Monozyten Monolayer Assay (MMA): Bestimmung der klinischen Relevanz von Alloantikörpern

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1 Monozyten Monolayer Assay (MMA): Bestimmung der klinischen Relevanz von Alloantikörpern Bern, Fabienne Knörr Biomedizinische Analytikerin Interregionale Blutspende SRK AG Immunhämatologisches Referenzlabor Blutspende SRK Schweiz AG Seite 1

2 Fallbeispiel: Anti-Yt a Schwangere Geplanter Kaiserschnitt Keine passende Erythrozytenkonzentrate (EK) in Bern Auftraggeber kümmert sich selber um passende EK Für unsere Datensammlung: MMA durchführen F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 2

3 Fallbeispiel: Anti-Yt a Formular Positivkontrolle Anti-Yt a Anti-Yt a F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 3

4 Fallbeispiel: Anti-Yt a Negative Reaktionen Phagozytose F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 4

5 Fallbeispiel: Anti-Yt a Klinisch nicht relevant Bei Transfusionen kann auf Yt a -negative EK verzichtet werden F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 5

6 Inhaltsverzeichnis Aktuell: Anti-Yt a Nutzen des MMA Ablauf des MMA Beladen der Erythrozyten Herstellung des Monozyten Monolayers Durchführung des Monozyten Monolayer Assays Auswertung des Monozyten Monolayer Assays Fallbeispiel: Anti-Kp b Fallbeispiel: Anti-Sc1 Fallbeispiel: Anti-Ge Statistik Antikörper F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 6

7 Nutzen des MMA Der MMA dient der Untersuchung der klinischen Relevanz von erythrozytären Antikörpern Bei Schwierigkeiten kompatible EK zu finden, kann der Test Hinweise liefern, welche Antikörper bei einer Transfusion unbedingt berücksichtigt werden sollten und welche unter Umständen nicht berücksichtigt werden müssen Bei Schwangeren mit Alloantikörpern kann der Test Hinweise liefern, ob der vorhandene Antikörper für das ungeborene Kind eine Gefahr darstellen könnte F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 7

8 Ablauf des MMA Erythrozyten, die das für den abzuklärenden Antikörper korrespondierende Antigen aufweisen, werden mit dem Patientenserum/-plasma inkubiert Aus frischen Vollblutspenden isolierte humane Monozyten lässt man auf einem Objektträger aus Plastik adhärieren Die eventuell beladenen Erythrozyten werden zu den Monozyten gegeben Die Monozyten-Erythrozyten-Reaktionen werden mikroskopisch ausgewertet F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 8

9 Beladen der Erythrozyten Erythrozyten, die das für den abzuklärenden Antikörper korrespondierende Antigen aufweisen, werden mit dem Patientenserum/-plasma inkubiert F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 9

10 Herstellung des Monozyten Monolayers Mononukleäre Zellen werden eine Stunde bei 37 C auf einem Objektträger mit Kammern inkubiert F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 10

11 Herstellung des Monozyten Monolayers Nach der Inkubation wird der Überstand inklusive Lymphozyten entfernt Nur die Monozyten verbleiben, da diese an Plastik adhärieren F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 11

12 Durchführung des Monozyten Monolayer Assays Die zuvor inkubierten und eventuell beladenen Erythrozyten werden zum Monolayer dazu pipettiert Es folgt eine Stunde Inkubation bei 37 C F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 12

13 Durchführung des Monozyten Monolayer Assay Erythrozyten die mit einem klinisch relevanten Antikörper beladen sind, werden während der Inkubation von den Monozyten phagozytiert F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 13

14 Durchführung des Monozyten Monolayer Assay Nach einer Stunde Inkubation wird der Überstand entfernt und der Objektträger gefärbt F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 14

15 Auswertung des Monozyten Monolayer Assays Mit dem Lichtmikroskop werden pro Kammer 600 Monozyten ausgezählt Als reaktiv gilt ein Monozyt, sobald mindestens ein Erythrozyt adhäriert oder phagozytiert ist F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 15

16 Auswertung des Monozyten Monolayer Assays Einzelne Monozyten werden als nicht reaktiv bewertet Wenn mehrere Monozyten einander berühren, ohne dass ein Erythrozyt adhäriert oder phagozytiert ist, werden die Monozyten einzeln gezählt F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 16

17 Auswertung des Monozyten Monolayer Assays Liegt der Wert der reaktiven Monozyten zwischen 0-3%, kann anhand des MMA eine klinische Relevanz eher ausgeschlossen werden Liegt der Wert der reaktiven Monozyten zwischen 3-5%, kann eine klinische Relevanz des Antikörpers nicht ausgeschlossen werden Liegt der Wert der reaktiven Monozyten über 5%, wird vermutet, dass der Antikörper klinisch relevant ist F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 17

