Haemophilus influenzae B IgG ELISA
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- Krista Brandt
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1 Arbeitsanleitung Haemophilus influenzae B IgG ELISA Enzymimmunoassay zur Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen das Polyribosylribitolphosphat von Haemophilus influenzae Typ B in humanem Serum und Plasma. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)
2 1. ZWECKBESTIMMUNG Enzymimmunoassay zur Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen das Polyribosylribitolphosphat (PRP) von Haemophilus influenzae Typ B in humanem Serum und Plasma. 2. KLINISCHE BEDEUTUNG Haemophilus influenzae Typ B (HiB) ist bei Kindern im Alter bis zu sechs Jahren ein häufiger Erreger invasiver, lebensbedrohlicher Infektionskrankheiten. Dabei treten die folgenden durch den Keim verursachten Krankheitsbilder gehäuft auf: Perikarditiden, Osteomyelitiden, Meningitiden, Encephalitiden, Pneumonien, Sinusitiden, Epiglottitiden und Otitiden. Die Erkrankung führt immer wieder zu Todesfällen bzw. neurologischen Defektheilungen, die sich trotz frühzeitiger Antibiotikatherapie nicht immer vermeiden lassen. Die eigentliche Krankheitsursache ist oft eine latent bestehende Immunschwäche, die eine spezifische Unfähigkeit zur humoralen Immunreaktion auf das Polyribosylribitolphosphat (PRP) der Polysaccharidkapsel des Erregers beinhaltet. Heute wird dafür häufig der Begriff "immunocompromised patients" verwendet, der erworbene wie angeborene spezifische und unspezifische Defekte der Infektabwehr zusammenfasst. Bei Kindern ist generell die noch bestehende Unreife des Immunsystems zu beachten. Aus diesem Grund ist die Impfung mit verschiedenen PRP-haltigen Vakzinen ab dem dritten Lebensmonat indiziert. Damit kann die Häufigkeit von Infektionen mit Haemophilus influenzae Typ B deutlich gesenkt werden. Der Impferfolg ist eng mit den nachweisbaren Antikörperkonzentrationen korreliert. Mit HiB IgG ist die Messung von PRP-spezifischen IgG-Antikörpern möglich. Eine Kontrolle des humoralen Immunstatus empfiehlt sich bei Kindern und Probanden aus Risikokollektiven etwa 4 bis 6 Wochen nach kompletter Immunisierung. Kontrolle des humoralen Immunstatus nach Impfung. Sicherung der Diagnose Haemophilus influenzae Typ B Infektion durch den wiederholten Nachweis von sich verändernden Antikörperkonzentrationen. Risikoeinschätzung bei "immunocompromised patients" durch das Ausbleiben des Impferfolgs nach Impfung mit einem PRP-haltigen Vakzin. Zu dieser Gruppe zählen: Kinder unter 2 Jahren mit durchgemachter Haemophilus influenzae Typ B Infektion, Kinder mit chronischen, rezidivierenden bakteriellen Infektionen der oberen Atemwege, Kinder mit chronischen Otitiden, Patienten mit gesicherten humoralen Immundefekten (IgG-2-Mangel, IgA-Mangel), Patienten mit gesicherten Granulozyten-Defekten, Patienten unter Chemo- bzw. Zytostatika-Therapie, Splenektomierte Kinder, Patienten mit Sichelzellenanämie, Patienten mit Trisomie 21 (Down Syndrom) und bestimmte ethnische Gruppen. 3. TESTPRINZIP Der HiB IgG ist ein Zweischritt-ELISA, der PRP-spezifische IgG-Antikörper nachweist. Die Vertiefungen der ELISA-Teststreifen sind mit PRP beschichtet. Werden verdünnte Serum- bzw. Plasmaproben inkubiert, binden spezifische Antikörper an das insolubilisierte PRP (Probeninkubation). Im nachfolgenden Waschschritt werden alle nicht gebundenen und damit nicht spezifischen Bestandteile der Probe entfernt. Im zweiten Inkubationsschritt erfolgt die Konjugatreaktion. Das Konjugat, ein Peroxidase-konjugierter Antihuman-IgG-Antikörper (Anti-human-IgG-POD), markiert das zuvor spezifisch gebundene IgG. In einem weiteren Waschschritt wird ungebundenes Konjugat entfernt. Im dritten Inkubationsschritt erfolgt die Substratreaktion, wobei die Peroxidase des Konjugats das Tetramethylbenzidin (TMB) zu einer gefärbten Substanz oxidiert. Durch anschließende Zugabe von Schwefelsäure wird diese Reaktion gestoppt, und es erfolgt ein Farbumschlag nach gelb. Die Farbintensität ist der Konzentration der PRP-spezifischen Antikörper in der Probe direkt proportional. Bei einer Wellenlänge von 450 nm wird die Extinktion in einem ELISA-Reader gemessen. Über eine Bezugskurve wird die Konzentration der PRP-spezifischen Antikörper in der Probe quantitativ bestimmt. 4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal. 2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden. 3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden endgültig geregelt ist. 4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. Version / 5
