Androstenedione ELISA

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1 Arbeitsanleitung Androstenedione ELISA Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Androstendion in humanem Serum. DB C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBLInternational.com D22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 ZWECKBESTIMMUNG Enzymimmunoassay zur quantitativen Bestimmung von Androstendion in humanem Serum. TEST PRINZIP Kompetitiver Enzymimmunoassay (ELISA). Das nicht markierte Antigen in der Probe, den Standards und den Kontrollen konkurriert mit dem enzymmarkiertem Antigen (Konjugat) um eine begrenzte Anzahl von Antikörperbindungsstellen auf der Mikrotiterplatte. Nach der Inkubation wird nicht gebundenes Material durch Waschen entfernt. Danach wird Enzymsubstrat hinzugefügt. Die enzymatische Reaktion wird durch Stopplösung abgebrochen. Die Extinktion wird mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen. Die Intensität der gebildeten Farbe nach der Substratreaktion ist umgekehrt proportional zur Konzentration von Androstendion in den Proben. Eine Standardreihe wird verwendet, um eine Kurve darzustellen, aus der die Menge an Androstendion in Proben und Kontrollen direkt bestimmt werden kann. KLINISCHE BEDEUTUNG Androstendion wird von der Nebenniere und den Keimdrüsen produziert. Daher ist die Bestimmung des Androstendionlevels für die Bewertung dieser Drüsenfunktion von Bedeutung. Androstendion ist ein Vorläufer von Testosteron und Östron. Während bei Männern die Androstendionproduktion in den Hoden stattfindet, wird dieses Hormon bei Frauen in den Eierstöcken gebildet. Hierbei schwankt das Produktionsniveau täglich, abhängig vom Zyklusstatus. Bei Frauen findet primär durch den Umbau verwandter Androgene, besonder Androstendion, statt. Wird bei Frauen ein anormaler Testosteronlevel festgestellt, sollte der Androstendiongehalt im Serum bestimmt werden. Die Bestimmung des Gehalts an Testosteron im Serum in Verbindung mit dem Enzymimmunoassay für Androstendion kann darauf hindeuten, ob die erhöhte Androgenproduktion ihren Ursprung in der Nebenniere oder im Eierstock hat. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN 1. Benutzer sollten dieses Protokoll vollständig verstanden haben, um diesen Kit erfolgreich zu gebrauchen. Zuverlässige Ergebnisse werden nur erzielt, wenn sich strikt und genau an die zur Verfügung gestellten Anweisungen gehalten wird. 2. Kontrollmaterial und Serumpools sollten in jedem Testlauf einbezogen werden, um die Zuverlässigkeit der Ergebnisse zu prüfen. 3. Zur Verdünnung oder Rekonstitution nur deionisiertes oder bidestilliertes Wasser verwenden. 4. Um den Kontakt mit potenziell schädlichen Substanzen zu reduzieren, sollten während des Gebrauchs der Kitreagenzien und Humanproben Handschuhe getragen werden. 5. Alle Reagenzien dieses Kits sowie alle Proben sollten auf Raumtemperatur gebracht und vor Gebrauch vorsichtig, aber gründlich, gemischt werden. Wiederholte Auftau und Einfriervorgänge der Reagenzien und Proben vermeiden. 6. Eine Standardkurve muss für jeden Testlauf erstellt werden. 7. Die Kitkontrollen sollten in jeden Testlauf einbezogen werden und innerhalb der Konfidenzintervalle liegen. 8. Unsachgemäßer Gebrauch, ungenaues Pipettieren, unvollständiges Waschen sowie unsachgemäße Lagerung der Reagenzien könnten sich darin widerspiegeln, dass die Assaywerte für die Kontrollen von den angegebenen Bereichen abweichen. 