Application Notes. Aracus
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- Lorenz Linden
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1 Application Notes Aracus membrapure GmbH Wolfgang Küntscher Str Hennigsdorf / Berlin Mail: info@membrapure.de Tel.: / Fax: /
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3 Index Physiological Extended 54 amino acid 1 2 Clinical Applications Physiological (125x3/iVD) 42 amino acid Physiological (150x4) Diagnostic short (MSUD) Food and Feedstuff Applications Hydrolysate (125x3) Hydrolysate (125x4) Hydrolysate PLUS (TRP) Feedstuff 24 Amino Acids Feedstuff-short Biogene amine and others Biogenic Amine Glyphosate and AMPA Stress factors plants Definitions of abbreviations
4 [mv] Time [min.] A P P L I C A T I O N N O T E Physiological Extended Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 150 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 128 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 240 µl/min Column Temperature...: 35 C to 74 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 120 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Physiological standard Solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) [mv] Voltage 120,3 HYL Voltage ,1 GABA ,7 3,8 SULFO 6,0 TAU 7,1 PEA 9,6 Urea 13,7 GLUA 21,3 ASP 24,5 HYP 28,2 THR 30,3 SER 34,2 ASN 36,5 GLU 39,3 GLN 42,5 SAR 45,6 AAA 48,9 50,8 GLY 53,7 ALA 56,3 CIT 59,5 ABU 65,9 VAL 67,6 68,0 SAC CYS2 68,6 ASA 69,2 PIP 69,7 CYSTA 70,2 HCI 71,2 MET 71,9 AILE 73,5 ILE 75,4 LEU 77,5 NORLEU 80,0 TYR 86,3 PHE 91,0 HCY2 95,5 BALA 96,8 ANHYD ASA 97,2 BAIB 99,5 ALEVA 121,8 ORN 123,6 LYS 101,2 KYN 102,7 HIS 104,0 1MHIS 65,90 VAL 68,58 ASA 69,17 PIP 70,23 HCI 67,58 SAC 67,97 CYS2 69,70 CYSTA 71,21 MET 71,91 AILE 73,53 ILE 75,44 LEU 77,46 NORLEU 80,05 TYR 106,2 3MHIS 108,9 TRP 112,7 CAR 113,7 HCAR 117,1 ANS 119,6 AEC 126,6 Ammonia 128,9 ETN 135,1 ARG Time [min.] Seite 1
5 Physiological Extended + number retention time retention time code number [min] [min] code 1 3,8 SULFO 27 71,2 AILE 2 6 TAU 28 73,5 ILE 3 7,1 PEA 29 75,4 LEU 4 9,6 Urea 30 77,5 NORLE 5 13,7 GLUA TYR 6 21,3 ASP 32 86,3 PHE 7 24,5 HYP HCY2 8 28,2 THR 35 95,8 BALA 9 30,3 SER 36 96,8 ANHYD ASA 10 34,2 ASN 37 97,2 BAIB 11 36,5 GLU 38 99,5 ALEVA 12 39,3 GLN ,1 GABA 13 39,3 SAR ,2 KYN 14 45,6 AAA ,7 HIS 15 48,9 PRO MHIS 16 50,8 GLY ,2 3MHIS 17 53,7 ALA ,9 TRP 18 56,3 CIT ,7 CAR 19 59,5 ABU ,7 HCAR 20 65,9 VAL ,1 ANS 21 67,6 SAC ,6 AEC CYS ,3 HYL 23 68,6 ASA ,8 ORN 24 69,2 PIP ,6 LYS 25 69,7 CYSTA ,6 Ammonia 26 70,2 MET ,9 ETH ,1 ARG Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 2
6 Seite 3
7 Clinical Applications Seite 4
8 Physiological (125x3/iVD) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125mm BL x 3.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 103 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 180 µl/min Column Temperature...: 35 C to 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 90 µl/min Reactor Temperature...: 115 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Physiological standard Solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) 3.995' P-Ser 5.329' Tau 6.255' PEA 7.923' Urea ' Asp ' Hypro ' Thr ' Ser ' Asn ' Glu ' Sar ' a-aaa ' Pro ' Gly ' Ala ' Cit ' a-aba ' Val ' (Cys) ' Cystha ' Met ' Ile ' Leu ' Nle ' Tyr ' Phe ' H-Cystine ' ' b-ala b-aiba ' g-aba ' His ' 1Mehis ' 3Mehis ' Trp ' Car ' Ans ' Hylys ' Orn ' Leu ' NH ' EOHNH ' Arg Seite 5
9 Physiological (125x3/iVD) number retention time retention time code number [min] [min] code P-Ser Ile Tau Leu PEA Nle Urea Tyr Asp Phe Hypro H-Cystin Thr b-ala Ser b-aiba Asn g-aba Glu His Sar Mehis a-aaa Mehis Pro Trp Gly Car Ala Ans Cit Hylys a-aba Orn Val Lys (Cys) NH Cystha EOHNH Met Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 6
10 Physiological (150x4) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 150 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 128 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 240 µl/min Column Temperature...: 35 C to 74 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 120 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Physiological standard Solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) 4.128' P-Ser 7.309' PEA 6.135' Tau 9.691' Urea ' Asp ' Hypro ' Thr ' Ser ' Asn ' Glu ' Gln ' Sar ' a-aaa ' Pro ' Gly ' Ala ' Cit ' a-aba ' Val ' (Cys) ' Cystha ' Met ' Ile ' Leu ' Nle ' Tyr ' Phe ' H-Cystine ' b-ala ' b-aiba ' g-aba ' His ' 1Mehis ' Trp ' 3Mehis ' Car ' Ans ' Lys ' Hylys ' Orn ' NH ' EOHNH ' Arg Seite 7
