Vitamin B12 II. Vitamin B12. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602

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1 II Deutsch Anwendungszweck In-vitro-Bindungstest zur quantitativen Bestimmung von in Humanserum und plasma. Der ElektroChemiLumineszenz ImmunoAssay ECLIA ist zur Durchführung an Elecsys und cobas e Immunoassay-Systemen vorgesehen. Zusammenfassung, auch als Cobalamin bezeichnet, ist eine komplexe organometallische Verbindung, in der ein Kobalt-Atom inmitten eines Corrin-Rings sitzt. Es handelt sich um ein wasserlösliches Vitamin, das durch Mikroorganismen synthetisiert wird. Es kann nicht im menschlichen Körper synthetisiert werden und tritt selten in Produkten pflanzlichen Ursprungs auf. Die Hauptquellen von sind Fleisch, Fisch, Eier sowie Milch und Milcherzeugnisse. 1 Die Aufnahme in den Gastrointestinaltrakt hängt vom Intrinsic Factor, der durch die gastrisch parietalen Zellen synthetisiert wird, und vom Cubam-Rezeptor im distalen Ileum ab. Der häufigste Grund eines schweren Vitamin B12-Mangels liegt im Fehlen des Intrinsic Factors aufgrund von autoimmuner atrophischer Gastritis. Die Erkrankung wird traditionell als perniziöse Anämie bezeichnet, obwohl viele Patienten hauptsächlich neurologische Manifestationen zeigen. Weitere Gründe für Vitamin B12-Mangel sind beispielsweise Malabsorption aufgrund von Gastrektomie, entzündlichen Darmerkrankungen oder Mangelernährung wie bei strengen Vegetariern (Veganern). 2 ist der Cofaktor zweier Enzyme: Methionin-Synthase und Methylmalonyl-CoA-Mutase. 2,3 Die im Zytoplasma befindliche Methionin- Synthase benötigt in Form von Methylcobalamin und katalysiert die Umwandlung von Homocystein in Methionin, eine essenzielle Aminosäure. Während dieses Schrittes wird eine Methylgruppe vom Methyltetrahydrofolat an die Aminosäure transferiert. 3 Dieses Enzym verbindet den Methylierungsweg durch die Synthese des Methyldonors S Adenosylmethionin und den Weg, auf dem Purin und Pyrimidin über die Generierung von Tetrahydrofolat synthetisiert werden. 3 In Form von 5 Desoxyadenosylcobalamin wird auch für das Mitochondrien- Enzym Methylmalonyl-CoA-Mutase benötigt, welches Methylmalonyl-CoA in Succinyl-CoA umwandelt. Dies ist ein Schritt bei der Oxidation von ungeradzahligen Fettsäuren und beim Katabolismus von ketogenen Aminosäuren. 3 ist somit wichtig für die DNA-Synthese, da es Methionin für die Protein-Synthese und Methylierung regeneriert, sowie für die Entwicklung und initiale Myelinisierung des Zentralnervensystems (ZNS) und die Aufrechterhaltung der normalen ZNS-Funktion. 2,3 Vitamin B12-Mangel tritt verbreitet in reicheren Ländern, vorwiegend bei älteren Menschen, und in ärmeren Bevölkerungsschichten auf. Die Prävalenz nimmt im Allgemeinen mit dem Alter zu. 4,5 Vitamin B12-Mangel beeinflusst die Erythrozyten-Synthese, was aufgrund abnormaler DNA-Synthese zu megaloblastärer Anämie führt. 3 Ferner beeinträchtigt Vitamin B12-Mangel die neurologischen Funktionen, insbesondere die Demyelinisation der Nerven, teilweise aufgrund abnormaler Methylierung, was zu peripherer Neuropathie, Demenz, schlechten kognitiven Leistungen und Depression führt. 