3 5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal- Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden. 6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten. Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder auf Anfrage direkt von IBL erhältlich. 7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen. 8. Das Reinigungspersonal ist durch das Fachpersonal bezüglich möglicher Gefahren und Umgang anzuleiten. 9. Kontakt mit Stopplösung vermeiden. Kann Hautreizungen und Verätzungen hervorrufen. 10. Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf anti-hcv, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. 5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8 C gelagert werden. Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen. Die Mikrotiterplatte ist auch nach dem Öffnen der Verpackung bis zu 6 Monate haltbar, wenn der Beutel sorgfältig wieder verschlossen und bei 2 8 C gelagert wird. 6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG Humanserum, Citrat-, EDTA- oder Heparin-Plasma. Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen. Lagerung: 2-8 C -20 C (aliquotiert) Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. Haltbarkeit: 6 Wochen 6 Monate Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden. 7. KOMPONENTEN DES KITS Anzahl / Menge Symbol 1 x 12 x 8 MTP 1 x 0.3 ml ENZCONJ CONC 5 x 0.35 ml CAL x 0.35 ml POS LL, POS HL 2 x 75 ml DILBUF 1 x 100 ml WASHBUF CONC 1 x 15 ml TMB SUBS 1 x 15 ml TMB STOP Komponente 2 Stück FOIL Abklebefolien Mikrotiterplatte Beschichtet mit PRP aus HiB Virus. Gebrauchsfertig! Enzymkonjugat, Konzentrat Anti-human-IgG-Peroxidase; blau gefärbt. Vor Gebrauch verdünnen! CAL 1-5, Konzentrat (NISBC code 96/536) Humanseren mit Stabilisatoren und Konservierungsmittel. Die chargen-abhängigen Antikörperkonzentrationen bitte den Flaschenetiketten entnehmen! Vor Gebrauch verdünnen! Kontrolle LL+HL, Konzentrat Positive Kontrollseren, LL, Low Level, HL, High Level ; zur Richtigkeitskontrolle; Humanseren mit Stabilisatoren und Konservierungsmittel. Die chargen-abhängigen Sollwerte bitte den Flaschenetiketten entnehmen! Vor Gebrauch verdünnen! Verdünnungspuffer 0.01 M Tris/HCl; ph 7,4; detergenshaltig; 0.01% (w/v) Thimerosal; rot gefärbt. Gebrauchsfertig! Waschpuffer, Konzentrat (10x) Enthält: Phosphatpuffer. TMB Substrat Substratlösung, Enthält Tetramethylbenzidin (TMB). Gebrauchsfertig! TMB Stop Solution Stopplösung; 0.5 M Schwefelsäure. Gebrauchsfertig! Hinweis: Waschpuffer, Substrat und Stopplösung sind mit folgenden Produkten austauschbar: TBE / FSME IgG (RE57401), TBE / FSME IgM (RE57411), Tetanus (RE57441) und Diphtherie (RE57431). Version / 5
4 8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 20; 100; 500; 1000 µl 2. Vortex-Mischer 3. Röhrchen zur Probenverdünnung 4. 8-Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 5. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 6. Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) 7. Bidest. oder deionisiertes Wasser 8. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr 9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG 1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten, Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden. 2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25 C) gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden. 3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal- Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden. 4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen. 5. Es sollte ein Pipettierschema verwendet werden um die Identifikation der Standards und Proben auf der Platte sicherzustellen. 6. Die Inkubationszeiten beeinflussen die Ergebnisse. Bei jedem Pipettierschritt sollten alle Wells in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeittakt behandelt werden. Die Verwendung einer 8-Kanal- Mikropipette zum Pipettieren in alle Wells wird empfohlen. 