Katalóg výrobkov. pre gke Steri-Record biologické indikátory, simulačné pomôcky (PCD = process challenge devices) a príslušenstvo

Transkript

1 Katalóg výrobkov pre gke Steri-Record biologické indikátory, simulačné pomôcky (PCD = process challenge devices) a príslušenstvo Prúžky so spórami, ampulky, suspenzie, Mini-Bio-Plus indikátory so živným médiom pre parné, formaldehydové, peroxidvodíkové, etylénoxidové sterilizačné procesy a sterilizáciu suchým teplom

2 Strana z 24

3 Obsah Všeobecné informácie o biologických indikátoroch... 3 Mini-Bio-Plus indikátory... 5 Pre parné sterilizačné procesy... 6 Pre formaldehydové sterilizačné procesy... 6 Pre peroxidvodíkové sterilizačné procesy... 6 Pre etylénoxidové sterilizačné procesy... 6 Bio-Compact simulačné pomôcky a náhradné diely... 7 Aktivačný nástroj pre Mini-Bio-Plus indikátory... 7 Stearo-Ampulky... 8 Inkubátor a príslušenstvo... 9 Suspenzie... 0 Geob. stearothermophilus... 0 B. atrophaeus... 0 Sada pre priamu inokuláciu... 0 Biologický indikátor prúžky so spórami... Pre parné a formaldehydové sterilizačné procesy... Pre peroxidvodíkové sterilizačné procesy... Pre etylénoxidové a suché sterilizačné procesy... Kultivačné médium... 2 Základy kinetiky úhynu mikroorganizmov... 3 Strana 2 z 24

4 Všeobecné informácie o biologických indikátoroch Sterilizácia v priemysle a v nemocniciach dosiahla v súčasnosti vysokú kvalitatívnu úroveň, ktorá je prínosom nielen pre pacienta, ale aj pre prevádzkovateľa. Hlasom, ktoré kritizujú vysoké náklady vynaložené na sterilizáciu a jej kontrolu treba pripomenúť, že spoľahlivá sterilizácia je základným predpokladom pre asepsu pri zložitých operáciách vykonávaných v súčasnosti. Nezávisle od morálneho záväzku urobiť všetko možné na prevenciu pred infekciami požaduje európska legislatíva, národná legislatíva (vyhláška o požiadavkách na prevádzku zdravotníckych zariadení) validáciu všetkých sterilizačných procesov ako v priemysle, zdravotníctve tak aj v oblasti dentálneho lekárstva a v oblasti plastickej chirurgie. Požiadavku validácie všetkých sterilizačných procesov, ich kontrolu a dokumentáciu parametrov procesu nájdeme tiež v poslednom prepracovanom vydaní smernice medzinárodne uznávaného inštitútu Róberta Kocha (smernica RKI) z roku 202 a tiež v norme DIN EN ISO Tiež európsky zákon o zdravotníckych pomôckach požaduje od validáciu všetkých sterilizačných procesov používaných pri výrobe zdravotníckych pomôcok. Nevyhnutnou pomôckou pri validácii sú biologické indikátory a/alebo chemické indikátory a/alebo meranie hodnôt fyzikálnych veličín. STN EN ISO 38 (časti -5) opisujú biologické indikátory pre sterilizáciu suchú, parnú, nízkoteplotnú formaldehydovú a etylénoxidovú. V tejto norme však nie sú obsiahnuté indikátory pre sterilizáciu peroxidom vodíka (H2O2)/Plazma. Pre kontrolu sterilizačných procesov sa používajú nasledovné zárodky: Skúšobný kmeň Geobacillus stearothermophilus Bacillus atrophaeus Sterilizačný proces para, formaldehyd, peroxid vodíka etylénoxid, suché teplo V norme EN ISO 38- nájdeme nasledovné požiadavky na biologické indikátory: Biologické indikátory musia byť zabalené v obale, ktorý prepúšťa sterilizačné médium a zabraňuje rekontaminácii vniknutím zárodkov cez obal. Výrobca biologických indikátorov je povinný uviesť na obale typ indikátora a číslo šarže a priložiť certifikát, v ktorom je uvedený dátum exspirácie, hustota populácie a D-hodnota. To znamená, že v závislosti od druhu sterilizačného procesu musia byť zvolené biologické indikátory s testovacím kmeňom s určitou rezistenciou. Rýchlosť úhynu mikroorganizmu biologického indikátora v čase predstavuje exponenciálna funkcia. Logaritmom tejto funkcie v čase je priamka, ktorej sklon vyjadruje rezistenciu biologického indikátora. Rezistencia zárodku sa označuje ako decimálny redukčný faktor alebo D-hodnota. D2 C- hodnota (udaná v [min]) v parnom sterilizačnom procese predstavuje čas, ktorý je potrebný na zníženie populácie na desatinu alebo o 90% východiskového počtu zárodkov (resp. o jeden logaritmický rád). D- hodnota sa uvádza vždy len pre určitý sterilizačný proces, napr. Dpara 2 C. Strana 3 z 24

5 Kinetiku úhynu vyjadruje exponenciálna funkcia.rádu, podobná funkcii pre rádioaktívny rozpad. Z toho vyplýva, že záťaž zárodkami sa počas sterilizácie znižuje, avšak nikdy nedosiahne nulu. Z tohoto dôvodu moderná definícia sterility nehovorí o absolútnej absencii zárodkov ale o extrémne nízkom počte. Norma EN 556 požaduje SAL (sterility assurance level = pravdepodobnosť sterility) < 0-6 zárodkov/časť. Údaj 0-6 zárodkov/časť hovorí, že z miliónu (0 6 ) sterilizovaných zdravotníckych pomôcok môže po sterilizácii jedna pomôcka obsahovať jeden zárodok. Hovoríme teda o "pravdepodobnosti sterilizácie". Čím väčšia je populácia (množstvo) a D- hodnota zárodkov, tým dlhšie trvá usmrtenie pri inak rovnakých podmienkach sterilizácie. Celková rezistencia biologických indikátorov je daná násobkom hustoty populácie a rezistencie zárodkov, (D2 C-hodnota) a udáva sa ako FBio-hodnota v minútach: FBio-hodnota= D2 C-hodnota x lg (Pop.) Táto hodnota predstavuje čas, ktorý je potrebný na redukciu počtu zárodkov na jeden zárodok (zo štatistického hľadiska to predstavuje pravdepodobnosť rastu jedného bioindikátora 66%). Pre štandardné parné sterilizačné procesy v zdravotníctve sa v STN EN ISO 38 požaduje minimálne FBio-hodnota 7,5 min. Celková rezistencia je zrejmá z dvoch príkladov: Príklad Populácia [KTJ/prúžok] D2-hodnota [min] FBio-hodnota [min] 0 6, Príklad s vysokou hustotou populácie zárodkov nespĺňa požiadavky normy STN EN ISO 38, pretože D2 C-hodnota nie je,5 min. Hoci v príklade 2 je počet zárodkov len desatina z počtu v príklade (00.000), je biologický indikátor celkovo viac rezistentný a spĺňa požiadavky normy. Potrebný čas na sterilizáciu závisí od množstva mikroorganizmov, ktoré sa nachádzajú na zdravotníckych pomôckach pred sterilizáciou. Preto je snaha aby na zdravotníckych pomôckach pred sterilizáciou bola čo najmenšia biologická záťaž ( bioburdy ) čo zabezpečíme procesom čistenia a dezinfekcie. Všetky balenia obsahujú okrem návodu na použitie aj certifikát, v ktorom je uvedená skutočne nameraná hustota populácie a D-hodnota. Certifikát je tiež zárukou, že sú splnené požiadavky na indikátory ktoré kladú normy a liekopisy. Strana 4 z 24