18 Fallbeispiel: Anti-Kp b Italienischer Patient mit Myelodysplastischem Syndrom Nachdem wir 4 EK Kp b - und E-negativ geliefert haben, ist die Frage, wie weiter? Vorschlag: MMA durchführen F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 18

19 Fallbeispiel: Anti-Kp b Formular Positivkontrolle Anti-Kp b Anti-Kp b F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 19

20 Fallbeispiel: Anti-Kp b Positive Reaktionen Phagozytose F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 20

21 Fallbeispiel: Anti-Kp b Positive Reaktionen Adhäsion F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 21

22 Fallbeispiel: Anti-Kp b Klinisch relevant Bei Transfusionen kann nicht auf Kp b -negative EK verzichtet werden F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 22

23 Fallbeispiel: Anti-Sc1 Probe nach Transfusion mit Sc1-positiven EK Anti-Sc1 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 23

24 Fallbeispiel: Anti-Sc1 Weitere Probe nach erneuten Transfusionen mit Sc1-positiven EK Positivkontrolle Anti-Sc1 Anti-Sc1 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 24

25 Fallbeispiel: Anti-Sc1 Negative Reaktionen F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 25

26 Fallbeispiel: Anti-Sc1 Positive Reaktionen F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 26

27 Fallbeispiel: Anti-Sc1 Nach 1. Transfusion mit Sc1-positiven EK ist der Antikörper klinisch nicht relevant Nach weiteren Transfusionen mit Sc1-positiven EK steigt der MMA auf 10% an Der Antikörper ist klinisch relevant Sc1-negative EK sind bei Transfusionen notwendig Weitere Transfusionen mit Sc1-positiven EK Patientin macht Transfusionsreaktion F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 27

28 Fallbeispiel: Anti-Ge um Uhr unerwartetes Eintreffen des Falls Operationstermin: , Uhr morgens Was machen wir, wenn Transfusionen nötig sind? Option 1: EK bestellen in Paris Option 2: Aufgrund des MMA-Resultats im Juli 2017 können Ge-positive EK transfundiert werden (Patient wurde nie Ge-positiv transfundiert) Entscheidung der Ärzte: Wenn nötig, darf Ge-positiv transfundiert werden F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 28

29 Statistik Antikörper Seite 1 Datum Geburtsdatum Auftragsnummer Antikörper MMA-Resultat / AK neg, Daratumumab / AK neg, Daratumumab / AK neg, Pembrolizumab / Allo- oder Auto-Anti-Jk a / Anti-? / Anti-? / Anti-? / Anti-At a / Anti-At a / Anti-Co a / Anti-Co a / Anti-Co a / Anti-Co a / Anti-Cr a / Anti-Cr a / Anti-Cr a / Anti-Cr a / Anti-Di a / Anti-Di a unbekannt 2017/ Anti-Di b 0.3 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 29

30 Statistik Antikörper Seite 2 Datum Geburtsdatum Auftragsnummer Antikörper MMA-Resultat / Anti-Do a / Anti-Do a / Anti-Do a / Anti-Do a / Anti-Do a / Anti-Fy5, FAAK / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-Ge / Anti-H, Bombay / Anti-I / Anti-In 0.2 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 30

31 Statistik Antikörper Seite 3 Datum Geburtsdatum Auftragsnummer Antikörper MMA-Resultat / Anti-Jk / Anti-Jk / Anti-Jk unbekannt 2014/ Anti-Jr a / Anti-Jr a unbekannt 2015/ Anti-Jr a / Anti-Jr a / Anti-Jr a / Anti-Jr a / Anti-Jr a / Anti-k / Anti-Kn a / Anti-Kp b / Anti-Kp b unbekannt 2018/ Anti-Kp b / Anti-LAN / Anti-LAN / Anti-Lu / Anti-Lu b / Anti-Lu b / Anti-Lu b / Anti-Lu b 6.8 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 31

32 Statistik Antikörper Seite 4 Datum Geburtsdatum Auftragsnummer Antikörper MMA-Resultat / Anti-N / Anti-Public / Anti-Public / Anti-Rh / Anti-Sc / Anti-Sc / Anti-Sc / Anti-Sc / Anti-Sc / Anti-U / Anti-U / Anti-U / Anti-Vel / Anti-Vel / Anti-Vw / Anti-Vw / Anti-Vw 17.3 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 32

33 Statistik Antikörper Seite 5 Datum Geburtsdatum Auftragsnummer Antikörper MMA-Resultat / Anti-Yt a / Anti-Yt a / Anti-Yt a / Anti-Yt a / Anti-Yt a / Auto-Anti-AnWj / Auto-Anti-GPA / FAAK / FAAK / FAAK / FAAK / FAAK / FAAK / FAAK / Pat. hämolysiert, unbek. wieso 0 F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 33

34 Herzlichen Dank für die Aufmerksamkeit F.Knörr Fortbildung für Anwender/innen von Blutprodukten Seite 34