe Fig. 17: Results Spiking Material Sample Seite 28 von 47

29 Ergebnisse der teilnehmenden Institute: Results of Participants: Auswertenummer Evaluation number Galactose [g/100g] Abweichung [g/100g] Deviation [g/100g] z-score σ 1 2 0,46-0,018-0,9 3 0,46-0,018-0,9 4 0,5 0,022 1,0 5 0,84 0,362 16, ,414-0,064-3, ,506 0,028 1,3 10 0,45-0,028-1,3 11 0,46-0,018-0,9 12 0,5 0,022 1, ,470-0,008-0,4 16 0,5 0,022 1,0 Hinweis Remark Ausreisser / Outlier Einheit korrigiert / units corrected z-score > Auswertenummer / evaluation number Abb. 18: Fig. 18: Z-Scores Dotierungsmaterialprobe Z-Scores Spiking Material Sample Seite 29 von 47

30 Dezember Dokumentation 5.1 Primärdaten Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g ja nein nein 2 mg/100g ja nein mg/100g 4 mg/100g ja nein 5 mg/100g nicht teilgenommen 6 mg/100g Fructose 7 mg/100g - - Probe A / 8 mg/100g Sample A 9 mg/100g ja 810 nein 10 mg/100g 11 mg/100g 12 mg/100g ja nein 13 mg/100g nein 14 mg/100g 15 mg/100g ja nein - nein 16 mg/100g ja n/a nein n/a nein Seite 30 von 47

31 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g ja nein nein 2 mg/100g ja nein mg/100g 4 mg/100g ja nein 5 mg/100g nicht teilgenommen 6 mg/100g Fructose 7 mg/100g - - Probe B / 8 mg/100g Sample B 9 mg/100g ja 1070 nein 10 mg/100g 11 mg/100g 12 mg/100g ja nein 13 mg/100g nein 14 mg/100g 15 mg/100g ja nein - nein 16 mg/100g ja n/a nein n/a nein Seite 31 von 47

32 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 g/100g ja 0,1 13,1 nein nein 2 g/100g ja 0,01 13,26 nein g/100g ja 0,01 0,01 13,7 4 g/100g ja 0,05 0,1 11,9 nein 5 g/100g 6 g/100g Fructose 7 g/100g - - Dotierungsmaterialprobe / 8 g/100g 9 g/100g ja 13,37 nein Spiking Material Sample 10 g/100g 11 g/100g 12 g/100g ja ,94 nein 13 g/100g 0,5 14,61 nein 14 g/100g 15 g/100g ja nein - nein 16 g/100g ja n/a 0,01 13,4 nein n/a nein Seite 32 von 47

33 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g ja 1 10 < 10 nein 101,4 nein 2 mg/100g nein 10 <10 nein mg/100g ja 1 2 4,04 ja 88 ja 4 mg/100g ja <50 nein 5 mg/100g nein 0,01 0,05 <50 ja 95 ja Lactose Probe A / Sample A nicht ermittelbar, nicht be- da stimmt, da 6 mg/100g Nachweisgrenze für Beurtei- 0,04 < 0,04 nein 105 ja nicht lung nicht re- bestimmt levant 7 mg/100g ja 16 8 mg/100g ja 5 mg/100g <5 nein 9 mg/100g ja 4 14 n.b. (13 mg/100g) nein 10 mg/100g nein 8 mg/100g 99 Nein (die Weiderfindung wurde aus der Konzentration der gemessenen Standardlösung im Vergleich zur angegebenen Lactosekonzentration auf der Flasche bestimmt) 11 mg/100g nein 70 n.n. nein 99,8 nein 12 mg/100g ja 3 10 <BG nein 13 mg/100g ja 10 <10 nein 14 mg/100g ja 3mg / 100g 3mg / 100g 7,39 nein 15 mg/100g nein 5 10 <10 nein - nein 16 mg/100g ja n/a 10 <10 nein n/a nein Seite 33 von 47

