Simultane Bestimmung der Vitamine B 1, B 2 und B 6 in Säuglingsnahrung auf Milchpulverbasis mittels LC-MS/MS
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- Rudolph Vogt
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1 Simultane Bestimmung der Vitamine B 1, B 2 und B 6 in Säuglingsnahrung auf Milchpulverbasis mittels LC-MS/MS Institut Kirchhoff Berlin GmbH Andrea Thellmann (F&E Management) Oudenarder Straße 16 Carrée Seestraße Berlin Tel.: +49 (0) Fax: +49 (0) at@institut-kirchhoff.de AB Sciex Pte. Ltd.
2 Gliederung Relevanz Zielsetzung Norm-Methoden Grundlagen - MS-Methode / Aufarbeitung / Optimierung Methodenvalidierung Veröffentlichungen Ausblick Fazit
3 Relevanz Industrielle Säuglingsnahrung ist weltweit Ersatz für Muttermilch liefert alle notwendigen Nährstoffe essentiell für Gesundheit und Entwicklung von Säuglingen Höchst- und Mindestmengen sind in der Verordnung über diätische Lebensmittel (Diätverordnung) wesentlicher Bestandteil sind die supplementierten Vitamine
4 Relevanz 7. Berliner LC-MS/MS Symposium 2017
5 Zielsetzung Multimethode zur Bestimmung der Vitamine B 1, B 2 und B 6 in Säuglingsnahrung auf Milchpulverbasis Steigerung der Effizienz (Zeit/Aufwand/Kosten) Vergleichbare Ergebnisse zu den aktuell etablierten Normmethoden Erhöhung der Selektivität und Empfindlichkeit bei der Bestimmung der B 6 -Vitamere
6 Norm-Methoden DIN EN : 2014 saure Hydrolyse enzymatischer Aufschluss (16-24h) Nachsäulenderivatisierung Vitamin B 1 DIN EN : 2014 saure Hydrolyse enzymatischer Aufschluss (16-24h) Vitamin B 2 DIN EN : 2006 saure Hydrolyse enzymatischer Aufschluss (16-24h) Pyridoxamin (PM) Pyridoxal (PL) Pyridoxin (PN)
7 Norm-Methoden Chromatogramm Vitamin B 6 HPLC-Fluoreszenzdetektion Pyridoxamin? Pyridoxin Pyridoxal? Milchpulver (deklarierter Gehalt 200µg/100g)
8 Grundlagen Determination of Vitamin B 12 in Infant Formula and Adult Nutritionals by HPLC: First Action Schimpf et al. : Journal of AOAC INTERNATIONAL Vol. 95, No. 2, 2012 HPLC analysis of vitamin B 6 in foods Velimatti Ollilainen, Department of Applied Chemistry and Microbiology, PO Box 24, FIN University of Helsinki, Finland Quantitative Analysis of Water-Soluble B-Vitamins in Cereal Using Rapid Resolution LC/MS/MS Agilent Technologies, Inc. 2008
9 Aufarbeitung Simultane Bestimmung der Vitamine B 1, B 2, Pyridoxal, Pyridoxin und Pyridoxamin Ansatz Aufschluss Messung Probeneinwaage Zugabe Enzymgemisch 3h enzymatische Hydrolyse bei 37 C 30min auf 60 C erhitzen Abkühlen, zentrifugieren, feinfiltrieren Verdünnen der Probe Zugabe von isotopenmarkierten internen Standards Quantifizierung mittels LC-MS/MS
10 Pyridoxamin? Optimierung Pyridoxin Pyridoxal? Pyridoxamin m/z 169,4 / 152,2 S/N = 100 Pyridoxal m/z 168,3 / 150,1 S/N = 10 Pyridoxin m/z 170,4 / 134,0 S/N = 400 Selektivität Empfindlichkeit 0,03 mg/100g 0,006 mg/100g 0,22 mg/100g
11 Methodenvalidierung Parameter B 1 B 2 PN PL PM Bestimmungsgrenze [mg/100g] Richtigkeit [%] ZRM EP Dotierung 0,05 0,05 0,05 0,05 0, Wiederholpräzision [%] 2,3 3,0 2,0 4,7 0,6 Vergleichspräzision [%] 5,0 6,7 5,1 7,1 0,9 Erweiterte Messunsicherheit [%] ZRM zertifiziertes Referenzmaterial (Milchpulver) EP Eignungsprüfung LVU Vitamine Berliner LC-MS/MS Symposium 2017
12 Milchpulver (zertifiziert, NIST SRM 1849a) Methodenvalidierung mg/100g Vitamin B Vitamin B Pyridoxin DIN Methode zertifizierter Gehalt LC-MS/MS (n=6)
13 Eignungsprüfung Vitamine 2015 (LVU) Methodenvalidierung Analyt Einheit Median der EP IKB-Ergebnis z-score n=6 B 1 mg/100g 0.65 (n=16) B 2 mg/100g 1.06 (n=18) B 6 (Pyridoxin) mg/100g 0.47 (n=12)
14 Veröffentlichungen 45. Lebensmittelchemikertag in Freising
15 Veröffentlichungen Food Lab Ausgabe 4 / (Seite 36 38)
16 Ausblick Analysenabgleich mit internationaler AOAC Studie (2016) Vorschlag für die Normierung ( 64 LFGB Vitaminanalytik) Teilnahme an weiteren Laborvergleichsuntersuchungen Bearbeitung weiterer Matrices Einbindung weiterer wasserlöslicher Vitamine
17 Vitamin B 6 einer Fischprobe (Salmon bipea 20; Jan 2017) Ausblick LC-MS/MS Pyridoxamin S/N = 200 0,30 mg/100g Pyridoxal S/N = 400 0,14 mg/100g Pyridoxin S/N = 700 0,05 mg/100g
18 Milchpulver (zertifiziert, NIST SRM 1849a) Ausblick Pantothensäure mg/100g Niacin µg/100g Vitamin B Folsäure Biotin zertifizierter Gehalt LC-MS/MS
19 Fazit Multimethode zur Bestimmung der Vitamine B 1, B 2 und B 6 in Säuglingsnahrung auf Milchpulverbasis Steigerung der Effizienz (Zeit/Aufwand/Kosten) Vergleichbare Ergebnisse zu den aktuell etablierten Normmethoden Erhöhung der Selektivität und Empfindlichkeit bei der Bestimmung der B 6 -Vitamere
20 Danksagung Firma Sciex: Herr Möller-Santner / Herr Stölzel / Herr Dahlmann F&E Team des Institut Kirchhoff: Oliver Meier
21 Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit 7. Berliner LC-MS/MS Symposium 2017
22 Referenzen Referenzverzeichnis Internationaler Abgleich von CEN-Standards durch Untersuchung von 24 Milchpulverproben (Infant Formula) Stakeholder Panel on Infant Formula and Adult Nutritionals (SPIFAN) AOAC INTERNATIONAL Laborvergleichsuntersuchung Vitamine 2015 LVU, Herbolzheim Laborvergleichsuntersuchung Salmon und Baby Milk / Vit-AG BIPEA, Cap rue d'aubervilliers, Paris, France
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