UA Precipath U plus (10 x 3 ml, für USA) Code Precipath U plus (10 x 3 ml) Code 301

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1 Bestellinformation Gerät(e), auf dem/denen das cobas c pack/die cobas c packs verwendet werden kann/können Tests System ID Roche/Hitachi cobas c 701/ Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Code Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, für USA) Code Precinorm U plus (10 x 3 ml) Code Precinorm U plus (10 x 3 ml, für USA) Code Precipath U plus (10 x 3 ml) Code Precipath U plus (10 x 3 ml, für USA) Code Precinorm U (20 x 5 ml) Code Precinorm U (4 x 5 ml) Code Precipath U (20 x 5 ml) Code Precipath U (4 x 5 ml) Code PreciControl ClinChem Multi 1 (20 x 5 ml) Code PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml) Code PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml, für USA) Code PreciControl ClinChem Multi 2 (20 x 5 ml) Code PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml) Code PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml, für USA) Code Diluent NaCl 9 (119 ml) System ID Deutsch Systeminformation : ACN 8700 () U: ACN 8702 () Anwendungszweck In-vitro-Test zur quantitativen Bestimmung von Harnsäure in Humanserum, -plasma und -urin mit Roche/Hitachi cobas c Systemen. Zusammenfassung 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 Harnsäure ist das Endprodukt des Purinstoffwechsels im menschlichen Organismus. Harnsäurebestimmungen werden zur Diagnose und Verlaufskontrolle zahlreicher Nieren- und Stoffwechselstörungen wie Niereninsuffizienz, Gicht, Leukämie, Psoriasis, bei Hungerzuständen und anderen Erkrankungen mit Ernährungsstörungen sowie bei Patienten unter zytostatischer Therapie eingesetzt. Die Oxidation der Harnsäure bildet die Grundlage für zwei Verfahren zur quantitativen Bestimmung dieses Purinmetaboliten. Ein Verfahren ist die Reduktion der Phosphorwolframsäure in alkalischer Lösung zu Wolframblau, das photometrisch gemessen wird. Diese Methode wird allerdings durch Medikamente und andere reduzierende Substanzen als Harnsäure gestört. Ein zweites Verfahren, von Praetorius und Poulson beschrieben, verwendet das Enzym Uricase zur Oxidation der Harnsäure. Diese Methode eliminiert im Wesentlichen die Einflüsse durch chemische Oxidation. Die Uricase kann bei Methoden, die über UV-Messungen den Verbrauch an Harnsäure bestimmen, oder in Kombination mit anderen Enzymen in einem Farbtest eingesetzt werden. Eine andere Methode ist der von Town et al. entwickelte Farbtest. Die Probe wird zunächst mit einem Reagenzgemisch, das Ascorbatoxidase und ein Aufhellsystem enthält, inkubiert. Bei diesem Testsystem ist es wichtig, dass in der Probe vorhandene Ascorbinsäure in der Vorreaktion eliminiert wird, um die folgende POD-Indikatorreaktion nicht zu stören. Nach Zugabe von Startreagenz beginnt die Oxidation der Harnsäure durch die Uricase. Der hier beschriebene Test von Roche ist eine Variante des vorher beschriebenen Farbtests. In dieser Reaktion bildet das entstandene Peroxid in Gegenwart der Peroxidase (POD), N Ethyl N (2 hydroxy 3 sulfopropyl) 3 methylanilin (TOOS) und 4 Aminophenazon einen Chinondiiminfarbstoff. Die Intensität des entstandenen roten Farbstoffs ist direkt proportional zur Harnsäurekonzentration und wird photometrisch gemessen. Testprinzip Enzymatischer Farbtest Harnsäure wird durch Uricase in Allantoin und Wasserstoffperoxid gespalten. Uricase Harnsäure + 2 H 2 O + O 2 Allantoin + CO 2 + H 2 O 2 In Gegenwart von Peroxidase wird 4 Aminophenazon durch Wasserstoffperoxid zu einem Chinondiiminfarbstoff oxidiert. 