34 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g ja nein 101,4 nein 2 mg/100g ja nein mg/100g ja ja 62 ja 4 mg/100g ja nein 5 mg/100g ja 0,01 0,05 62 ja 95 ja nicht bestimmt, da 6 mg/100g ja für Beurteilung 0,04 0,13 nein 105 ja nicht re- levant Lactose Probe B / Sample B 7 mg/100g ja mg/100g ja 5 mg/100g 96,4 nein 9 mg/100g ja nein 10 mg/100g 8 mg/100g mg/100g ja nein 99,8 nein 12 mg/100g ja nein 13 mg/100g nein 14 mg/100g ja 3mg / 100g 3mg / 100g 17,29 nein 15 mg/100g ja nein - nein 16 mg/100g ja n/a nein n/a nein Seite 34 von 47

35 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 g/100g ja 0 0,01 6,4 nein 101,4 nein 2 g/100g ja 0,01 6,4 nein g/100g ja 0,01 0,01 3,09 4 g/100g ja 0,05 0,1 6,28 nein 5 g/100g ja 0,01 0,05 2,8 ja 95 ja 6 g/100g Lactose 7 g/100g ja 6,227 Dotierungsmaterialprobe 8 g/100g ja 5 mg/100g 5,75 nein / 9 g/100g ja 0 0,01 6,219 nein Spiking Material 10 g/100g 8 mg/100g 5.7 Sample 11 g/100g ja 0,07 6,01 nein 94,7 nein 12 g/100g ja ,28 nein 13 g/100g 0,5 6,57 nein 14 g/100g ja 0.003g / 0.003g / 100g 100g 5,48 nein 15 g/100g ja nein - nein 16 g/100g ja n/a 0,01 6,33 nein n/a nein Seite 35 von 47

36 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g 2 mg/100g ja nein mg/100g 4 mg/100g ja nein 5 mg/100g ja 0,01 0, ja 95 ja 6 mg/100g 7 mg/100g ja 251 Galactose 8 mg/100g Probe A / 9 mg/100g ja 239 nein Sample A 10 mg/100g 8 mg/100g mg/100g ja nein 99,8 nein 12 mg/100g ja nein 13 mg/100g 14 mg/100g 15 mg/100g ja nein - nein 16 mg/100g ja n/a nein n/a nein Seite 36 von 47

37 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 mg/100g 2 mg/100g ja nein mg/100g 4 mg/100g ja nein 5 mg/100g ja 0,01 0, ja 95 ja 6 mg/100g 7 mg/100g ja 227 Galactose 8 mg/100g Probe B / 9 mg/100g ja 240 nein Sample B 10 mg/100g 8 mg/100g mg/100g ja nein 99,8 nein 12 mg/100g ja nein 13 mg/100g 14 mg/100g 15 mg/100g ja nein - nein 16 mg/100g ja n/a nein n/a nein Seite 37 von 47

38 Dezember 2015 Parameter Teilnehmer Einheit Nachweisbar NWG BG Ergebnis Inkl. WF Wiederfindungsrate [%] WF mit gleicher Matrix Analyte Participant Unit Detectable LOD LOQ Result Incl. RR Recovery rate [%] RR with same Matrix 1 g/100g 2 g/100g ja 0,01 0,46 nein g/100g ja 0,01 0,01 0,46 4 g/100g ja 0,05 0,1 0,5 nein 5 g/100g ja 0,01 0,05 0,84 ja 95 ja 6 g/100g Galactose 7 g/100g ja 0,41 Dotierungsmaterialprobe / 8 g/100g 9 g/100g ja 0,51 nein Spiking Material Sample 10 g/100g 8 mg/100g g/100g ja 0,04 0,46 nein 94,7 nein 12 g/100g ja ,5 nein 13 g/100g 14 g/100g 15 g/100g ja nein - nein 16 g/100g ja n/a 0,01 0,5 nein n/a nein Seite 38 von 47

39 5.2 Homogenität Homogenitätsuntersuchung des Materials vor der LVU Homogenitätsprüfung von Probe B anhand der Bestimmung von Fructose mittels HPLC-RI: Wiederholmessungen g/100g 1 0,88 2 0,86 3 0,93 4 0,81 5 0,83 Allgemeiner Mittelw ert 0,86 Wiederholstandardabw eichung 0,047 5,4% Gegenüberstellung der aufsteigenden Probennummern und der betreffenden Einzel-Messwerte 120 Homgenität / homogeneity Galactose Sample A DLA-Nr. / No. Ergebnis : Seite 39 von 47