7. Die korrekte Durchführung der Waschschritte ist entscheidend. Ungenügend gewaschene Wells ergeben falsche Ergebnisse. Die Verwendung einer Multikanalpipette oder eines automatischen Waschsystems für Mikrotiterplatten wird empfohlen. Zwischen den Inkubationen die Wells nicht austrocknen lassen. Beim Waschen und Ausschütteln dürfen die beschichteten Wells nicht beschädigt werden. Alle Reagenzien müssen daher mit Vorsicht pipettiert werden. Beim Waschvorgang ist es wichtig, dass alle Wells vollständig und gleichmäßig mit Waschpuffer gefüllt werden und nach dem Ausschütteln kein Rückstand an Flüssigkeit zurückbleibt. 8. Feuchtigkeit beeinflusst die beschichteten Wells/Röhrchen. Verpackung nicht öffnen bevor Raumtemperatur erreicht ist. Nicht benötigte Wells/Röhrchen sofort in den wieder verschließbaren Beutel mit Trockenmittel zurückgeben. 10. TESTVORBEREITUNGEN Vorbereitung der Komponenten Der Inhalt des Kits für 96 Bestimmungen kann in 3 Läufe aufgeteilt werden. Die unten angegebenen Volumina sind für einen Lauf mit 4 Streifen (32 Bestimmungen). Verd. / rekonst. Komponente mit Diluent Verhältnis Bemerkungen Lagerung Haltbarkeit 60 µl ENZCONJ CONC 6 ml DILBUF 1:101 Vorsichtig mischen. 2-8 C 1 Stunde 30 ml WASHBUF CONC 270 ml Aqua dest. 1:10 Vorsichtig mischen. 2-8 C 8 Wochen Verdünnung von Standards, Kontrollen und Proben CAL 1-5 CONTROL LL CONTROL HL zu verdünnen mit Verhältnis Bemerkungen immer DILBUF 1:26 z.b. 20 µl µl Serum / Plasma immer DILBUF 1:26 z.b. 20 µl µl Für die Auswertung mittels Standardkurve werden die Kalibratoren 1 bis 5 und Kontrollseren benötigt. Version / 5
5 11. TESTDURCHFÜHRUNG 1. Je 100 µl von verdünntem Standard, verdünnter Kontrolle und verdünnter Probe in die entsprechenden Wells der Mikrotiterplatte pipettieren. 2. Platte mit Haftklebefolie abdecken. 1 h bei RT (18-25 C) inkubieren. 3. Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 250 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 4. Je 100 µl des verdünnten Enzymkonjugats in jedes Well pipettieren. 5. Platte mit Haftklebefolie abdecken. 1 h bei RT (18-25 C) inkubieren. 6. Folie entfernen. Inkubationslösung verwerfen. Platte 3 x mit je 250 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen. 7. Substrat- und Stopplösung möglichst mit einer 8-Kanal-Pipette pipettieren und Substrat- und Stopplösung in denselben Zeitintervallen zugeben. Mit positivem Vorhub pipettieren, um die Bildung von Luftbläschen zu vermeiden. 8. Je 100 µl TMB Substratlösung in jedes Well pipettieren min bei RT (18-25 C) inkubieren. 10. Die Substratreaktion durch Zugabe von 100 µl TMB Stopplösung in jedes Well pipettieren. Platte kurz schütteln. 11. Die optische Dichte mit einem Photometer bei 450 nm ± 10 nm (Referenzwellenlänge: nm) innerhalb 10 min nach dem Pipettieren der Stopplösung messen. 12. QUALITÄTSKONTROLLE Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet wurde. Ferner muss der Anwender die GLP-Regeln (Good Laboratory Practice) oder vergleichbare Normen/Gesetze beachten. Anwender und/oder Labor müssen zur Diagnosestellung ein gemäß GLP validiertes System verwenden. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind, sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen Ringversuchen teilzunehmen. Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten) Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und Waschmethoden. 13. TESTAUSWERTUNG Die erhaltenen OD der Standards (y-achse, linear) gegen deren Konzentration (x-achse, logarithmisch) auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. X-Achse (log): Konzentration in [µg/ml] Y-Achse (lin.): Extinktion Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog) oder Logit-Log-Berechnung empfohlen (z. B. 4-Parameter. Glg. 1). Gleichung 1: Y = d+(a-d)/(1+(x/c) b ) Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Standardwerte verwendet werden (bei Doppelwerten kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet werden). Die Konzentrationen der Proben werden von der Standardkurve abgelesen. Proben, deren Extinktion oberhalb des Kalibrators 5 liegen, müssen mit Verdünnungspuffer 1+1 vorverdünnt werden. Die ermittelte Konzentration wird mit dem Verdünnungsfaktor 2 multipliziert. Die Umrechnung von Citratplasma- in Serumwerte erfolgt durch Multiplikation der abgelesenen Konzentrationen mit dem Faktor 1,1. Validitätskriterien: Siehe QC-Zertifikat. Version / 5
