Thrombozytenfunktionsanalyse mit dem Multiplate System Impedanz-Vollblut-Aggregometrie zur Beurteilung der Thrombozytenfunktion

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1 Impedanz-Vollblut-Aggregometrie zur Beurteilung der Thrombozytenfunktion Erfahrungen aus dem 1. Jahr Dr. med. Georg Wittmann Abt.f.Transfusionsmedizin und Hämostaseologie Klinikum der LMU München phone fax ATMH G.Wittmann Thrombozytenfunktionsanalyse mit dem Multiplate System ASA 5 mg i.v. Wittmann 2

2 Vollblut-basiert geschlossen 1-3 verschiedene Tests verfügbar ein Messkanal hoher Testpreis geringe Standardisierung Thrombozytenfunktions- Analyse offen Einsatz in Forschungs- und Referenz-Labors Kartridgen-basierte Thrombozytenfunktionstests Einfach zu benutzen Mehrere Messkanäle flexibel Offenes System Born-Aggregation Durchflußzytometrie Wittmann 3 Adhäsion, Spreading und Aggregation der Thrombozyten auf den Oberflächen der Elektroden bewirken eine Widerstandsänderung zwischen den beiden Sensordrähten Wittmann 4

3 Pipettiereinlass Küvette Stecker zum Anschluss an das Instrument PTFE-beschichteter Rührstab Wittmann 5 Aggregation [AU] test 1 test 2 Aggregation Test Velocity [min] 6 Area under the curve = AUC Wittmann 6

4 TRAPtest Aktivierung Inhibition COLtest TXA 2 TRAP ADPtest ADP Clopidogrel Prasugrel Cangrelor 1 Freisetzung von Arachidonsäure ASPItest Arachidonsäure Kollagen TXA 2 ArA 1 COX PGE1 ADPtest HS (ADP + PGE1) GpIIb/IIIa-Antagonisten: Reopro (abciximab) Aggrastat (Tirofiban) Integrillin (Eptifibatid) : Aspirin NSAR Thrombozytenaktivierung GpIIb/IIIa Exposition Degranulation 9/5/8 7 concentrate (PRP) 15 µl platelet concentrate + 45 µl phosphate buffer * 3 min incubation + 2 / 4 / 6 µl Collagen 3.2 / 6.4 / 9.6 µg collagen /ml final concentration * sodium phosphate (.81% NaCl,.67 M PO 4 ph 7.2) 3 µl citrated blood + 3 µl saline (NaCl.9%) 3 min incubation + 2 µl Collagen 3.2 µg collagen /ml final concentration blood Wittmann 8

5 1 apheresis platelet concentrates tested on: (day of production) day 3 (after 2 days storage) (after 4 days storage) 5 concentrates were divided: control: normal storage (breathing bag / agitation) dense bag with agitation breathing bag / no agitation 9/5/8 9 AUC n=1 Collagen 3.2 µg/ml Collagen 6.4 µg/ml 1 AUC COL4-AUC Getrennt nach: ID AUC 1 Getrennt nach: ID Collagen 9.6 µg/ml > effect of storage time /5/8 1 day 3 day 3 COL6-AUC

6 Collagen 3.2 µg/ml Collagen 6.4 µg/ml AUC AUC AUC 8 6 loss of activity over time stronger loss of platelet activity seen when triggered with smaller collagen doses on comparable platelet activity with all three collagen stimulations tested on almost no activity with the lowest collagen dose applied, while still approx. 5% of activity of was found Collagen 9.6 µg/ml > effect of storage time 4 2 9/5/8 11 day 3 > effect of storage conditions AUC 12 1 control dense bag no agitation n=5 9/5/8 12 collagen 3.2 µg/ml collagen 6.4 µg/ml collagen 9.6 µg/ml

7 > effect of storage conditions AUC 12 1 control dense bag no agitation stronger reduction of platelet activity when a dense bag (non-breathing plastic) or no agitation was applied 9/5/8 13 collagen 3.2 µg/ml collagen 6.4 µg/ml collagen 9.6 µg/ml n= no activator collagen 3.2 µg/ml collagen 6.4 µg/ml collagen 9.6 µg/ml Aggregation (AUC) d d1 d2 d3 d6 d7 d8 9/5/8 14 mean + SD shown for 35 apheresis concentrates

8 Ergebnisse nach Abnahmesystem A ggregation (AUC) COL 6,4µg/ml SPECTRA DN; n=8 TRIMA SN; n=26 AMICUS SN; n=14 AMICUS DN; n= /5/8 (Tage) 15 Aggregation of 36 citrated blood samples from platelet donors with and without aspirin in vitro 8 7 Aggregation (AUC) control Aspirin in vitro final concentraton:.5 mg/ml 3 minutes incubation 9/5/8 16

9 Untersuchungszeitraum 5 Monate (1-26 bis 2-27) n=81 d+d1+d2+d3+d6+d7 Untersuchungszeitraum 17 Monate (1-26 bis 3-28) n=266 d+d6 Wittmann 17 PBS + Kollagen 4 ul (absolut) AUC absolut d d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 Wittmann 18

10 PBS + Kollagen 6 (absolut) AUC absolut d d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 Wittmann 19 ph im Verlauf 8, 7,8 7,6 7,4 ph 7,2 7, 6,8 6,6 d d1 d2 d3 d6 d7 Wittmann 2

11 chco 3 im Verlauf Base Excess im Verlauf chco Base Excess d d1 d2 d3 d6 d7-4 d d1 d2 d3 d6 d7 Wittmann 21 PBS + Kollagen 4 ul Abnahme-Verfall AUC Abnahme Verfall Wittmann 22

12 chco 3 Abnahme-Verfall Base Excess Abnahme-Verfall chco Base Excess Abnahme Verfall -4 Abnahme Verfall Wittmann 23 Wittmann 24

13 Vorstellung einer einfachen Methode zur Feststellung der funktionellen Kapazität von Thrombozytenkonzentraten Die Analyse wird nicht durch optische Eigenschaften des TK gestört (additives, platelet fragments, lipids) Effekte der Lagerungszeit und der Lagerungsbedingungen werden erfasst. Festlegung unterer Grenzwerte für K4 ca AUC für K6 ca AUC Derzeit keine Abhängigkeit von Säure-Basenhaushalt feststellbar Nebeneffekt Monitoring der Thrombozytenspender Wittmann 25