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2 de Deutsch ANWENDUNGSBEREICH Der V8 Serum Protein 6-band Kit dient zur Auftrennung und Auswertung von Serumproteinen mittels Kapillarelektrophorese (CE). Serum enthält über 100 einzelne Proteine, jedes mit einer Reihe spezifischer Funktionen, die unter verschiedenen pathologischen Bedingungen gewissen spezifischen Konzentrationsschwankungen unterliegen 1. Seit der Einführung der Kapillarelektrophorese durch Tiselius 2 und die darauf folgende Nutzung der Zonenelektrophorese sind Serumproteine aufgrund ihrer elektrischen Ladung bei einem bestimmten ph-wert fraktioniert worden. Mit dem V8 Serum Protein 6-band Kit werden Serumproteine mithilfe eines alkalischen Puffers in 6 Hauptfraktionen (Albumin, Alpha-1-Globulin, Alpha-2-Globulin, Beta-1- Globulin, Beta-2-Globulin und Gamma-Globulin) aufgetrennt. Mit Ausnahme des Albumins enthält jede der Elektrophoresezonen in der Regel mindestens 2 Komponenten. Die relativen Ausmaße dieser Fraktionen haben sich bei der Diagnose und Prognose bestimmter Erkrankungen als nützliches Hilfsmittel erwiesen 3-5. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Die Reagenzien dieses Kits sind nur zur In-vitro-Diagnostik bestimmt. Nicht einnehmen oder mit dem Mund pipettieren. Beim Umgang mit den Kitkomponenten Handschuhe tragen. Siehe Sicherheitsdatenblatt bezüglich der R- und S-Sätze sowie Informationen zur Entsorgung. INHALT 1. V8 SP6 Buffer. REF HL SA (1 x 500 Tests). Jede Flasche enthält ausreichend SP6 Buffer für 500 Tests. Der Puffer ist gebrauchsfertig und muss, wie im Bedienungshandbuch angegeben, auf dem V8- Gerät von Helena in die entsprechende Position platziert werden. 2. Filter. REF HL SA (x1). Wie im Bedienungshandbuch beschrieben das Filtersystem an die Zuleitung des Flaschenanschlusses für den SP6 Buffer am V8-Gerät von Helena anbringen. Dieser Filter ist ein Einmalfilter und muss mit Auswechseln des Serumproteinpuffers ebenfalls ausgetauscht werden. 3. Probengefäße. REF HL SA (4 x 36). Das Gerät nach Anleitung des Helena-V8-Bedienungshandbuchs mit den Probengefäßen bestücken. 4. Weitere Kitkomponenten. Jedes Kit enthält eine Gebrauchsanweisung. 19 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 19 21/9/11 12:59:15

3 V8 Serum Protein 6-band Kit VERWENDUNGSMATRIX Die Anzahl der Tests je Pufferflasche kann unter 500 liegen, wenn der Systemdurchsatz weniger als 100 Tests pro Durchlauf beträgt. Im Folgenden finden Sie eine ungefähre Ausbeute pro Flasche nach Anzahl der Tests: 100+ Tests/Durchlauf: 500 Tests/Flasche Tests/Durchlauf: 450 Tests/Flasche Tests/Durchlauf: 400 Tests/Flasche <40 Tests/Durchlauf: 350 Tests/Flasche LAGERUNG UND STABILITÄT V8 SP6 Buffer. REF HL SA. Der SP6 Buffer sollte bei gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Geöffnete, auf dem V8-Gerät von Helena platzierte Flaschen sind bei Monate stabil. Der SP6 Buffer ist eine klare, farblose Flüssigkeit. Den Puffer verwerfen, wenn Veränderungen im Erscheinungsbild des SP6 Buffers bemerkt werden. Eine Trübung weist beispielsweise auf eine mikrobielle Kontamination hin. PUFFER NICHT EINFRIEREN. NICHT MITGELIEFERTES, ABER BENÖTIGTES MATERIAL REF V8 Storage Buffer REF V8 Maintenance Buffer REF V8 Clinical Waste Drawer Pack OPTIONAL ZU VERWENDENDE PRODUKTE REF Supplemental Buffer PackREF V8 Immunodisplacement Kit REF V8 Free Kappa / Free Lambda Kit REF V8 Anti-IgD / Anti-IgE Kit - bei Durchführung von Immunodisplacement im Serum oder Urin. REF Urine Preparation Buffer SP6 REF VS20002 Sartorius VivaSpin 20 Centrifugal Concentrators REF GEHE GE Healthcare NAP-5 Desalting Columns - bei Durchführung einer Proteinanalyse im Urin. 20 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 20 21/9/11 12:59:15