2 H 2 O 2 + H + + TOOS a) + 4 Aminophenazon Peroxidase Chinondiiminfarbstoff + 4 H 2 O Die Farbintensität des gebildeten Chinondiimins ist direkt proportional zur Harnsäurekonzentration und wird durch Messung der Extinktionszunahme bestimmt. a) N Ethyl N (2 hydroxy 3 sulfopropyl) 3methylanilin Reagenzien - gebrauchsfertige Lösungen R1 R3 Phosphatpuffer: 0.05 mol/l, ph 7.8; TOOS: 7 mmol/l; Fettalkoholpolyglykolether: 4.8 ; Ascorbatoxidase (EC ; Zucchini) 83.5 µkat/l (25 C); Stabilisatoren Phosphatpuffer: 0.1 mol/l, ph 7.8; Kaliumhexacyanoferrat (II): 0.3 mmol/l; 4 Aminophenazon 3 mmol/l; Uricase (EC ; Arthrobacter protophormiae) 83.4 µkat/l (25 C); Peroxidase (POD) (EC ; Meerrettich) 50 µkat/l (25 C); Stabilisatoren R1 befindet sich in Position B und R3 in Position C. Vorsichtsmaßnahmen und Warnhinweise In-vitro-Diagnostikum. Die beim Umgang mit Laborreagenzien üblichen Vorsichtsmaßnahmen beachten. Die Entsorgung aller Abfälle ist gemäß den lokalen Richtlinien durchzuführen. Sicherheitsdatenblatt auf Anfrage für berufsmäßige Benutzer erhältlich. Reagenz-Handhabung Gebrauchsfertig 1 / 5

2 Lagerung und Haltbarkeit Haltbarkeit bei 2 8 C: Im Gerät, in Gebrauch und gekühlt: Im Reagent Manager: Diluent NaCl 9 Haltbarkeit bei 2 8 C: Im Gerät, in Gebrauch und gekühlt: Im Reagent Manager: Siehe Verfallsdatum auf dem cobas c pack Etikett. 4 Wochen 24 Stunden Siehe Verfallsdatum auf dem cobas c pack Etikett. 4 Wochen 24 Stunden Probenentnahme und Vorbereitung Zur Probenentnahme und -vorbereitung nur geeignete Röhrchen oder Sammelgefäße verwenden. Nur die nachfolgend aufgeführten Proben wurden getestet und können verwendet werden. Serum Plasma: Li Heparin und K 2 EDTA-Plasma EDTA-Plasmawerte sind um ca. 7 niedriger als Serumwerte. Die aufgeführten Probenarten wurden mit einer Auswahl an handelsüblichen Probenentnahmeröhrchen, die zu diesem Zeitpunkt erhältlich waren, getestet, d.h. nicht alle erhältlichen Röhrchen aller Hersteller wurden getestet. Probenentnahmesysteme von verschiedenen Herstellern können unterschiedliche Materialien enthalten, die die Testergebnisse im Einzelfall beeinflussen können. Bei der Verwendung von Primärröhrchen (Probenentnahmesysteme) sind die Anweisungen des Herstellers zu beachten. : Die Harnsäurebestimmung in umgehend durchführen. Nicht im Kühlschrank aufbewahren. Zur Vermeidung einer Ureatausfällung in proben Natriumhydroxid zugeben, um den alkalisch zu halten (ph > 8.0). Um die angegebene haltbarkeit zu erreichen, NaOH vor Probenentnahme zufügen. Die proben werden mit destilliertem/entionisiertem Wasser oder NaCl (0.9 ) im Verhältnis verdünnt. Diese Verdünnung wird bei der Berechnung der Ergebnisse berücksichtigt. Proben, die Präzipitate enthalten, müssen vor dem Test zentrifugiert werden. Haltbarkeit in : 15 5 Tage bei 2 8 C 6 Monate bei (-15) (-25) C Haltbarkeit in 4 Tage bei C (nach Zugabe von NaOH): 16 Gelieferte Materialien Siehe "Reagenzien - gebrauchsfertige Lösungen". Zusätzlich benötigte Materialien Siehe Abschnitt "Bestellinformation". Allgemein übliche Laborausrüstung Testdurchführung Um eine einwandfreie Funktion des Tests sicherzustellen, sind die gerätespezifischen Anweisungen zu befolgen. Gerätespezifische Testanweisungen sind im entsprechenden Bedienungshandbuch zu finden. Für Arbeitsanleitungen, die nicht von Roche validiert wurden, wird keine Gewähr übernommen. Sie müssen vom Anwender definiert werden. Applikation für Serum und Plasma cobas c 701/702 Testdefinition Messart 2 Punkt-End Reaktionszeit / Messpunkte 10 / Wellenlänge (Neben/Haupt) 700/546 nm Reaktionsrichtung Einheiten Steigend mg/dl (µmol/l, mg/l) Reagenzpipettierung Diluens (H 