40 Homgenität / homogeneity Lactose Sample B DLA-Nr. / No. Ergebnis : Homgenität / homogeneity Lactose Dotierungsmaterialprobe DLA-Nr. / No. Ergebnis *10 Seite 40 von 47

41 Dezember Analytische Methoden Angaben der Teilnehmer Teilnehmer Analyten Methode ist akkreditiert Methodenbeschreibung Probenvorbereitung Einwaage Extraktion Referenzmaterial Sonstige Hinweise Participant Analytes Method accredited Method description Sample Preparation Sample weight Extraction Referencematerial Further remarks 1 Fructose ja enzymatisch 2,5 2 Fructose ja SLMB 685.1Detektor: Amperometrische Zelle lösen in H2O 1g 40min/70 C 3 Fructose ja IC-PAD lösen in H2O 1 g Wasser Sigma 4 Fructose ja Microgenics Test- Combination Fructose 6 Fructose 7 Fructose Fructose 64 LFBG, , 9 Fructose ja Dezember 2002 modifiziert keine Nachweis- und Zugabe von heissem (enzymatische Bestimmung Bestimmungsgrenze, keine ca. 1 g Wasser (60 C-70 C), D (-)-Fructose, Sigma mit Testkit Saccharose/D- da in der Routine 15 min Magnetrührer Glucose/D-Fructose, Fa. R- nicht relevant biopharm) 10 Fructose 11 Fructose 12 Fructose ja Enzymatik homogenisieren 1g/10ml 1+2 ; 3g/100ml 3 wäßrige Extraktion r-biopharm 13 Fructose nein HPLC-RI Wasserextraktion 5g 1+2 ; 2,5 g 3 5g 1+2 2,5 g 3 verdünnt in 25 ml 14 Fructose 15 Fructose ja HPIEC-PAD Extraktion mit Wasser 1 g / 100 ml 60 C; Ultraschall 16 Fructose nein HPLC Extraktion mit Wasser 5g 1+2 ; 2,5g 3 Fluka 1+2 Probe A und B / Sample A and B 3 Dotierungsmaterialprobe / Spiking Material Sample Seite 41 von 47

42 Dezember 2015 Teilnehmer Analyten Methode ist akkreditiert Methodenbeschreibung Probenvorbereitung Einwaage Extraktion Referenzmaterial Sonstige Hinweise Participant Analytes Method accredited Method description Sample Preparation Sample weight Extraction Referencematerial Further remarks 1 Lactose nein enzymatisch 2 2 Lactose ja SLMB 685.1Detektor: Amperometrische Zelle lösen in H2O 1g 40min/70 C Wiederfindung mit 3 Lactose 1+2 nein HPLC-MS schütteln 1 g Formiat-Puffer Fluka C13-Lactose interner Standard 3 Lactose 3 ja IC-PAD lösen in H2O 1 g Wasser Sigma Wasserfreie Lactose r-biopharm Test- 4 Lactose ja Combination Lactose ja Enzymatik boehringer wässriger Aufschluss 2g 70 c - ASU L Untersuchung von Lebensmitteln - Bestimmung des Heißwasserextraktion Lactosegehaltes in bei 70 C, Carrez- 6 Lactose ja lactosereduzierter - Milch Klärung, Glucose- 2,5 g Heißwasserextraktion bei 70 C, Carrez- Klärung Lactose-Monohydrat, Merck und lactosereduzierten Entfernung mit Milchprodukten in Enzytec Glucose- Gegenwart von Glucose - Remover-Kit E3400 Enzymatisches Verfahren Abweichung: Verwendung eines Testkits 7 Lactose ja enzymatisch Carrez-Klärung 15 Min, 70 C DRRR, DLA 8 Lactose ja AOAC mod /IC-EC 64 LFGB, L , Sept modifiziert 9 Lactose ja (enzymatische Bestimmung keine ca. 1 g mit Testkit Lactose/D- Galactose, Fa. r-biopharm) Wasserbad 70 C, 15 min Vergleichslösung des Testkits 1+2 Probe A und B / Sample A and B 3 Dotierungsmaterialprobe / Spiking Material Sample Lactose-Bestimmung mit Boehringer Mannheim/R- Biopharm Lactose/D- Glucose- Enzymtestkit , Ergebnis als wasserfreie Lactose angegeben Seite 42 von 47