6 . gke Steri-Record Biologické indikátory so živným médiom Mini-Bio-Plus biologické indikátory so živným médiom (SCBI = self contained biological indicator) s terčíkom so spórami a živným médiom v sklenenej ampulke. Pre inkubáciu nie je potrebné mikrobiologické laboratórium. Vhodné pre validáciu a kontrolu sterilizačných procesov. Pre lepšie odlíšenie majú SCBI rôznu farbu uzáverov. Vhodné sú tiež pre umiestnenie v špeciálnych gke-simulačných pomôckach (Bio-C-PCD) (pozri.5). Všetky SCBI spĺňajú požiadavky normy STN EN ISO pre parné sterilizačné procesy G. Stearthermophilus s populáciou 0 5 a 0 6, na papierovom terčíku podľa STN EN ISO Vyrábajú sa 2 verzie: STEAM.. Štandardná verzia s dobou inkubácie 24 hodín Obj. č. Označenie výrobku Farba uzáveru Populácia ks / bal Štandardná verzia (Inkubácia 24 h) B-S-MBP-0-5 Svetlá modrá B-S-MBP-0-6 Tmavá modrá Verzia instant pre okamžité vyhodnotenie Instant-Mini-Bio-Plus SCBI obsahujú okrem terčíka s biologickým indikátorom tiež chemický indikátor triedy 5, ktorý je tiež umiestnený v plastovom obale. Chemický indikátor triedy 5 poskytuje informáciu o výsledku hneď po skončení sterilizačného procesu (32-37 C). Materiál je možné prepustiť do obehu hneď po skončení sterilizácie a nie je potrebné čakať na výsledok inkubácie, pretože indikátor triedy 5 podľa normy STN EN ISO 40- poskytuje rovnocennú alebo dokonca presnejšiu výpoveď o kvalite sterilizačného procesu ako biologický indikátor. Obj. č. Označenie výrobku Farba uzáveru Populácia ks / bal Verzia Instant pre okamžité vyhodnotenie Svetlá B-S-MBP-I-0-5-SV4 0 oranžová Tmavá B-S-MBP-I-0-6-SV4 0 oranžová Strana 5 z 24

7 .2. pre Formaldehydové sterilizačné procesy (LTSF) G. stearothermophilus s populáciou 0 6, na papierovom terčíku FORM podľa STN EN ISO Živné médium obsahuje naviac neutralizačnú látku, takže nie je potrebné vykonávať neutralizáciu zvlášť pomocou metódy opísanej v STN EN ISO 38-5 ponorením do Na2SO3. Obj. č. Označenie výrobku Farba uzáveru Populácia ks / bal B-F-MBP-0-6 žltá Pozn.: LTSF = Low Temperature Steam Formaldehyde = nízkoteplotná sterilizácia parami formaldehydu.3. pre sterilizáciu peroxidom vodíka / plazmou G. stearothermophilus s populáciou 0 6, terčík a bariéra sú vyrobené z materiálov, ktoré neobsahujú celulózu. VH2O2 Obj.č.: Označenie Farba uzáveru Populácia ks/bal B-V-G-MPB Biela na nosiči zo sklených vlákien B-V-T-MPB šedá na nosiči z materiálu Tyvek pre etylénoxidové sterilizačné procesy B. atrophaeus s populáciou 0 6, na papierovom terčíku podľa STN EN ISO EO Obj.č.: Označenie výrobku Farba uzáveru Populácia ks/bal B-E-MBP červená B-E-MBP-EP-0-6* (*) Okrem požiadaviek v EN ISO 38-2 a amerického liekopisu (United States Pharmakopöe (USP)) sa vykonávajú naviac nasledovné merania rezistencie podľa európskeho liekopisu (EP): Úhyn: 25 min 54 C, 600 mg/l EO 60% rel. vlhkosť vzduchu Prežitie: 50 min 30 C, 600 mg/l EO 60% rel. vlhkosť vzduchu Strana 6 z 24

8 Simulačné pomôcky (zariadenia ktoré sťažujú prienik sterilizačného média) do ktorých sa ukladajú biologické indikátory so živným médiom Bio-Process Challenge Device (Bio-C-PCD), farba: zelená, určené špeciálne pre použitie v kombinácii s vyššie uvedenými Mini-Bio-Plus SCBI pre validáciu a kontrolu parných, etylénoxidových, formaledhydových a peroxidvodíkových sterilizačných procesov. Okrem toho sú v ponuke Helix-PCD podľa DIN EN 422 pre etylénoxidové sterilizačné procesy. Simulačné pomôcky s okrúhlym prierezom sú určené pre použitie vo veľkých parných sterilizátoroch a simulačné pomôcky s oválnym prierezom sú určené pre použitie v malých parných sterilizátoroch. Simulačná pomôcka v ktorej je uložený biologický indikátor SCBI sa ako zostava zaraďuje do triedy 2 podľa STN EN ISO 40-. Ku každému teliesku je v balení 5 tesniacich krúžkov. Tesniaci krúžok je v uzávere a vymieňa sa v časových intervaloch podľa návodu. STEAM VH2O2 FORM EO.6 Príslušenstvo Obj.-č. Označenie výrobku PCD-verzia B-PM-RCPCD-0 okrúhla Pentračné vlastnosti Menej ako minimálne požiadavky na odvzdušnenie B-PM-OCPCD- Oválna Minimálne požiadavky B-PM-RCPCD- okrúhla na odvzdušnenie B-PM-OCPCD-2 oválna Mierne požiadavky B-PM-RCPCD-2 okrúhla na odvzdušnenie B-PM-OCPCD-3 oválna Menšia citlivosť ako dutinový test podľa B-PM-RCPCD-3 okrúhla B-PM-OCPCD-4 oválna B-PM-RCPCD B-PM-RCPCD-5 okrúhla STN EN (návrh STN EN ISO 40-6) Zodpovedá dutinovému testu podľa STN EN (návrh STN EN ISO 40-6) Väčšia citlivosť ako dutinový test podľa STN EN (návrh STN EN ISO 40-6) B-E-PM-HPCD Helix Typový test podľa EN 422 (Etylénoxid).6. Náhradné diely pre simulátory Obj. č. Označenie výrobku ks / bal Náhradná čiapočka (plast/nerez) (so závitom M4x) Náhradné tesniace krúžky pre všetky Bio-C-PCDs Aktivačný nástroj pre SCBI Pre aktiváciu gke SCBI (rozdrvenie vnútornej sklenenej ampulky). Aktivačný nástroj je súčasťou gke Inkubátora. Ak používate gke Inkubátor, tak tento samostatný nástroj nie je potrebný. Obj. č. Označenie výrobku ks / bal I-C Drvič / aktivačný nástroj Strana 7 z 24