2 O) R1 72 µl 25 µl R3 14 µl 20 µl Probenvolumen Probe Probenverdünnung Probe Normal 3 µl Diluens (NaCl) Reduziert 12 µl 15 µl 135 µl Erhöht 6 µl Applikation für cobas c 701/702 Testdefinition Messart 2 Punkt-End Reaktionszeit / Messpunkte 10 / Wellenlänge (Neben/Haupt) Reaktionsrichtung Einheiten 700/546 nm Steigend mg/dl (µmol/l, mg/l) Reagenzpipettierung Diluens (H 2 O) R1 72 µl 25 µl R3 14 µl 20 µl Probenvolumen Probe Probenverdünnung Probe Diluens (NaCl) Normal 3 µl 15 µl 150 µl Reduziert 3 µl 6 µl 160 µl Erhöht 6 µl 15 µl 150 µl Kalibration Kalibratoren Kalibrationsart Kalibrationshäufigkeit S1: H 2 O S2: C.f.a.s. Linear 2 Punkt-Kalibration - nach Reagenzchargenwechsel - wenn Qualitätskontrollverfahren dies erfordern Rückführbarkeit: Diese Methode wurde gegen die ID/MS standardisiert. 17 Qualitätskontrolle Zur Qualitätskontrolle sind die unter "Bestellinformation" aufgeführten Materialien zu verwenden. Zusätzlich kann anderes geeignetes Kontrollmaterial verwendet werden. Quantitative kontrollen werden für die Routinequalitätskontrolle empfohlen. Die Kontrollintervalle und Kontrollgrenzen sind den individuellen Anforderungen jedes Labors anzupassen. Die Ergebnisse müssen innerhalb der definierten Bereiche liegen. Jedes Labor sollte Korrekturmaßnahmen für den Fall festlegen, dass Werte außerhalb der festgelegten Grenzen liegen. Bei der Qualitätskontrolle die entsprechenden Gesetzesvorgaben und Richtlinien beachten. 2 / 5

3 Berechnung Die Roche/Hitachi cobas c Systeme berechnen automatisch die Analytkonzentration der Probe. Umrechnungsfaktoren: mg/dl x 59.5 = µmol/l mg/dl x 10 = mg/l Einschränkungen des Verfahrens - Interferenzen Als Bewertung gilt: Wiederfindung ± 10 vom Ausgangswert bei einer Harnsäurekonzentration von 7 mg/dl (417 µmol/l). Ikterus: 18 Keine wesentliche Beeinflussung bis zum Index I von 40 (ca. 684 µmol/l bzw. 40 mg/dl konjugiertes und unkonjugiertes Bilirubin). Hämolyse: 18 Keine wesentliche Beeinflussung bis zum Index H von 1000 (ca. 621 µmol/l bzw mg/dl Hämoglobin). Lipämie (Intralipid): 18 Keine wesentliche Beeinflussung bis zu einem Index L von Es besteht keine zufriedenstellende Übereinstimmung zwischen dem L-Index (entspricht der Trübung) und der Triglyceridkonzentration. Ascorbinsäure < 0.17 mmol/l (< 3 mg/dl) stört nicht. Medikamente: In therapeutischen Konzentrationen wurde bei üblichen Medikamenten-Panels keine Störung gefunden. 19,20 Ausnahmen: Calciumdobesilat führt zu falsch niedrigen Harnsäurewerten. Uricase reagiert spezifisch mit Harnsäure. Andere Purinderivate können die Harnsäurereaktion hemmen. Dicynone (Etamsylat) in therapeutischen Konzentrationen kann zu falsch niedrigen Werten führen. In sehr seltenen Fällen kann eine Gammopathie, insbesondere vom Typ IgM (Waldenström-Makroglobulinämie), zu unzuverlässigen Ergebnissen führen. 21 Medikamente: In therapeutischen Konzentrationen wurde bei üblichen Medikamenten-Panels keine Störung gefunden. 20 Ausnahmen: Calciumdobesilat, Levodopa und Methyldopa können zu falsch niedrigen Harnsäurewerten führen. Hohe Homogentisinsäurekonzentrationen in proben führen zu falschen Ergebnissen. Dicynone (Etamsylat) in therapeutischen Konzentrationen kann zu falsch niedrigen Werten führen. Für diagnostische Zwecke sind die Ergebnisse stets im Zusammenhang mit der Patientenvorgeschichte, der klinischen Untersuchung und anderen Untersuchungsergebnissen zu werten. WICHTIGER HINWEIS Spezielle Waschprogrammierung: Spezielle Waschschritte sind zwingend erforderlich, wenn auf Roche/Hitachi cobas c Systemen bestimmte Testkombinationen zusammen durchgeführt werden. Die zur Vermeidung