Labor. Detlef Thieme (IDAS, Kreischa)

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1 Labor Detlef Thieme (IDAS, Kreischa) DTU,

2 Mexiko: Fünf Nationalspieler gedopt 10. Juni Uhr, B.Z./sid Beim Gold-Cup in den USA wurden fünf mexikanische Nationalspieler positiv auf Clenbuterol getestet

3 Clenbuterol Langzeitnachweis??? Contador, FIFA WC U17

4 2. Field Study Mexico (FIFA) Team- Classification Samples collected [n] positive findings (%) Average conc. [pg/mg] Max [pg/mg] U20 19 U17 24 local 20

5 2. Field Study Mexico (FIFA) Team- Classification Samples collected [n] positive findings (%) Average conc. [pg/mg] Max [pg/mg] U (94.7) U (83.3) local (90.0)

6 number of findings 2. Clenbuterol Hair Concentrations hair clenbuterol [pg/mg]

7 Nachkontrollen Olympia Langzeitmetabolite Moskau 1

8 Sotchi Moskau 2

9 Doping im Leistungssport Kraft Muskelaufbau Steroide Clenbuterol Wachstumshormon Ausdauer Psychostimulation Bronchodilatation Sauerstofftransport Amphetamin Erythropoetin Blutdoping

10 Wahrnehmung des Athleten

11 WADA Definitionen Doping laut WADA Definition: the detection of a prohibited substance or metabolites or markers of that substance in the athlete s specimen, the use of prohibited substances or methods, possession or trafficking prohibited substances or refusing without compelling justification to submit a sample.

12 1967: Tom Simpson Im Nachhinein wurde ermittelt, dass Simpson Aufputschmittel (Amphetamin) und Alkohol zu sich genommen hatte. Der Obduktionsbefund war Dehydratation.

13 Klassiker: Amphetamine, Cocain 1000 cocaine amphetamine methamphetamine (D-)

14 Alternativen?? amphetamine oxilofrin

15 PSE: Administrative Einflüsse ephedrine pseudoephedrine NRL club doctors 2005: Players were requesting Sudafed tablets before matches. WADA 2010: Results of the monitoring program over the past five years have shown a sustained increase in samples containing pseudoephedrine.

16 Ephedrin Methylhexanamin? methylhexaneamine (dimethylpentylamine) ephedrine

17 Wirksamkeit von Methylhexanamin In the mid-2000s, ephedrine was banned from dietary supplements. Soon after, Arnold trademarked methylhexanamine as Geranamine. He claimed it was an all-natural extract of the geranium plant, and began selling it over the internet in a performance-enhancing supplement called Ergopharm s Ergolean AMP.

18 Stimulanzien Unumstrittene Wirkung körperfremd ausschließlich akut wirksam Wettkampfkontrollen ausreichend Keine analytischen Probleme Heute nicht folgenlos anwendbar Regelturbulenzen: z.b. Coffein z.b. Pseudoephedrin (Verbot-Freigabe-Verbot) Designer-Stimulanzien???

19 Klassiker: Synthetische Steroide z.b. Metandienon

20 Metandienon MS identification of a new long-term metabolite of metandienone in urine Wilhelm Schänzer et.al., Rapid Commun. Mass Spectrom. 2006

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22 Primobolan, Schering (~1970)

23 Körpereigenes Doping exogen Metandienon Nandrolon? Nachweis der Substanz oder Abbauprodukte in jeder beliebigen (?) Konzentration. Grenzwerte endogen Testosteron Epo Wachstumshormon Abweichung von Normalität Normalwerte Individuell (Blutpass)

24 Back to the Basics: Testosteron T/E: Grenzwert? 1990 = = =4

25 13C/12C Isotopenverhältnisse zum Nachweis von Testosteronmissbrauch

26 Testosteron Abbau Ernährung

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29 TDSSA: Zusatzanalysen Wachstumshormon, hgh --- BLUT Isoformen: 20k /22k Ile Thr Pro 1 Phe Leu Pro Leu Arg Ser Ile Arg Leu Leu Ser Gln Leu Leu 80 Asn 20 Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr 30 Gln Glu Phe 10 Phe Glu Gln Ser Trp Leu Gln Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala 100 Asn 90 Ser Leu Ile Leu Ser Lys 70 Phe Thr Arg Pro Ser Gly Gly Gln Gln Ile Lys 140 Gln Thr Tyr Ser Lys Phe His 150 Asp Ser Thr Asn Cys Arg Ser Ser Val Glu Gly Asp Asp Ala Asn Leu Gln Gln Thr Glu Glu Arg Asn Asp Glu Leu Arg Gly Met Leu ThrGln 130 Ile Val Ile Arg Leu 180 Gly Phe Cys 190 Phe Thr Glu Val Leu 160 Phe Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Leu Val Tyr Gly 120 Gly Ala Glu Ser Glu Asn Leu Ser Asp Asp Asp Lys Leu Val Met Leu Asp Asp Tyr Lys Lys Arg Ser Phe Leu Ser Pro Thr Pro Ile Ser Glu Cys Ser 60 Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Thr Gln Struktureller Unterschied

30 Wachstumshormon: Isoform approach Ratios for reca/pita (ratio A) and recb/pitb (ratio B) before and every 2 h after injection of low-dose (0.033 mg/kg, A, C) or high-dose (0.083 mg/kg, B, D) rhgh Bidlingmaier, M. et al. Clin Chem 2009;55: Copyright 2009 American Association for Clinical Chemistry

31 Wachstumshormon, hgh Isoform-approach Verhältnis 22k/20k Isoformen Direkter Zusammenhang zur Struktur Nachweisdauer ~ 1d Marker approach Indirekte Wirkungen auf biochemische Parameter (IGF1, Bindungsproteine) Alternativeinflüsse (Alter) Nachweisdauer >1d

32 Neue Alternativen??? GHRP s

33 EPO variable Glykosylierung konstante Aminosäuresequenz

34 Endogenes EPO 11h: rekombinantes EPO 53 h:???? <> 85%?

35 Mikrodosenstudie Proband A 1000 IU Gesamtapplikation einmal (therapeutischer Anwendung ca IU 3 x wöchentlich) 97,5 h nach Applikation noch AAF Blank1 Blank3 Blank2 1,5 h 5 h 9,5 h 12,5 h 18,5 h25,5 h29 h 32,5 h Blank4 Nach Applikation

36 Detektion Mikrodosen Auftrennung nach Proteingrößer je neuer desto einfacher

37 NegQC PosQC PosQC NegQC

38 18% Häufigkeit von Dopingmitteln (Breitensport) 16% 14% 12% 10% % 6% 4% 2% 0%