9 2. gke Steri-Record Stearo-Ampulky s G. stearothermophilus suspenziou a živným médiom STEAM na kontrolu parnej sterilizácie extrémne vlkého prostredia alebo roztokov. Sklenené ampulky majú priemer mm a výšku 45 mm. V sklenenej ampulke je suspenzia Geob. Stearothermophilus so živným médiom a ph indikátorom, s populáciami 0 5 alebo 0 6. Objem:,5 ml. Indikátory zodpovedajú norme STN EN ISO Der D2 C-hodnota je v rozmedzí,5 2 min. Iné D2 C-hodnoty sú možné na želanie. Obj. č. Označenie výrobku Populácia ks / bal B-S-AMP B-S-AMP Strana 8 z 24

10 3. gke Steri-Record inkubátory a príslušenstvo 3.. Inkubátory Inkubátor sa vyrába v štyroch rôznych verziách pre rôzne teploty. Inkubačná teplota sa znázorňuje na displeji. Inkubátor sa dodáva s hliníkovým držiakom pre Mini-Bio-Plus SCBI alebo sa môže objednať inkubátor bez hliníkového držiaka a hliníkový držiak pre požadovanú aplikáciu sa objednáva zvlášť. (pozri 3.2 príslušenstvo). Sieťový zdroj má označenie zhody CE v súlade so smernicami pre nízke napätie. Obj.č.: Označenie Obsah Inkubátory vrátane hliníkového držiaka pre SCBI 60-9 I-37-AB-MBP pre inkubáciu B. atrophaeus biologických indikátorov Pre inkubáciu I-57-AB-MBP G. stearohermophilus biologických indikátorov 60-2 I-V-AB-MBP s nastaviteľnou teplotou s nastaviteľnou teplotou a I-V-T-AB-MBP možnosťou programovania doby inkubácie Inkubátory bez hliníkového držiaka pre SCBI I-37 pre inkubáciu B. atrophaeus biologických indikátorov Pre inkubáciu 60-0 I-57 G. stearohermophilus biologických indikátorov 60- I-V s nastaviteľnou teplotou s nastaviteľnou teplotou a 60-2 I-V-T možnosťou programovania doby inkubácie Teplota [ C] Príslušenstvo Hliníkové držiaky pre umiestnenie 2 kusov SCBI, Stearo-Ampuliek alebo skúmaviek so živným roztokom. Obj.č.: Označenie Obsah Priemer 60-3 I-AB-MBP Hliníkový držiak pre všetky gke Steri-Record Mini-Bio-Plus SCBI 0 mm 60-4 I-AB-AMP Hliníkový držiak pre všetky gke Steri-Record Stearo-Ampulky mm 60-5 I-AB-CM Hliníkový držiak pre všetky gke Steri-Record ampulky so živným roztokom 4,5 mm Strana 9 z 24

11 4. gke Steri-Record suspenzie a sada pre inokuláciu Suspenzie so spórami (0 ml) sú v 40% zmesi etanol/voda, balené v sklenených ampulkách uzavretých gumenou zátkou. Spĺňajú požiadavky normy STN EN ISO Pre parné, formaldehydové a peroxidvodíkové sterilizačné procesy Geob. Stearothermophilus Suspenzia sa dodáva s certifikátom, v ktorom je uvedená hustota populácie a D2 C-hodnota. G. Stearothermophilus zárodok ATCC č sa používa tiež pre sterilizáciu peroxidom vodíka. Vzhľadom k tomu, že pre určenie D-hodnoty zatiaľ neexistuje žiadna norma, nie je táto hodnota uvedená. Na objednávku je možné vypočítať tieto hodnoty v laboratóriu dostupnými metódami. Norma: STN EN ISO STEAM VH2O2 Obj. č. Označenie výrobku Populácia Populácia na fľašku B-S-F-V-SUS B-S-F-V-SUS Pre suché teplo a etylénoxid s B. atrophaeus (ATCC Nr. 9372) Suspenzia sa dodáva s certifikátom, v ktorom sa uvádza populácia a D-hodnota pre etylénoxid a suché taplo. Norma: STN EN ISO DRY EO Obj. č. Označenie výrobku Populácia Populácia na fľašku B-E-H-SUS B-E-H-SUS B-E-H-SUS Sada pre priame očkovanie s Geob. Stearothermophilus suspenziou na kontrolu sterility komplexných nástrojov pri sterilizácii parou, formaldehydom alebo peroxidom vodíka. Ak si objednáte tiež suspenzie s B. atrophaeus môžete injekčnú striekačku použiť tiež pri sterilizácii etylénoxidom alebo suchým teplom. STEAM FORM VH2O2 Obj. č. Označenie výrobku Obsah Sada pre očkovanie 2x,5 ml Geob. Stearothermophilus 0 7 KTJ/ml suspenzie s precíznou striekačkou a 20 cm dlhou ihlou Strana 0 z 24

12 5. gke Steri-Record biologický indikátor balený prúžok so spórami Spóry baktérií sú naočkované na filtračnom papieri 6 x 38 mm a zabalené vo vrecúškach. Prúžky so spórami sa dodávajú v baleniach po 00-, 500- a.000 ks. 5. Pre parné a formaldehydové sterilizačné procesy Kmeň: Geob. stearothermophilus Prúžky sa dodávajú s certifikátom v ktorom je uvedená hustota populácie a hodnota D2 C. U biologických indikátoroch s obj.č sa naviac meria tiež rezistencia v LTSF procesoch a obidve hodnoty rezistencie DFA a D2 C sa určujú podľa normy STN EN ISO a zistené hodnoty sa uvádzajú v certifikáte. STEAM FORM Obj. č. Označenie výrobku Sterilizačný proces Populácia ks / bal B-S-SS Para B-S-SS B-S-F-SS-0-5 Para + Formaldehyd Pre peroxidvodíkové sterilizačné procesy Kmeň: Geob. stearothermophilus VH2O2 Spóry sú nanesené na prúžku z Polyesteru (PET). Pre určenie rezistencie ešte zatiaľ neexistuje žiadna norma. Hodnoty D sa určujú v rezistometri a uvedené sú v certifikáte. (*) balené jednotlivo (**) balené spolu Obj.č. Označenie výrobku Populácia ks / bal * 00 B-V-SS ** Pre sterilizačné procesy etylénoxidom a suchým teplom Kmeň: B. atrophaeus Norma: STN EN ISO 38-2 DRY EO (***) Tieto indikátory sú merané naviac podľa EP Obj.č. Označenie výrobku Populácia ks / bal B-E-H-SS B-E-H-SS-EP-0-6*** Strana z 24