6 14. INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Die Bestimmung PRP-spezifischer Antikörper gestattet den Nachweis einer humoralen Immunreaktion nach einer Immunisierung mit einem PRP-haltigen Impfstoff bzw. einer Infektion mit Haemophilus influenzae Typ B, die klinisch apparent oder inapparent verlaufen sein kann. Bleibt dieser Nachweis nach einer Immunisierung negativ oder gehört der Patient zu einem Risikokollektiv (vgl. "Testindikationen"), ist davon auszugehen, dass ein Risiko besteht, mit Haemophilus influenzae Typ B infiziert zu werden. Das Ausbleiben einer Serokonversion nach Impfung lässt Schlüsse auf die Reaktions-fähigkeit gegenüber bakteriellen Kohlenhydratantigenen zu. Eine polysaccharid-spezifische Immunschwäche wird bei Patienten mit chronischen Bronchitiden, rezidivierenden Pneumonien, intrinsic Asthma bronchiale bzw. Bronchiektasen unklarer Genese beobachtet. Humorale Immunreaktionen nach Infektionen mit nicht bekapselten Haemophilus influenzae weist HiB IgG nicht nach. In der Literatur [2, 8, 9, 10, 11] wird davon ausgegangen, dass bei Antikörperkonzentrationen unter 0.15 µg/ml kein ausreichender Schutz gegen Haemophilus influenzae Typ B vorliegt. Antikörperkonzentrationen zwischen 0.15 und 1.0 µg/ml werden als nachgewiesener Kontakt mit dem Keim interpretiert. Erst Antikörperkonzentrationen oberhalb von 1.0 µg/ml werden als ausreichende natürliche oder nach der 3. Impfung erworbene Immunität gewertet. 15. TESTCHARAKTERISTIKA Intraserielle Impräzision (Präzision in der Serie): Es wurden 2 Proben im Konzentrationsbereich der Kalibratoren in Doppelbestimmung jeweils 20 mal mit einer Charge gemessen. Die intraserielle Impräzision betrug, bezogen auf die Konzentration 10%. Interserielle Impräzision (Präzision von Tag zu Tag): Es wurden die POS HL und POS LL Kontrollseren in Doppelbestimmung in jeweils 20 Testansätzen an unterschiedlichen Versuchstagen mit einer Charge gemessen. Die interserielle Impräzision lag, bezogen auf die Konzentration, zwischen 9 und 12%. Die untere Nachweisgrenze beträgt 0.1 µg/ml (chargenspezifisch). 16. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT 1. Barra, A. et al.: Measurement of Anti-Haemophilus influenzae type B capsular polysaccharide antibodies by ELISA. J. Immunol. Meth. 115, 111 (1988) 2. Claesson, BA. et al.: Development of serum antibodies of the immuno-globulin G class and subclasses against the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type B in children and adults with invasive infections. J. Clin. Microbiol. 26, 2549 (1988) 3. Dolan, K.T. et al.: An enzyme-linked immunosorbent assay for quantitation of Haemophilus influenzae type B polysaccharide-specific IgG1 and IgG2 in human and infant rhesus monkey sera. J. Immunoassay 12, 543 (1991) 4. Hetherington, S.V. et al.: Correlation between antibody affinity and serum bactericidal activity in infants. J. Infect. Dis. 165, 753 (1992) 5. Isaacs, D.: Infectious diseases. Editorial overview. Curr. Opin. Pediat. 4, 45 (1992) 6. Kristensen, K., Weis Bentzon, M.: Relation between enzyme-linked immunosorbent assay and radioimmunoassay for the detection of antibodies to the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type B. Acta. path. microbiol. immunol. scand. Sect. C 100, 142 (1992) 7. Lagergard, T. et al.: Comparison between radioimmunoassay and direct and indirect enzymelinked immunosorbent assay for determination of antibodies against Haemophilus influenzae type B capsular polysaccharide. J. Clin. Microbiol. 26, 2554 (1988) 8. Käyhty, H. et al.: Antibodies response to capsular polysaccharides of groups A and C Neisseria meningitis and Haemophilus influenzae type b during bacteremic disease. Infect. Dis. 143, 32 (1981) 9. Anderson, P.: The protective level of serum antibodies to the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type B. J. Infect. Dis. 149, 1034 (1984) 10. Zielen, S. et al.: Untersuchung zur Effektivität der Haemophilus-influenzae-B-Diphtherie- Konjugatimpfung bei deutschen Kindern. Monatsschr. Kinderheilkunde 140, 852 (1992) 11. Zielen, S., Ahrens, P.: Haemophilus influenzae Typ B-Impfserologie. Ellipse 11, 15 (1994) 12. Togni, G. u. a.: Präanalytik. Schweiz. Med. Forum. 6, (2002) Version / 5
7 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /
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