3 Weitere Auswirkungen von Vitamin B12-Mangel oder Verarmung sind ein erhöhtes Risiko für Neuralrohr-Defekte, Osteoporose, zerebrovaskuläre und kardiovaskuläre Erkrankungen. 3 Eine frühzeitige Diagnose ist aufgrund der latenten Natur dieser Störung sowie der Gefahr eines dauerhaften neurologischen Schadens entscheidend. 3,5 Der primäre Test, der zur Bestätigung der Diagnose eines Vitamin B12-Mangels durchgeführt wird, ist generell die Messung des Vitamin B12-Spiegels im Serum. 2 Aktuelle Veröffentlichungen legen nahe, dass zur Verbesserung der Diagnose-Spezifität zusätzlich die folgenden Biomarker gemessen werden sollten: Folat, Methylmalonylsäure (MMA), Homocystein und Holotranscobalamin. 2,5,6,7 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 cobas e 602 Der Elecsys II Test verwendet ein kompetitives Testprinzip mit für spezifischem Intrinsic Factor. Das in der konkurriert mit dem exogen zugesetzten biotinylierten um die Bindungsstellen am mit Ruthenium-Komplex a) markiertem Intrinsic Factor. a) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-Komplex (Ru(bpy) ) Testprinzip Kompetitionsprinzip. Gesamtdauer des Tests: 27 Minuten. 1. Inkubation: Durch Inkubation der (15 µl) mit den Vitamin B12-Vorbehandlungsreagenzien 1 und 2 wird gebundenes freigesetzt. 2. Inkubation: Durch Inkubation der vorbehandelten mit dem Ruthenium-markierten Intrinsic Factor wird ein Vitamin B12-Bindungsprotein-Komplex gebildet, dessen Menge von der Konzentration des Analyten in der abhängig ist. 3. Inkubation: Nach Zugabe von Streptavidin-beschichteten Mikropartikeln und biotinyliertem werden, unter Bildung eines Ruthenium-markierten Intrinsic Factor --Biotin- Komplexes, die noch freien Bindungsstellen des Ruthenium-markierten Intrinsic Factors besetzt. Der Gesamtkomplex wird über die Biotin- Streptavidin Wechselwirkung an die Festphase gebunden. Das Reaktionsgemisch wird in die Messzelle überführt, wo die Mikropartikel durch magnetische Wirkung auf die Oberfläche der Elektrode fixiert werden. Danach werden die ungebundenen Substanzen mit ProCell/ProCell M entfernt. Durch Anlegen einer Spannung wird die Chemilumineszenzemission induziert und mit dem Photomultiplier gemessen. Die Ergebnisse werden anhand einer Kalibrationskurve ermittelt. Diese wird durch eine 2 Punkt-Kalibration und eine über den Reagenzbarcode mitgelieferte Masterkurve gerätespezifisch generiert. Reagenzien gebrauchsfertige Lösungen Auf dem Reagenz-Rackpack-Etikett (M, R1, R2) und den Vorbehandlungsreagenzien (PT1, PT2) ist B12 II angegeben. PT1 Vorbehandlungsreagenz 1 (Deckel weiß), 1 Flasche, 4 ml: Dithiothreitol g/l; Stabilisator, ph 5.5. PT2 Vorbehandlungsreagenz 2 (Deckel grau), 1 Flasche, 4 ml: M R1 R2 Natriumhydroxid 40 g/l; Natriumcyanid g/l. Streptavidin-beschichtete Mikropartikel (Deckel transparent), 1 Flasche, 6.5 ml: Streptavidin-beschichtete Mikropartikel 0.72 mg/ml; Konservierungsmittel. Intrinsic Factor ~Ru(bpy) (Deckel grau), 1 Flasche, 10 ml: Mit Ruthenium-Komplex markierter rekombinanter Intrinsic Factor (Schwein) 4 µg/l; Dicyanocobinamid 15 µg/l; Stabilisator; Humanserumalbumin; Phosphatpuffer, ph 5.5; Konservierungsmittel. ~Biotin (Deckel schwarz), 1 Flasche, 8.5 ml: Biotinyliertes 25 µg/l; Biotin 3 µg/l; Phosphatpuffer, ph 7.0; Konservierungsmittel. Vorsichtsmaßnahmen und Warnhinweise In-vitro-Diagnostikum. Die beim Umgang mit Laborreagenzien üblichen Vorsichtsmaßnahmen beachten. Die Entsorgung aller Abfälle ist gemäß den lokalen Richtlinien 1 / 5