13 6. Živné médiá na kultiváciu všetkých gke Steri-Record prúžkov so spórami. CASO-Bujón (TSB) s phindikátorom sú plnené v skúmavkách s plastovým uzáverom so závitom. Rast zárodkov spôsobuje zmenu ph-indikátora čím dôjde k zmene farby roztoku na základe čoho sa vyhodnocuje rast mikroorganizmov. 6. Pre parné a peroxidvodíkové sterilizačné procesy G. stearothermophilus STEAM VH2O2 Obj.č. Označenie výrobku ks / bal B-S-V-CM Pre formaldehydové sterilizačné procesy G. stearothermophilus Živné médium obsahuje naviac neutralizačnú látku, vďaka ktorej je možná kultivácia ihneď po skončení sterilizácie a nie je potrebný úkon neutralizácie ponorením do Na2SO3 ako to je opísané v STN EN ISO FORM Obj.č. Označenie výrobku ks / bal B-F-CM pre sterilizačné procesy etylénoxidom a suchým teplom B. atrophaeus DRY EO Obj.č. Označenie výrobku ks / bal B-E-H-CM Strana 2 z 24

14 Základy kinetiky úhynu a interpretácia sterilizačných procesov Autor: Dr. Ulrich Kaiser, gke GmbH Obsah. Rýchlosť úhynu pri sterilizačných procesoch.. Definícia reakcie. rádu.2. Inaktivačný faktor.3. Decimálny redukčný faktor (D-hodnota).4. Experimentálne stanovenie rezistencie biologického indikátora.4. Stanovenie D-hodnoty MPN- metódou.4.2 Stanovenie D- hodnoty z krivky prežitia.4.3 Interval prežitie-usmrtenie 2. Definícia pravdepodobnosti sterility (Sterility Assurance Level = SAL) 2.. Definícia sterilného výrobku podľa EN Vplyv teploty na sterilizačný proces 3.. Arrheniová rovnica 3.2. Definícia z- hodnoty (Teplotný koeficient D- hodnoty) 4. Ekvivalentný čas sterilizačného procesu (F (T,z) -hodnota) 4.. F 0 -hodnota 4.2. Iné F (T,z) -hodnoty 5. Analýza sterilizačných procesov 5.. Analýza procesov pri známych východiskových podmienkach 5.2. Analýza sterilizačných procesov pri striedavých alebo neznámych podmienkach (proces typu Overkill) 6. Požiadavky na výber biologických indikátorov pre validáciu a rutinnú kontrolu 6.. Výber kmeňov 6.2. Rezistencia biologických indikátorov 6.3. Výber biologických indikátorov pre rutinnú kontrolu 6.4. Umiestnenie biologických indikátorov 7. Zoznam parametrov a symbolov použitých v texte Strana 3 z 24

15 koloniebildende Einheiten [KBE/Teil]. Rýchlosť úhynu pri sterilizačných procesoch Matematické zákony pre rýchlosť úhynu mikroorganizmov sú pri väčšine známych sterilizačných procesov rovnaké, za predpokladu dosiahnutia požadovaných fyzikálnych a/alebo chemických parametrov sterilizácie. Pri rovnakých sterilizačných podmienkach je veľmi dôležitá rezistencia zárodkov, ktorá spôsobuje veľké rozdiely. Identické kmene rovnakých mikroorganizmov s rovnakým referenčným číslom (napr. G. Stearothermophilus ATCC 9372), môžu v závislosti od podmienok pre rast a sporuláciu preukazovať rôznu rezistenciu, ktorá sa môže odlišovať až o faktor 0. Za predpokladu, že sa jedná o identické zárodky a chemické a/alebo fyzikálne podmienky sterilizačného proseu sú rovnaké, závisí rýchlosť úhynu spravidla od aktuálneho počtu zárodkov a od druhu sterilizačného procesu. To platí pre známe sterilizačné procesy ako je sterilizácia suchým teplom, vlhkým teplom, formaldehyodm, etylénoxidom a peroxidom vodíka C 34 C 0 C Zeit [min] Diagram : Znázornenie krivky úhynu pre parnú sterilizáciu pri rôznych teplotách. Definícia reakcie. rádu Rýchlosť úhynu je vyjadrená v rovnici () diferenciálnymi kvocientami a vyjadruje úbytok počtu zárodkov N v čase t a označuje sa ako rýchlosť zmeny. rádu. dn dt k' N () t = čas [min] N = počet živých zárodkov v danom okamihu [KTJ/časť] k = konštanta rýchlosti zmeny [min - ] (platí pre prirodzený logaritmus) Zmena počtu zárodkov v čase je proporcionálne závislá od momentálne prítomnej koncentrácie živých zárodkov N na časť. Jedná sa tu nie o udanie množstva, ale koncentrácie, množstvo na určitú časť. Konštanta proporcionality k' sa nazýva konštanta rýchlosti zmeny. Závisí od druhu sterilizačného procesu. U väčšiny sterilizačných procesov závisí od teploty. Ak upravíme rovnicu, zintegrujeme ju a transformujeme prirodzený logaritmus na dekadický, dostávame rovnicu s novou konštantou rýchlosti zmeny: NO lg k t (2) N F t = čas sterilizácie (expozícia) [min] N 0 = východiskový počet zárodkov [KTJ/časť] N F = počet zárodkov nakonci procesu [KTJ/časť] I F = Inaktivačný faktor k = konštanta rýchlosti zmeny [min - ] (platí pre dekadický logaritmus) Ak zobrazíme mierku pre kolóniu tvoriace jednotky logaritmicky (a nie lineárne ako je to na diagrame ) dostaneme z kriviek priamky (za predpokladu, že zárodky majú rovnakú rezistenciu). V praxi môže dôjsť k nelinearitám práve v dôsledku rôznej rezistencie..2 Inaktivačný faktor Úpravou rovnice dostávame: lg N 0 lg NF k t IF (3) Inaktivačný faktor IF poskytuje informáciu o znížení počtu zárodkov alebo o počte decimálnych redukcií počas sterilizačného procesu. Ak je na počiatku sterilizácie hustota 0 6 [KTJ/časť] a končí na úrovni 0 2 [KTJ/časť] hovoríme o redukcii počtu zárodkov o 4 rády alebo o inaktivačnom faktore (IF) 4 (pozri diagram 2)..3 Decimálny redukčný faktor (D-hodnota) Decimálny redukčný faktor alebo krátko D- hodnota je mierou odolnosti zárodku pri určitom sterilizačnom procese. D-hodnota udáva ako dlho musí pôsobiť sterilizačný proces na mikroorganizmy, aby došlo k redukcii počtu zárodkov o jeden rád, alebo o 90% východiskového počtu zárodkov. Pri parných, etylénoxidových, formaldehydových a peroxidvodíkových sterilizačných procesoch sa D-hodnota uvádza ako čas v minútach [min], pri sterilizácii žiarením sa uvádza ako dávka žiarenia [Mrad]. Môže sa určiť experimentálne. Strana 4 z 24

