Sofia Strep A+ FIA Seite 1 von 31. Zur Verwendung mit Sofia und Sofia 2 Komplexität der CLIA: Befreit. Zur In-vitro-Diagnose

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1 Zur Verwendung mit Sofia und Sofia 2 Komplexität der CLIA: Befreit Zur In-vitro-Diagnose VERWENDUNGSZWECK Der Sofia Strep A+ FIA weist Antigene von Streptokokken der Gruppe A durch Rachenabstriche bei Patienten mit Anzeichen und Symptomen von Pharyngitis, z. B. Halsschmerzen, nach. Alle negativen Testergebnisse sollten durch Bakterienkulturen gesichert werden, da negative Ergebnisse eine Streptokokken-Infektion der Gruppe A nicht ausschließen und daher nicht als alleinige Basis für Behandlungen herangezogen werden sollten. Der Test ist zum Gebrauch durch Fachkräfte im Labor vorgesehen und unterstützt die Diagnose einer Infektion mit Streptokokken der Gruppe A. Der Sofia Strep A+ FIA kann mit Sofia oder Sofia 2 verwendet werden. ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG Streptokokken der Gruppe A sind eine der häufigsten Ursachen für akute Infektionen der oberen Atemwege. Es konnte gezeigt werden, dass eine frühe Diagnose und Behandlung einer durch Streptokokken der Gruppe A bedingten Pharyngitis die Schwere der Symptome zu lindern und schwere Komplikationen, wie rheumatisches Fieber und Poststreptokokken-Glomerulonephritis, zu verringern hilft. 1, 2 Die primären Nachweismethoden für Streptokokken der Gruppe A sind Kulturverfahren, immunologische Verfahren und/oder molekulare Verfahren. Konventionelle Nachweismethoden für Streptokokken der Gruppe A aus Rachenabstrichen beinhalten die Kultivierung, Isolierung und anschließende Identifizierung von lebensfähigen Pathogenen; dies dauert in der Regel 24 bis 48 Stunden oder länger. 3,4 Schnelltests zum Nachweis von Antigenen wie der Sofia Strep A+ FIA gehören aufgrund der schnellen Durchlaufzeit und der einfachen Handhabung zu den meistgebrauchten Diagnosehilfen für Streptokokken der Gruppe A. In letzter Zeit ist eine Reihe neuer In-vitro- Diagnostika verfügbar geworden, die molekularbasierte Technologien zur Amplifikation von Nukleinsäuren einsetzen. Diese ermöglichen den Nachweis von Streptokokken der Gruppe A mit hoher Genauigkeit in deutlich weniger als 24 Stunden. TESTPRINZIP Der Sofia Strep A+ FIA beruht auf der Immunfluoreszenz-Technologie und wird zusammen mit Sofia oder Sofia 2 eingesetzt, um Antigene von Streptokokken der Gruppe A nachzuweisen. Der Sofia Strep A+ FIA umfasst die Extraktion der Antigenkomponenten der Streptokokken-Bakterien der Gruppe A (GAS). Die Abstrichprobe des Patienten wird in das Reagenzröhrchen mit der Reagenzlösung gegeben; während dieser Zeit werden die bakteriellen Antigene extrahiert, wodurch sie zugänglicher für die spezifischen Antikörper werden. Ein Aliquot der extrahierten Probe wird in die Probenvertiefung der Kassette gegeben. Die Probe wandert aus der Probenvertiefung durch einen Teststreifen mit verschiedenen Sofia Strep A+ FIA Seite 1 von 31

2 spezifischen chemischen Umgebungen. Wenn Antigene von Streptokokken der Gruppe A vorhanden sind, werden sie von Antikörpern gebunden, die an fluoreszente Mikropartikel gekoppelt sind, welche durch den Teststreifen wandern. Die gebundenes Antigen enthaltenden fluoreszenten Mikropartikel werden an einer bestimmten Stelle auf dem Teststreifen von Antikörpern gefangen und vom Sofia oder Sofia 2 nachgewiesen. Falls keine Antigene vorhanden sind, werden die fluoreszenten Mikropartikel weder durch Fänger-Antikörper eingefangen noch durch Sofia bzw. Sofia 2 nachgewiesen. Die Testkassette wird je nach Entscheidung des Benutzers entweder für eine automatisch gesteuerte Entwicklung in Sofia oder Sofia 2 eingelegt ( WALK AWAY Modus) oder für eine manuell regulierte Entwicklung auf eine Ablage oder einen Labortisch gestellt und daraufhin zum Scannen in Sofia oder Sofia 2 eingelegt ( READ NOW Modus). Sofia oder Sofia 2 scannt, misst und wertet das Immunfluoreszenzsignal nach methodenspezifischen Algorithmen aus. Sofia oder Sofia 2 zeigt die Testergebnisse (z. B. positiv, negativ oder ungültig) auf dem Bildschirm an. IN DER PACKUNG MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Testkit (25 Stück): Einzeln verpackte Testkassetten (25) Polyklonale Kaninchen-Antikörper gegen Streptokokken der Gruppe A Reagenzröhrchen (25) Reagenzlösungsflaschen (25): 4M Natriumnitrit und 0,4N Salzsäure in Glasampulle Sterile Viskose-Rachentupfer (25) Durchsichtige 120 µl Fixvolumen-Pipetten (25) Positiv-Kontrolltupfer (1): Der Tupfer ist mit hitzeinaktivierten, nicht infektiösen Streptokokken der Gruppe A beschichtet Negativ-Kontrolltupfer (1): Der Tupfer ist mit hitzeinaktivierten, nicht infektiösen Streptokokken der Gruppe C beschichtet Packungsbeilage (1) Kurzanleitung (1) QK-Karte (an der Kit-Schachtel) Druckerpapier (1) IM KIT NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN Timer oder Uhr Sofia oder Sofia 2 Kalibrationskassette (gehört zum Lieferumfang des Installationspakets von Sofia oder Sofia 2) Tupfer/-Transportsystem für Kultur oder ein von der FDA zugelassenes molekulares Verfahren. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Für den Einsatz in der In-vitro-Diagnostik. Den Inhalt des Kits nicht nach Ablauf des Verfallsdatums, das außen auf der Packung aufgedruckt ist, verwenden. Bei der Entnahme, Handhabung, Lagerung und Entsorgung von Patientenproben und dem Inhalt von benutzten Kits sind entsprechende Vorsichtsmaßnahmen zu befolgen. 5 Für die Handhabung von Patientenproben wird die Verwendung von Nitril- oder Latexhandschuhen (oder gleichwertigen Handschuhen) empfohlen. 5 Sofia Strep A+ FIA Seite 2 von 31