2 II durchzuführen. Sicherheitsdatenblatt auf Anfrage für berufsmäßige Benutzer erhältlich. Die Packung enthält Bestandteile, die gemäß der Verordnung (EG) Nr. 1272/2008 wie folgt klassifiziert sind: Gefahr H290 H314 H412 Prävention: P280 Reaktion: P303 + P361 + P353 P304 + P340 + P310 P305 + P351 + P338 Kann gegenüber Metallen korrosiv sein. Verursacht schwere Verätzungen der Haut und schwere Augenschäden. Schädlich für Wasserorganismen, mit langfristiger Wirkung. Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen. BEI KONTAKT MIT DER HAUT (oder dem Haar): Alle beschmutzten, getränkten Kleidungsstücke sofort ausziehen. Haut mit Wasser abwaschen/duschen. BEI EINATMEN: Die Person an die frische Luft bringen und für ungehinderte Atmung sorgen. Sofort GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen. BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen. Die Produktsicherheitskennzeichnung folgt im Wesentlichen den in der EU gültigen GHS-Regularien. Kontakt: Tel.-Nr für alle Länder Humanmaterial gilt als potentiell infektiös. Für alle aus Humanblut hergestellten Produkte wird nur Blut von einzeln getesteten Spendern verwendet, bei denen weder Antikörper gegen HCV und HIV noch HBsAg nachzuweisen sind. Die angewendeten Testmethoden sind von der US Gesundheitsbehörde (FDA) genehmigt bzw. erfüllen die Anforderungen der Europäischen Direktive 98/79/EG, Anhang II, Liste A. Da keine Testmethode mit absoluter Sicherheit eine potentielle Infektionsgefahr ausschließen kann, sollte das Material mit der gleichen Sorgfalt behandelt werden wie eine Patientenprobe. Im Falle einer Exposition ist entsprechend den Anweisungen der zuständigen Gesundheitsbehörden vorzugehen. 8,9 Schaumbildung bei allen Reagenzien und narten (n, Kalibratoren und Kontrollen) vermeiden. Reagenz-Handhabung Die in der Packung befindlichen Reagenzien sind gebrauchsfertig zu einer untrennbaren Einheit zusammengefügt. Alle für die korrekte Anwendung benötigten Informationen werden über die jeweiligen Barcodes eingelesen. Lagerung und Haltbarkeit Aufbewahrung bei 2 8 C. Nicht einfrieren. Die Elecsys Reagenzpackung aufrecht stehend aufbewahren, um eine komplette Verfügbarkeit der Mikropartikel während des automatischen Mischens vor Gebrauch zu gewährleisten. Haltbarkeit: ungeöffnet bei 2 8 C nach dem Öffnen bei 2 8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum 84 Tage (12 Wochen) Haltbarkeit: auf den Geräten 35 Tage (5 Wochen) auf dem Gerät oder 60 Tage bei Wechsellagerung im Kühlschrank und auf dem Gerät, bei einer Gesamtzeit auf dem Gerät, die 10 x 8 Stunden nicht überschreitet nentnahme und Vorbereitung Nur die nachfolgend aufgeführten n wurden getestet und können verwendet werden. Serum, entnommen mit Standard-nentnahmeröhrchen oder Röhrchen, die Trenngel enthalten. Na Heparin, Li Heparin, K 2 EDTA und K 3 EDTA-Plasma. Li Heparin- Plasma-Röhrchen, die Trenngel enthalten, können eingesetzt werden. Als Bewertung gilt: Steigung Achsenabschnitt < ± 2 x Erfassungsgrenze (LoB) + Korrelationskoeffizient Haltbarkeit: 2 Stunden bei C, 48 Stunden bei 2 8 C, 56 Tage bei ( 15) ( 25) C. Nur einmal einfrieren. Stabilität von Serum, gewonnen mit Trennröhrchen: 24 Stunden bei 2 8 C (siehe auch Angaben der Röhrchenhersteller). Die aufgeführten narten wurden mit einer Auswahl an handelsüblichen nentnahmeröhrchen, die zu diesem Zeitpunkt erhältlich waren, getestet, d.h. nicht alle erhältlichen Röhrchen aller Hersteller wurden getestet. nentnahmesysteme von verschiedenen Herstellern können unterschiedliche Materialien enthalten, die die Testergebnisse im Einzelfall beeinflussen können. Bei der Verwendung von Primärröhrchen (nentnahmesysteme) sind die Anweisungen des Herstellers zu beachten. n, die Präzipitate enthalten, müssen vor dem Test zentrifugiert werden. Keine hitzeinaktivierten n verwenden. Hämolyse vermeiden. Keine mit Azid stabilisierten n und Kontrollen verwenden. Serum und Plasmaproben zur Vitamin B12-Bestimmung sollten nüchternen Personen entnommen werden. Hinweis: n mit extrem hohen Gesamtproteinkonzentrationen (z. B. von Patienten mit Waldenströms Makroglobulinämie) sind für diesen Test nicht geeignet, da es zur Bildung von Protein-Gel im ngefäß kommen kann. Die Abarbeitung von Protein-Gel kann zu einem Abbruch des Laufs führen. Die kritische Proteinkonzentration hängt von der individuellen nzusammensetzung ab. Die Bildung von Protein-Gel wurde in n (aufgestockt mit humanem IgG oder humanem Serumalbumin) mit einer Gesamtproteinkonzentration von > 160 g/l beobachtet. Es muss sichergestellt werden, dass die Temperatur der n, Kalibratoren und Kontrollen zur Messung C beträgt. Auf den Geräten befindliche n, Kontrollen und Kalibratoren sollten wegen möglicher Verdunstungseffekte innerhalb von 2 Stunden vermessen werden. Gelieferte Materialien Siehe "Reagenzien - gebrauchsfertige Lösungen". Zusätzlich benötigte Materialien , II CalSet, für 4 x 1 ml , PreciControl Varia, für je 2 x 3 ml PreciControl Varia 1 und , Diluent Universal, 2 x 16 ml nverdünnungsmedium, oder , Diluent Universal, 2 x 36 ml nverdünnungsmedium Allgemein übliche Laborausrüstung Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 oder cobas e Gerät Zubehör für Elecsys 2010 und cobas e 411 Geräte: , ProCell, 6 x 380 ml Systempuffer 2 / 5

3 II , CleanCell, 6 x 380 ml Messzellen- Reinigungslösung , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml Zusatz zum Waschwasser , Adapter für SysClean , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 Reaktionsgefäße , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 Pipettenspitzen Zubehör für MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 und cobas e 602 Geräte: , ProCell M, 2 x 2 L Systempuffer , CleanCell M, 2 x 2 L Messzellen-Reinigungslösung , PC/CC Cups, 12 Gefäße zum Vortemperieren von ProCell M und CleanCell M , Wash M, 12 x 70 ml Reinigungslösung für den Run-Abschluss und zum Spülen bei Reagenzwechsel , PreClean M, 5 x 600 ml Detektions- Reinigungslösung , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 Magazine je 84 Reaktionsgefäße bzw. Pipettenspitzen, Abfallbeutel , WasteLiner, Abfallbeutel , SysClean Adapter M Zubehör für alle Geräte: , ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 