16 koloniebildende Einheiten [KBE/Teil] Ak nanesieme logaritmus počtu zárodkov v závislosti od času, dostaneme priamku ktorej recipročné stúpanie predstavuje D-hodnotu. D- hodnota platí vždy iba pre jeden určitý sterilizačný proces a jeden definovaný zárodok. Pre paru sa v indexe uvádza sterilizačná teplota. V certifikáte biologických indikátorov sa uvádza väčšinou D 2 C -hodnota. Ako vidno z diagramu 2, táto hodnota závisí značne od teploty. D T (4) k D T = Decimálny redukčný faktor [min] alebo [Mrad] k = konštanta rýchlosti zmeny Ig [min - ],0E+06,0E+05 DN,0E+04,0E+03,0E+02,0E+0 D34 CD2 C 34 C 2 C 0 C D0 C,0E Zeit [min] Diagram 2: Znázornenie D-hodnoty pri rôznych teplotách Ak dosadíme rovnicu 4 do rovnice 3, dostaneme: t lgn 0 lgnf IF DT (5) N 0 = východiskový počet zárodkov [KTJ/časť] N F = počet zárodkov po sterilizácii [KTJ/časť] D T = decimálny redukčný faktor [min] alebo [Mrad] (D T -hodnota) t = čas pôsobenia [min] IF = inaktivačný faktor (decimálny redukčný stupeň) Ak čas pôsobenia vydelíme D-hodnotou dostaneme inaktivačný faktor IF, ktorý vyjadruje počet decimálnych redukcií. Sterilizačný čas, ktorý zodpovedá jednotke D- hodnoty redukuje populáciu o 90% alebo o stupeň decimálnej redukcie. Ak poznáme D-hodnotu, môžeme vypočítať čas sterilizácie potrebný na zníženie počtu mikroorganizmov o určitý počet stupňov decimálnych redukcií. Východiskový počet mikroorganizmov pritom nie je rozhodujúci. Ak sa zmení východiskový počet mikroorganizmov No, zmení sa pri rovnakom čase pôsobenia konečný počet mikroorganizmov NF. Takto je pri danom sterilizčnom procese konečná hodnota počtu mikroorganizmov závislá od východiskovej hodnoty. Potrebný čas pôsobenia dostaneme, ak upravíme rovnicu (5). t ) (lgn 0 lgnf DT IF DT (6).4 Experimentálne určenie rezistencie biologického indikátora Rezistencia BI sa môže určiť buď stanovením D-hodnoty podľa STN EN ISO 38- použitím dvoch metód (pozri prílohu C a D) alebo určením hraničných hodnôt pre prežitie a usmrtenie (pozri prílohu E)..4. Určenie D-hodnoty pomocou MPN-metódy (Most probable number, určenie najpravdepodobnejšieho počtu) Mikroorganizmy určitej veľkosti populácie sa vystavia pôsobeniu pri definovaných podmienkach pôsobenia odstupňovaným dĺžkam sterilizačného času, pričom všetky ostatné hodnoty premenných procesu s výnimkou času zostávajú konštantné. Pre každý čas pôsobenia sa musí použiť aspoň dvadsať naočkovaných nosičov s mikroorganizmami. Po uplynutí času pôsobenia sa skúma schopnosť rastu mikroorganizmov. Používa sa aspoň sedem rôznych sterilizačných časov a síce: a) aspoň jedna skúšobná sada, pri ktorej všetky skúšané vzorky preukážu rast; b) aspoň štyri skúšobné sady, pri ktorých preukáže rast malá časť vzoriek; c) aspoň dve skúšobné sady, pri ktorých nebude pozorovaný žiaden rast. Z výsledkov série pokusov sa vypočíta D- hodnota. Čas pôsobenia Počet vzoriek Počet vzoriek bez rastu [t i ] [n i ] [r i ] t n r = 0 t 2 n 2 r 2 t 3 n 3 r 3 t 4 n 4 r 4 t 5 n 5 r 5 t 6 n 6 r 6 t 7 n 7 r 7 t je najkratší čas pôsobenia, pri ktorom sa u všetkých vzorkách pozoruje rast. Časy pôsobenia od t 2 do t 7 sú narastajúce časy Strana 5 z 24

17 pôsobenia. Pri časoch t 6 a t 7 by nebal byť pozorovateľný žiaden rast. Z týchto hodnôt sa vypočítajú faktory x a y pre časy pôsobenia t až t 7. t t i ( i ) x i (7) y i r n 2 ( i ) ( i ) ri n i (8) pre t kde sa u všetkých vzorkách pozoruje rast je r =0. Pre y i dostávame: r ( i ) y i (9) n( i ) Z vypočítaných hodnôt x i a y i môžeme vypočítať čas pôsobenia µ i pre každý čas pôsobenia nasledovne: i xi yi [min] (0) Strednú hodnotu času pôsobenia, pri ktorom nepozorujeme žiaden rast sa môže vypočítať ako suma všetkých µ i. i 6 i 0 [min] () i Ak interval medzi časmi pôsobenia (d) zostáva konštantný a ak použijeme rovnaký počet skúmaných vzoriek pri každom čase pôsobenia, môže sa stredná hodnota pre žiaden rast" alternatívne vypočítať z nasledovnej rovnice: d d t6 [min] (2) 2 n i 6 r i i procesu s výnimkou času zostávajú konštantné. Musia sa použiť aspoň štyri podmienky pôsobenia, ktoré musia obsahovať: a) žiadne pôsobenie, b) 3 sterilizačné časy so znížením počtu rozmnožovania sa schopných mikroorganizmov na menej ako 0,0% východiskových mikroorganizmov v oblasti použitých časov pôsobenia. Musia sa vykonať aspoň tri skúšky. Pre každú skúšku sa musia pre každý čas pôsobenia použiť aspoň tri zaočkované nosiče mikroorganizmami. Po expozícii sa skúšobné mikroorganizmy oddelia od nosiča a určí sa počet mikroorganizmov pomocou výrobcom uvedenej metódy. Ak nanesieme logaritmus počtu mikroorganizmov v závislosti od času expozície dostaneme priamku ktorej recipročné stúpanie predstavuje D-hodnotu v minútach..4.3 Interval prežitie - usmrtenie Interval prežitie-usmrtenie sa definuje zaručeným časom prežitia bioindikátora, ktorý obsahuje aspoň 00 mikroorganizmov po tom, ako bol biologický indikátor vystavený vplyvu pôsobenia sterilizácie s nasledovnou dĺžkou trvania: čas prežitia = (log Populácie - 2) x D [min] Zaručený čas pre usmrtenie biologického indikátora je daný sterilizáciou s nasledujúcim časom pôsobenia: čas usmrtenia = (log Populácie + 4) x D [min] Z toho dostávame pravdepodobnosť sterilizácie SAL 0-4 (každý ci mikroorganizmus zostane ešte pri živote). Anzahl mikrobiologischer Überlebender [KBE/Einheit] Bio-Burden = Verschiedene Keime mit unterschiedlicher Population und Resistenz Biologische Indikatoren (BI) = Keime mit definierter Population und Resistenz Stredná hodnota sa vypočíta podľa rovnice D 0,2507 lgn 0 [min] (3) kde N 0 predstavuje východiskový počet mikroorganizmov [KTJ/vzorku]..4.2 Určenie D-hodnoty z krivky prežitia Skúmané vzorky sa musia vystaviť definovaným sterilizačným podmienkam pri odstupňovaných časoch pôsobenia pričom všetky hodnoty premenných parametrov 0, 0,0 0,00 0,000 0,0000 0,00000 Überlebens - Abtötungs-Fenster D xx-wert F Bio-Wert F O-Wert Zeit [min] 0 - Sterility Assurance Level (SAL) = SAL (nach EN 556) Diagram 3: Definícia Biozáťaž, SAL, Biologický Indikátor, F Bio-hodnota, F 0-hodnota 2. Definícia pravdepodobnosti sterility (Sterility Assurance Level = SAL) Počet mikroorganizmov sa počas procesu sterilizácie znižuje podľa funkcie prvého rádu Strana 6 z 24

