Schnelles Immunassay zum Nachweis von IgM-Antikörpern gegen Chlamydia pneumoniae in Serum- oder Vollblutproben aus der Fingerspitze

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1 Schnelles Immunassay zum Nachweis von IgM-Antikörpern gegen Chlamydia pneumoniae in Serum- oder Vollblutproben aus der Fingerspitze Bestellnummer In-vitro-Diagnostikum ANWENDUNGSBEREICH Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test ist ein immunchromatographischer Schnelltest zum Nachweis von IgM-Antikörpern gegen Chlamydia pneumoniae in Serum- oder Vollblutproben aus der Fingerspitze. Die Testergebnisse dienen zur Hilfe bei der Diagnose akuter Chlamydia pneumoniae-infektion. Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test kann in medizinischen Labors und in Arztpraxen durchgeführt werden. ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG DES TESTS Chlamydia pneumoniae gehören zu den Chlamydien, die obligat intrazelluläre Erregerbakterien sind. Die Bakterien bilden intrazelluläre Einschlusskörper, die sich im Zytoplasma der Wirtszelle replizieren (1.2). Chlamydia pneumoniae ist einer der ersten Krankheitserreger der Atemwege, der bei Erwachsenen und Kindern 10-20% der ambulanten Lungenentzündung in den unteren Atemwegen und bei Erwachsenen 10-20% der akuten Bronchitis verursacht (3, 4, 5) Zudem verursacht er Sinusitis, Pharyngitis und die Infektion durch Chlamydia pneumoniae wird nachweislich mit dem Beginn von Asthma in Verbindung gebracht (6,7). Zudem sind Infektionen durch Chlamydia pneumoniae mit der Entwicklung von Atherosklerose verbunden (8,9,10). Im Allgemeinen erfolgt die Diagnose von Chlamydia pneumoniae serologisch und häufig werden abgeänderte Mikroimmunfluoreszenz (MIF)- Methoden eingesetzt (2,11). Weitere Methoden sind z.b. Enzymimmunoassays (EIA) und PCR-Methoden (2). Diese Methoden erfordern ausgebildetes Personal sowie einen erfahrenen Diagnostiker. Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test stellt eine einfache und schnelle Methode zum Nachweis von IgM-Antikörpern gegen Chlamydia pneumoniae aus Blutproben dar. BIOLOGISCHE GRUNDSÄTZE Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test erkennt IgM-Antikörper gegen Chlamydia pneumoniae aus einer Blutprobe. Die Patientenprobe wird im Probenverdünnungsröhrchen verdünnt. Drei Tropfen der verdünnten Probe werden in das runde Feld zum Auftragen von Proben (S) der Testkarte gegeben. Falls die Probe IgM-Antikörper gegen Chlamydia pneumoniae enthält, so verbinden sich diese mit den gold markierten Antikörpern und dem immobilisierten Erfassungsreagenz und bilden einen Komplex, der als rote Testlinie im Testfeld (T) sichtbar ist. Die Testkarte enthält zudem ein integriertes System der Ablaufsteuerung und eine rote Kontrolllinie im Kontrollfeld ( C) zeigt an, dass der Test richtig funktioniert hat. Für diesen Test sind nur 10 l Vollblut oder 5 l Serum erforderlich und die Durchführung und Auswertung erfolgt in 5 bis 10 Minuten. Ein positives Testergebnis mit dem ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test ist eine Hilfe zur Diagnose von akuter Chlamydia pneumoniae -Infektion. REAGENZIEN/MATERIALIEN BEILIEGEND Testkarten und Pipetten 20 Aluminiumbeutel mit einer Testkarte und einer Plastik-Pipette Lanzetten 20 automatische Lanzetten zum Erhalt einer Vollblutprobe aus der Fingerspitze Kapillare 20 Stck Glaskapillaren von 10 l Probenverdünnungsröhrchen 20 Röhrchen mit 1,2 ml Probenverdünnungspuffer Alkohol-Wattepads 20 kleine, in Alkohol getränkte quadratische Wattebäusche Packungsbeilage Merkblatt mit Bedienungsanleitung NICHT BEILIEGENDES MATERIAL Schaltuhr VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Sämtliche Reagenzien dienen ausschließlich der In-vitro-Diagnose und sind anwendungsbereit. 