ml System-Reinigungslösung Testdurchführung Um eine einwandfreie Funktion des Tests sicherzustellen, sind die gerätespezifischen Anweisungen zu befolgen. Gerätespezifische Testanweisungen sind im entsprechenden Bedienungshandbuch zu finden. Das Aufmischen der Mikropartikel vor Gebrauch erfolgt automatisch. Testparameter über die auf den Reagenzien befindlichen Barcodes einlesen. Sollte in seltenen Ausnahmefällen der Barcode nicht gelesen werden können, ist die 15 stellige Zahlenfolge einzugeben. MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 und cobas e 602 Geräte: PreClean M Lösung ist erforderlich. Gekühlt gelagerte Reagenzien vor Beladung auf ca. 20 C temperieren und in den Reagenzrotor (20 C) des Gerätes platzieren. Schaumbildung vermeiden. Temperieren der Reagenzien sowie Öffnen und Schließen der Flaschen erfolgt selbsttätig im Gerät. Kalibration Rückführbarkeit: Diese Methode wurde gegen den Test ( ) standardisiert. Richtigkeit beim WHO Standard 03/178: Es wurde eine Studie zur Evaluierung der Richtigkeit des Elecsys II Tests unter Verwendung des Internationalen Standards 03/178 der Weltgesundheitsorganisation für durchgeführt. 10 Dabei wurden 2 Reagenzchargen auf 16 Geräten eingesetzt. Die mittlere Wiederfindung des Sollwertes des IS 03/178 der WHO (480 pg/ml) lag bei 102 %. Jedes Elecsys Reagenz hat ein Barcode-Etikett mit spezifischen Informationen zur Kalibration der Reagenzcharge. Die vorgegebene Masterkurve wird durch den Einsatz des entsprechenden CalSets an das Gerät angepasst. Kalibrationsfrequenz: Eine Kalibration muss einmal pro Charge mit frischem Reagenz erfolgen (maximal 24 Stunden nachdem die Reagenzpackung auf dem Gerät registriert wurde). Erneute Kalibration wird empfohlen: nach 1 Monat (28 Tagen) bei Einsatz der gleichen Reagenzcharge nach 7 Tagen (bei Einsatz der gleichen Reagenzpackung auf dem Gerät) bei Bedarf: z. B. Qualitätskontrolle außerhalb des definierten Bereichs Qualitätskontrolle Zur Qualitätskontrolle ist PreciControl Varia einzusetzen. Zusätzlich können andere geeignete Kontrollmaterialien verwendet werden. Die Kontrollen der verschiedenen Konzentrationsbereiche sind in Einfachbestimmung bei Gebrauch des Tests mindestens 1 x pro 24 Stunden, 1 x pro Reagenzpackung und anlässlich einer Kalibration mitzuführen. Die Kontrollintervalle und Kontrollgrenzen sind den individuellen Anforderungen jedes Labors anzupassen. Die Ergebnisse müssen innerhalb der definierten Bereiche liegen. Jedes Labor sollte Korrekturmaßnahmen für den Fall festlegen, dass Werte außerhalb der festgelegten Grenzen liegen. Bei der Qualitätskontrolle die entsprechenden Gesetzesvorgaben und Richtlinien beachten. Berechnung Das Gerät berechnet automatisch die Analytkonzentration jeder (wahlweise in pmol/l oder pg/ml). Umrechnungsfaktoren: pmol/l x 1.36 = pg/ml pg/ml x = pmol/l Einschränkungen des Verfahrens - Interferenzen Der Test wird nicht beeinflusst durch Ikterus (Bilirubin 1112 µmol/l bzw. 65 mg/dl), Hämolyse (Hb mmol/l bzw g/dl), Lipämie (Triglyceride 17.1 mmol/l bzw mg/dl), Biotin ( 205 nmol/l bzw. 50 ng/ml), IgG 28 g/l, IgA 16 g/l und IgM 10 g/l. Als Bewertung gilt: Wiederfindung ± 10 % vom Ausgangswert bei n > 200 pg/ml und ± 20 pg/ml bei n 200 pg/ml. Bei Patienten unter Therapie mit hohen Biotin-Dosen (> 5 mg/tag) sollte die nentnahme mindestens 8 Stunden nach der letzten Applikation erfolgen. Es wurden keine Einflüsse durch Rheumafaktoren bis zu einer Konzentration von 1500 IU/mL beobachtet. 