3 Keine gebrauchten Kassetten, Reagenzröhrchen, Fixvolumen-Pipetten, Lösungen und Kontrolltupfer wiederverwenden. Die Kalibrationskassette muss bei Nichtgebrauch in dem mitgelieferten Schutzbeutel aufbewahrt werden. Um genaue Ergebnisse zu erhalten, müssen die Anweisungen auf der Packungsbeilage befolgt werden. Falsche oder ungeeignete Probengewinnung, -lagerung und -transport können zu falschen Testergebnissen führen. Probengewinnungs- und Handhabungsverfahren erfordern spezifische Ausbildung und Belehrung. Verwenden Sie die in diesem Assay enthaltenen Tupfer mit Viskose-Spitze, um den Rachenabstrich durchzuführen. Keine Tupfer mit Calciumalginat-Fasern, Wattespitze oder Holzschaft verwenden. Die Testkassette muss bis kurz vor ihrer Verwendung im Folienbeutel bleiben und darf erst dann der Umgebung ausgesetzt werden. Beschädigte Testkassetten bzw. Material dürfen nicht verwendet und müssen entsorgt werden. Die Reagenzlösung enthält eine saure Lösung. Wenn die Lösung mit Haut oder Augen in Berührung kommt, mit viel Wasser abspülen. Die Reagenzlösungsflasche enthält Glas; vorsichtig brechen und nur einmal zusammendrücken, um die Ampulle zu brechen. Wenn die Glasampulle der Reagenzlösungsflasche fehlt, die Lösung grün ist, bevor die Ampulle zerbrochen wird, oder wenn sich die Lösung nach dem Brechen des Glases und dem Schütteln nicht grün verfärbt, die Reagenzlösungsflasche entsorgen und eine andere Flasche verwenden. Keine Proben aus dem Reagenzröhrchen in die Probenvertiefung der Kassette füllen. Zum Hinzufügen der Probe zur Testkassette ist die mitgelieferte durchsichtige 120-μl-Fixvolumen-Pipette zu verwenden. Wenn der WALK AWAY Modus verwendet wird, NICHT zulassen, dass sich die Testkassette auf dem Labortisch bzw. der Arbeitsplatte entwickelt, bevor die Kassette in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt wird. Wenn der READ NOW -Modus verwendet wird, muss die Testkassette volle 5 Minuten entwickelt werden, BEVOR sie in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt wird. Nicht auf den Strichcode oder oben auf die Testkassette schreiben. Sofia oder Sofia 2 verwendet diesen zur Erkennung des auszuführenden Testtyps sowie das Haltbarkeitsdatum der Testkassette. Versuchen Sie nicht die Testkassette mehr als einmal zu scannen. Der Strichcode auf der Testkassette enthält eine eindeutige Bezeichnung, die es verhindert, dass Sofia oder Sofia 2 eine zuvor gescannte Testkassette ein zweites Mal scannt. Wenn eine Testkassette mehr als einmal auf demselben Sofia oder Sofia 2 gescannt wird, wird eine Fehlermeldung angezeigt. Da es sich bei der Nachweisreagenz um eine fluoreszierende Substanz handelt, bilden sich keine sichtbaren Ergebnisse auf dem Teststreifen. Zur Ergebnisauswertung muss Sofia oder Sofia 2 verwendet werden. Tests müssen in einer Umgebung mit ausreichender Belüftung durchgeführt werden. Behälter und gebrauchten Inhalt gemäß den staatlichen, bundesstaatlichen und örtlichen Vorschriften entsorgen. Beim Umgang mit den Inhalten dieses Kits geeignete Schutzkleidung, Handschuhe und Schutzbrille/Gesichtsschutz tragen. Nach Gebrauch Hände gründlich waschen. Bitte lesen Sie das Sicherheitsdatenblatt (SDB) auf quidel.com, um weitere Informationen zu Gefahrensymbolen, Sicherheit, Handhabung und Entsorgung der Komponenten in diesem Kit zu erhalten. AUFBEWAHRUNG UND STABILITÄT DES KITS Das Kit bei Raumtemperatur 15 C bis 30 C (59 F bis 86 F) und vor direktem Sonnenlicht geschützt aufbewahren. Der Inhalt des Kits ist bis zu dem auf der Schachtel aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Nicht einfrieren. Sofia Strep A+ FIA Seite 3 von 31

4 QUALITÄTSKONTROLLE Bei Sofia bzw. Sofia 2 und der Testkassette kommen drei Qualitätskontrolltypen zum Einsatz: Kalibrierprüfung, integrierte Verfahrenskontrollfunktionen und externe Kontrollen. Sofias Kalibrationsprüfung Hinweis: Hierbei handelt es sich um eine Kalibrierprüfung. Die Kalibrierprüfung sollte alle 30 Tage durchgeführt werden. Der Sofia kann leicht eine Erinnerung zur Durchführung der Kalibrierprüfung ausgeben, wenn er entsprechend eingestellt wurde. Bei der obligatorischen Kalibrierprüfung werden die Optik und die Berechnungssysteme des Sofia mithilfe einer hierfür vorgesehenen Kalibrationskassette überprüft. Diese Kalibrationskassette gehört zum Lieferumfang des Sofia-Installationspakets. Einzelheiten zur Kalibrierprüfung finden sich im Sofia- Benutzerhandbuch. Wichtig: Zwischen den Tests muss die Kalibrationskassette zum Lichtschutz im mitgelieferten Schutzbeutel aufbewahrt werden. 1. Um die Kalibration des Sofia zu überprüfen, wählen Sie Kalibration aus dem Hauptmenü. 2. Legen Sie gemäß den Aufforderungen die Kalibrationskassette in Sofia ein und schließen Sie das Schubfach. Sofia führt die Kalibrierprüfung automatisch innerhalb von zwei Minuten durch, wobei keine Benutzereingaben erforderlich sind. Der Sofia meldet, wenn die Kalibrierprüfung abgeschlossen ist. OK wählen, um zum Hauptmenü zurückzukehren. HINWEIS: Falls die Kalibrierprüfung nicht erfolgreich ausgeführt werden konnte, benachrichtigen Sie bitte den Verantwortlichen vor Ort, oder wenden Sie sich für Unterstützung an den technischen Support von Quidel, Montag bis Freitag zwischen 7 und 17 Uhr pazifische Zeit: (in den USA); (außerhalb der USA); Fax: ; customerservice@quidel.com (Kundendienst); technicalsupport@quidel.com (technischer Support), oder wenden Sie sich an Ihr Vertriebsunternehmen vor Ort. Sofia Strep A+ FIA Seite 4 von 31

5 Sofia 2 Kalibrierprüfung Die Kalibrierprüfung sollte alle 30 Tage durchgeführt werden. Sofia 2 kann so eingerichtet werden, dass eine Erinnerung zur Durchführung der Kalibrierprüfung ausgeben wird. Bei der obligatorischen Kalibrierprüfung werden die Optik und die Berechnungssysteme des Sofia 2 mithilfe einer speziellen Kalibrationskassette überprüft. Diese Kalibrationskassette gehört zum Lieferumfang des Sofia 2. Einzelheiten zur Kalibrierprüfung finden sich im Sofia 2-Benutzerhandbuch. Wichtig: Zwischen den Tests muss die Kalibrationskassette zum Lichtschutz im mitgelieferten Schutzbeutel aufbewahrt werden. 1. Um die Kalibrierung des Sofia 2 zu überprüfen, wählen Sie Kalibrierung starten aus dem Hauptmenü. 2. Nach erfolgter Aufforderung die Kalibrations- Kassette in Sofia 2 einlegen und das Schubfach schließen. Sofia 2 wird die Kalibrationsprüfung automatisch innerhalb von zwei Minuten durchführen, wobei keine Benutzereingaben erforderlich sind. Sofia 2 meldet, wenn die Kalibrierprüfung abgeschlossen ist. Wählen Sie, um zum Bildschirm Test durchführen zurückzukehren. HINWEIS: Falls die Kalibrierprüfung nicht erfolgreich ausgeführt werden konnte, benachrichtigen Sie bitte den Verantwortlichen vor Ort, oder wenden Sie sich für Unterstützung an den technischen Support von Quidel, Montag bis Freitag zwischen 7 und 17 Uhr Pazifikzeit (GMT-08:00) unter (in den USA); (außerhalb der USA); Fax: ; customerservice@quidel.com (Kundendienst); technicalsupport@quidel.com (technischer Support), oder wenden Sie sich an Ihr Vertriebsunternehmen vor Ort. Integrierte Verfahrenskontrollen Der Sofia Strep A+ FIA enthält zwei integrierte Verfahrenskontrollfunktionen. Der Hersteller empfiehlt, die Ergebnisse dieser integrierten Verfahrenskontrollen täglich bei der Durchführung der ersten getesteten Probe zu dokumentieren. Eine Kontrolle des Extraktionsverfahrens erfolgt durch eine Farbveränderung von klar zu grün, während die Reagenzlösung gemischt wird. Die Farbveränderung kennzeichnet die Integrität der Reagenzlösung und weist darauf hin, dass das Extraktionsverfahren korrekt durchgeführt wurde. Sofia Strep A+ FIA Seite 5 von 31