2. Die Testanweisungen sollten vor Durchführung eines Tests sorgfältig gelesen werden. Falls die Anweisungen nicht genau befolgt werden, kann das Testergebnis falsch sein. 3. Test und Zubehör nicht wiederholt verwenden. 4. Die allgemeinen Laborverfahren und Vorsichtsmaßnahmen für die Handhabung und Entsorgung von Proben und genutzten Materialien müssen befolgt werden. 5. Falls der Aluminiumbeutel und die Zubehöre beschädigt sind, darf der Test nicht verwendet werden. 6. Der Test darf nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwendet werden. 7. Nach dem Öffnen des Aluminiumbeutels muss der Test innerhalb der nächsten 10 Minuten durchgeführt werden. 8. Reagenzien und Tests aus verschiedenen Chargen dürfen nicht vermischt werden. 9. Der Probenpuffer enthält 0,09 Natriumazid. Vermeiden Sie den Kontakt mit der Haut. Nicht einnehmen! HALTBARKEIT UND LAGERUNG Das Ablaufdatum ist auf dem Etikett des Kits angegeben. Die Bestandteile des Kits müssen vor Ablauf des Datums verwendet werden. Lagern Sie den Test bei 2-27 C. Nicht einfrieren. VERFAHRENSTECHNISCHE HINWEISE 1. Das Format der Testkarte ist nachstehend dargestellt. Probenauftragefeld : 3 Tropfen der verdünnten Probe dazugeben. 2. Die Stapelverarbeitung der Proben ist möglich, falls die entsprechenden Schritte, die Abfolge der Reagenzzugabe, die Inkubationszeiten und die 16

2 Ablesezeit der Ergebnisse eingehalten werden. Das Kontrollfeld ( C) jeder Karte bietet eine Ablaufsteuerung für jede Probe. Diese prüft die ordnungsgemäße Strömungseigenschaften der Probe und des Reagenzes sowie die Reagenzleistung. REAGENZVORBEREITUNG 1. Alle Bestandteile des Kits müssen vor der Verwendung Raumtemperatur annehmen. 2. Alle Reagenzien sind anwendungsbereit (keine Verdünnung mehr erforderlich). 3. Je nach Anzahl der zu testenden Proben muss die entsprechende Anzahl der Testkomponenten vorbereitet werden: Probenverdünnungsröhrchen, Testkarten und Pipetten. Zum Testen von Vollblutproben aus der Fingerspitze müssen diese Blutgewinnungsbestandteile vorbereitet werden: automatische Lanzette, in Alkohol getränktes Pad und Glaskapillare. PROBEENTNAHME UND ABWICKLUNG Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM Test ist für die Verwendung mit Kapillar-Vollblutproben, aber auch intravenösen Vollblutproben und Serumproben vorgesehen. Das Blut kann in EDTA-Röhrchen aufgefangen werden. Die Proben müssen unter Anwendung bewährter Laborverfahren gewonnen werden. Mit dem Kapillar aufgefangene Vollblutproben aus der Fingerspitze müssen sofort getestet werden. Intravenöse Vollblutproben sollten bei 2-8 C gelagert und innerhalb eines Arbeitstages analysiert oder zur späteren Untersuchung eingefroren werden. Serumproben sollten bis zu 3 Tagen bei 2-8 C gelagert oder für spätere Untersuchungen eingefroren werden. Verdünnte Proben (kapillare oder intravenöse Blut- und Serumproben) sollten innerhalb eines Arbeitstages getestet werden. TESTVERFAHREN Alle für diesen Test erforderlichen Bestandteile sollten Raumtemperatur haben. Öffnen Sie das Probenverdünnungsröhrchen mit dem Puffer durch Entfernen der Kappe. Vollblutproben aus der Fingerspitze 1. Drehen Sie die graue Kappe bis sie sich löst. 2. Machen Sie mit der grauen Kappe mindestens 2 Umdrehungen. 