16 häufig verwendete Pharmaka wurden in vitro getestet. Es konnten keine Störungen festgestellt werden. In seltenen Einzelfällen können Störungen durch extrem hohe Titer von Antikörpern gegen Analyt-spezifische Antikörper, Streptavidin sowie Ruthenium auftreten. Diese Einflüsse werden durch ein geeignetes Test- Design minimiert. Da normalerweise Intrinsic Factor als Bindeprotein in -Serumtests verwendet wird, können Antikörper gegen Intrinsic Factor (verbreitet bei perniziöser Anämie) zu erhöhten Vitamin B12-Messwerten führen. 2,11,12 Der Elecsys II Test ist so konzipiert, dass Störungen aufgrund von Antikörpern gegen Intrinsic Factor vermieden werden. 13 Für diagnostische Zwecke sind die Ergebnisse stets im Zusammenhang mit der Patientenvorgeschichte, der klinischen Untersuchung und anderen Untersuchungsergebnissen zu werten. Hinweis: Die Gegenwart von Immunglobulin--Komplexen kann zu unerwartet hohen Vitamin B12-Werten führen. 14,15 Grenzen und Bereiche Messbereich pg/ml bzw pmol/l (definiert durch die Erfassungsgrenze (LoB) und das Maximum der Masterkurve). Werte unterhalb der Erfassungsgrenze (LoB) werden als < 50.0 pg/ml bzw. < 36.9 pmol/l angegeben. Werte oberhalb des Messbereichs werden als > 2000 pg/ml bzw. > 1476 pmol/l angegeben. Untere Messgrenzen Erfassungsgrenze (Limit of Blank; LoB), Nachweisgrenze (Limit of Detection; LoD) und Bestimmungsgrenze (Limit of Quantitation; LoQ) Erfassungsgrenze (LoB) = 50 pg/ml (36.9 pmol/l) Nachweisgrenze (LoD) = 100 pg/ml (73.8 pmol/l) Bestimmungsgrenze (LoQ) = 150 pg/ml (111 pmol/l) mit einer zulässigen Impräzision von 20 % Die Erfassungsgrenze (LoB), die Nachweisgrenze (LoD) sowie die Bestimmungsgrenze (LoQ) wurden gemäß den Anforderungen laut EP17 A des CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) bestimmt. Die Erfassungsgrenze entspricht dem 95. Perzentil aus n 60 Messungen von analytfreien n über mehrere unabhängige Messreihen. Die Erfassungsgrenze entspricht der Konzentration unterhalb der analytfreie n mit einer Wahrscheinlichkeit von 95 % gefunden werden. Die Nachweisgrenze (LoD) wird aus der Erfassungsgrenze (LoB) und der Standardabweichung niedrig konzentrierter n ermittelt. Die 3 / 5

4 II Nachweisgrenze (LoD) entspricht der niedrigsten nachweisbaren Analytkonzentration (Wert über der Erfassungsgrenze (LoB) mit einer Wahrscheinlichkeit von 95 %). Die Bestimmungsgrenze (LoQ) ist definiert als die kleinste Analytmenge in einer, die mit einer zulässigen Impräzision von 20 % genau quantifiziert werden kann. Sie wurde mit n mit niedrigen Vitamin B12-Konzentrationen bestimmt. Verdünnung n mit Vitamin B12-Konzentrationen oberhalb des Messbereichs können manuell (1:2) mit Diluent Universal verdünnt werden. Die Konzentration der verdünnten muss > 738 pmol/l bzw. > 1000 pg/ml betragen. Ergebnisse nach manueller Verdünnung mit dem Verdünnungsfaktor 2 multiplizieren. Hinweis: Bei n mit Analytkonzentrationen außerhalb des Messbereichs wird probenabhängig