6 Bei jeder Durchführung eines Tests im Sofia oder Sofia 2 wertet Sofia oder Sofia 2 die Verfahrenskontrollen in der Testkassette aus, und das Ergebnis wird auf dem Bildschirm angezeigt. Diese Information wird automatisch zusammen mit dem Testergebnis in Sofia oder Sofia 2 protokolliert. Durch ein gültiges Ergebnis der Verfahrenskontrolle wird bestätigt, dass die extrahierte Probe ordnungsgemäß durchgeflossen und die Kassette voll funktionsfähig ist. Diese Verfahrenskontrolle wird von Sofia oder Sofia 2 ausgewertet, nachdem sich die Testkassette 5 Minuten entwickelt hat. Falls die Probe nicht ordnungsgemäß durchgeflossen ist, zeigt Sofia oder Sofia 2 an, dass das Ergebnis ungültig ist. Falls dies passiert, überprüfen Sie das Verfahren und wiederholen Sie den Test mit einer neuen Patientenprobe und einer neuen Kassette. Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis im Sofia an. Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis im Sofia 2 an. Externe Qualitätskontrollen Anhand externer Kontrollen kann auch nachgewiesen werden, dass die Reagenzien richtig reagieren und der Assay korrekt durchgeführt wurde. Quidel empfiehlt die Durchführung der Positiv-und Negativ-Kontrollen wie folgt: einmal je ungeschulter Bediener einmal je neue Kit-Lieferung vorausgesetzt, dass jedes einzelne Los der Lieferung getestet wird wie unter Berücksichtigung Ihrer internen Qualitätskontrollverfahren und im Einklang mit regionalen und staatlichen Bestimmungen oder Akkreditierungsanforderungen als zusätzlich erforderlich erachtet wird. Um externe Kontrollen zu prüfen, muss der Anwender zuerst Qualitätskontrolle ausführen aus dem Hauptmenü wählen. Dann bei entsprechender Aufforderung die Benutzerkennung eingeben und die QK-Karte Sofia Strep A+ FIA Seite 6 von 31

7 (in der Kitverpackung) scannen. Diese Karte liefert Informationen über die jeweilige Kit-Charge einschließlich Chargennummer und Verfallsdatum. Der Benutzer wählt den gewünschten Modus ( WALK AWAY oder READ NOW ) und prüft die externen Kontrolltupfer. Externe Positiv- und Negativ-Kontrolltupfer werden im Kit mitgeliefert und müssen nach dem in dieser Packungsbeilage oder der Kurzanleitung beschriebenen Testverfahren getestet werden. Die Positiv-Kontrolle muss vor der Negativ-Kontrolle durchgeführt werden. Nach dem Prüfen der Positiv- und Negativkontrollen werden die Ergebnisse beider Tests in Sofia als bestanden oder nicht bestanden, in Sofia 2 als oder angezeigt. Keine Patiententests durchführen oder Patiententestergebnisse melden, wenn einer der QK-Tests fehlschlägt. Wiederholen Sie den Test, oder wenden Sie sich an den technischen Support von Quidel, bevor Patientenproben getestet werden. Wenn sowohl die positiven als auch die negativen Kontrollen fehlschlagen, den Test mit neuen positiven und negativen Kontrollen wiederholen. Wenn nur eine Kontrolle fehlschlägt, hat der Benutzer die Möglichkeit sowohl den positiven als auch den negativen Kontrolltest zu wiederholen ODER nur den fehlgeschlagenen Kontrolltest zu wiederholen. Der Benutzer kann auf dem Sofia-Bildschirm Überspringen oder auf dem Sofia 2-Bildschirm wählen, um den Kontrolltest, der zuvor erfolgreich war, zu überspringen. Die QK-Ergebnisse zeigen den übersprungenen Kontrolltest in Sofia als unbekannt oder als in Sofia 2 an. Weitere externe Kontrolltupfer sind separat erhältlich. Wenden Sie sich dazu bitte an den Kundendienst von Quidel unter der Rufnummer (innerhalb der USA) oder PROBENNAHME Verwenden Sie die im Kit enthaltenen Tupfer mit Viskose-Spitze, um den Rachenabstrich durchzuführen. Die Rachenabstrichproben nach standardmäßigen klinischen Methoden entnehmen. Die Zunge mit einem Spatel oder Löffel nach unten drücken. Streichen Sie den Tupfer über die Mandeln und den Rachen. Befolgen Sie dafür übliche Methoden zur Probennahme wie z. B. die von Facklam beschriebene Methode. 6 Falls eine Kultur benötigt wird, um negative Sofia Strep A+ FIA zu bestätigen, Organismen nachzuweisen und/oder für antimikrobielle Empfindlichkeitstest, nehmen Sie zwei Rachenabstrichproben - einen Tupfer zum Testen mit Sofia Strep A+ FIA und den anderen für die Kultur. Wenn die Bestätigung eines negativen Strep A+ FIA Sofia Testergebnis mithilfe eines von der FDA zugelassenen Assay durchgeführt wird, müssen ein oder mehr zusätzliche Rachenabstriche mit einer vergleichbaren Entnahmeart und Transportgerät genommen werden, um den Test wie vom Hersteller des Molekular-Assays beschrieben, zu ermöglichen. Sofia Strep A+ FIA Seite 7 von 31

8 TRANSPORT UND LAGERUNG DER PROBEN Es wird empfohlen, die Abstrichproben möglichst bald nach der Entnahme zu bearbeiten. Die Tupfer können bis zu 24 Stunden lang in einer sauberen, trockenen Kunststoffdose oder einem Plastikbeutel bei Raumtemperatur (23 C) oder bis zu 48 Stunden lang gekühlt (2 bis 8 C) aufbewahrt werden. Die folgenden Transportmedien und Lagerbedingungen wurden geprüft und sind ebenfalls akzeptabel (Tabelle 1): Tabelle 1 Empfohlene Transportmedien Transportmedien Empfohlene Lagerbedingungen 2 C bis 8 C Umgebungstemperatur BD BBL Kulturtupfer mit Flüssigkeit Stuart Media (#220099) 48 Stunden 48 Stunden Zusätzliche Tupfer für Kulturen müssen unter solchen Bedingungen transportiert und gelagert werden, bei denen die Lebensfähigkeit von Organismen nachgewiesenerweise erhalten bleibt. Befolgen Sie bei der jeweiligen Probennahme und Transportmethode die Anweisungen des Herstellers. Zusätzliche Tupfer für molekulare Tests müssen unter den vom Hersteller des Molekular-Assays empfohlenen Bedingungen transportiert und gelagert werden. TESTVERFAHREN Wichtig: Alle klinischen Proben und Testmaterialien müssen Raumtemperatur aufweisen, bevor mit dem Test begonnen wird. Die Reagenzlösung nicht verwenden, wenn sie vor dem Aufbrechen der Ampulle grün ist oder wenn sie sich nach dem Brechen der Glasampulle nicht grün verfärbt. Wenn der WALK AWAY Modus verwendet wird, nicht zulassen, dass sich die Testkassette auf dem Labortisch bzw. der Arbeitsplatte entwickelt, bevor die Kassette in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt wird. Wenn der READ NOW -Modus verwendet wird, muss die Testkassette volle 5 Minuten entwickelt werden, bevor sie in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt wird. Ablaufdatum: Vor Gebrauch das Verfallsdatum auf der äußeren Verpackung überprüfen. Nach Ablauf des auf dem Etikett aufgedruckten Verfallsdatums darf die Testkassette nicht mehr verwendet werden. 1. Überprüfen, ob bei Sofia oder Sofia 2 der gewünschte Modus eingestellt ist: WALK AWAY oder READ NOW Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Verwendung von Sofia und Sofia Vor der Durchführung des Assays EINMAL drücken, um die Glasampulle in der Reagenzlösungsflasche zu zerbrechen. Sofia Strep A+ FIA Seite 8 von 31

9 3. Die Reagenzlösungsflasche 5 Mal kräftig schütteln, um die Lösungen zu mischen. Die Lösung sollte eine grüne Farbe annehmen, nachdem die Ampulle gebrochen wird. 4. Reagenz hinzufügen: a) Gegen die Reagenzlösungsflasche klopfen bzw. diese schütteln, damit sich die gesamte Flüssigkeit am Boden ansammelt. b) Die Lasche abdrehen. c) Die Reagenzlösung langsam bis zur Fülllinie in das Reagenzröhrchen geben. 5. Den Tupfer mit der Patientenprobe in das Reagenzröhrchen einführen. Die Lösungen kräftig mischen, indem der Tupfer 5 Mal durch eine Aufund Abbewegung in das Röhrchen eingetaucht wird. 6. Den Tupfer 1 Minute lang im Reagenzröhrchen belassen. 7. Die Lösungen erneut kräftig mischen, indem der Tupfer 5 Mal durch eine Auf- und Abbewegung in das Röhrchen eingetaucht wird. Sofia Strep A+ FIA Seite 9 von 31