18 D-Wert [min] pričom sa za jednu časovú jednotku vyjadrenú D-hodnotou zníži na 0-tinu (alebo o 90%) z východiskovej hodnoty alebo inak povedané o jeden inaktivačný faktor IF. Po dosiahnutí záťaže mikroorganizmami s hodnotou KTJ/časť dosiahneme po uplynutí ďalšieho časového úseku ktorý zodpovedá D-hodnote matematickú hodnotu 0,. Hodnoty pod už nepredstavujú počet živých mikroorganizmov, ale pravdepodobnosť výskytu živých mikroorganizmov na definovanom počte častí (kusov). Ak sterilizujeme 0 častí (0 kusov zdravotníckych pomôcok ZP) počas trvania jednej D-hodnoty, usmrtíme 90% mikroorganizmov. Hodnota 0, potom znamená, že 9 z 0 častí sú sterilné a na jednej časti (ZP) sa vyskytujú mikroorganizmy. Hodnota 0,0 alebo 0-2 znamená že zo 00 častí (ZP) obsahuje jedna časť mikroorganizmy. Pri počte mikroorganizmov < preto nehovoríme o záťaži mikroorganizmami, ale o pravdepodobnosti sterility. Táto udáva pomer počtu nesterilných častí k celkovému počtu častí. 2. Definícia sterilného výrobku podľa európskej normy 556 Klasický pojem sterilný znamená, že na sterilnej zdravotníckej pomôcke alebo na sterilnom výrobku sa nevyskytujú žiadne rozmnoženiaschopné mikroorganizmy. Podľa spomenutej matematickej zákonitosti môžeme zvyšovať pravdepodobnosť sterility, avšak nemôžeme dosiahnuť pravdepodobnosť sterility 0 mikroorganizmov/časť. Z tohoto dôvodu bola stanovená v EN 556 pravdepodobnosť sterility (Sterility Assurance Level SAL 0-6 = : Mil.), ktorá poskytuje dostatočnú bezpečnosť. Znamená to, že ak z milióna výrobkov maximálne jeden obsahuje živé mikroorganizmy, môžeme ich podľa európskej legislatívy označiť ako sterilné. Priamy biologický dôkaz tejto hodnoty experimentálne nie je možný ale môžeme použiť extrapoláciu priamok usmrtenia. 3. Vplyv teploty na sterilizačný proces 3. Arrheniová rovnica Ako bolo spomenuté v bode, sú konštanty k resp. k a tým tiež D-hodnota veličiny závislé na teplote. Závislosť opisuje Arrheniová rovnica: Ea RT k k 0 e (4) R = plynová konštanta [8,34 J/mol K] T = Teplota [K] k = rýchlostná konštanta [min - ] k = faktor nezávislosti od teploty [min - ] Ea = Aktivačná energia [J/mol] Kde k 0 je konštanta, ktorej veľkosť závisí iba od druhu sterilizačného procesu a môže byť určená iba experimentálne. Aktivačná energia Ea je energia potrebná na spustenie reakcie. Podľa Arrheniovej rovnice môžeme odvodiť exponenciálnu zmenu D-hodnoty v závislosti od teploty. Táto závislosť sa pri sterilizačných procesoch označuje ako z-hodnota. 3.2 Definícia z-hodnoty (Teplotný koeficient D-hodnoty) z-hodnota vyjadruje, ako sa mení rýchlosť usmrcovania mikroorganizmov v závislosti od teploty. Matematicky je z-hodnota teplotný rozdiel, ktorý spôsobuje zmenu D-hodnoty o faktor 0 za inak rovnakých podmienok. Ak stanovíme D-hodnoty pri rôznych teplotách a nanesieme na semilogaritmickú stupnicu v závislosti od teploty, dostaneme priamku, ktorej recipročné stúpanie predstavuje z-hodnotu.,0e+02,0e+0,0e+00 experimentell gemessene D-Werte Regressionslinie 5 z-wert,0e Temperatur [ C] Diagram 4: Znázornenie z-hodnoty Pomocou z-hodnoty môžeme vypočítať D- hodnoty pri neznámych teplotách podľa nasledujúcej rovnice: z lgd lgd T T T T 2 (5) 2 4. Ekvivalentný čas sterilizačného procesu (F (T,z) -hodnota) Ako vidno z rovnice 6, sterilizačný čas závisí od decimálneho redukčného faktora a inaktivačného faktora. Pretože D-hodnota platí iba pre jednu teplotu, musíme tiež čas sterilizácie pri rôznych teplotách vo fáze nábehu prepočítať na jednu teplotu. Celkový čas sterilizácie vztiahnutý na jednu teplotu sa nazýva ekvivalentný čas F T,z s vyznačením teploty a z-hodnoty v indexe. F- hodnota vyjadruje čas sterilizácie pri konštantnej teplote. Inak vyjadrené, F-hodnota predstavuje prácu sterilizácie určitého sterilizačného procesu a vyjadruje sa ako čas v minútach pri definovanej teplote. Inaktivačný faktor nie je mierou práce Strana 7 z 24