eine Nichtlinearität bei Verdünnung beobachtet. Da Diluent Universal geringe Mengen an endogenem enthalten kann, sollten Linearitätsstudien mit einem bekannten analytarmen Serumpool durchgeführt werden. n außerhalb des Messbereichs können 1:2 mit Diluent Universal verdünnt werden; der endogene Vitamin B12-Gehalt hat bei diesen Konzentrationen keinen signifikanten Einfluss. Referenzwerte Da möglicherweise Unterschiede hinsichtlich Bevölkerung und Ernährungsstatus bestehen, wird empfohlen, dass jedes Labor über einen geeigneten Zeitraum in einer statistisch signifikanten Anzahl von Tests Normalbereiche ermittelt, bevor den Ergebnissen dieser Tests eine klinische Bedeutung beigemessen wird. Die untenstehenden Werte wurden mit dem Elecsys II Test in n von einer vermeintlich gesunden Population ermittelt. Die Berechnung beruht auf 135 Seren (von 68 Männern und 67 Frauen). Die Altersspanne lag zwischen 20 und 78 Jahren. Schwangere wurden ausgeschlossen. Die Auswahl der Referenzpopulation erfolgte anhand normaler Homocysteinwerte. N Median Bereich ( Perzentil) pg/ml pmol/l pg/ml pmol/l Diese Werte gelten nur als Richtlinien. Jedes Labor sollte die Übertragbarkeit der Referenzbereiche für die eigenen Patientengruppen überprüfen und gegebenenfalls selbst ermitteln. Spezifische Leistungsdaten Nachstehend werden repräsentative Leistungsdaten der Geräte aufgezeigt. Die Ergebnisse der einzelnen Laboratorien können davon abweichen. Präzision Die Präzision wurde mit Elecsys Reagenzien, gepoolten Humanseren und Kontrollen gemäß einem Protokoll (EP5 A2) des CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) bestimmt: 2 Läufe täglich (je Lauf 2-fach), jeweils über 21 Tage (n = 84). Es wurden folgende Ergebnisse erzielt: Elecsys 2010 und cobas e 411 Geräte pg/ml pg/ml % pg/ml % Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum PreciControl Varia PreciControl Varia Elecsys 2010 und cobas e 411 Geräte pmol/l pmol/l % pmol/l % Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum PreciControl Varia PreciControl Varia MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 und cobas e 602 Geräte pg/ml pg/ml % pg/ml % Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum PreciControl Varia PreciControl Varia MODULAR ANALYTICS E170, cobas e 601 und cobas e 602 Geräte pmol/l pmol/l % pmol/l % Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum Humanserum PreciControl Varia PreciControl Varia Methodenvergleich a) Ein Vergleich des Elecsys Tests (kalibriert mit CalSet II; x) mit dem Elecsys II Test (kalibriert mit II CalSet; y) in einem klinischen Patientenkollektiv ergab folgende Korrelationen (pg/ml): Anzahl der gemessenen n: 100 y = 0.952x y = 0.957x τ = r = Die nkonzentrationen lagen zwischen 69 und 1890 pg/ml (51 und 1395 pmol/l). b) Ein Vergleich des Elecsys II Tests (y) mit einer handelsüblichen Methode (x) in einem klinischen Patientenkollektiv ergab folgende Korrelationen (pg/ml): Anzahl der gemessenen n: / 5

