BVD-Bekämpfung in Deutschland sind wir schon auf der Zielgeraden?
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- Maike Thomas
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1 BVD-Bekämpfung in Deutschland sind wir schon auf der Zielgeraden? Zieldefinition Bekämpfungsstand Risikofaktoren und Diskussions-/lösungsansätze Molekulare Epidemiologie BVD-2c in Deutschland 9. Stendaler Symposium, Mai 2015 Horst Schirrmeier
2 Wo oder was ist denn das Ziel? Begründung BVD-VO Reduzierung der kursierenden Virusmenge (PI-Prävalenz) Infektionsgefahr senken und unverdächtige Bestände schützen (schon erreicht?) neues Ziel - Eradikation zur Eradikation
3 BVDV Bekämpfungsstrategie in Deutschland ( testandcull ) 1. Legislative Basis: BVD-Verordnung 2008, in Kraft seit Amtliche Methodensammlung 2. Ziel: Reduzierung der PI-Prävalenz (keine Eradikation) Etablierung von zertifizierten BVD-unverdächtigen (non PI) Tieren und Betrieben 3. Weg: Verpflichtende Untersuchung aller Kälber bis zum 6 Lebensmonat auf BVD- Antigen/genom Unverzügliche Abschaffung von Pi-Tieren Ausschließlich Handel mit unverdächtigen Tieren Verhinderung von Re-und Neuinfektionen durch geeignete zoosanitäre Maßnahmen einschließlich Vakzination (freiwillig) Datenmanagement(HI-Tier) System der Qualitätssicherung (zugelassenen Testkits, akkreditierte Labore, Ringtest) (keine Restriktionen für Betriebe mit PI-Tieren fundamentaler Unterschied zur Schweiz)
4 PI-Prävalenz und Anzahl detektierter PI-Tiere I/2011 bis I/2015 (quartalsweise) PI number prevalence ,7 number ,55 0,52 0, , , ,25 0,24 0, ,17 0,13 0, , ,6 0,5 0,2 0,1 0,08 0,06 0,06 0,05 0,04 0 0,4 0,3 percent Jahr Anzahl PI % Prävalenz Betriebe mit PI In % % ,69% % ,59 % % % % % 03/ ,038% 239
5 PI-Prävalenz ,41% Bezug: Anzahl Geburten 0,23% 0,68% 0,29% 0,16% 0,36% 0,43% 0,04% 0,26% 0,46% 0,35% 0,72% 0,51%
6 PI-Prävalenz ,29 % 0,15% Bezug: Anzahl Geburten 0,23% 0,07% 0,04% 0,14% 0,14% 0,02% 0,11% 0,21% 0,30% 0,45 % 0,25%
7 PI-Prävalenz ,19% Bezug: Anzahl Geburten 0,11% 0,13% 0,03% 0,02% 0,11% 0,09% 0,01% 0,07% 0,13% 0,03% 0,24% 0,11%
8 PI-Prävalenz 2014 Bezug: Anzahl Geburten
9 Risokofaktoren und Lösungsansätze Langes Verbleiben nach PI-Feststellung Definition eines Zeitrahmens, z.b. innerhalb von 7 Tagen Langer möglicher Untersuchungsrahmen (6 Monate) Reduzierung auf 2 Monate und Reduzierung des Intervalls bei zweimaliger Untersuchung auf 40 Tage Handel mit nicht untersuchten (männlichen) Kälbern z.b. für Export; Import Reduzierung von Ausnahmeregelungen, Privatrechtliche Vereinbarungen Überbewertung des Status unverdächtiges Tier - Trojaner!!! Sperre für das Verbringen von tragenden Tieren aus Beständen mit PI- Feststellung, außer serologisch negativ (>150 d) Unterbewertung des Status unverdächtiger Bestand Zertifizierung vorantreiben, Voraussetzung für den Ausstieg aus der OS- Untersuchung Handel aus Beständen mit floridem BVD-Geschehen (PI-Tiere) Handelssperre für festzulegendem Zeitraum
10 Risokofaktoren und Lösungsansätze Ungenügendes serologisches Monitoring als Erfolgskontrolle In BVD-VO aufnehmen (Jungtierfenster, Tankmilch) Impfung? Alte, nicht untersuchte Rinder (z.b.2012: 1265 PI-Tiere älter 12 Monate) Tierkontakte an Sammelstellen, auf Ausstellungen, Weidehaltung Defizite in Management, Risikobewußtheit und Biosicherheit Keine legislativen Lösungen aber Formulierung klarer Zielstellungen und awareness -Schulung ( BVD control by education and partnership ) Fehlen europäischer Regelungen wie z.b. für BHV-1 (Directive 64/432/EG) Derzeit nicht erreichbar; Ausweg: privatrechtliche Vereinbarungen aber: zunehmende nationale Bemühungen um eigene Programme
11 Genotypisierung (5 NTR) Genotyping of 726 German BVDV isolates g 0,2% 1k 0,1% 2a 2% 2c 6% 1a 4% 1j 0,1% 1h 3% 1f 9% 1e 5% 1d 25% 1b 46% BVDV-1b und BVDV-1d am häufigsten (71%) 1f: 9%, 1e: 5%, 1h: 3% 1g, 1k, 1j: <1% BVDV-2: 8%