von Verschleppungen notwendigen, speziellen Waschprogrammierungen sind über den cobas link erhältlich. Eine manuelle Eingabe ist nicht erforderlich. Die neueste Version der Liste zur Vermeidung von Verschleppungen ist auch dem NaOHD/SMS/SmpCln1+2/SCCS Methodenblatt beigefügt. Weitere Anweisungen siehe Bedienerhandbuch. Gegebenenfalls muss ein spezielles Waschprogramm zur Vermeidung von Verschleppungen vor Ausgabe der Ergebnisse dieses Tests definiert werden. Grenzen und Bereiche Messbereich mg/dl ( µmol/l) Proben mit höheren Konzentrationen über die Rerun-Funktion bestimmen. Bei der Rerun-Funktion werden diese Proben 1:2.5 verdünnt. Die Ergebnisse von Proben, die durch die Rerun-Funktion verdünnt wurden, werden automatisch mit dem Faktor 2.5 multipliziert mg/dl ( µmol/l) Proben mit höheren Konzentrationen über die Rerun-Funktion bestimmen. Bei der Rerun-Funktion werden diese Proben 1:2.5 verdünnt. Die Ergebnisse von Proben, die durch die Rerun-Funktion verdünnt wurden, werden automatisch mit dem Faktor 2.5 multipliziert. Untere Messgrenzen Untere Nachweisgrenze des Tests 0.2 mg/dl (11.9 µmol/l) Die untere Nachweisgrenze entspricht der niedrigsten messbaren Analytkonzentration, die von Null unterschieden werden kann. Sie ist berechnet als die Konzentration, die 3 Standardabweichungen oberhalb des niedrigsten Standards liegt (Standard 1 + 3, Wiederholpräzision, n = 21). Werte unterhalb der unteren Nachweisgrenze (< 0.2 mg/dl) werden nicht vom Gerät markiert. 2.2 mg/dl (131 µmol/l) Die untere Nachweisgrenze entspricht der niedrigsten messbaren Analytkonzentration, die von Null unterschieden werden kann. Sie ist berechnet als die Konzentration, die 3 Standardabweichungen oberhalb des niedrigsten Standards liegt (Standard 1 + 3, Wiederholpräzision, n = 21). Werte unterhalb der unteren Nachweisgrenze (< 2.2 mg/dl) werden nicht vom Gerät markiert. Referenzwerte 22 Männer mg/dl ( µmol/l) Frauen mg/dl ( µmol/l) (Referenzbereich nach Krieg und Colombo) 1. Morgenurin mg/dl ( µmol/l) 24 Std mg/tag ( µmol/tag) entsprechend mg/dl ( µmol/l) (berechnet aus einem volumen von 1.5 L/24 h) (Referenzbereich nach Tietz) 15 Normale Ernährung Ernährung mit niedrigem Puringehalt Frauen Männer Ernährung mit hohem Puringehalt mg/24 Stunden < 400 mg/24 Stunden < 480 mg/24 Stunden < 1000 mg/24 Stunden Jedes Labor sollte die Übertragbarkeit der Referenzbereiche für die eigenen Patientengruppen überprüfen und gegebenenfalls selbst ermitteln. Spezifische Leistungsdaten des Tests Nachstehend werden repräsentative Leistungsdaten der Analysengeräte aufgezeigt. Die Ergebnisse einzelner Labors können davon abweichen. Präzision Die Präzision wurde mit Humanproben und Kontrollen gemäß einem internen Protokoll mit Wiederholpräzision (n = 21) und Zwischenpräzision (3 Aliquote pro Durchlauf, 1 Durchlauf pro Tag, 21 Tage) bestimmt. Folgende Ergebnisse wurden erzielt: Wiederholpräzision Precinorm U 4.29 (255) 0.03 (2) 0.6 Precipath U 10.5 (625) 0.0 (2) 0.3 Humanserum A 5.03 (299) 0.03 (2) 0.6 Humanserum B 11.1 (660) 0.1 (6) 0.6 Humanserum C 22.3 (1327) 0.1 (6) / 5