43 Dezember 2015 Teilnehmer Analyten Methode ist akkreditiert Methodenbeschreibung Probenvorbereitung Einwaage Extraktion Referenzmaterial Sonstige Hinweise Participant Analytes Method accredited Method description Sample Preparation Sample weight Extraction Referencematerial Further remarks NMKL method No 155, 2nd Probe wurde ed 2006, SLV -m045.1, mit geschüttelt und 2.0 g 10 Lactose ja 2.0 g Testkit Lactose/D-galactose zur Analyse UV-Test von R-biopharm entnommen 60ml MQ Wasser zugegeben und Probe im Wasserbad inkubiert (70 C) für 15 min. Nach dem Abkühlen wurden 5 ml Carrez I, 5ml Carrez II und 10ml 0.1M NaOH zugegeben und für 30 min inkubiert. Wasserzugabe bis 100 ml. Die Probe wurde zentrifugiert um z.b. Fett abzutrennen. Internes Referenzmaterial aus Cornflakes Die Methode ist nicht geeignet um Lactose in Proben zu bestimmen, die mehr als das 5-fache an Galactose im Vergleich zu Lactose und/oder mit Lactase vorbehandelte Proben. 11 Lactose ja Enzymatik; UV 340 nm Carrez-Klärung 2,42 15 min, 60 C 12 Lactose 1+2 nein HPAEC-PAD homogenisieren 1g/10ml wäßrige Extraktion 12 Lactose 3 ja Enzymatik homogenisieren 3g/100ml wäßrige Extraktion r-biopharm Ion chromatography- 13 Lactose 1+2 nein Amperometric pulse Wasserextraktion 0,25 g detector 2,5 g verdünnt in Lactose 3 nein HPLC-RI Wasserextraktion 2,5 g ml 14 Lactose nein Enzymatic (Megazyme Kit) Wasserextraktion & Carrez-Klärung 1g 50 C für 30 min interne Spike-Probe 15 Lactose ja HPIEC-PAD Extraktion mit Wasser 1 g / 100 ml 60 C; Ultraschall Fluka 16 Lactose nein HPLC Extraktion mit Wasser 5g 0,25 g verdünnt in 25 ml Megazyme Kit K- LACGAR 1+2 Probe A und B / Sample A and B 3 Dotierungsmaterialprobe / Spiking Material Sample Seite 43 von 47

44 Dezember 2015 Teilnehmer Analyten Methode ist akkreditiert Methodenbeschreibung Probenvorbereitung Einwaage Extraktion Referenzmaterial Sonstige Hinweise Participant Analytes Method accredited Method description Sample Preparation Sample weight Extraction Referencematerial Further remarks 1 Galactose 2 Galactose ja SLMB 685.1Detektor: Amperometrische Zelle lösen in H2O 1g 40min/70 C 3 Galactose r-biopharm Test- 4 Galactose ja Combination Galactose ja Enzymatik boehringer 6 Galactose i 7 Galactose ja enzymatisch Carrez-Klärung 15 Min, 70 C DLA (08/2014) 8 Galactose 9 Galactose ja kein 64 LFGB, L , Sept. Referenzmaterial, 2010 modifiziert Wasserbad 70 C, 15 keine (enzymatische Bestimmung keine ca. 1 g min Nachweisgrenze, da mit Testkit Lactose/Din der Routine nicht Galactose, Fa. r-biopharm) relevant 10 Galactose ja s. oben (Lactose) 11 Galactose ja Enzymatik; UV 340 nm Carrez-Klärung 2,421 / 2, ; 5, min, 60 C 12 Galactose ja Enzymatik homogenisieren 1g/10ml 1+2 ; 3g/100ml 3 wäßrige Extraktion r-biopharm Galactose Galactose Galactose ja HPIEC-PAD Extraktion mit Wasser 1 g / 100 ml 60 C; Ultraschall 16 Galactose nein HPLC Extraktion mit Wasser 5g Sigma-Aldrich 1+2 Probe A und B / Sample A and B 3 Dotierungsmaterialprobe / Spiking Material Sample Seite 44 von 47

