7. Anhang. 7. Anhang. Abbildung 7.1: Aminosäuresequenz AtMYC2 im Wildtyp und in jin1. Unterschiede zwischen den Sequenzen sind rot unterlegt.

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1 7. Anhang jin1 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV AtMYC2 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV jin1 LGWGDGYYKGEEDKANPRRRSSSPPFSTPADQEYRKKVLRELNSLISGGVAPSDDAVDEEVTDTEWFFLVSMTQSFACGAGLAGKAFATGNAVWVSGSDQ AtMYC2 LGWGDGYYKGEEDKANPRRRSSSPPFSTPADQEYRKKVLRELNSLISGGVAPSDDAVDEEVTDTEWFFLVSMTQSFACGAGLAGKAFATGNAVWVSGSDQ jin1 LSGSGCERAKQGGVFGMHTIACIPSANGVVEVGSTEPIRQSLDLINKVRILFNFDGGAGDLSGLNWNLDPDQGENDPSMWINDPIGTPGSNEPGNGAPSS AtMYC2 LSGSGCERAKQGGVFGMHTIACIPSANGVVEVGSTEPIRQSSDLINKVRILFNFDGGAGDLSGLNWNLDPDQGENDPSMWINDPIGTPGSNEPGNGAPSS jin1 SSQLFSKSIQFENGSSSTITENPNLDPTPSPVHSQTQNPKFNNTFSRELNFSTSSSTLVKPRSGEILNFGDEGKRSSGNPDPSSYSGQTQFENKRKRSMV AtMYC2 SSQLFSKSIQFENGSSSTITENPNLDPTPSPVHSQTQNPKFNNTFSRELNFSTSSSTLVKPRSGEILNFGDEGKRSSGNPDPSSYSGQTQFENKRKRSMV jin1 LNEDKVLSFGDKTAGESDHSDLEASVVKEVAVEKRPKKRGRKPANGREEPLNHVEAERQRREKLNQRFYALRAVVPNVSKMDKASLLGDAIAYINELKSK AtMYC2 LNEDKVLSFGDKTAGESDHSDLEASVVKEVAVEKRPKKRGRKPANGREEPLNHVEAERQRREKLNQRFYALRAVVPNVSKMDKASLLGDAIAYINELKSK jin1 VVKTESEKLQIKNQLEEVKLELAGRKASASGGDMSSSCSSIKPVGMEIEVKIIGWDAMIRVESSKRNHPAARLMSALMDLELEVNHASMARIH*. AtMYC2 VVKTESEKLQIKNQLEEVKLELAGRKASASGGDMSSSCSSIKPVGMEIEVKIIGWDAMIRVESSKRNHPAARLMSALMDLELEVNHASMSVVNDLMIQQA jin1.. AtMYC2 TVKMGFRIYTQEQLRASLISKIG* Abbildung 7.1: Aminosäuresequenz AtMYC2 im Wildtyp und in jin1. Unterschiede zwischen den Sequenzen sind rot unterlegt. 114

2 BLAST query on Arabidopsis sequences Query performed by the The Arabidopsis Information Resource () for full BLAST options and parameters, refer to the NCBIBLAST Documentation BLASTN [Jan ] Reference: Altschul, Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schäffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25: Sequences producing significant alignments: Score E (bits) Value At1g t04646 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At5g t03324 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At1g t04498 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At4g t01109 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At5g t03597 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha At3g t03502 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At1g t04100 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At2g t01255 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At1g t05240 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At3g t03932 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At3g t03415 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At2g t01260 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp At2g t00694 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha At4g t00503 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-167 At3g t03553 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-160 At1g t04326 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-160 At5g t03264 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-158 At5g t05149 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-158 At1g t03987 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-155 At5g t03928 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-122 At1g t04278 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-117 At3g t04120 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-113 At5g t03304 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-93 At2g t00688 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-89 At5g t03099 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-79 At4g t01252 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-79 At2g t00987 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-71 At4g t01222 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-62 At5g t03716 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-59 At5g t03712 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-59 At2g t01038 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-51 At1g t05033 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-51 At2g t01060 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-50 At5g t03550 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-48 At5g t03685 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-45 At4g t00999 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-45 At3g t04687 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-44 At4g t01025 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-36 At5g t03414 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-32 At1g t04333 CACTA-like transposase family (Ptta/En/Sp e-32 At1g t04341 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-32 At5g t03435 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-29 At3g t03581 CACTA-like transposase family (Tnp2/En/Sp e-29 At4g t01223 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-27 At5g t03326 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-06 At3g t03447 CACTA-like transposase family (En/Spm) ha e-04 Abbildung 7.2: BLAST Sequenzvergleich, der in jin1 gefundenen Sequenz am Ende des AtMyc2-Gens. 115