12 ELISA oder PCR? Zahlen für ,54% 72,46% ELISA PCR ELISA PCR 120,0% 100,0% 80,0% 60,0% 40,0% 20,0% 0,0% 99,95 99,90 99,93 100,00 99,71 99,67 99,62 97,92 100,00 97,34 97,82% 99,32 94,39 100,00 81,12 72,46 61,10 38,90 27,54 0,05 0,10 0,07 18,88 2,66 5,61 2,18 0,68 0,00 0,29 0,33 0,38 2,08 0,00 0,00
13 Zugelassenene Diagnostika (Antigennachweis) 1. Herdchek BVDV Ag/Serum Plus (IDEXX) serum, plasma, ear notches E RNS -basiert, 2. PrioCheck BVDV AG PI-focus (Prionics/Thermo Fisher Scíentific) p80-basiert Nur erlaubt für Ohrstanzproben >90 Tage, Ak sensitiv SNAP/ POC Test nicht zugelassen aber einsetzbar zur Selbstkontrolle mit Ausnahmegenehmigung
14 Zugelassenen Diagnostika (Genomnachweis) 1. DIAVET BVD / MD BioMerieux (formerly ADIAVET) 2. BoVir-SL BVDV real time RT-PCR Kit/ Quidel (formerly AnDiaTec) 3. virella BVDV real time RT-PCR Kit/ Gerbion 4. virotypebvdv BVDV/QiagenLeipzig 5. BVDV PrioCHECK/ PrionicsDeutschland 6. LSI VetMAXBVDV 4ALL/Life technologies, 7. ViroReal Kit BVD-Virus/Ingenetix (nur für Serum) 8. RealPCR BVDV RNA Test, IDEXX
15 Zugelassenen Diagnostika (AK-Nachweis) Indirect ELISA: 1. IDEXX BVDV Total Ab 2. SVANOVIR BVDV-Ak Screening and confirmation/ Svanova NS3-blocking ELISA: 1. IDEXX BVDV p80 Ab 2. PrioCHECKBVDV Ab, ThermoFisher 3. SERELISA BVD/MD Antikörper, Synbiotics 4. ID Screen BVD p80, ID vet 5. LSI Vet BVDIL, Life Technologies
16 Hämorrhagisches Syndrom und MucosalDiseaselike Erkrankungen durch akute Infektionen mit BVDV-2c Anfang 2013: Schwerste klinische Erkrankungen bei Rindern aller Altersstufen, hochgradige Verluste (bis 60%) in NRW, später auch NS und NL Klinik: Pneumonie, Diarrhea, Hämorrhagien, Schleimhautläsionen Alle Tiere hatte Status unverdächtig Fotos: Dr. M. Holsteg
17 Hämorrhagisches Syndrom und MucosalDiseaselike Erkrankungen durch akute Infektionen mit BVDV-2c Lange Virämie( bis 8 Wochen) und Virusausscheidung bei rekonvaleszenten Tieren Hinweise auf Carrier (Neuerkrankungen nach Zukauf empfänglicher Tiere in Bestände mit BVDV-2 Historie ) Isolierung eines Subtype 2c Virus, eigenes Cluster Charakteristisches Fluoreszenzbild (sichelförmig, membrangebunden)
18 5 UTR Phylogenetischer Baum deutscher BVDV-2 Isolaten schwarz: Isolate NRL blau: GenBank references rot: aktuelle hochvirulente BVDV-2c
19 Putativer molekularer Hintergrund der extremen Virulenz Duplikation in der p7/ns 2 Region Koexistenz von dup- und dup+ Varianten Adaptive Mutationen innerhalb der Duplikation Low/moderate virulent Highlyvirulent (duplication, mutation) Jenckel et al, 2014
20 Experimentelle Infektion von Kälbern mit BVDV-2c 8 Kälber, 4 Wochen alt, Intranasale Infektion mit 10 6 KID50, BVDV-2c NRW Tiere am 5. Tag p. i. immunisiert mit Vacoviron Täglich Blut, Nasentupfer, Maultupfer, Rektaltupfer Blutstatus Virusisolierung (Leukozyten und Plasma) AG-ELISA (Plasma) real time-rt-pcr (Leukozyten, Plasma, Tupfer) Pathologie, Bakteriologie
21 Ergebnisse (1) - zellulärer Blutstatus Ausgeprägte Leukopenie und Thrombozytopenie (z.t <20% der Basiswerte)
22 T134 T136 T157 T164 T144 T147 T166 T172 Leukozyten Ergebnisse (2) Virusisolierung und Schicksal PID-1 PID1 PID2 PID3 PID4 PID5 PID6 PID7 PID8 PID9 PID10 PID11 Nasentupfer T134 T136 T157 T164 T144 T147 T166 T172 PID-1 PID1 PID2 PID3 PID4 PID5 PID6 PID7 PID8 PID9 PID10 PID11 moribund, euthanasiert verendet 100 % Mortalität
23 Ergebnisse (3) Antigen-ELISA Plasma und Nasentupfer Rasche Antigenanflutung im Blut 5./6. Tag p.i. Starke Virusausscheidung
24 Ergebnisse (4) Nachweis von Virusgenom im Blut Genomlasten analog PI-Tieren
25 Pathology Foto: Teifke, Tauscher BU: Mannheimia hämolytica
26 Foto: C. Illing Danke
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