45 Dezember Verzeichnis der teilnehmenden Institute in alphabetischer Reihenfolge Teilnehmer / Participant Ort / Town Land / Country ENGLAND ÖSTERREICH FRANKREICH Deutschland ITALIEN Deutschland SPANIEN Deutschland DÄNEMARK Deutschland Deutschland Deutschland Deutschland SCHWEDEN ENGLAND Deutschland Deutschland [Die Adressdaten der Teilnehmer wurden für die allgemeine Veröffentlichung des Auswerte-Berichts nicht angegeben.] Seite 45 von 47

46 7. Verzeichnis relevanter Literatur 1. DIN EN ISO/IEC 17043:2010; Konformitätsbewertung Allgemeine Anforderungen an Eignungsprüfungen / Conformity assessment General requirements for proficiency testing 2. Verordnung / Regulation 882/2004/EU; Verordnung über amtliche Kontrollen / Regulation on official controls 3. DIN EN ISO/IEC 17025:2005; Allgemeine Anforderungen an die Kompetenz von Prüf- und Kalibrierlaboratorien / General requirements for the competence of testing and calibration laboratories 4. Richtlinie / Directive 1993/99/EU; über zusätzliche Maßnahmen im Bereich der amtlichen Lebensmittelüberwachung / on additional measures concerning the official control of foodstuffs 5. ASU 64 LFGB : Planung und statistische Auswertung von Ringversuchen zur Methodenvalidierung 6. DIN ISO 13528:2009; Statistische Verfahren für Eignungsprüfungen durch Ringversuche / Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons 7. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Laboratories ; J.AOAC Int., 76(4), (1993) 8. The International Harmonised Protocol for the Proficiency Testing of Ananlytical Chemistry Laboratories ; Pure Appl Chem, 78, (2006) 9. Evaluation of analytical methods used for regulation of food and drugs;w. Horwitz; Analytical Chemistry, 54, (1982) 10.A Horwitz-like funktion describes precision in proficiency test; M. Thompson, P.J. Lowthian; Analyst, 120, (1995) 11.Protocol for the design, conduct and interpretation of method performance studies; W. Horwitz; Pure & Applied Chemistry, 67, (1995) 12.Recent trends in inter-laboratory precision at ppb and sub-ppb concentrations in relation to fitness for purpose criteria in proficiency testing; M. Thompson; Analyst, 125, (2000) 13.ASU 64 LFGB L (2010) / DIN : Bestimmung des Lactose- und Galactosegehaltes von Milch und Milchprodukten; Enzymatisches Verfahren / Milk and milk products - Determination of lactose and D-galactose content - Enzymatic method 14.ASU 64 LFGB L Bestimmung des Lactosegehaltes in lactosereduzierter Milch und lactosereduzierten Milchprodukten in Gegenwart von Glucose; Enzymatisches Verfahren (2014) 15.ASU 64 LFGB L Bestimmung von Lactose in Brot einschließlich Kleingebäck aus Brotteigen (1983) 16.ASU 64 LFGB L Bestimmung von Glucose und Fructose in Kinder- Zwieback und Zwiebackmehl (1985). 17.ISO 22662:2012; Milch und Milchprodukte - Bestimmung des Lactosegehalts mit Hochleistungs-Flüssigchromatographie (Referenzverfahren) / Milk and milk products Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) 18.Chávez-Servín et al. (2004) Analysis of mono- and disaccharides in milkbased formulae by high-performance liquid chromatography with refractive index detection. J Chromatogr A. 1043(2): Morlock et al. (2014) Streamlined analysis of lactose-free dairy products. Chromatogr A. 1324: Seite 46 von 47

47 Von den 17 Teilnehmern haben 16 mindestens ein Ergebnis eingereicht. Die Auswertung erfolgte hinsichtlich der Parameter Fructose, Lactose und Galactose. Die Ergebnisse wurden quantitativ ausgewertet und für Lactose zusätzlich qualitativ (Proben A und B) sowie eine Wiederfindungsbewertung für Probe B und die Dotierungsmaterialprobe angegeben. Details zu den einzelnen Parametern sind dem Auswertebericht zu entnehmen. 8 Teilnehmer haben ihren Sitz im Europäischen Ausland (Dänemark, England, Frankreich, Italien, Österreich, Schweden, Spanien). Seite 47 von 47