9. Beim Lesen der Mikrotiterplatte beeinflussen Blasen in den Mikrowells die optische Dichte (OD).Vorsichtig die Blasen vor der Messung entfernen. 10. Die Substratlösung (TMB) ist lichtsensibel und sollte bei sachgemäßer Lagerung farblos bleiben. Instabilität oder Kontaminierung könnten zur Entwicklung einer bläulichen Farbe führen. Ist dies der Fall, sollte das Reagenz nicht benutzt werden. 11. Zum Pipettieren des Substrats keine Pipetten verwenden, in denen diese Flüssigkeit in Kontakt mit jeglicher Art von Metall kommen könnte 12. Um Kontaminierung der Reagenzien zu vermeiden, müssen für jedes zu pipettierende Reagenz, Probe, Standard und Kontrolle neue Einmalpipettenspitzen verwendet werden. 13. Es dürfen keine Kitkomponenten mit unterschiedlichen Lotnummern in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden. 14. Die Kitreagenzien müssen als gefährlicher Abfall angesehen werden und den nationalen Regeln und Normen entsprechend entsorgt werden. V6.2 / May 15, / 6

3 GRENZEN 1. Alle Reagenzien dieses Kits sind für die direkte Bestimmung von androstenedione in humanem Serum kalibriert. Der Kit ist nicht für die Bestimmung von androstenedione in Saliva, Plasma oder anderen Probenarten humanem oder tierischen Ursprungs kalibriert. 2. Kein hämolysiertes, lipämisches, ikterisches oder unsachgemäß gelagertes Serum verwenden. 3. Proben oder Kontrollseren, die Azid oder Thimerosal enthalten, sind nicht mit diesem Kit kompatibel, da sie zu falschen Ergebnissen führen können. 4. Nur Standard A kann benutzt werden, um hohe Serumproben zu verdünnen. Der Gebrauch eines anderen Reagenz kann zu falschen Ergebnissen führen. 5. Die mit diesem Kit erhaltenen Ergebnisse sollten nie die einzige Grundlage für eine klinische Diagnose sein. Beispielsweise kann das Auftreten heterophiler Antikörper von Patienten, die häufig in Kontakt mit Tieren oder tierischen Produkten stehen, immunologische Tests beeinflussen. Die klinische Diagnose sollte alle Aspekte des Patienten und dessen Hintergrund berücksichtigen, auch die Regelmäßigkeit des Kontaktes mit Tieren/tierischen Produkten, wenn falsche Ergebnisse vermutet werden. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN POTENTIELL BIOLOGISCH GEFÄHRLICHES MATERIAL Humanes Serum, das für die Herstellung der Standards und Kontrollen verwendet wird, wurde nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberflächenantigen und negativ auf HCVAntikörper sowie auf HIV getestet. Allerdings kann keine Testmethode vollkommene Sicherheit bieten, dass keine HIV, HCV, Hepatitis B Viren oder andere infektiöse Agenzien vorhanden sind. Diese Reagenzien sollten als potentiell biologisch gefährlich angesehen werden und nur mit derselben Vorsicht wie bei jeder anderen Blutprobe behandelt werden. CHEMISCHE GEFAHREN Den Kontakt mit Reagenzien, die TMB, Wasserstoffperoxid oder Schwefelsäure enthalten, vermeiden. Bei Kontakt mit reichlich Wasser abwaschen.tmb ist möglicherweise karzinogen. PROBENGEWINNUNG UND AUFBEWAHRUNG Ca. 0,1 ml Serum wird für eine Doppelbestimmung benötigt. 45 ml Blut in einem dafür vorgesehenen und entsprechend markiertem Röhrchen sammeln und das Blut gerinnen lassen. Dies zentrifugieren und die Serumschicht vorsichtig entfernen. Lagerung bei 4 C für bis zu 24 Stunden oder bei 10 C oder niedriger, wenn die Analysen später erfolgen sollen. Alle humanen Proben sind als möglicherweise biologisch gefährliches Material zu behandeln und entsprechende Vorsichtsmaßnahmen zu treffen. PROBENVORBEREITUNG Dieser Assay ist ein direktes Testsystem; es bedarf keiner Probenvorbereitung. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3 % VK). Volumina: 50, 100, 150, 300 μl 2. VortexMischer 3. Orbitalschüttler (600 U/min) (z.b. EAS 2/4, SLT) oder Linearschüttler (200 U/min) 4. 8Kanal Mikropipette mit Reagenziengefäßen 5. Waschflasche, automatisches oder halbautomatisches Waschsystem für Mikrotiterplatten 6. Messgerät für Mikrotiterplatten zur Messung der Absorption bei 450 nm (Referenzwellenlänge nm) 7. Bidest. oder deionisiertes Wasser 8. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr V6.2 / May 15, / 6

4 KOMPONENTEN DES KITS 1. MTP Rabbit AntiAndrostenedion Antikörperbeschichtete Mikrotiterplatte mit abbrechbaren Wells Gebrauchsfertig. Inhalt: Eine 96Well (12x8)Mikrotiterplatte, beschichtet mit polyklonalem Antikörper in einem wiederverschließbaren Beutel mit Trockenmittel. 2. ENZCONJ Androstenedione Meerrettichperoxidase (HRP)Konjugat, Gebrauchsfertig. Inhalt: Eine Flasche Androstenedion HRPKonjugat in Proteinpuffer mit quecksilberfreiem Konservierungsmittel. Volumen: 15 ml/flasche 3. CAL AF Androstenedion Standards Gebrauchsfertig. Inhalt: Sechs Fläschchen mit Androstenedion in Proteinpuffer mit quecksilberfreiem Konservierungsmittel. Hergestellt duch Spiken eines Puffers mit bekannter Menge an Androstenedion *Unten aufgeführt sind ungefähre Konzentrationen. Die Etiketten der Fläschchen für genaue Angaben beachten. Standard Konzentration Volumen/Fläschchen Standard A 0 ng/ml 2.0 ml Standard B 0.1 ng/ml 1.0 ml Standard C 0.3 ng/ml 1.0 ml Standard D 1 ng/ml 1.0 ml Standard E 3 ng/ml 1.0 ml Standard F 10 ng/ml 1.0 ml Einmal geöffnet sollten die Standards innerhalb von 14 Tagen verbraucht werden oder aliquotiert und eingefroren werden. Mehrfache Auftau und Einfrierzyklen vermeiden. 4. CONTROL HIGH CONTROL LOW Kontrollen Gebrauchsfertig. Inhalt: Zwei Fläschchen mit Androstenedion in HumanserumProteinpuffer mit quecksilberfreiem Konservierungsmittel. Hergestellt duch Spiken eines Puffers mit bekannter Menge an Androstenedion. Siehe Etiketten der Fläschchen für erwartete Werte und Akzeptanzbereiche Volumen: 1.0 ml/fläschchen Stabilität: 12 Monate in ungeöffneten Fläschchen oder wie auf dem Etikett angezeigt. Einmal geöffnet sollten die Standards innerhalb von 14 Tagen verbraucht werden oder aliquotiert und eingefroren werden. Mehrfache Auftau und Einfrierzyklen vermeiden. 5. WASHBUF CONC Waschpuffer Konzentrat Inhalt: Zwei Flaschen Puffer mit nichtionischem Detergens und quecksilberfreiem Konservierungsmittel. Volumen: 50 ml/flasche Vorbereitung: Im Verhältnis 1:10 in bidestilliertem oder deionisiertem Wasser vor Gebrauch verdünnen. Wenn die ganze Platte benutzt werden soll, 50 ml des Waschpufferkonzentrats mit 450 ml Wasser verdünnen. 6. TMB SUBS TMB Substratlösung Gebrauchsfertig. Inhalt: Eine Flasche mit Tetramethylbenzidin und Wasserstoffperoxid in einem DMFfreien oder DMSOfreien Puffer. Volumen: 18 ml/ Flasche 7. TMB STOP TMB Stopplösung Gebrauchsfertig. Inhalt: Eine Flasche mit 1M Schwefelsäure. Volumen: 8 ml/ Flasche V6.2 / May 15, / 6

