Polymorphismen von Molekülen der Thrombozytenmembran
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- Katharina Michel
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1 Polymorphismen von Molekülen der Thrombozytenmembran Studiengang (Master) Medizinische Biotechnologie M10.d Prof. Dr. Volker Kiefel Institut für Transfusionsmedizin Universitätsmedizin Rostock
2 Fetale/neonatale Alloimmunthrombozytopenie NAIT (FNAIT/FMAIT) Thrombozyten-Äquivalent zum MHN Übertritt fetaler Thrombozyten in den mütterlichen Kreislauf Bildung mütterlicher Alloantikörper (IgG) gegen Antigene auf GP IIb/IIIa, Ib/IX, Ia/IIa, CD109, GPIV (CD36) Übertritt der Antikörper in in den fetalen Kreislauf Fetale Thrombpozytopenie Häufigkeit ca: 1:800-1:2000 Geburten
3 Neonatale Alloimmunthrombozytopenie (NAIT) Pathogenese, typischer Verlauf
4 Zielantigene thrombozytärer Alloantikörper Fibrinogen-R vwf-r GP IIb/IIIa: Vitronectin Rezeptor GP Ia/IIa: Kollagen-R Integrin αiibβ3 Integrin αvβ3 Integrin α2β1
5 Neonatale Alloimmun-TP (NAIT) reversible fetale/neonatale TP, die 1/800 1/2000 aller Geburten betrifft Ausgelöst durch Anti-HPA-1a, Anti-HPA-5b oder weitere Ak ZNS-Blutungen in ca 15% Diagnostik HPA-1-Typisierung der Mutter Ak-Screening (Mutter), serologisches Crossmatch ggf. weitere HPA-Antigene i. d. Familie bestimmen
6 Thrombozytäre Allo-/Isoantigene Antigen Lokalisation Frequenz HPA-1a (Pl(A1)) HPA-1b (Pl(A2)) GP IIIa GP IIIa 97,5 30,8 HPA-2a (Ko(b)) HPA-2b (Ko(a)) GP Ib(alpha) GP Ib(alpha) 99,4 11,8 HPA-3a (Bak(a)) HPA-3b (Bak(b)) GP IIb GP IIb 86,14 62,9 HPA-4a (Yuk(b)) HPA-4b (Yuk(a)) GP IIIa GP IIIa >99,9 (D), >99,7 (JP) < 0,1 (D), 1,7 (JP) HPA-5a (Br(b)) HPA-5b (Br(a)) GP Ia GP Ia 98,8 20,7 HPA-15a (Gov(b)) HPA-15b (Gov(a)) CD109 CD109 80,5 60,2 niedrigfrequente Alloantigene GP IIb/IIIa (Isoantikörper) GP IV (Anti-Nak(a)) >>99% >>99%
7 Antikörper gegen niedrigfrequente Alloantigene Problem: gelegentlich führt eine extrem seltene Mutation (Vater=>Kind) zu einer NAIT. Testung der Seren mit normalen Zellpanels: falsch negatives Resultat. Seit 1985: Crossmatches mit glykoproteinspezifischem Test (MAIPA): HPA-6bW (Caa, Tua), GP IIIa HPA-7bW (Moa), GP IIIa HPA-8bW (Sra), GP IIIa HPA-9bW (Maxa), GP IIb HPA-10bW (Laa), GP IIIa HPA-11bW (Groa), GP IIIa HPA-12bW (Iya), GP Ibβ HPA-13bW (Sita), GP Ia HPA-14bW (Oea), GP IIIa HPA-16bW (Duva), GP IIIa HPA-bW (Vaa), GP IIIa HPA-18bW (Caba), GP Ia HPA-19bW (Sta), GP IIIa HPA-20bW (Kno), GP GPIIIb HPA-21bW (Nos), GP IIIa HPA-22bW (Sey), GP IIb HPA-23bW (Hug), GP IIIa HPA-24bW (Cab2a+), GP IIb HPA-25bW (Swia), GP Ia HPA-26bW (Seca), GP IIIa Kiefel u. Santoso in Transfusionsmedizin und Immunhämatologie, Springer, 4. Auflage Sachs et al., 2012
8 HPA-1a/1a: 70% HPA-1a/1b: 28% HPA-1b/1b: 2% => Anti-HPA-1a