4 de PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Für Serumproteinanalysen ist frisch entnommenes Serum das Untersuchungsmaterial der Wahl, da Plasma-proben zwischen der Beta- und Gammafraktion eine große Fibrinogenbande enthalten. Proben können bei 2 bis 8 bis zu 7 Tagen und bei -20 C bis zu 1 Monat gelagert werden. Wenn Proben eingefroren werden sollen, müssen sie sofort gekühlt und innerhalb von 8 Stunden nach Ent-nahme eingefroren werden. Aufbewahren der Proben bei 2 bis 8 kann zu einem Proteinabbau, insbesondere der Komplementfrak-tionen, führen. Folglich kann bei einer Lagerung bei 2 bis 8 nach 7 Tagen der Nachweis einer eindeutigen Beta-2-Region nicht mehr möglich sein. Proben NICHT bei Raumtemperatur lagern - die Probe wird schnell abgebaut. Proben mit Kryoglobulinen können nach Kühlen oder Einfrieren viskös oder trübe werden. Es ist anzuraten, diese Proben vor dem Testen auf Raumtemperatur zu bringen. Das Untersuchungsmaterial der Wahl für die Urinanalyse ist frisch gesammelter Urin (24-Stunden-Sammelurin). Proben können bei 2 bis 8 bis zu 7 Tagen gelagert werden. Für längere Lagerzeiten können die Proben bis zu einem Monat bei -70 C aufbewahrt werden. Proben NICHT bei -20 C aufbewahren. Urinproben sind vor dem Testen auf dem V8-System mit einem der oben aufgeführten optionalen Urinvor-bereitungspuffer (Urine Preparation Buffer) und Gerätekombinationen zu entsalzen. STÖRFAKTOREN 1. Hämolytische Proben können falsche Alpha-2- und Betafraktionen zeigen. 2. Proben, die über längere Zeit unabgedeckt stehen, können durch Verdunstung falsche Ergebnisse liefern. 3. Die Anwesenheit von röntgendichtem Kontrastmittel kann verursachen, dass die Alpha-2- und Beta-Regionen des Elektropherogramms erhöht erscheinen. 21 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 21 21/9/11 12:59:15