5 TESTDURCHFÜHRUNG Alle Reagenzien müssen vor Gebrauch Raumtemperatur erreicht haben. Standards, Kontrollen und Proben sollten in Doppelbestimmungen durchgeführt werden. Ist der Test einmal gestartet, sollten alle Schritte ohne Unterbrechung durchgeführt werden. 1. Die Gebrauchslösungen des Waschpuffers vorbereiten 2. Die gewünschte Anzahl an MikrowellStreifen abbrechen. Den Beutel schließen und die restlichen MikrowellStreifen wieder kühl lagern. 3. Je 25 µl von jedem Standard, jeder Kontrolle und Probe in die entsprechend markierten Wells der Mikrotiterplatte pipettieren 4. Je 100 µl Enzymkonjugat in jedes Well pipettieren. (Wir empfehlen den Gebrauch einer Mehrkanalpipette) 5. 1 h bei RT auf einem Orbitalschüttler (ca. 600 U/min) oder Linearschüttler (ca. 200 U/min) inkubieren. 6. Platte 3 x mit 300 µl verdünntem Waschpuffer waschen. Restliche Flüssigkeit auf Papiertüchern ausklopfen um sicherzustellen, dass sie trocken ist. (Der Gebrauch eines Waschsystems ist empfohlen.) 7. Um Substrat oder Stopplösung hinzuzufügen, wenn möglich 8KanalPipette verwenden. Das Pipettieren sollte für das Substrat und die Stopplösung in jeweils gleichen Zeitintervallen erfolgen. Die Bildung von Luftblasen sollte vermieden werden µl der TMB Substratlösung in jedes Well pipettieren min bei RT (1825 C) ) auf einem Orbitalschüttler (ca. 600 U/min) oder Linearschüttler (ca. 200 U/min) inkubieren oder bis Standard A eine dunkelblaue Farbe für die gewünschte OD erreicht 10. Die Substratreaktion durch Zugabe von 50 µl TMB Stopplösung in jedes Well stoppen. Platte kurz und leicht schütteln. 11. Die optische Dichte mit einem Photometer bei 450 nm* innerhalb von 20 min messen. *) Wenn die OD die Obergrenze zur Detektion überschreitet oder wenn ein 450 nmfilter nicht zur Verfügung steht, kann ein Filter mit 405 nm oder 415 nm benutzt warden. Die OD sind dann niedriger, was allerdings nicht die Ergebnisse der Patienten oder Kontrollproben beeinflusst. TESTAUSWERTUNG 1. Die optische Dichte jeder Standarddoppelbestimmung berechnen. 2. Eine Standardkurve auf semilogpapier mit den durchschnittlichen Werten zur optischen Dichte auf der yachse und den Standardkonzentrationen auf der xachse zeichnen. Wenn eine ImmunoassaySoftware benutzt wird, wird eine 4 oder 5ParameterKurve empfohlen. 3. Die durchschnittliche optische Dichte jeder ProbenDoppelbestimmung berechnen. 4. Die Werte der Proben direkt von der Standardkurve ablesen. 5. Haben die Proben eine Konzentration höher als 10 ng/l, diese mit Standard A in einem Verhältnis kleiner als 1:8 verdünnen. Das erhaltene Ergebnis muss mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert werden. TYPISCHE STANDARDWERTE Standard Mittelwert OD Wert (ng/ml) A B C D E F Unknown TYPISCHE STANDARDKURVE Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden. V6.2 / May 15, / 6

6 TESTCHARACTERISTIKA SENSITIVITÄT Die Nachweisgrenze/ Limit of Detection (LoD) wurde aus der Analyse von 64 Leerwertbestimmungen und einer Niedrigwertprobe bestimmt und wurde wie folgt berechnet: LoD = μb σB σS, wobei σb und σs die Standardabweichung der Leer und Niedrigwertprobe sind und μb der Mittelwert des Leerwert (blank) ist. Die Nachweisgrenze (Limit of Detection = LoD) wurde mit 0,04 ng / ml bestimmt. SPEZIFIZITÄT (KREUZREAKTIONEN) Folgende Komponenten wurden auf AndrostenedionKreuzreaktivität getestet. Steroid % Kreuzreaktivität Androstenedione 100 DHEA 1.8 Testosterone 0.2 Estrone <0.1 Estradiol <0.1 Progesterone <0.1 17OHProgesterone <0.1 5αDHT <0.1 Cortisol <0.01 DHEAS <0.01 INTRAASSAY PRÄZISION Vier Proben wurden jeweils 24 mal mit der gleichen Kalibrationskurve bestimmt. Die Ergebnisse (in ng/ml) sind nachfolgend dargestellt: Probe Mittelwert SD CV% INTERASSAY PRÄZISION Drei Proben wurden zehnmal über einen Zeitraum von vier Wochen untersucht Die Ergebnisse (in ng/ml) sind nachfolgend dargestellt: Probe Mittelwert SD CV% WIEDERFINDUNG Es wurden gespikte Proben durch Hinzufügen bestimmter Mengen Androstenedion zu drei Serumproben hergestellt. Die Ergebnisse (in mg/l) sind nachfolgend dargestellt: Gemessenes Erwartetes Wiederfindung Probe 1. Nativ Nativ Nativ Ergebnis Ergebnis % V6.2 / May 15, / 6

