In vitro Allergiediagnostik

Transkript

1 In vitro Allergiediagnostik Allergisch?? Ja? Nein? Heinz Kofler

2 Was brauchen Sie dazu? 1)Wissen was sie suchen!(stufendiagnostik) 2) Wissen wie das Ergebnis aussieht und was es bedeutet 3)Bezug zum Patienten und zur Diagnose herstellen 4)wissen welche Technik wofür geeignet ist

3 Prävalenz Nahrungsmittelallergie Atopische Dermatitis Asthma bronchiale Allergische Rhinitis ½ ~Alter in J.

4 Grundprinzip: Immunologische Reaktion:= erworben =reproduzierbar =spezifisch Eine immunologische Reaktion- Hier: eine IgE Reaktion Messbar(Lautstärke,Größe?) Sichtbar machen(farbe, Farbumschlag, ect) IgE Antikörper: Heuschnupfen, Asthma, Insektengiftallergie IgG Antikörper:Farmerlunge, Coeliakie(Sprue)

5

6 = Sandwich Sandwich Immunoassay:

7 RAST Klassen CAP system Pharmacia <0.35Ku/l 0 > Ku/l 1 > Ku/l Ku/l 3 > Ku/l 4 > Ku/l 5 >100 Ku/l 6

8 Indikationen für spezifisches IgE im Rahmen der Stufendiagnostik Diskrepanz Anamnese / Hauttest Bestimmung des Sensibilisierungsgrades (vor Hauttest oder Provokation) Kofaktor für Allergenauswahl bei S.I.T. Reaktionen (meist) NICHT IgE-mediiert bei... Metallen, Kunststoffen NSAR,Analgetika* Lokalanästhetika Sulfonamide und Antibiotika(Makrolide!) ACE-Hemmer, Clavulansäure, Muskelrelaxantien.. Insektizide,Herbizide.. *Propyphenazon+Alb.gekoppelt:pers. Mitt. Ch.Ebner

9 Tryptase(G5 inaktive Form,B12 Aktiv&inaktiveForm)) Umwandlung Kininogene in Kinine (Gefässpermeabilität) Vermehrte Freisetzung von C3a 4 Isoenzyme(eine α, drei β Tryptasen) Inaktiv tetramer, aktiv: monomer Alfa Tryptase kontinuierliche Freisetzung Korreliert mit der MZ-anzahl Beta Tryptase: gespeichert in Granula Einfacher Nachweis im Serum möglich (wiederholte Messungen 20 min bis 24h) Indikationen: Objektivierbarer Parameter anaphylaktischer, klinischer Symptome Differenzierungshilfe vasovagale, atypische Reaktionen Post mortem Beweisführung Insektengiftallergie (30% > 13.5 ug/l bei Grad 3 und 4): identifiziert Hochrisikokollektiv, Mastozytose formen

10 Effektorzelle der allergischen Entzündung: Eosinophiler Gr.

11 Eosinophile und Mechanismen der Degranulation Effektorfunktion: Freisetzung von Mediatoren (amplifizierend, proinflammatorisch) Stimulation der Eosinophilen durch: Immunglobuline, an Oberflächenstrukturen gebunden: (siga2>igg1,3,ige.) Priming durch lösliche Chemokine und Zytokine (Il-3,IL-5, Il-14, Il-13,GM-CSF GM-CSF>> RANTES,u.a. daneben: C5a,C3a,PAF, Substanz P,Mellittin u.a.

12 Eosinophile und Krankheit Asthma bronchiale Atopische Dermatitis Allergische Rhinitis Konjunktivitis vernalis Bullöses Pemphigoid Eosinophile Gastroenteritis Prurigo nodularis Hypereosinophiliesyndrom

13 ECP Abnahmetechnik/Versand Abnahme in Serummonovette min bei RT stehen lassen 1400xg 10 min RT Überstand abpipettieren in neues Röhrchen geben 1400xg 10 min RT Neuerlich Überstand pipettieren Bestimmung oder Versand Normalwert: bis 20 ug/l >20 ug/l erhöht

14 ECPWerte/ Inkubationszeit RT/ h hk u.e ECP u.e Re.x. 0.5h 20 1h 2h 15 hk hk hk Re.x. 3h 5h u.e Re.x. Re.x.

15 Prinzip: Gewinnung Von Zellen Stimulation Im Reagenzglas Mit Allergen Messung der Antwort

16 Kontrollen >2ug/g 1-2ug/g >05ug/g Staub Probe Staubprobe (aus Matratze) Inkubation mit Puffer

17 ALLERGIEDIAGNOSTIK 1. Anamnese 2. Hauttestung 3. In vitro Diagnostik 4. Provokationstest Positionspapier des Ä.D.A Allergo Journal 9, 21-24, 2000 JDDG 4 1 Jänner 2006Leitlinie Allergiediagnostik in vitro

18 ZUSAMMENFASSUNG Basis für Allergiediagnostik müssen Anamnese und ein konkreter Verdacht sein CAP-Screenings allein sind weder zum Auschluß noch Beweis einer Allergie ausreichend Hauttest und CAP und Provokationstest ergänzen einander und haben situationsabhängig unterschiedliche Wertigkeiten