5 II y = 0.923x y = 0.881x τ = r = Die nkonzentrationen lagen zwischen 182 und 1797 pg/ml (134 und 1326 pmol/l). c) Ein Vergleich des Elecsys II Tests auf dem cobas e 601 Gerät (y) mit dem Elecsys II Test auf dem cobas e 411 Gerät (x) in einem klinischen Patientenkollektiv ergab folgende Korrelationen (pg/ml): Anzahl der gemessenen n: 117 y = 1.01x 2.77 y = 1.01x τ = r = Die nkonzentrationen lagen zwischen 56 und 1887 pg/ml (41 und 1393 pmol/l). Spezifität (analytisch) Bei Vitamin B12-Konzentrationen von 129 pg/ml und 550 pg/ml wurden folgende Kreuzreaktionen ermittelt: Kreuzreaktant Getestete maximale Konzentration ng/ml Kreuzreaktivität % Dicyanocobinamid Literatur 1 Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and Assessment of Clinical Laboratory Results; 1st Edition, Frankfurt/Main: TH-Books- Verl.-Ges.,1998: Stabler SP. deficiency. N Engl J Med 2013;368: Allen LH. Vitamin B-12. Adv Nutr 2012;3(1): doi: /an Epub 2012 Jan 5. 4 Allen LH. How common is vitamin B-12 deficiency? Am J Clin Nutr 2009;89(2):693S-696S. Epub 2008 Dec Chatthanawaree W. Biomarkers of cobalamin (vitamin B12) deficiency and its application. J Nutr Health Aging 2011 Mar;15(3): Yetley EA, Pfeiffer CM, Phinney KW, et al., Biomarkers of vitamin B-12 status in NHANES: a roundtable summary. Am J Clin Nutr 2011 Jul;94(1):313S-321S. 7 Hvas AM, Nexo E. Diagnosis and treatment of vitamin B12 deficiency - an update. Haematologica 2006;91(11): Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens. (29 CFR Part ). Fed. Register. 9 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work. 10 Thorpe SJ, Heath A, Blackmore S, et al. International Standard for serum vitamin B12 and serum folate: international collaborative study to evaluate a batch of lyophilised serum for B12 and folate content. Clin Chem Lab Med 2007;45(3): Yang DT, Cook RJ. Spurious elevations of vitamin B12 with pernicious anemia. N Engl J Med 2012;366: Carmel R, Agrawal YP. Failures of cobalamin assays in pernicious anemia. N Engl J Med 2012;367: [Erratum, N Engl J Med 2012;367:976.] 13 Schilling KA, Wiesgigl M. The Elecsys assay is not affected by anti-intrinsic factor antibodies. Clin Chem Lab Med 2013 Jun 29;51(11):e251-e Jeffery J, Millar H, MacKenzie P, et al. An IgG complexed form of vitamin B12 is a common cause of elevated serum concentrations. Clin Biochem 2010 Jan;43(1-2): doi: /j.clinbiochem Epub 2009 Sep Bowen RA, Drake SK, Vanjani R, et al. Markedly increased vitamin B12 concentrations attributable to IgG-IgM-vitamin B12 immune complexes. Clin Chem 2006;52(11): Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Weitergehende Informationen siehe Bedienungshandbuch des jeweiligen Gerätes, gerätespezifische Applikationsblätter, Produktinformationen und Methodenblätter aller erforderlichen Komponenten (falls im Land verfügbar). Um die Grenze zwischen dem ganzzahligen Teil und dem gebrochenen Teil einer Zahl anzugeben, wird in diesem Methodenblatt immer ein Punkt als Dezimaltrennzeichen verwendet. Tausendertrennzeichen werden nicht verwendet. Symbole In Erweiterung zur ISO werden von Roche Diagnostics folgende Symbole und Zeichen verwendet. GTIN Inhalt der Packung Geräte, auf denen die Reagenzien verwendet werden können Reagenz Kalibrator Volumen nach Rekonstitution oder Mischen Globale Artikelnummer GTIN Ergänzungen, Streichungen oder Änderungen sind durch eine Markierung am Rand gekennzeichnet. 2015, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 5 / 5