10 8. So viel Flüssigkeit wie möglich aus dem Tupfer ausdrücken, indem das Röhrchen beim Herausziehen des Tupfers mit einer vollständig drehenden Bewegung seitlich zusammengedrückt wird. Den Tupfer entsprechend dem Entsorgungsprotokoll für biologisch gefährlichen Abfall entsorgen. 9. Die mitgelieferte durchsichtige 120-μl-Fixvolumen-Pipette mit der Probe füllen: Zum Füllen der Fixvolumen-Pipette mit der Probe: a) Den oberen Ballon FEST zusammendrücken und die Pipettenspitze in die Probe einführen. b) Während sich die Pipettenspitze noch in der Probe befindet, langsam den Druck vom oberen Ballon nehmen, um die Pipette zu füllen. 10. Den oberen Ballon fest zusammendrücken, um den Inhalt aus der Pipette in die Probenvertiefung der Probenkassette zu dispensieren. Zusätzliche Flüssigkeit im Überlauf-Ballon sollte zurückgelassen werden. HINWEIS: Die Fixvolumen-Pipette ist dazu bestimmt, die korrekte Patientenprobenmenge zu sammeln und zu dispensieren. Die Pipette in einem Behälter für biologisch gefährlichen Abfall entsorgen. HINWEIS: Keine Probe aus dem Reagenzröhrchen verschütten. Die enthaltene durchsichtige 120 µl Fixvolumenpipette verwenden. 11. Sofort mit dem nächsten Abschnitt Verwendung von Sofia und Sofia 2 fortfahren, um den Test abzuschließen. Sofia Strep A+ FIA Seite 10 von 31

11 VERWENDUNG VON SOFIA UND SOFIA 2 Modi WALK AWAY / READ NOW Die Bedienungsanleitung für Sofia oder Sofia 2 finden Sie im Benutzerhandbuch. Sofia und Sofia 2 können für zwei unterschiedliche Modi (WALK AWAY und READ NOW) eingerichtet werden. Die Verfahren für jeden einzelnen Modus sind nachfolgend beschrieben. Modus WALK AWAY Im Modus WALK AWAY setzt der Benutzer die Testkassette sofort in Sofia oder Sofia 2 ein. Der Benutzer kehrt nach 5 Minuten zurück, um die Testergebnisse abzulesen. In diesem Modus misst Sofia oder Sofia 2 automatisch die Zeit der Testentwicklung vor dem Scannen und der Anzeige der Testergebnisse. Modus READ NOW Absolut wichtig: Der Test muss für VOLLE 5 Minuten entwickelt werden, BEVOR er in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt wird. Der Benutzer muss die Testkassette zuerst 5 Minuten (außerhalb Sofia oder Sofia 2) auf eine Ablage oder den Labortisch legen und die Zeitdauer des Entwicklungsschritts manuell messen. Dann wird die Testkassette in Sofia oder Sofia 2 eingesetzt. Im Modus READ NOW scannt Sofia oder Sofia 2 die Kassette und zeigt das Testergebnis innerhalb von einer Minute an. Hinweis: Das Ergebnis bleibt nach der empfohlenen Entwicklungszeit von 5 Minuten weitere 5 Minuten lang stabil. Tipps zum Testen bei höherem Probenaufkommen Zur Vereinfachung des Testens bei höherem Probenaufkommen, kann der Benutzer eine oder mehr Reagenzlösungsfläschchen im Voraus vorbereiten. Der Benutzer kann die Ampulle in jedem Reagenzlösungsfläschchen zerbrechen, es zum Vermischen der Lösungen schütteln und die noch verschlossenen Fläschchen auf der Arbeitsplatte bei Raumtemperatur bis zu 12 Stunden ohne Verlust der Aktivität vor der Verwendung mit (einer) Abstrichprobe(n) aufbewahren. Absolut wichtig: Die Testkassette muss bis kurz vor ihrer Verwendung im Folienbeutel versiegelt bleiben und darf erst dann der Umgebung ausgesetzt werden. Sofia Strep A+ FIA Seite 11 von 31

12 TEST MIT SOFIA DURCHFÜHREN 1. Die Benutzer-ID mit dem Barcode-Scanner einlesen oder manuell über das Tastenfeld eingeben. HINWEIS: Falls versehentlich ein falscher Barcode eingescannt wurde, das Feld mit den Pfeiltasten auf dem Sofia erneut hervorheben und einfach einen neuen Scanvorgang mit dem richtigen Barcode durchführen. Der vorherige Barcode wird vom richtigen Barcode überschrieben. 2. Patienten-ID oder Bestellnr. mit dem tragbaren Barcode-Scanner einlesen oder manuell über das Tastenfeld eingeben. 3. Auf Test starten und Sofias Schubfach öffnet sich automatisch. 4. Stellen Sie sicher, dass der richtige Entwicklungsmodus, WALK AWAY oder READ NOW, ausgewählt worden ist. Legen Sie die vorbereitete Testkassette des Patienten in das Schubfach ein und schließen Sie dieses vorsichtig. Sofia Strep A+ FIA Seite 12 von 31

13 5. Sofia startet automatisch und zeigt den Fortschritt wie im Beispiel unten an. Im Modus WALK AWAY werden die Testergebnisse nach ungefähr 5 Minuten auf dem Bildschirm angezeigt. Im Modus READ NOW werden die Testergebnisse innerhalb von 1 Minute auf dem Bildschirm angezeigt. Siehe Abschnitt Sofia Auswertung der Ergebnisse. Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt eine verbleibende Zeit von 4 Minuten und 13 Sekunden für den Test im Modus WALK AWAY. Sofia wertet die Ergebnisse nach 5 Minuten aus und zeigt sie an. SOFIA AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Nach Abschluss des Tests werden die Ergebnisse auf dem Sofia-Bildschirm angezeigt. Die Ergebnisse können automatisch auf dem integrierten Drucker gedruckt werden, wenn die entsprechende Option aktiviert ist. Die fluoreszenten Testlinien sind mit dem bloßen Auge nicht zu erkennen. Auf dem Sofia-Bildschirm wird angezeigt, ob die Verfahrenskontrolle gültig oder ungültig ist, und es wird jeweils ein positives oder negatives Ergebnis für Strep A ausgegeben. Wenn die Verfahrenskontrolle ungültig ist, den Test mit einer neuen Patientenprobe und einer neuen Testkassette wiederholen. Sofia Strep A+ FIA Seite 13 von 31

14 Positive Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein gültiges positives Ergebnis für Strep A. HINWEIS: Ein positives Testergebnis schließt Koinfektionen mit anderen Pathogenen nicht aus. Negative Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein gültiges negatives Ergebnis für Strep A. Ein negatives Ergebnis schließt eine Streptokokken-Infektion der Gruppe A nicht aus. Negative Ergebnisse des Sofia für Strep A+ FIA müssen durch Kultur oder einen von der FDA zugelassenen molekularen Assay für Streptokokken der Gruppe A bestätigt werden. Ungültige Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis an. Ungültiges Ergebnis: Wenn der Test ungültig ist, ist ein neuer Test mit einer neuen Patientenprobe und einer neuen Testkassette durchzuführen. Sofia Strep A+ FIA Seite 14 von 31

15 TEST MIT SOFIA 2 DURCHFÜHREN 1. Die Benutzer-ID mit dem integrierten Barcode-Scanner einlesen oder manuell über das Tastenfeld auf dem Touchscreen eingeben. HINWEIS: Das Feld mittels dem Touchscreen von Sofia 2 erneut hervorheben, falls Sie irrtümlich den falschen Barcode scannen. Scannen Sie den richtigen Strichcode einfach erneut, und der vorherige Strichcode wird mit dem richtigen überschrieben. 2. Die Patienten-ID und ggf. die Auftragsnummer mit dem Barcodescanner einlesen oder die Daten mit dem Tastenfeld auf dem Touchscreen manuell eingeben. 3. Sicherstellen, dass der richtige Entwicklungsmodus, WALK AWAY oder READ NOW, ausgewählt worden ist. drücken und das Schubfach von Sofia 2 öffnen. Sofia Strep A+ FIA Seite 15 von 31