19 lg Keimzahl [KBE/Teil] Inaktivierungsfaktor sterilizácie, pretože mikroorganizmy menšej rezistencie (menšia D-hodnota) uhynú oveľa skôr ako rovnaký počet mikroorganizmov s vyššou rezistenciou (vyššia D-hodnota). Ako bolo ukázané, môžeme vypočítať pri určitej východiskovej koncentrácii sterilizačný čas pri určitej teplote s cieľom dosiahnuť určitý konečný počet mikroorganizmov. V praxi sa nahreje sterilizátor za určitý čas, kým sa nedosiahne sterilizačná teplota napr. 2 C. Počas nárastu teploty zo 00 C na 2 C už dochádza k úhynu mikroorganizmov. Táto fáza sa môže zohľadniť pri určovaní celkového času sterilizácie. Ak poznáme z-hodnotu, môžeme prepočítať sterilizačné časy keď ešte nie je dosiahnutá sterilizačná teplota na čas s dosiahnutou sterilizačnou teplotou. Suma jednotlivých časových integrálov sa môže zhrnúť na sterilizačný čas pri 2 C a nazýva sa ekvivalentný čas. F-hodnota je čas sterilizácie pri definovanej teplote, v prípade sterilizácie žiarením vyjadruje definovanú dávku. F (lgn 0 lgn ) D IF D T, z F T T (6) lg No F-Wert lg NF Zeit [min] Diagram 5: Znázornenie F-hodnoty 4. F 0 -hodnota F 0 -hodnota sa definuje pri sterilizačnej teplote 2 C a z-hodnote 0 C a v priemysle predstavuje referenciu pre mnohé procesy. 4.2 Ďalšie F (T,z) -hodnoty Môžu sa definovať ďalšie F-hodnoty, avšak sa musí vyznačiť k akej teplote a z-hodnote sa vzťahujú. Ako novinka sa udáva F c -hodnota v metrickom systéme pri 20 C a z = 0 C. 5. Analýza sterilizačných procesov Pred validáciou sa musí analyzovať sterilizačný proces pri zohľadnení východiskových podmienok (druh sterilizácie, sterilizovaný materiál, obaly atď.). Hydro- a termostabilné výrobky sa sterilizujú parným sterilizačným procesom. Termolabilné výrobky sa sterilizujú v priemysle spravidla etylénoxidom alebo žiarením. V nemocniciach sa používa viacej formaldehydová sterilizácia. Po určení sterilizačného procesu a obalov sa musí sterilizačný proces zadefinovať tak, aby sa bezpečne dosiahla v EN 556 určená pravdepodobnosť sterility 0-6 mikroorganizmov/časť. Pri známych východiskových podmienkach (rovnaké výrobky, rovnaký východiskový počet mikroorganizmov atď.), ktoré spravidla platia iba v priemysle pri výrobe sterilného materiálu sa prispôsobujú parametre sterilizačného procesu východiskovým podmienkam. Ak sa nepredpokladajú konštantné východiskové podmienky ako je to napr. v nemocnici, pracujeme podľa najhorších predpokladov (overkill-metóda). Aby sme šetrili sterilizovaný materiál a zabránili zbytočnému predlžovaniu chodu sterilizátorov prispôsobujeme čas sterilizácie daným podmienkam. To predpokladá nielen presný výpočet všetkých potrebných parametrov, ale aj ich dôsledné dodržiavanie. 5. Analýza procesu pri známych východiskových podmienkach Stanovuje sa záťaž mikroorganizmami u sterilizovaných výrobkov, ktorá závisí od druhu mikroorganizmov, ich počtu a rezistencie (decimálny redukčný faktor) a tiež sa stanovuje z-hodnota. Potom nasleduje výpočet parametrov sterilizácie. Postup vidíme na nasledujúcom príklade: Východiskové podmienky: Východisková koncentrácia mikroorganizmov: N 0 = 0 3 KTJ/časť Požadované podmienky na konci sterilizačného procesu: N F = 0-6 KTJ/časť D 2 C- hodnota =,5 min z-hodnota = 0 C Príklad : Ako vysoký musí byť inaktivačný faktor? IF = lg N 0 lg N F IF = lg 0 3 lg 0-6 = 3 (-6) = 9 Inaktivačný faktor predstavuje 9 decimálnych stupňov redukcie. Príklad 2: Strana 8 z 24

20 lg Keimzahl [KBE/Teil] Inaktivierungsfaktor IF=? Aký ekvivalentný sterilizačný čas je potrebný na sterilizáciu pri teplote 2 C: F 0 = (lg N 0 lg N F ) D T F 0 = (3+6),5 min = 3,5 min Ekvivalentný sterilizačný čas pre tento proces pri 2 C predstavuje 3,5 min. Príklad 3: Chceme sterilizovať termolabilný materiál pri teplote 0 C. Aký dlhý sterilizačný čas je potrebný? F 0 C;z=0 C. Výpočet D-hodnoty pre 0 C podľa rovnice (6): lgdt lgd z T T z (lgd 2 T 2 T 2 lgdt ) T T ( T T2 ) lgdt 2 lgdt z lgd0 C lgd2 lgd 0 C C C z lg,5,,276 D 0, 276 8,8 [min] 0 C 2. Výpočet sterilizačného času z rovnice 6 F 0 C,0 = (lg N 0 lg N F ) D T F 0 C,0 = (3+6) 8,8 min = 70 min Sterilizačný čas pri 0 C predstavuje 2 h 50 min. Príklad 4: Výrobok sa poškodí pri dlhšom sterilizačnom čase ako 3 min. Akú teplotu musíme použiť, aby sme neprekročili sterilizačný čas 3 min? Teplota môže stúpnuť nad 2 C.. Stanovenie D-hodnoty 2 2. Bestimmung der Sterilisationstemperatur lgdt lgd z T T T T z DT lgdt ) 2 T (lg 2 T 2 0 C (lg,5 lg0,33) 2 C T 27, 56 C Pri čase sterilizácie 3 min musíme sterilizovať pri 27,6 C. V diagrame 6 sú graficky znázornené všetky tri procesy t(2 C)=? 2 C 0 C t(0 C)=? Zeit [min] Diagram 6: Znázornenie príkladov 5.2 Analýza sterilizačných procesov pri meniacich sa alebo neznámych východiskových podmienkach (overkill metóda) Ak východiskové podmienky nie sú konštantné ako je to napr. v nemocnici spôsobené rôznorodosťou sterilizovaného materiálu a meniacou sa kontamináciou mikroorganizmami musíme vychádzať z najhorších podmienok (Worst-Case). Európsky liekopis (EP) a americký liekopis (USP) uvádzajú minimálne F 0 -hodnoty pre dané podmienky použitia sterilizačných procesov (overkill procesy). Pre parný sterilizačný proces sa uvádzajú dva sterilizačné časy pri dvoch teplotách, ktoré však vykazujú dva rôzne ekvivalentné časy sterilizácie: 2 D T t lgn 0 lgn F D T 3min 0,33min 3 6 Teplota [ C] Čas [min] F 0 -hodnota [min] Strana 9 z 24