4 Zwischenpräzision Precinorm U 4.47 (266) 0.07 (4) 1.5 Precipath U 11.1 (660) 0.2 (12) 1.6 Humanserum (236) 0.05 (3) 1.3 Humanserum (427) 0.10 (6) 1.3 Wiederholpräzision Kontrolle Level (438) 0.11 (7) 1.4 Kontrolle Level (839) 0.1 (6) 0.9 A 44.6 (2654) 0.5 (30) 1.2 B 127 (7557) 1 (60) 0.6 C 223 (13269) 2 (119) 0.7 Zwischenpräzision Kontrolle Level (678) 0.2 (12) 1.9 Kontrolle Level (1267) 0.3 (18) (1743) 0.9 (54) (1910) 0.8 (48) 2.3 Die Ergebnisse der Zwischenpräzision stammen vom cobas c 501 Gerät als Mastersystem. Methodenvergleich Die auf einem Roche/Hitachi cobas c 701 Gerät (y) ermittelten Harnsäurewerte für Humanserum-, -plasma und -urin wurden mit den Werten verglichen, die mit dem entsprechenden Reagenz auf einem Roche/Hitachi cobas c 501 Gerät (x) bestimmt wurden. Probenanzahl (n) = 96 Passing/Bablok 25 y = 0.992x mg/dl τ = r = Lineare Regression y = 1.008x mg/dl Die Probenkonzentrationen lagen zwischen 2.60 und 22.8 mg/dl (155 und 1357 µmol/l). Probenanzahl (n) = 110 Passing/Bablok 25 y = 0.997x mg/dl τ = r = Lineare Regression y = 1.004x mg/dl Die Probenkonzentrationen lagen zwischen 3.40 und 259 mg/dl (202 und µmol/l). Literatur 1 Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag Rice EW, Gorgan BS. Clin Chem 1962;8: Kageyama N. A direct colorimetric determination of uric acid in serum and urine with uricase-catalase system Clin Chim Acta 1971;31: DiGiorgio J, Henry RJ, et al. eds. Clinical Chemistry: Principles and Technics. 2nd ed. New York, NY: Harper and Row 1974: Kaiser E, et al. Wiener Klin Wschr 1972;84: Kim EK, Waddel LD, Sunderland MLE, et al. Observations on Diagnostic Kits for the Determination of Uric Acid. Clin Biochem 1971;4: Elking MP, Karat HF. Drug induced modifications of laboratory test values. Am J Hosp Pharm 1968;25(9): Young DS, Thomas DW, Friedman RB, et al. Effects of drugs on clinical laboratory tests.clin Chem 1972;18(10): Küffer H. Causes of misleading laboratory results: disturbance due to drugs. Therap Umschau 1971;28(10): Haug H, Dorloechter G, Hermann G. Der Einfluss von Pharmaka auf Auto-Analyzer-Tests. Diagnostik 1972;5: Singh HP, Hebert MA, Gault MH. Effect of Some Drugs on Clinical Laboratory Values as Determined by the Technicon SMA Clin Chem 1972;18(2): Praetorius E, Poulsen H. Enzymatic determination of uric acid; with detailed directions. Scand J Clin Lab Invest 1953;5(3): Town MH, Gehm S, Hammer B, et al. J Clin Chem Clin Biochem 1985;23: Wu AHB, ed. Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th edition. St. Louis (MO): Saunders Elsevier 2006; WHO Publication: Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations, WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2:Jan Siekmann L. Determination of uric acid in human serum by isotope dilution-mass spectrometry. J Clin Chem Clin Biochem 1985;23: Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Breuer J. Report on the Symposium Drug effects in Clinical Chemistry Methods. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34: Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Thefeld W, Hoffmeister H, Busch EW, et al. Normalwerte der Serumharnsäure in Abhängigkeit von Alter und Geschlecht mit einem neuen enzymatischen Harnsäurefarbtest. Dtsch Med Wschr 1973;98: Krieg M, Gunsser KJ, Steinhagen-Thiessen E, et al. Comparative quantitative clinico-chemical analysis of the characteristics of 24-hour urine and morning urine. J Clin Chem Clin Biochem 1986 Nov;24(11): Colombo JP, ed. Klinisch-chemische diagnostik. Rotkreuz: LABOLIFE-Verlagsgemeinschaft 1994: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Um die Grenze zwischen dem ganzzahligen Teil und dem gebrochenen Teil einer Zahl anzugeben, wird in diesem Methodenblatt immer ein Punkt als Dezimaltrennzeichen verwendet. Tausendertrennzeichen werden nicht verwendet. Symbole In Erweiterung zur ISO werden von Roche Diagnostics folgende Symbole und Zeichen verwendet. Inhalt der Packung Volumen nach Rekonstituition oder Mischen Signifikante Ergänzungen oder Änderungen sind durch eine Markierung am Rand gekennzeichnet. 2014, Roche Diagnostics 4 / 5

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