16 4. Die vorbereitete Testkassette in das Schubfach von Sofia 2 einlegen und das Schubfach schließen. 5. Sofia 2 startet automatisch und zeigt den Fortschritt wie im Beispiel unten an. Im Modus WALK AWAY werden die Testergebnisse nach ungefähr 5 Minuten auf dem Bildschirm angezeigt. Im Modus READ NOW werden die Testergebnisse innerhalb von 1 Minute auf dem Bildschirm angezeigt. Siehe Abschnitt Sofia 2 Auswertung der Ergebnisse. Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt eine verbleibende Zeit von 2 Minuten und 34 Sekunden für den Test im Modus WALK AWAY. Sofia 2 wertet die Ergebnisse nach 5 Minuten aus und zeigt sie an. SOFIA 2 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Nach Abschluss des Tests werden die Ergebnisse auf dem Sofia 2-Bildschirm angezeigt. Die fluoreszierenden Testlinien sind mit dem bloßen Auge nicht zu erkennen. Auf dem Sofia 2-Bildschirm wird angezeigt, ob die Verfahrenskontrolle oder ist, und es wird jeweils ein oder Ergebnis für Strep A ausgegeben. Wenn die Verfahrenskontrolle ist, den Test mit einer neuen Patientenprobe und einer neuen Testkassette wiederholen. Positive Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein gültiges positives Ergebnis für Strep A. HINWEIS: Ein positives Testergebnis schließt Koinfektionen mit anderen Pathogenen nicht aus. Sofia Strep A+ FIA Seite 16 von 31

17 Negative Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein gültiges negatives Ergebnis für Strep A. Ein negatives Ergebnis schließt eine Streptokokken- Infektion der Gruppe A nicht aus. Alle negativen Sofia Testergebnisse für Strep A+ FIA müssen durch Kultur oder ein von der FDA zugelassenes molekulares Assay bestätigt werden. Ungültige Ergebnisse: Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis an. Ungültiges Ergebnis: Wenn der Test ungültig ist, ist ein neuer Test mit einer neuen Patientenprobe und einer neuen Testkassette durchzuführen. EINSCHRÄNKUNGEN Der Inhalt dieser Testpackung dient dem qualitativen Nachweis von Antigenen von Streptokokken der Gruppe A durch Rachenabstriche. Der Test erkennt sowohl lebensfähige als auch nicht lebensfähige Streptokokken-Bakterien der Gruppe A und kann auch bei Abwesenheit lebender Organismen ein positives Ergebnis hervorbringen. Atemwegsinfektionen, einschließlich Pharyngitis, können durch Streptokokken von anderen Serogruppen als Gruppe A sowie von anderen Pathogenen verursacht werden. Der Sofia Strep A+ FIA unterscheidet asymptomatische Träger von Streptokokken der Gruppe A nicht von solchen, die eine Streptokokken-Infektion aufweisen. 7 Ein negatives Testergebnis kann zustande kommen, wenn die Antigenkonzentration in einer Probe unter der Nachweisgrenze des Tests liegt oder wenn eine Probe falsch entnommen, transportiert oder gelagert wurde. Die Nichtbefolgung des Testverfahrens kann die Testleistung stark beeinflussen bzw. das Testergebnis ungültig machen. Alle negativen Sofia Testergebnisse für Strep A+ FIA müssen durch Kultur oder ein von der FDA zugelassenes molukulares Verfahren bestätigt werden. Wenn ein negatives Sofia Strep A+ Ergebnis durch ein molekulares Verfahren bestätigt wurde und die klinischen Symptome weiter andauern oder wenn sich akuter Streptokokkenrheumatismus (acute rheumatic fever, ARF) einstellt, sind nachfolgende Tests mit der Kulturmethode erforderlich. Im Modus READ NOW können falsch negative und/oder ungültige Ergebnisse auftreten, wenn die Testkassette vor dem Auslesen nicht ganze 5 Minuten lang inkubiert wurde. Testergebnisse müssen in Verbindung mit anderen, dem Arzt zur Verfügung stehenden klinischen Daten beurteilt werden. Sofia Strep A+ FIA Seite 17 von 31

18 Negative Testergebnisse schließen etwaige andere Infektionen nicht aus. Positive Testergebnisse schließen eine Koinfektion mit anderen Pathogenen nicht aus. Corynebacterium pseudodiphtheriticum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Streptococcus parasanginis, Streptokokken der Gruppen C, D und F, Adenovirus vom Typ 1 und 3, Epstein-Barr-Virus und Mumps (Enders) können sich störend auf den Assay auswirken. Blut, Mucin und Nacho Flavor Doritos können sich störend auf den Assay auswirken. ERWARTETE WERTE Streptokokkenbakterien der Gruppe A sind für ca. 19 % aller Infektionen der oberen Atemwege verantwortlich. 8 Die Infektion wird insbesondere im Winter und zum Frühlingsanfang beobachtet, wobei die meisten Fälle bei Patienten auftreten, die in stark besiedelten Regionen wohnen. In Übereinstimmung mit diesen Zahlen lag bei der multizentrischen klinischen Studie, die 2014 von Quidel durchgeführt wurde, für 21% (175/851) der Patienten mit Pharyngitis bei Strep A ein kulturpositives Ergebnis vor. Annähernd die Hälfte dieser Personen (45 %) waren männlich. Das Alter der Patienten lag zwischen 3 und 76 Jahren, und 80 % (685/851) waren Kinder (3 bis 17 Jahre alt). LEISTUNGSCHARAKTERISTIKA Die folgenden Studien wurden mit Sofia Strep A+ und Sofia durchgeführt. Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA im Vergleich zur Zellkultur und im Vergleich zu Zellkultur mittels PCR Die Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA im Modus WALK AWAY von Sofia wurde mit standardmäßiger Bakterienkultur und Nachweis und einem von der FDA zugelassenen RT-PCR-Assay für Streptokokken der Gruppe A in einer multizentrischen klinischen Feldstudie verglichen. Diese Studie wurde 2014 von ungeschulten medizinischen Fachkräften an sieben verschiedenen CLIA-freigestellten Standorten in verschiedenen geografischen Regionen in den USA durchgeführt. In dieser multizentrischen Point-of-Care- Feldstudie wurden jeweils zwei (2) Rachenabstriche von achthunderteinundfünfzig (851) Patienten mit Symptomen entnommen, die auf bakterielle Pharyngitis schließen ließen. Ein Rachenabstrich wurde frisch am CLIA-befreiten Standort im Sofia Strep A+ FIA untersucht. Ein zweiter Rachenabstrich wurde in ein Transportmedium gelegt und auf Eispackungen an ein zentrales Referenzlabor transportiert. Der Rachenabstrich wurde auf einer Schafsblut-Agarplatte (SBA) ausgestrichen und bis zu 48 Stunden lang kultiviert. Ein Teil des Transportmediums wurde anschließend im PCR-Assay getestet. Die Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA wurde durch einen Vergleich des Ergebnisses des FIA-Schnelltests mit dem entsprechenden Kulturergebnis (Tabelle 2) ermittelt; die PCR-diskordante Auflösung ist in den Fußnoten aufgeführt. Sofia Strep A+ FIA Seite 18 von 31

19 Tabelle 2 Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA im Vergleich zur Kultur Modus WALK AWAY Kultur Sensitivität = 93.7% (164/175) Pos. Neg. (95 % KI=89,1-96,5 %) Sofia Pos * Spezifität = 94.4% (638/676) Sofia Neg. 11** 638 (95 % KI=92,4-95,9 %) Gesamt: PPV = 81.2% (164/202) NPV = 98.3% (638/649) *Vierundzwanzig (24) der 38 diskordanten Proben zeigten in einem anderen von der FDA zugelassenen molekularbiologischen Messgerät ein positives Ergebnis für GAS. **Drei (3) der 11 diskordanten Proben zeigten in einem anderen von der FDA zugelassenen molekularbiologischen Messgerät waren negativ und 8 waren positiv. Reproduzierbarkeitsstudie Die Reproduzierbarkeit des Sofia Strep A+ FIA mit Sofia wurde In drei verschiedenen Laboren evaluiert. Zwei verschiedene Bediener an jedem Standort testeten eine Reihe codierter, arrangierter Proben, die in negativer klinischer Matrix vorbereitet waren und sich hinsichtlich Streptokokken der Gruppe A auf negativ (keine Bakterien) bis moderat positiv (3 x LOD) beliefen. Die Inter-Labor-Übereinstimmung (Tabelle 3) betrug % für negative Proben und % für positive Proben. Standort Tabelle 3 Sofia Strep A+ FIA Reproduzierbarkeitsstudie Inter-Labor-Übereinstimmung Negativ* (C 0) Hoch negativ* (C 5) Schwach positiv** (C 95) Mod. positiv** (C 100) 1 30/30 27/30 27/30 30/ /30 29/30 23/30 30/ /30 25/30 28/30 30/30 Gesamt 90/90 81/90 78/90 90/90 % Allgemeine Übereinstimmung (95 % KI) 100% (95.9%-100.0%) *Nicht nachgewiesene Bakterien/gesamt **Nachgewiesene Bakterien/gesamt 90% (82.1%-94.7%) 87% (78.1%-92.2%) 100% (95.9%-100.0%) Sofia Strep A+ FIA Seite 19 von 31