2x 3. Massieren Sie die Fingerspitze leicht und reinigen Sie sie mit dem in Alkohol getauchten Pad. Warten Sie, bis der Finger trocken ist. 4. Drücken Sie die automatische Lanzette mit der runden Öffnung fest gegen die gereinigte Fingerspitze und aktivieren Sie sie mit dem Knopf. Der Stich ist quasi schmerzlos. 5. Drücken Sie einen Bluttropfen aus der Fingerspitze. Öffnen Sie das Plastikventil und entfernen Sie vorsichtig eine Glaskapillare. Halten Sie die Glaskapillare waagerecht in den Bluttropfen, bis sie wie in dem folgenden Bild dargestellt, vollständig gefüllt ist. 6. Legen Sie die Glaskapillare in das Probenverdünnungsröhrchen und verschließen Sie das Röhrchen fest mit der Kappe. Schütteln Sie das Röhrchen mehrmals, bis sich das Blut aus der Kapillare völlig mit dem Puffer vermischt hat. Probenpuffer 7. Öffnen Sie die Kappe und stellen Sie das Röhrchen in das in der Verpackung enthaltene Gestell. 8. Entnehmen Sie die Testkarte und die Pipette aus der Folie. Kennzeichnen Sie die Probe. Verwenden Sie nur eine Karte pro Probe. 9. Entnehmen Sie einige Tropfen der verdünnten Probe mit der Pipette. Halten Sie die Pipette mit der verdünnten Blutprobe senkrecht über das runde Feld zum Auftragen (S) und geben Sie 3 Tropfen darauf. Nach dem Auftragen der Tropfen darf die Testkarte 2 Minuten lang nicht berührt oder bewegt werden. 17

3 10. Ein positives Ergebnis kann abgelesen werden, sobald die Test- und Kontrolllinien sichtbar sind, was in den meisten Fällen ca. 5 Minuten erfordert. Falls das Testergebnis nach 5 Minuten unsicher oder nur schwer abzulesen ist, warten Sie nochmals 5 Minuten und lesen das Ergebnis erneut ab. Nach mehr als 15 Minuten ist das Ergebnis nicht mehr gültig. Intravenöse Vollblut- oder Serumproben Falls Sie intravenöse Vollblutproben oder Serumproben verwenden, beginnen Sie den Test mit Punkt 6 des obigen Abschnitts Vollblutproben aus der Fingerspitze und geben 10 l Vollblutprobe oder 5 l Serumprobe in das Probenverdünnungsröhrchen mit dem Puffer. Die Probenverdünnung entspricht 1/120 für Vollblutproben und 1/240 für Serumproben. AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Das Testergebnis ist positiv, falls eine rote Kontrolllinie im Kontrollfeld (C ) und eine hell- bis dunkelrote Linie im Testfeld (T) erscheint. Das Testergebnis ist negativ, falls eine rote Kontrolllinie im Kontrollfeld (C ) und keine rote Linie im Testfeld erscheint. Das Testergebnis ist ungültig, falls keine Kontrolllinie mit oder ohne sichtbarer Testlinie erscheint. Ungültige Testergebnisse können aufgrund eines verfahrenstechnischen Fehlers oder einer beschädigten Testeinheit entstehen. In diesem Fall muss der Test mit einer neuen Testeinheit wiederholt werden. Positiv Der Test zeigt an, dass IgM-Antikörper gegen Chlamydia pneumoniae in der Blutprobe enthalten sind und weist dementsprechend auf eine wahrscheinliche akute Chlamydia pneumoniae-infektion hin. Bei einer akuten Primärinfektion kann ein IgM-Ergebnis bereits in den ersten Serumproben erkannt werden. Negativ Der Test zeigt an, dass keine IgM-Antikörper gegen Chlamydia pneumoniae in der Blutprobe enthalten sind. Die weist darauf hin, dass keine Chlamydia pneumoniae-infektion vorliegt oder die Infektion nicht akut ist. Ein negatives Ergebnis kann auch mit stabilen oder rückläufigen IgG- und/oder IgA- Antikörpern gegen Chlamydia pneumoniae erzielt werden, was auf eine zurückliegende Infektion, eine kürzliche