3 Atmyc2-Sequenz: ataaaataagtaattaatctgttataaaaaatatattctaaaagttgacaaaacgacaaatataaatcgaaaaaataggtgaaaagttatagtaaagtgt Eco72I ttttccactgagctcacagttcactctttggtacaaaagaaacaatcagttaaaatctaagtcaatcattaaagagcgtgtgatacacgtgcgaccaaac agccgtacgatctcactcacttccggtcttaattcttaccgcgtcgatccaacagtcgatggggttaaatcgggatgtgagttcatcgaagcttctctct ctcttacaaccatccacgtttcccaatgaaatctcgccacgtaatatccctaacaacaaatttacacattcaccctcaagatcagttacacatataataa tcgcagacgctctccatttttctccactacgaagactttctcctatctctctctctctcattaaaaacgtgtttttttttaccggtcaccggtttatgga EcoRV ATGACTGATTACCGGCTACAACCAACGATGAATCTTTGGACCACCGACGACAACGCTTCTATGATGGAAGCTTTCATGAGCTCTTCCGATATCTCAACTT HaeIII TATGGCCTCCGGCGTCGACGACAACCACGACGGCGACGACTGAAACAACTCCGACGCCGGCGATGGAGATTCCGGCACAGGCGGGATTTAATCAAGAGAC TCTTCAGCAACGTTTACAAGCTTTGATTGAAGGAACACACGAAGGTTGGACCTACGCTATATTCTGGCAACCGTCGTATGATTTCTCCGGCGCCTCCGTG CTCGGATGGGGAGATGGTTATTACAAAGGTGAAGAAGATAAAGCAAACCCGAGACGGAGATCGAGTTCGCCGCCGTTTTCTACTCCGGCGGATCAGGAGT ACAGGAAAAAAGTGTTGAGAGAGCTTAACTCGTTGATCTCCGGTGGTGTTGCTCCGTCGGATGACGCTGTTGATGAGGAGGTGACGGATACGGAATGGTT TTTCTTGGTTTCGATGACGCAGAGCTTCGCTTGCGGTGCGGGATTAGCTGGTAAAGCGTTTGCAACGGGTAACGCGGTTTGGGTTTCCGGGTCAGATCAA TTATCCGGGTCGGGTTGTGAACGGGCTAAGCAAGGAGGAGTGTTTGGGATGCATACTATTGCGTGTATTCCTTCGGCGAACGGAGTTGTGGAAGTCGGGT CAACGGAGCCGATCCGACAGAGTTCGGACCTTATTAACAAGGTTCGAATTCTTTTCAATTTCGACGGCGGAGCTGGAGATTTATCGGGTCTTAATTGGAA MvaI TCTTGACCCGGATCAAGGTGAGAACGACCCGTCTATGTGGATTAATGACCCGATTGGAACACCTGGATCTAACGAACCGGGTAACGGAGCTCCAAGTTCT AGCTCCCAGCTTTTTTCAAAGTCTATTCAGTTTGAGAACGGTAGCTCAAGCACAATAACCGAAAACCCGAATCTGGATCCGACTCCGAGTCCGGTTCATT CTCAGACCCAGAATCCGAAATTCAATAACACTTTCTCCCGAGAACTTAATTTTTCGACGTCAAGTTCTACTTTAGTGAAACCAAGATCCGGCGAGATATT AAACTTCGGCGATGAAGGTAAACGAAGCTCCGGAAACCCGGATCCAAGTTCTTATTCGGGTCAAACACAATTCGAAAACAAAAGAAAGAGGTCGATGGTT TTGAACGAAGATAAAGTTCTATCATTCGGAGATAAAACCGCCGGAGAATCAGATCACTCCGATCTAGAAGCTTCCGTCGTGAAAGAAGTAGCAGTAGAGA AACGTCCAAAGAAACGAGGAAGAAAGCCAGCAAACGGTAGAGAAGAGCCACTAAACCACGTCGAAGCAGAGAGACAAAGACGCGAGAAACTAAACCAAAG ATTCTACGCGTTACGAGCGGTTGTACCAAACGTTTCAAAAATGGATAAAGCTTCGTTACTCGGTGACGCAATCGCTTACATCAACGAGCTTAAATCCAAA GTAGTCAAAACAGAGTCAGAGAAACTCCAAATCAAGAACCAGCTCGAGGAAGTGAAACTCGAGCTCGCCGGAAGAAAAGCGAGTGCTAGTGGAGGAGATA TGTCGTCTTCGTGTTCTTCGATTAAACCGGTGGGGATGGAGATTGAAGTGAAGATAATTGGTTGGGACGCAATGATTAGAGTTGAATCTAGTAAGAGGAA TCATCCGGCGGCGAGGTTGATGTCGGCGTTGATGGATTTGGAGTTGGAAGTGAATCACGCGAGTATGTCGGTGGTTAACGATTTGATGATTCAACAAGCG ACGGTGAAGATGGGTTTTAGGATCTATACGCAAGAACAGCTCAGAGCAAGTTTGATTTCAAAAATCGGTTAAaagggtgtgttttgggaagtttagaaag ttatggggtcaaatcataattaattcgttttagtggcttcagtaattttgtagattttagttttgtaagaaaaaaatcttaaaatagagcgacaagtttc ttcttttgctctatgtttgagtctgtatcgttttattgttgtatctcctcaatgagtaaacttgtatatattgatatgagtaatatgagttagttactga aaaagttaatatttctacacaatttcatatgataaaaaagaaaaagaaatcgagtataaatggtctaaaataagagactaatggtcatgatcactgattt tgtacatatggtcaaaaatgtctctcctaacacatcaaacttaggaagagagacaaatcttaagtaagttaagtcgagagggagaccatatgcacagttt tcttaagtcagtgtgataatgtttcctcttgtctaatcaataagacacaacacacataaaccttagtataat Abbildung 7.3: Schnittstellen der in Southern Analysen verwendeten Restriktionsenzyme ROT: Sondensequenz 116