20 Nachweisgrenze Die Nachweisgrenze (LOD) für den Sofia Strep A+ FIA mit Sofia wurde anhand von 3 Stämmen von Streptococcus pyogenes der Gruppe A ermittelt. Die LOD belief sich auf 2,76E+03 bis 8,13E+03 koloniebildende Einheiten (kbe)/test (Tabelle 4). Stamm Bruno [CIP ] CDC-SS-1402 CDC-SS-1460 Tabelle 4 Nachweisgrenzen für Sofia Strep A+ FIA kbe/test = koloniebildende Einheiten/Test Niedrigster nachweisbarer Wert* 4,00E+03 kbe/test 8,13E+03 kbe/test 2,76E+03 kbe/test *Die Bakterienkonzentrationen wurden mittels Grenzverdünnung, Bakterienkulturen und Kolonienzählung ermittelt, um den kbe-/test-wert zu bestimmen. Analytische Reaktivität Die analytische Reaktivität für den Sofia Strep A+ FIA mit Sofia wurde mit 21 Virusstämmen von Streptococcus pyogenes der Gruppe A bei 1,74E+04 koloniebildenden Einheiten (kbe)/test (Tabelle 5) ermittelt. Tabelle 5 Analytische Reaktivität Streptococcus pyogenes-stamm Stamm Nr. 1 (ATCC-19615) Stamm Nr. 2 (ATCC ) Stamm Nr. 3 (ATCC ) Stamm Nr. 4 (klinisches Isolat 52123) Stamm Nr. 5 (klinisches Isolat 52120) Stamm Nr. 6 (klinisches Isolat 62055) Stamm Nr. 7 (klinisches Isolat 52152) Stamm Nr. 8 (klinisches Isolat 62092) Stamm Nr. 9 (klinisches Isolat 52151) Stamm Nr. 10 (ATCC ) Stamm Nr. 11 (ATCC-1315) Stamm Nr. 12 (ATCC ) Stamm Nr. 13 (ATCC-12203) Stamm Nr. 14 (ATCC ) Stamm Nr. 15 (klinisches Isolat 52154) Stamm Nr. 16 (klinisches Isolat 5036) Stamm Nr. 17 (klinisches Isolat 5095) Stamm Nr. 18 (klinisches Isolat 5017) Stamm Nr. 19 (klinisches Isolat 5060) Stamm Nr. 20 (klinisches Isolat 5112) Stamm Nr. 21 (klinisches Isolat 5008) Sofia Strep A+ FIA Seite 20 von 31

21 Analytische Spezifität Kreuzreaktivität Die Kreuzreaktivität des Sofia Strep A+ FIA mit Sofia wurde mit insgesamt 61 bakteriellen und pilzlichen Streptokokken-Mikroorganismen (nicht Gruppe A) und 26 Virusisolaten bewertet. Keine der in Tabelle 6 aufgeführten Mikroorganismen oder Viren wiesen Anzeichen von Kreuzreaktivität im Assay auf. Dieselben Mikroorganismen aus Tabelle 6 wurden mit Streptokokken der Gruppe A vorgemischt und im Sofia Strep A+ FIA getestet. Tabelle 6 Kreuzreaktivität Organismus/Virus Arcanobacterium haemolyticum Bacteroides fragilis Bordetella pertussis Candida albicans Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium pseudodiphtheriticum* Enterococcus faecalis* Enterococcus faecium Escherichia coli Fusobacterium necrophorum Haemophilus influenzae Haemophilus parahaemolyticus Klebsiella pneumoniae Moraxella catarrhalis Neisseria gonorrhoeae Neisseria lactamica Neisseria meningitides Neisseria sicca Neisseria subflava Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Serratia marcescens Staphylococcus aureus* Staphylococcus epidermidis Staphylococcus haemolyticus Streptococcus intermedius Staphylococcus saprophyticus Streptococcus anginosus Streptococcus gordonii Getestete Konzentration** 3,00E+05 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+04 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 1,40E+06 kbe/test 1,50E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 3,00E+04 kbe/test Sofia Strep A+ FIA Seite 21 von 31

22 Organismus/Virus Streptococcus mitis Streptococcus mutans* Streptococcus oralis Streptococcus parasanginis* Streptococcus pneumoniae Streptococcus salivarius Streptococcus sanguinis Streptokokken der Gruppe B, Stamm Nr. 1: Streptococcus agalactiae Streptokokken der Gruppe B, Stamm Nr. 2 Streptokokken der Gruppe B, Stamm Nr. 3 Streptokokken der Gruppe B, Stamm Nr. 4 Streptokokken der Gruppe B, Stamm Nr. 5 Streptokokken der Gruppe C, Stamm Nr. 1 Streptokokken der Gruppe C, Stamm Nr. 2 Streptokokken der Gruppe C, Stamm Nr. 3 Streptokokken der Gruppe C, Stamm Nr. 4 Streptococcus dysgalactiae* Streptokokken der Gruppe C, Stamm Nr. 5 Streptokokken der Gruppe D, Stamm Nr. 1: Enterococcus casseliflavus Streptokokken der Gruppe D, Stamm Nr. 2 Streptokokken der Gruppe D, Stamm Nr. 3* Streptokokken der Gruppe D, Stamm Nr. 4: Enterococcus faecalis Streptokokken der Gruppe D, Stamm Nr. 5: Enterococcus faecalis Streptokokken der Gruppe F, Stamm Nr. 1 Streptokokken der Gruppe F, Stamm Nr. 2 Streptokokken der Gruppe F, Stamm Nr. 3 Streptokokken der Gruppe F, Stamm Nr. 4* Streptokokken der Gruppe F, Stamm Nr. 5 Streptokokken der Gruppe G, Stamm Nr. 1: Streptococcus dysgalactiae Streptokokken der Gruppe G, Stamm Nr. 2 Streptokokken der Gruppe G, Stamm Nr. 3 Streptokokken der Gruppe G, Stamm Nr. 4 Streptokokken der Gruppe G, Stamm Nr. 5 Adenovirus Typ 1* Adenovirus Typ 3* Adenovirus Typ 4 Adenovirus Typ 5 Adenovirus Typ 11 Coronavirus 229E Getestete Konzentration** 3,00E+04 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 1,00E+05 kbe/test 1,00E+06 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 3,00E+05 kbe/test 3,00E+07 kbe/test 3,00E+11 TCID 50/Test 3,00E+05 TCID 50/Test 7,50E+03 TCID 50/Test 3,00E+05 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test Sofia Strep A+ FIA Seite 22 von 31

23 Organismus/Virus Coronavirus OC43 Coxsackievirus B5 (Faulkner) Cytomegalovirus (Towne) Echovirus Typ 3 Epstein Barr Virus (EBV)* Herpes-Simplex-Virus 1 Herpes-Simplex-Virus 2 Influenza A/New Jersey/8/76 (H1N1) Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2) Influenza B/Hong Kong/5/72 Influenza B/Panama/45/90 Influenza C/Taylor/1233/47 Masern (Edmonston) Mumps (Enders)* Parainfluenzavirus 1 Parainfluenzavirus 2 Parainfluenzavirus 3 Parainfluenzavirus 4A Rhinovirus Typ 2 Rhinovirus Typ 15 kbe/test = koloniebildende Einheiten/Test TCID50/Test = 50 % Gewebekultur-Infektionsdosis *Dieser Organismus/Virus kann sich störend auf diesen Assay auswirken. Getestete Konzentration** 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+06 TCID 50/Test 3,00E+03 TCID 50/Test 1,50E+04 TCID 50/Test 3,00E+07 Genomkopien/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 1,50E+04 TCID 50/Test 1,50E+04 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+03 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 1,10E+05 TCID 50/Test 6,80E+05 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test 3,00E+03 TCID 50/Test 3,00E+04 TCID 50/Test **Die Bakterienkonzentrationen wurden mittels Grenzverdünnung, Bakterienkulturen und Kolonienzählung ermittelt, um den kbe- /Test-Wert zu bestimmen. Virenkonzentrationen wurden mit Standardvirologiemethoden (Reed-Muench) bestimmt. Sofia Strep A+ FIA Seite 23 von 31