Infektion, eine Heilung oder eine persistente Infektion hinweist. EINSCHRÄNKUNGEN DES VERFAHRENS Falls die Probe zu früh gewonnen wurde, sind IgM-Antikörper eventuell nicht erkennbar (11,12). Bei Reinfektionen sind eventuell keine IgM-Antikörper vorhanden (11,12). In seltenen Fällen können in asymptomatischen Objekten Schwanz - IgM-Antikörper erkennbar sein, die bis zu 3 Jahren fortbestehen können (13). Die Ergebnisse sollten in Zusammenhang mit dem klinischen Zustand und den Symptomen, der epidemiologischen Situation und weiteren Labordaten ausgewertet werden. SPEZIFISCHE LEISTUNGSDATEN Die Empfindlichkeit des ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Tests wurde anhand von 42 klinischen Proben untersucht und die Ergebnisse wurden mit den MIFA-Testergebnissen des Ani Labsystems verglichen. MIFA + - ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM Der ImmunoCard STAT! Chlamydia pneumoniae IgM-Test zeigte 100% Empfindlichkeit und 87,5% Spezifität an. KREUZREAKTIVITÄT Der Test wurde auch mit folgenden Serumproben als negativ befunden: Chlamydia trachomatis IgM Epstein-Barr-Virus IgM Chlamydia trachomatis IgG Cytomegalovirus IgM Chlamydia trachomatis IgA Mycoplasma pneumoniae IgM Bordetella pertussis IgM Herpes simplex Virus IgM Rubella IgM Toxoplasma gondii IgM 18

4 REFERENCES/REFERENZE/BIBLIOGRAPHIE/ REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS/REFERENZEN 1. Balows A, Hausler WJ jr., Herrmann KL, Isenberg HD & Shadomy HJ (1991) Manual of Clinical Microbiology, 5 th ed. American Society of Microbiology. 2. Koneman EW, Allen SD, Manda WM, Schreckenberger PC & Winn WC jr. (1997) Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, 5 th ed. Lippincott-Raven Publishers. 3. Grayston JT (1989) Chlamydia pneumoniae, strain TWAR. Chest 95: Kleemola M, Saikku P, Vasakorpi R, Wang SP & Grayston JT (1988) Epidemics of pneumonia caused by TWAR. J infect Dis 157: Grayston JT, Aldous MB, Easton A, Wang SP, Kuo CC, Campbell LA et al. (1993) Evidence that Chlamydia pneumoniae causes pneumonia and bronchitis. J infect Dis 168: Thom DH, Grayston JT, Campbell LA, Kuo CC, Diwan VK & Wang SP (1994) Respiratory infection with Chlamydia pneumoniae in middle-aged and older adult outpatients. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 13 (10): Johnston SL & Martin RJ (2005) Chlamydophila pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae, A Role in Asthma pathogenesis? Am J Respir Crit Care Med 172: Saikku P, Leinonen M, Linnanmaki E, Ekman MR, Manninen V, Manttari M, Frick MH & Huttunen JK (1992) Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease ín the Helsinki Heart Study. Ann Intern Med. 116(4): Saikku P (2000) Chlamydia pneumoniae in atherosclerosis. J Intern Med. 247(3): Yavuz MT, Yavuz O, Yazici M, Guler S, Ozhan H, Albayrak S & Coskun A (2006) Interaction between Chlamydia pneumoniae seropositivity, inflammation and risk factors for atherosclerosis in patients with severe coronary stenosis. Scand J Clin Lab Incest. 66(6): Grayston JT, Campbell LA. Kuo CC, Mordhorst CH, Saikku P, Thom DH & Wang SP (1990) A new respiratory tract pathogen: Chlamydia pneumoniae strain TWAR. J Infect Dis. 161: Persson K & Boman J (2000) Comparison of five serologic tests for diagnosis of acute infections by Chlamydia pneumoniae. Clin Diangn Lab Imm. 7: Kuo CC, Jackson LA, Campbell LA & Grayston JT (1995) Chlamydia pneumoniae (TWAR). Clin Microbiol Rev. 8:

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