Thrombozytenfunktionstestung in der Transfusionsmedizin. Petra Jilma Klinisches Institut für Labormedizin AKH-Wien

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1 Thrombozytenfunktionstestung in der Transfusionsmedizin Petra Jilma Klinisches Institut für Labormedizin AKH-Wien

2 Thrombozytentransfusionen sollen Hämostase verbessern! Unterschiedliche Messmethoden Testung von Spendern Untersuchung von Thrombozytenkonzentraten Testung der Empfänger

3 Thrombozytenfunktion H. Mani et al: Fortschritte in der Thrombozytenfunktionsdiagnostik; Hämostaseoligie 2010

4 1) PFA-100 Plättchenfunktionsanalyser Das System Printer LCD Bildschirm Tastatur Behälter für Starterlösung Meßzelle Kasette für Meßzelle Karusell 4

5 Messprinzip 3 unterschiedliche Messzellen, unterscheiden sich druch den zugebenen Aktivator Kollagen/Epinephrin: vergleichbare schwächere Aktivierung durch Adrenalin/Kollagen Stress Kollagen/ADP: relativ starke Aktivierung durch recht hohe Menge ADP Innovance PFA-P2Y: Aktivierung durch ADP/PGE1 Kollagenstress

6 Aufbau der Messzelle Durch Adhäsion: Verschluss Messgröße: Verschlusszeit (s) = Zeit bis zum Stillstand des Blutflusses Simulation von Flussbedingungen im arteriellen Stromgebiet

7 Anwendung Aspirin- und Clopidogreleinnahme Von Willebrand Disease Diagnostik V. a. Thrombasthenie Glanzmann und Bernard Soullier Syndrom Screening bei Patienten mit erhöhtem perioperativem Blutungsrisiko

8 2) Multiplate Einfaches, standardisiertes und schnelles Testverfahren aus antikoaguliertem Vollblut (Hirudin oder Heparin) 5 Kanäle für hohen Durchsatz Hohe Sensitivität Parallelbestimmung (2 Sensorenpaare) zur Qualitätskontrolle ASA 500 mg i.v.

9 Impedanzaggregometrie Testmethode doppelt ausgeführter thrombogener Sensor, Magnetrührer die Thrombozyten adhärieren nach Zufabe eines Aktivators (z.bsp TRAP) und aggregieren auf den Sensoroberflächen und erhöhen den elektrischen Widerstand

10 3) Lichttransmissionsaggregometrie (Born) (LTA) Prinzip: Herstellung von PRP und PPP, Zusatz von Agonisten: Kontinuierliche Registrierung der im Verlauf der Aggregation sich ändernden Transmission von Licht Nachteile: eingeschränkte Standardisierbarkeit, keine physiologischen Bedingungen, kein shear stress, aufwendig, in Speziallabors

11 4) Thrombelastogramm (TEG) Der Ablauf der Gerinnung und die Verfestigung des Gerinnsels wird aufgezeichnet.

12 5) Flowzytometrie Vorteile: Wenig Material notwendig Messung unterschiedlicher Aspekte der Thrombozyten- Funktion: z.bsp: Aktivierung (Expression von P- selectin), Aggregation (Expression der Fibrinbindungsstelle) keine Scherkräfte Nachteile: Nicht überall verfügbar personal- und zeitintensiv

13 6) IMPACT R High shear

14 percentage of the well surface covered by platelets aggregates (percentage SC): platelet adhesion average size of the aggregates (AS in µm 2 ): platelet aggregation

15 Testung der Thrombozytenspender Screening mittels Point of Care-Geräten, z. Bsp: PFA-100, Multiplate, ROTEM 1) High incidence of defective high-shear platelet function among platelet donors 1) 11% der Spender: CEPI-CT, CADP-CT durch Einnahme von Cyclooxygenasehemmern P. Harrison et al. Transfusion 2004;44:

16 2) Impaired platelet function among platelet donors 20 % der Spender: CEPI-CT 9%: TXB 2 Hohe Spendefrequenz: negativer Einfluss auf die Thrombozytenfunktion P. Jilma-Stohlawetz et al.: Thromb Haemost 2001:880-6

17 3) Influence of multicomponent apheresis on donors haematol. and coagulat. parameters and platelet function Untersuchung von 48 Multikomponentenspendern am Tag 0 vor und nach Apherese, Tag 2, 14 und 42. Am Tag 2 war die Plättchenfunktion signifikant beeinträchtigt (gemessen mittels Aggregometrie und ROTEM) Gerinnungsparameter (PTZ, aptt, Fibrinogen, D-Dimer, Faktor VIII und vwf) blieben nahezu unverändert. S. Macher et al. Vox sang. 2012,

18 Testung der Thrombozytenkonzentrate Viele Studien, unterschiedliche Aspekte können untersucht werden, z.bsp. Verschiedene Apheresemaschinen Lagerungsdauer Einfluss der Lagermedien Manipulationen, wie Plasmadepletion und Filtration Aber nicht alle Methoden sind geeignet!!

19 Vergleich: Apheresemaschinen TRAP-6 induced MEA TRAP-6 induced LTA inducible aggregation differs between Amicus and Trima/MCS+ Jilma-Stohlawetz et al.: Transfusion 2009:

20 Lagerung von Thrombozytenkonzentraten In vitro assessment of platelet concentrates with Multiplate C. Shams Hakimi et al. Platelets :132-37

21 Lagerung von Thrombozytenkonzentraten platelet P-selectin increases during storage, while induced P-selectin declines Transfusion 2008:129-35

22 Einfluss der Plasmadepletion auf die Thrombozytenfunktion Vox Sang. 2012:

23 Testung der Thrombozytenfunktion des Empfängers Problematisch, da alle Testsysteme > 100Plt/G benötigen, sonst nur sehr eingeschränkte Aussagekraft Nur sehr wenige Studien am besten Vollblutmethoden

24 improved in vivo platelet function after PC transfusion platelet function was determined under high shear conditions by Impact-R: adhesion increased, while the size of aggregates did not change Horvath M et al. Transfusion 2010:

25 Thromboelastometry in patients with liver cirrhosis before and after platelet transfusion Tripodi A et al. 2013; Liver:

26 Zusammenfassung Es gibt keine beste Methode, die Testsysteme messen unterschiedliche Aspekte der Thrombozytenfunktion Besonders bei Apheresekonzentraten ist die Thrombozytenfunktion des Einzelspenders von großer Bedeutung: stichprobenartige Überprüfung überlegenswert, besonders bei Dauerspendern Noch keine Daten, ob die unterschiedliche in vitro Ergebnisse einen Einfluss auf Recovery und Thrombozytenfunktion der Empfänger haben

27 Vielen Dank für die Aufmerksamkeit! Fragen?