24 Störsubstanzen Mehrere rezeptfreie Produkte, Vollblut, Mucin und Blutagar wurden beurteilt und wirkten sich bei den getesteten Konzentrationen nicht auf den Sofia Strep A+ FIA und Sofia aus (Tabelle 7). Tabelle 7 Störtests Substanz Crest Pro-Health Deep Clean Mint Mundspülung (Cetylpyridniumchlorid) Listerine Original antiseptische Mundspülung (Eucalyptol, Menthol, Methylsalicylat und Thymol) Listerine Cool Mint antiseptische Mundspülung (Eucalyptol, Menthol, Methylsalicylat und Thymol) RiteAid Sore Throat Relief (Benzocain und Menthol) Chloraseptic Max Sore Throat (Phenol und Glycerin) Dimetapp Children s Cold & Cough (Brompheniraminmaleat, Dextromethorphan HBr und Phenylephrin-HCl) RiteAid Children s Cold & Allergy (Brompheniraminmaleat und Phenylephrin-HCl) CVS Children s Cold & Cough DM (Brompheniraminmaleat, Dextromethorphan HBr und Phenylephrin-HCl) RiteAid Tussin Cough & Cold Mucus Relief CF (Dextromethorphan HBr, Guaifenesin und Phenylephrin-HCl) Robitussin Max Strength Multi-Symptom CF Max (Dextromethorphan HBr, Guaifenesin und Phenylephrin-HCl) Robitussin Night Time Multi-Symptom Cold CF (Acetaminophen, Diphenhydramin- HCl und Phenylephrin-HCl) Cepacol Sore Throat Cherry (Benzocain und Menthol) Halls Triple Soothing Action Cherry (Menthol) Halls Triple Soothing Action Menthol-lyptus (Menthol) Ricola Schweizer Kräuterzucker (Menthol) Sucrets Complete Vapor Cherry (Dyclonin-Hydrochlorid und Menthol) Chloraseptic Sore Throat Cherry (Phenol und Glycerin) BreathSavers Spearmint (Cetylpyridniumchlorid) Tic Tac fresh mints (Eucalyptol, Menthol, Methylsalicylat und Thymol) Cheetos, Flaming Hot Doritos, Nacho Flavor Frisches Vollblut Mucin Schafsblutagar (5 % Schafsblut) Pferdeblutagar (5 % Pferdeblut) *Nacho Flavor Doritos wirkten störend bei 25 % w/v **Frisches Vollblut wirkte störend bei 100 μl/tupfer ***Mucin (Rinder-Unterkieferdrüse) wirkte störend bei 28,7 mg/ml Konzentration 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % v/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 24 % w/v 12 % w/v 12 % w/v* 75 μl/tupfer** 4,3 % w/v*** 24 % w/v 24 % w/v Sofia Strep A+ FIA Seite 24 von 31

25 CLIA-Freistellungsstudien Neben der oben erwähnten prospektiven Studie im Modus WALK AWAY, wurde die Genauigkeit des Sofia A+ FIA im Modus READ NOW von Sofia mit standardmäßiger Bakterienkultur und Nachweis und in einer multizentrischen klinischen Feldstudie verglichen. Diese Studie wurde im Jahr 2016 von ungeschulten medizinischen Fachkräften an drei verschiedenen CLIA-freigestellten Standorten in verschiedenen geografischen Regionen in den USA durchgeführt. In dieser Studie wurden drei (3) Rachenabstrichproben parallel von jeweils jedem der dreihundertachtungsechzig (368) Patienten mit Symptomen entnommen, die auf eine bakterielle Pharyngitis hinwiesen. Ein Tupfer wurde für Standardtest verwendet. Ein Rachenabstrich wurde frisch am Prüfzentrum im Sofia Strep A+ FIA im READ NOW Modus getestet. Ein dritter Rachenabstrich wurde in ein Transportmedium gelegt und auf Eispackungen zu einem zentralen Referenzlabor zum Anlegen einer Kultur transportiert. Der Rachenabstrich für die Kultur wurde auf einer Schafsblut-Agarplatte (SBA) ausgestrichen und bis zu 48 Stunden lang kultiviert. Der Nachweis von β-hämolytischen Kolonien wurde mithilfe von Standardverfahren durchgeführt. Die Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA wurde durch einen Vergleich des Ergebnisses des FIA-Schnelltests mit dem entsprechenden Kulturergebnis (Tabelle 8) ermittelt. Tabelle 8 Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA im Vergleich zur Kultur Modus READ NOW Kultur Sensitivität = 93.3% (98/105) Pos. Neg. (95 % KI=86,9-96,7 %) Sofia Pos * Spezifität = 93.5% (246/263) Sofia Neg. 7** 246 (95 % KI=89,9-95,9 %) Gesamt: PPV = 85.2% (98/115) NPV = 97.2% (246/253) *Neun (9) der 17 diskordanten Proben zeigten in einem anderen von der FDA zugelassenen molekularbiologischen Messgerät ein positives Ergebnis für GAS und 8 waren negativ. **Drei (3) der 7 diskordanten Proben zeigten in einem anderen von der FDA zugelassenen molekularbiologischen Messgerät ein negatives Ergebnis und 4 waren positiv. Studie in der Nähe des Cut-Off Eine zusätzliche Studie wurde durchgeführt, um zu zeigen, dass ungeschulte, vorgesehene Anwender den Test mit leicht reaktiven Proben konsistent und genau durchführen können. Die Studie bestand aus 3 verschiedenen CLIA-freigestellten Standorten, an denen der Sofia Strep A+ FIA und Sofia mithilfe codierter, randomisierter Testplatten mit simulierten Proben beurteilt wurde, einschließlich einer schwach positiven (C 95 eine Konzentration am Assay-Cutoff) und einer schwach negativen (C 5 eine Konzentration knapp unterhalb des Assay-Cutoffs). Zwei oder mehr Bediener an jedem Standort (insgesamt 10 Bediener) testeten die Testplatte an jedem der 10 Tage, die über einen Zeitraum von etwa 2 Wochen verteilt waren. Die Leistung des Sofia Strep A+ FIA mit Proben nahe dem Assay-Cutoff war akzeptabel, wenn dieser durch ungeschulte vorgesehene Anwender durchgeführt wurde. Die prozentuale Übereinstimmung mit den erwarteten Ergebnissen bei der jeweiligen Probe wird in Tabelle 9 dargestellt. Sofia Strep A+ FIA Seite 25 von 31

26 Probenpegel Streptokokken A schwach positiv (C 95) Streptokokken A schwach negativ (C 5) Tabelle 9 Sofia Strep A+ FIA-Leistung nahe dem Cutoff (alle Standorte) *Nachgewiesene Bakterien/gesamt **Nicht nachgewiesene Bakterien/gesamt Ungeschulte, vorgesehene Anwender Prozentuale Übereinstimmung mit den erwarteten 95 % Konfidenzintervall Ergebnissen 90% (54/60)* 79.9%-95.3% 97% (58/60)** 88.6%-99.1% Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA mit Sofia 2 Die folgenden Studien wurden durchgeführt, um die Äquivalenz zwischen Sofia und Sofia 2 beim Testen des Sofia Strep A+ FIA zu zeigen. Methodenvergleich Die Aussagekraft des Sofia Strep A+ FIA beim Test mit Sofia vs. Sofia 2 wurde mit einer Testplatte von 200 klinischen Proben verglichen. Diese Feldstudie wurde an 3 Laborstandorten für vorgesehene Benutzer mit identischen Testplatten von bekannten positiven und negativen klinischen Proben durchgeführt, die in einer einzigartigen negativen klinischen Matrix angeordnet waren. Jeder Standort verwendete 2 Sofias und 2 Sofias 2; von jedem Instrumententyp wurden in der Studie also 6 Instrumente eingesetzt. Einhundert (100) positive und einhundert (100) negative Proben wurden in die Testplatten integriert. Die Testplatteninhalte wurden mit dem Cutoff des Sofia Strep A+ FIA so vorbereitet, dass eine breite Spanne von negativen (C 0 und C 5) und positiven Proben so angeordnet ist, dass ungefähr 50 % der Proben im Bereich der Erkennungsgrenze (C 95), die übrigen moderat positiven gleichmäßig verteilt über den Assaybereich (2 3x LOD, 4 5x LOD und >5x LOD) lagen. Alle Proben wurden codiert und zur Vorbereitung der randomisierten Testplatten verwendet. Insgesamt wurden pro Standort 200 Proben geprüft, die zu insgesamt 600 Ergebnissen führten. Sofia Strep A+ FIA Seite 26 von 31