9 Genetische Grunddaten thrombozytärer Alloantigene Antigen Glycoprotein HGNC Chromosome Nucleotide change Mature Protein HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-6w HPA-7w HPA-8w HPA-9w HPA-10w HPA-11w HPA-12w HPA-13w HPA-14w HPA-15 HPA-16w HPA-w HPA-18w HPA-19w HPA-20w HPA-21w HPA-22bw HPA-23bw HPA-24bw HPA-25bw HPA-26bw HPA-27bw GPIba GPIIb GPIa GPIIb GPIbb GPIa CD109 GP1a GPIIb GPIIb GPIIb GPIa GPIIb GP1BA ITGA2B ITGA2 ITGA2B GP1BB ITGA2 CD109 ITGA2 ITGA2B ITGA2B ITGA2B ITGA2 ITGA2B T>C 482C>T 2621T>G 506G>A 1600G>A 1544G>A 1297C>G 1984C>T 2602G>A 263G>A 1976G>A 119G>A 2483C>T 1909_1911delAAG 2108C>A 497C>T 662C>T 2235G>T 487A>C 1949C>T 1960G>A 584A>C 1942C>T 1508G>A 3347C>T 1818G>T 2614C>A L33P T145M I843S R143Q E505K R489Q P407A R636C V837M R62Q R633H G15E T799M K611del S703Y T140I T195M Q716H K137Q T619M E628K K164T R622W S472N T1087M K580N L841M Quelle: The Immuno Polymorphism Database
10 Alloantikörperpezifitäten bei NAIT Anti- Deutschland1 HPA-1a HPA-1b HPA-2b HPA-3a HPA-4b HPA-5a HPA-5b HPA-8bW HPA-11bW HPA-12bW HPA13bW HPA-14bW HPA-15b GPIV (Nak(a)) HPA-1a+5b HPA-4b+5b Σ 428 (75,1%) (1,8%) (,7%) (22%) (75,3%) 2 13 (2,3%) 569 Kroll et al., Transfusion 2005;45: Ohto et al., Transfusion Medicine 2004; 4:399 1 Japan
11 Techniken zum Nachweis freier thrombozytärer Antikörper Antiglobulintests mit intakten Thrombozyten Plättchen-Suspensions-I)mmunfluoreszenztest (PSIFT); ELISA Agglutinationstechniken mit Partikeln, die mit Anti-IgG beladen sind Glykoproteinspezifische Techniken Immunoblot Immunpräzipitation in-house GP spezifische Enymimmuntests (MAIPA), Radioimmuntests (immunobead assay) unter Verwendung monoklonaler Antikörper* kommerzielle GP spezifische Immunoassays *Kiefel et al. Blood. 1987;70:22, Kiefel Transfusion Medicine; 1992;2:181
12 Freie und zellständige thrombozytäre Antikörper (PSIFT) Problem: Keine Unterscheidung zwischen Ak gegen verschiedene Proteine (HLA-Antikörper, plättchenspezifische Antikörper)
13 Y Y Fibrinogen-R vwf-r Kollagen-R
14
15 Immunoblot
16 GP-spezifischer ELISA: MAIPA* monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens
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23 HPA1a 1b
24 HPA1a 1b 3a
25 Transfusion und thrombozytäre Alloimmunisierung1 252 Patienten mit hämatologisch/onkologischen Erkrankungen nach Substitution mit Erythrozyten/Thrombozyten: 113 (44.8%) wiesen HLA I/HPA-Antikörper auf Alloantikörper-Spezifitäten Anzahl Spezifität(en) HLA I HPA-5b, HLA I HPA-5b HPA-5a, HLA I HPA-1a HPA-1b HPA-1b, HPA-5b, HLA I HPA-2b, HLA I HPA-1b, HPA-2b, HLA I 1 Kiefel et al., Transfusion 2001;41:766 Häufigste Alloak bei polytransfundierten Patienten/NAIT Transfusion n Spez. NAIT n (75%) HPA-1a 101 (,7%) HPA-5b 10 (1,8%) HPA-3a HLA I HPA-5b HPA-1b HPA-5a Spez. 20/113 Seren von Patienten mit Alloak enthielten HPA-Antikörper
26 Passive alloimmune Thrombozytopenie (2) (1) tödliche ICH nach Gabe von 1 FFP; Anti-HPA-1a Titer 8 Look back: schwere Blutungskomplikationen bei 2/3 FFPGaben Sofortiger Abfall der Thrombozytenzahl nach Gabe von (z.b.) GFP Ursache: throbozytärer AlloAk (Anti-HPA-1a(1), -5b(2), GP IV(3) (zus. Allgemeinsymptome, Thr.-Aktivierung)) (1) Solenthaler et al., BJH 1999; 106:258; (2) Warkentin et al. Blood 1992;79:2480; (3) Morishita et al. Transfusion 2005;45:803
27 Prof. Dr. V. Kiefel Inst. f. Transfusionsmedizin Universitätsmedizin Rostock Ernst-Heydemann-Str.6 D Rostock Tel.: transfusion.med.uni-rostock.de
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