21 > 60 Pri bližšom porovnaní zistíme, že F 0 pri 2 C predstavuje 5 min zatiaľ čo F 0 pri 34 C predstavuje iba 0,75 min. Jedná sa tu o čistý čas pôsobenia, ku ktorému musíme pripočítať ešte časy pre vyrovnanie teplotných rozdielov aby sme dostali celkový čas sterilizácie. Skutočnosť, že v norme sa uvádza dlhší čas - 3 min sa oddôvodňuje tým, že čas potrebný na vyrovnanie teploty v komore s teplotou materiálu závisí od často premenlivého faktora kvality pary. Táto problematika vystupuje do popredia obzvlášť pri extrémne krátkych sterilizačných časoch. Z tohoto dôvodu sa zvýšil bezpečnostný faktor pri 34 C. 6. Požiadavky a výber biologických indikátorov pre validáciu a rutinnú kontrolu Ak pri kontrole parametrov sterilizačného procesu zistíme, že dôležité parametre ako je napríklad kvalita pary kolíšu, nemôžeme vykonať validáciu parametrov. V takomto prípade je možné overenie účinnosti iba pomocou naočkovania (inokulácie) mikroorganizmov vo forme suspenzie do najťažšie sterilizovateľných miest. Sterilizačné procesy používajúce plyn sa validujú výlučne použitím biologických indikátorov. 6. Výber kmeňov V závislosti od sterilizačného procesu sa vyberajú nepatogénne mikroorganizmy, ktorých rezistencia je vyššia ako rezistencia známych patogénnych mikroorganizmov. Norma EN ISO 38 odporúča pre jednotlivé sterilizačné procesy určitý druh mikroorganizmov. Uprednostňujú sa také, ktoré vytvárajú spóry. Vyrábajú sa tak, aby ich počet bol štandardizovaný a aby ich trvácnosť bola niekoľko rokov. Používajú sa iba biologické indikátory s priloženým certifikátom, v ktorom sa uvádza výrobca, testovací kmeň, populácia, D-hodnota a dátum exspirácie. Indikátory musia spĺňať požiadavky uvedených noriem. Okrem toho sa uvádza charakteristika kmeňa s uvedením pôvodu zbierky kultúr s príslušným číslom katalógu. Napríklad.: DSM = Deutsche Sammlung für Mikroorganismen (Nemecká zbierka mikroorganizmov) ATCC = American Type Culture Collection NCTC = National Collection of Type Culture (London) V nasledujúcej tabuľke sú uvedené používané biologické indikátory pre rôzne sterilizačné procesy: Meno ATCC Nr.: Sterilizačné metódy Atrophaeus 9372 Etylénoxid, Horúci vzduch G.Stearother -mophilus 7953 Para, Formaldehyd, H 2 O 2 Pumilus 2742 Beta- a Gama žiarenie Podľa druhu sterilizačného procesu sa zvolia biologické indikátory pre jednotlivé sterilizačné procesy. 6.2 Rezistencia biologických indikátorov: Celková rezistencia biologického indikátora závisí od populácie a individuálnej rezistencie mikroorganizmu (D-hodnota). Celková rezistencia je daná násobkom D-hodnoty a logaritmu populácie. F Bio = D 2 C lg (pop) [min] F Bio -hodnota predstavuje čas potrebný na zníženie východiskovej populácie na hodno- tu. Môžeme to vidieť z dvoch príkladov: Príklad Populácia [KTJ/časť] D 2 -hodn [min] F Bio hodn [min] 0 6, Ako z tabuľky vidno, D-hodnota rovnakého mikroorganizmu nie je konštantná a závisí od podmienok rastu a sporulácie. Preto musí mať každá šarža biologických indikátorov certifikát, v ktorom je uvedená populácia a individuálna rezistencia a z toho vyplývajúca absolútna rezistencia biologického indikátora. 6.3 Výber biologických indikátorov pre rutinnú kontrolu Pre rutinnú kontrolu musia biologické indikátory s ohľadom na čistotu, populáciu a charakteristiku odporu zodpovedať požiadavkám spomenutých noriem. Pre rutinnú kontrolu parných sterilizačných procesov s meniacimi sa podmienkami (overkill) sa predpokladá, že F Bio -hodnota sa volí tak, aby SAL na konci sterilizačného procesu predstavoval pre biologický indikátor približne Strana 20 z 24

22 Keimzahl [KBE/Teil] 0-4. Podľa toho môžeme vypočítať F Bio - hodnotu: F 0 = F Bio + 4 D 2 C F Bio = F 0 4 D 2 C Overenie sterility podľa EN 556 použitím biologických indikátorov prakticky nie je možné, pretože počet milión indikátorov je nereálny. Aby sme overili, či sa dosiahne pravdepodobnosť sterilizácie 0 6, používa sa vyššia záťaž a extrapoláciou sa dostaneme na hodnotu 0 6 (pozri diagram 7).,0E+04,0E+03,0E+02,0E+0,0E+00,0E-0,0E-02,0E-03,0E-04 KBE des Bio- Indikators Bioburden des unsterilen Produktes F=2x5=0 (90% Abtötungsrate) F=2x6=2 (99% Abtötungsrate) F=2x7=4 (99,9 % Abtötungsrate),0E-05 "Steriles,0E-06 Produkt" Zeit [min] Diagram 7: Výber biologických indikátorov 6.4 Umiestnenie biologických indikátorov Biologické indikátory sa nikdy neumiestňujú v komore mimo balíkov. V normách pre biologické indikátory sa neuvádzajú smernice pre spôsob balenia biologických indikátorov. Tieto informácie nachádzame spravidla v normách v ktorých sa uvádza metodika skúšania sterilizátorov. Pre parné sterilizátory je to EN 285. Biologické indikátory musia byť umiestnené vždy na najťažšie sterilizovateľných miestach ( Worst-Case ). V prípade dutých predmetov s malým priemerom alebo s úzkou štrbinou nie je možné umiestniť biologický indikátor do tohoto kritického miesta, preto sa v týchto prípadoch vykonáva priame naočkovanie suspenziou. Okrem toho sa zohľadňuje tzv. Small-Load"- efekt (efekt pri malej náplni ak je v komore iba málo materiálu). V takomto prípade sa všetky nekondenzovateľné plyny (ktoré neboli z komory odstránené alebo sa do komory dostali s parou) sústreďujú do malej náplne komory. Koncentrácia plynov môže mať vážne následky pre úspešnosť sterilizácie vo vnútorných častiach náplne. Strana 2 z 24

23 7. Zoznam parametrov a symbolov použitých v texte Označ. Opis Veličina Jednotka Význam D T E 0 F (T,z) F 0 Decimálny redukčný faktor (D-hodnota) Aktivačná energia reakcie Ekvivalentný čas sterilizačného procesu Ekvivalentný čas sterilizačného procesu pri štandardných podmienkach (napr. Para 2 C) Čas Reakčná energia Čas Čas [min] [J/mol] [min] [min] Opisuje rezistenciu biologických indikátorov. Uvádza sa ako čas potrebný na redukovanie východiskového počtu mikroorganizmov o 90%, teda redukcia o jednu dekádu Energia potrebná na naštartovanie chemickej reakcie Umrechnung aller Sterilisationszeiten bei anderen Temperaturen als der angegebenen auf die Referenztemperatur. Gibt die Sterilisationsarbeit als Zeiteinheit bei der angegebenen Temperatur an Sterilizačná práca pri 2 C a z-hodnote 0 C (Referenčná hodnota) IF Inaktivačný faktor Číslo N Redukcia počtu mikroorganizmov jednej časti počas sterilizačného procesu vyjadrená ako počet decimálnych stupňov redukcie K Konštanta rýchlosti reakcie log /teplota [min - ] Pri použití dekadického logaritmu k Konštanta rýchlosti reakcie ln /teplota [min - ] Pri použití prirodzeného logaritmu k 0 Faktor rýchlosti reakcií /teplota [min - Špecifický pre každý sterilizačný ] nezávislý od teploty proces N N F N 0 Momentálny počet mikroorganizmov na časť Počet mikroorganizmov po pôsobení sterilizácie na časť Východiskový počet mikroorganizmov Počet mikroorganiz mov Počet mikroorganiz mov Počet mikroorganiz mov [KTJ/časť] [KTJ / časť] [KTJ / časť] Množstvo Koncentrácia Východiskový počet mikroorganizmov pred sterilizáciou R Všeobecná plynová konštanta Konštanta [J/mol K] = 8,34 [J/mol K] T Sterilizačný čas Čas [min] Sterilizačný čas Z Teplotný koeficient Teplota [ C] Vyjadruje závislosť D-hodnoty od teploty Autor: Dr. Ulrich Kaiser c/o gke-gmbh Auf der Lind 0 D Waldems-Esch SK V04 /204 Strana 22 z 24

24 gke GmbH Auf der Lind 0 D Waldems info@gke.eu SK V04 /204 Strana 23 z 24