27 Vergleichsergebnisse für Sofia vs. Sofia 2 sind in der nachfolgenden Tabelle 10 dargestellt. Die Strep A positive Übereinstimmung betrug 99 %; die negative Übereinstimmung betrug 97 %. Tabelle 10 Sofia Strep A+ FIA Sofia vs. Sofia 2 Methodenvergleich Sofia Positive 99 % (369/374) Pos. Neg. Übereinstimmung (95 %CI = 96,9 % 99,4 %) in % = Sofia 2 Pos b Negative Sofia 2 Neg 5 a 219 Gesamt: Übereinstimmung in % = 97 % (219/226) (95 % CI = 93,7 % 98,5 %) a Es traten 5 diskordante Sofia 2 negativ/sofia positive Ergebnisse für Strep A auf, davon 3 stark negative (C 5) und 2 echt negative (C 0) Proben. Die 2 echt negativen (C 0) Ergebnisse, die ein falsch positives Ergebnis in Sofia zeigten, waren auf eine Kontaminierung zurückzuführen. b Es traten 7 diskordante Sofia 2 positive/sofia negative Ergebnisse für Strep A auf, wobei alle hoch negative (C 5) Proben betrafen. Reproduzierbarkeit Unter Verwendung von 3 unterschiedlichen Laboratorien, wobei es sich beim einen um Quidel handelte, wurde eine Reproduzierbarkeitsstudie mit dem Sofia Strep A+ FIA durchgeführt. Zwei bis drei verschiedene Bediener an jedem Standort testeten eine Testplatte aus 9 arrangierten Proben, die in einer negativen klinischen Matrix vorbereitet waren und einen Bereich von negativ bis moderat positiven Strep A- Konzentrationen abdeckten. Jeder Bediener prüfte eine Testplatte an 5 verschiedenen Tagen innerhalb ungefähr 1 Woche.* Insgesamt wurden 6 Sofia 2 eingesetzt. Die Übereinstimmung zwischen den Laboratorien für den Sofia Strep A+ FIA für alle Proben betrug zwischen 98,9 und 100 % (Tabelle 11). Standort Tabelle 11 Sofia Strep A+ FIA Reproduzierbarkeitsstudie Inter-Labor- Übereinstimmung mit Sofia 2 Streptokokken A negativ (C 0) Streptokokken A schwach positiv (C 95) Streptokokken A moderat positiv (2 3X LOD) 1 30/30 29/30 30/ /30 30/30 30/ /30 30/30 30/30 Gesamt 90/90 89/90 90/90 % Allgemeine Übereinstimmung (95 % KI) 100% (95,9 100 %) 98.9% (94,0 99,9 %) 100% (95,9 100 %) *An Standort 1 teilten sich zwei unterschiedliche Bediener das Testen einer Testplatte, ein Bediener an den ersten drei Tagen und ein anderer Bediener an den Tagen 4 und 5. Sofia Strep A+ FIA Seite 27 von 31

28 Nachweisgrenze Mit 3 Stämmen von Streptococcus pyogenes wurde mit dem Sofia Strep A+ FIA auf Sofia und Sofia 2 die Nachweisgrenze (LOD) geprüft (Tabelle 12). Stamm Tabelle 12 Nachweisgrenzen für Sofia Strep A+ FIA Plattform Niedrigster nachweisbarer Wert* (kbe/test) Sofia 3,94E+04 Bruno [CIP ] Sofia 2 4,07E+04 Sofia 1,31E+05 CDC-SS-1402 Sofia 2 1,60E+05 Sofia 8,03E+04 CDC-SS-1460 Sofia 2 7,45E+04 kbe/test = koloniebildende Einheiten/Test *Die Bakterienkonzentrationen wurden mittels Grenzverdünnung, Bakterienkulturen und Kolonienzählung ermittelt, um den kbe-/test-wert zu bestimmen. CLIA-Freistellungsstudie Eine Studie wurde durchgeführt, um zu zeigen, dass ungeschulte, vorgesehene Anwender den Test mit dem Sofia Strep A+ FIA und Sofia 2 konsistent und genau mit leicht reaktiven Proben durchführen können. Die Studie bestand aus drei (3) klar unterschiedlichen CLIA-freigestellten Standorten, an denen der Sofia Strep A+ FIA unter Verwendung von codierten, randomisierten Testplatten von simulierten Proben beurteilt wurde; darin eingeschlossen waren eine (1) schwach positive (C 95 Konzentration im Bereich des Assay-Cutoffs) und eine negative für Strep A. Drei (3) Bediener an jedem Standort (insgesamt 9 Bediener) prüften die Testplatte an jedem von 10 Tagen über eine Gesamtdauer von ungefähr 2 Wochen (Tabelle 13). Tabelle 13 Sofia Strep A+ FIA-Leistung nahe dem Cutoff mit Sofia 2 Probenpegel Ungeschulte, vorgesehene Anwender Prozentuale Übereinstimmung mit den erwarteten Ergebnissen* 95 % Konfidenzintervall Schwach positiv (C 95) 100 % (72/72) 93,9 100 % Negativ (C 0) 100 % (72/72) 93,9 100 % HILFE Falls Sie Fragen zur Verwendung dieses Produkts haben oder ein Testsystemproblem melden möchten, wenden Sie sich bitte an den technischen Support von Quidel unter (in den USA) oder , Montag bis Freitag, 7 bis 17 Uhr pazifische Zeit. Falls Sie sich außerhalb der USA befinden, kontaktieren Sie Ihren lokalen Händler oder technicalsupport@quidel.com. Testsystemprobleme können ferner der FDA über das MedWatch-Programm gemeldet werden (Tel.: 800.FDA.1088; fax: 800.FDA.0178; Sofia Strep A+ FIA Seite 28 von 31

29 LITERATUR 1. American Academy of Pediatrics. [Group Streptococcal Infection]. In: Pickering L.K., Baker C.J., Kimberlin D.W., Long S.S., eds. Red Book: 2009 Report of the Committee on Infectious Diseases. 28th ed. Elk Grove Village, IL: America Academy of Pediatrics; 2009: Youmans G.P., Paterson P.Y., and Sommer H.M., Upper Respiratory Tract Infection: General Considerations, in the Biological and Clinical Basis of Infectious Disease, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1980, pp Versalovic J., Carroll K.C., Jorgensen J.H., Funke G., Landry M.L., Warnock D.W., eds. Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. ASM Press, Washington, DC. Chapter 20, Streptococcus, 2011, pp Youmans G.P., Paterson P.Y., and Sommers H.M. The Biological and Clinical Basis of Infectious Disease, 1975, pp Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition. U.S. Department of Health and Human Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007). 6. Facklam R.R. and Washington J.A. Manual of Clinical Microbiology 5th Edition, 1991, p Rammelkamp C.H., Jr. Principles of Internal Medicine, 8th Edition, 1977, pp Lauer B.A., Reller L.D., and Mirrett S., Journal of Clinical Microbiology, 17: , Sofia Strep A+ FIA 25 Test Sofia Strep A+ FIA 25 Test Sofia Strep A+ FIA Seite 29 von 31

30 MDSS GmBH Schiffgraben Hannover, Deutschland Quidel Corporation McKellar Court San Diego, CA USA quidel.com Tupfer MDD 93/42/EEC Emergo Europe Den Haag Niederlande Puritan Medical Products Company LLC 31 School Street Guilford, Maine DE00 (01/18) Sofia Strep A+ FIA Seite 30 von 31