5 V8 Serum Protein 6-band Kit SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE 1. Vergewissern Sie sich, dass sich der Einschub für den Abfallbehälter im Gerät befindet. 2. Vergewissern Sie sich vor Einschalten des V8, dass sich Lager- und Wartungspuffer sowie Einweggefäße auf dem Gerät und in den richtigen Positionen befinden. Im Bedienungshandbuch ist beschrieben, wie das Verbrauchsmaterial richtig eingesetzt wird. 3. Starten Sie Platinum 4V und legen eine neue CE-Sitzung an. Wählen Sie in Platinum 4V aus dem Dropdown-Menü CE SYSTEM und klicken auf DEFAULT METHOD (Standardmethode). Achten Sie darauf, dass je nach erforderlichem Test SP6 bzw. SP6 Urine gewählt ist. 4. Schalten Sie das V8-Gerät von Helena wie im Bedienungshandbuch beschrieben ein. 5. Für Einzeltestanforderungen siehe das Bedienungshandbuch. 6. Setzen Sie die Pufferflasche V8 SP6 in das Fach für Flüssigreagenzien des Helena- V8 ein. Achten Sie dabei auf die richtige Position. Zu einem korrekten Einsetzen der Pufferflasche des V8 SP6 gehört, dass vor Einsetzen in das V8-Gerät von Helena ein neues Filtersystem an die Zuleitung zum Flaschenanschluss angebracht wird (siehe Bedienungshandbuch). 7. Mit Einsetzen der Pufferflasche des V8 SP6 wird in Platinum 4V automatisch ein Fenster mit der Eingabeaufforderung DEFINE BUFFER (Puffer festlegen) angezeigt. Scannen oder geben Sie die Barcodenummer in das der Flaschenposition entsprechende Feld Pufferposition ein. 8. Wenn das V8-Gerät für die Probenaufnahme betriebsbereit ist, blinkt es rot. 9. Setzen Sie alle Primärprobenröhrchen in das Probenrack ein. Dabei darauf achten, dass durch das Rackfenster der Barcode deutlich zu erkennen ist (siehe Bedienungshandbuch). 10. Die Probenracks links in den V8-Probentransportbereich stellen und wie im Bedienungshandbuch beschrieben den Deckel schließen. 11. Das V8-Gerät beginnt automatisch mit der Analyse aller geladenen Proben. Die Ergebnisse werden an die Platinum 4V-Software übertragen. 12. Bei Bedarf nach Testende das Gerät herunterfahren, indem es wie im Bedienungshandbuch beschrieben ausgeschaltet wird. 13. Es ist wichtig, das V8-Gerät am Schluss des Arbeitstages richtig aufbereitet wird. Siehe Bedienungshandbuch. AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Es wird empfohlen, die Auswertung der CE-Spuren gegen Normalwerte durchzuführen, die in dem jeweiligen Labor für diese Methode ermittelt wurden. Für einen vollständigen Überblick über die Auswertung von Serumproteinen siehe Ritzmann, S.E, Studien haben gezeigt, dass für Männer und nicht schwangere Frauen die Werte gleich sind. Man hat bei schwangeren Frauen nahe 22 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 22 21/9/11 12:59:16

6 de dem Geburtstermin und bei Frauen, die orale Verhütungsmittel einnehmen, einige Abweichungen festgestellt. Das Alter kann Auswirkungen auf die Normalwerte haben. Nabelschnurblut hat einen verringerten Gesamtproteingehalt sowie verringerte Albumin, Alpha-2- und Betafraktionen; leicht erhöhte Alpha-1 und normale bzw. erhöhte Gammafraktion (weitgehend mütterlicher Herkunft). Die Gammaglobuline fallen bis zum Alter von 3 Monaten rasch ab, wohingegen andere Fraktionen bis dahin bereits Erwachsenenwerte erreicht haben. Bei den Gammaglobulinen werden Erwachsenenwerte erst im Alter zwischen 10 und 16 Jahren erreicht. Im Alter von über 40 Jahren verringert sich das Albumin und das Betaglobulin ist erhöht. QUALITÄTSKONTROLLE Helena Biosciences CEtrol Serum Controls (Kat. Nrn und ) können für die Bestätigung aller Phasen der Serumproteinbestimmung verwendet werden. Siehe Packungsbeilage für die entsprechenden Testergebnisse. EINSCHRÄNKUNGEN Aufgrund der inhärenten Einschränkungen von Auflösung und Empfindlichkeit der Kapillarelektrophorese ist es theoretisch möglich, dass einige monoklonale Gammopathien mit dieser Analysemethode nicht nach-gewiesen werden können. Wenn der vorliegende klinische Fall auf eine Gammopathie hindeutet, sollte das Elektropherogramm genau auf Anzeichen einer Abnormalität untersucht werden. Im Zweifelsfall sollte ver-sucht werden, eventuell vorhandene abnormale Gammaglobuline durch Immunodisplacement und/oder Im-munfixation im Agarosegel zu typisieren. REFERENZWERTE Von 39 normalen Proben von männlichen und weiblichen Spendern zwischen 17 und 64 Jahren wurden die folgenden Normalwerte ermittelt (diese gelten nur als Richtlinie): Proteinfraktion Mittelwert (%) ± 2s-Bereich Albumin 62,59 55,19-69,98 Alpha-1 3,85 2,68-5,03 Alpha-2 7,56 4,93-10,19 Beta-1 7,14 5,24-9,03 Beta-2 4,00 1,46-6,54 Gamma 14,81 9,81-19,81 23 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 23 21/9/11 12:59:16