4 PCR mit pfu-polymerase zur Amplifikation von AtMyc2 aus WtC Primer F: NcoI-Schnittstelle Primer R: KpnI-Schnittstelle Klonierung des PCR-Produktes in den pcr2.1 TOPO Vektor Verdau mit KpnI + NcoI und Klonierung in prt100-35s-promotor - poly-a Signal Verdau mit PstI und Klonierung in den Binärvektor pcb302 - BASTA-Resistenz Transformation in Agrobacterium tumefaciens GV3101 Transformation in jin1-pflanzen Abbildung 7.4: Übersicht über die Vorgehensweise zur Komplementation des jin1-phänotyps unter Kontrolle des 35S-Promotors Primer F: ACC ATG GAA TGA CTG ATT ACC GGC TAC AA R: AGG TAC CTT TTA ACC GAT GAT TTT TGA AAT CA 117

5 PCR mit pfu-polymerase zur Amplifikation der Promotorregion von AtMyc2 aus WtC Primer F: PstI-Schnittstelle Klonierung des PCR-Produktes in den pcr2.1 TOPO Vektor (Invitrogen) prt100-konstrukt aus der 35S-Komplementation Verdau mit SgrAI und PstI, Klonierung in prt100 PstI-Verdau und Klonierung in den binären Vektor pcb302 Transformation in Agrobacterium tumefaciens GV3101 Transformation in jin1-pflanzen Abbildung 7.5: Übersicht über die Vorgehensweise zur Komplementation des jin1-phänotyps unter Kontrolle des endogenen Promotors. Primer F: ACT GCA GAT GTC TCA GAA AAT TAT ATT C R: AGG TAC CTT CGT GTG TTC CTT CAA TCA AAG C 118

6 Summary of BLAST Results Abbildung 7.6: AtMYC2 zeigt große Sequenzähnlichkeiten mit weiteren MYC Proteinen im Arabidopsis Genom 119

7 Abbildung 7.7: Die abgeleitete Aminosäuresequenz von AtMYC2 verglichen mit drei weiteren MYC Proteinen in Arabidopsis thaliana (At4g17880, At5g46760, At5g46830). 120

8 Abbildung 7.8: Die abgeleitete Aminosäuresequenz von AtMYC2 verglichen mit MYC Proteinen der Tomate (JAMYC2, JAMYC10) 121