7 LINEARITÄT Drei Serumproben wurden mit Kalibrator A seriell verdünnt. Die Ergebnisse (in ng/ml) sind nachfolgend dargestellt: Probe 1 1:2 1:4 1:8 2 1:2 1:4 1:8 3 1:2 1:4 1:8 Gemessenes Ergebnis Erwartetes Ergebnis Wiederfindung % ERWARTETE NORMALWERTE Wie für alle klinische Assays sollte jedes Labor Daten sammeln und einen eigenen Bereich für erwartete Normalwerte erstellen Gruppe N Mittelwert (ng/ml) Bereich (ng/ml) Männer Frauen LITERATUR 1. Perel E, et al. The Conversion of Androstenedione to Estrone, Estradiol, and Testosterone in Breast Tissue. J Steroid Biochem. 1980; 13: Bermúdez JA, et al. Stereochemical Approach to Increase the Specificity of Steroid Antibodies. J Steroid Biochem. 1975; 6: Hampl R, et al. The Use of Iodinated Steroid as Radioligand for Testosterone Radioimmunoassay. J Steroid Biochem. 1978; 9: Hummer L, et al. An Easy and Reliable Radioimmunoassay of Serum Androstenedione: AgeRelated Normal Values in 252 Females Aged 2 to 70 Years. Scand J Clin Lab Invest. 1983; 43: Hennam JF, et al. A Cost Reductive Method for the Radioimmunoassay of Plasma Androstenedione. A Comparison of Antisera and the Effects of Chromatography. Acta Endocrinol. 1974; 76: Judd HL, et al. Serum Androstenedione and Testosterone Levels During the Menstrual Cycle. J Clin Endo Metabo. 1973; 36: LejeuneLenair C, et al. A Direct RadioImmunoassay for Plasma Delta 4Androstenedione. Application to Children. Clin Chem Acta. 1979; 94: Parker LN, et al. An Improved Radioimmunoassay for 4Androstene3, 17Dione. Steroids. 1977; 29: Pizarro MA, et al. Human Testicular Metabolism of Testosterone and Androstenedione in Normal and Infertile Men. J Steroid Biochem. 1980; 12: Rao PN, et al. Specific Antisera Suitable for SolidPhase Radioimmunoassay of 11Beta Hydroxyandrost4Ene3,17Dione. Steroids. 1974; 24: Putz Z, et al. A Selective Radioimmunoassay of Androstenedione in Plasma and Saliva. J Clin Chem Clin Biochem. 1982; 20: Schanbacher BD, et al. Simultaneous Determination of Testosterone, 5AlphaAndrostan17BetaOl3 One, 5AlphaAndrostane3Alpha, 17BetaDiol and 5AlphaAndrostane3Beta, 17BetaDiol in Plasma o f A dult M ale R abbits b y R adioimmunoassay(1). Endocrinology. 1975; 97: Slaats EH, et al. Interference of SexHormone Binding Globulin in the CoatACount Testosterone No Extraction Radioimmunoassay. Clin Chem. 1987; 33: Swinkles LM, et al. Salivary and Plasma Free Testosterone and Androstenedione Levels in Women Using Oral Contraceptives Containing Desogestrel or Levonorgestrel. Ann Clin Biochem. 1988; 23: Thorneycroft IH, et al. A Radioimmunoassay of Androstenedione. Steroids. 1973; 21: Check JH, et al. Falsely Elevated Steroidal Assay Levels Related to Heterophile Antibodies Against Various Animal Species. Gynecol Obstet Invest. 1995; 40(2): V6.2 / May 15, / 6

8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.No.: / Kat.Nr.: / No. Cat.: / Cat.No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / ΑριθμόςΚατ.: LotNo.: / ChargenBez.: / No. Lot: / LotNo.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / InvitroDiagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για InVitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: 11 IBL@IBLInternational.com WEB: Symbols Version 4.5 /