7 V8 Serum Protein 6-band Kit LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Folgende Leistungseigenschaften wurden von Helena Biosciences als Richtlinien ermittelt. Jedes Labor muss seine eigenen Werte ermitteln. Präzision: Reproduzierbarkeit innerhalb des Tests (n = 120) Reproduzierbarkeit zwischen den Tests (n = 96) Mittelwert (%) VK (%) Mittelwert (%) VK (%) Albumin 62,64 1,36 63,7 1,2 Alpha-1 4,48 4,52 4,7 4,8 Alpha-2 8,87 2,77 8,7 1,8 Beta-1 7,30 3,46 7,1 3,7 Beta-2 4,62 4,82 4,5 3,6 Gamma 12,09 4,10 11,3 2,7 Empfindlichkeit: Die CE V8-Serumproteinmethode kann Serumproteine mit Werten von 220 µg/ml (0,22 g/l) nachweisen. Genauigkeit: Der Vergleich mit einer handelsüblichen halb automatischen Gelmethode zum Nachweis von Serumproteinen ergab: y = 1,965x - 6,0119, r 2 = 0,951 LITERATUR 1. Alper, C.A. Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid, N. Eng. J. Med., 1974; 291 : Tiselius, A. A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures, Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages , Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects, Allen R. Liss, Inc., New York, HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 24 21/9/11 12:59:16

8 it Italiano SCOPO PREVISTO Il V8 Serum Protein 6-band Kit viene utilizzato per la separazione e quantizzazione delle proteine sieriche mediante elettroforesi capillare (EC). Il siero contiene oltre 100 singole proteine, ciascuna con specifiche funzioni, le quali variano la loro concentrazione a seconda delle differenti condizioni patologiche in corso 1. Dall invenzione dell elettroforesi a fronte mobile ad opera di Tiselius 2, e il successivo utilizzo dell elettroforesi di zona, le proteine del siero sono state frazionate in base alla loro carica ad un particolare ph. V8 Serum Protein 6-band kit utilizza un tampone alcalino per separare le proteine del siero in 6 classi prin-cipali (albumina, alpha-1 globulina, alpha-2 globulina, beta-1 globulina, beta-2 globulina e gamma globuli-na). Ciascuna delle zone elettroforetiche, ad eccezione dell albumina, contiene normalmente almeno 2 componenti. Le relative proporzioni, di queste frazioni, dimostrano l utilità nella diagnosi e prognosi di certe malattie 3-5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI I reagenti contenuti in questo kit sono destinati esclusivamente alla diagnostica in vitro. Non ingerire né pipettare con la bocca i componenti del kit. Indossare guanti durante l uso dei componenti del kit. Per le indicazioni relative ai rischi e alla sicurezza e per le informazioni sullo smaltimento, fare riferimento alle schede tecniche dei prodotti. COMPOSIZIONE 1. Tampone V8 SP6. REF HL SA (1 x 500 test). Ciascun flacone contiene sufficiente tampone SP6 per il completamento di 500 test. Il tampone è pronto per l uso e deve essere collocato in una posizione appropriata sullo strumento Helena V8 conformemente alle istruzioni del manuale utente. 2. Filtro. REF HL SA (x 1). L unità filtro deve essere applicata al condotto di ingresso del connettore del flacone di tampone SP6 dello strumento Helena V8 conformemente alle istruzioni del manuale utente. Questo filtro è monouso e deve essere sostituito al momento della sostituzione del tampone sieroproteico. 3. Coppette per campioni. REF HL SA (4 x 36). Le coppette per campioni devono essere caricate nello strumento Helena V8 conformemente a quanto riportatoi nel manuale utente. 4. Altri componenti del kit. Ogni kit contiene un foglio procedurale. 25 HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 25 21/9/11 12:59:16

9 Helena Biosciences Europe Queensway South, Team Valley Trading Estate, Gateshead, Tyne and Wear, NE11 0SD, United Kingdom Tel +44 (0) ; HL P 2011/02 (3) HL P (3) [Multi Language V8 Serum Protein 6-band Kit].indd 60 21/9/11 12:59:18