11 Physiological (150x4) number retention time retention time code number [min] [min] code P-Ser Ile Tau Leu PEA Nle Urea Tyr Asp Phe Hypro H-Cystin Thr b-ala Ser b-aiba Asn g-aba Glu His Gln Mehis Sar Mehis a-aaa Trp Pro Car Gly Ans Ala Hylys Cit Orn a-aba Lys Val NH (Cys) EOHNH Cystha Arg Met Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 8
12 Diagnostic short (MSUD) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 150 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent B, C and Eluent F Runtime...: 34 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 240 µl/min Column Temperature...: 57 C to 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 120 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Diagnostic standard solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) ' a-ile ' Ile ' Leu ' Nle ' Tyr ' Phe ' Val ' Met Seite 9
13 Diagnostic short (MSUD) number retention time [min] code Val Met a-ile Ile Leu Nle Tyr Phe Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 10
14 Seite 11
15 Food and Feedstuff Applications Seite 12
16 Hydrolysate (125x3) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125 mm BL x 3.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 60 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 220 µl/min Column Temperature...: 49 C to 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 110 µl/min Reactor Temperature...: 115 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Hydrolysate standard solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) ' Pro ' NH ' Asp ' Thr ' Sar ' Glu ' Gly ' Ala ' (Cys) ' Val ' Met ' Ile ' Leu ' Tyr ' Phe ' His ' Lys ' Arg Channel A Seite 13
17 Hydrolysate (125x3) number retention time [min] code Asp Thr Ser Glu Pro Gly Ala (Cys) Val Met Ile Leu Tyr Phe His Lys NH Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 14
18 Hydrolysate (125x4) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 60 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 280 µl/min Column Temperature...: 49 C to 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 140 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Hydrolysate standard solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) ' Pro ' Asp ' Thr ' Ser ' Gly ' Ala ' (Cys) ' Val ' Met ' Ile ' Leu ' Tyr ' Phe ' Lys ' NH ' Arg ' Glu ' His Channel A Channel B Seite 15
19 Hydrolysate (125x4) number retention time [min] code Asp Thr Ser Glu Pro Gly Ala (Cys) Val Met Ile Leu Tyr Phe His Lys NH Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 16
20 Hydrolysate PLUS (TRP) Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 80 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 220 µl/min and 280µl/min Column Temperature...: 33 C to 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 120µl/min and 140 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Hydrolysate standard solution with additional: L-Asparagine L-Tryptophan L-Ornithine Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) ' Pro ' Asp ' Thr ' Ser ' Asn ' Glu ' Gly ' (Cys) ' Val ' Ala ' Met ' Ile ' Leu ' Tyr ' Phe ' Trp ' Orn ' Lys ' NH ' Arg ' His Channel A Seite 17
21 Hydrolysate PLUS (TRP) number retention time [min] code Asp Thr Ser Asn Glu Pro Gly Ala (Cys) Val Met Ile Leu Tyr Phe His Trp Orn Lys NH Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 18
22 Feedstuff Equipment...: ARACUS Column...: Natrium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Natrium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 52 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 250 µl/min Column Temperature...: 58 C to 75 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 125 µl/min Reactor Temperature...: 115 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Feedstuff standard Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) ' Pro 3.822' Cya ' MetSON ' Asp ' Thr ' Ser ' Glu ' Ala ' Gly ' (Cys) ' Val ' Met ' Ile ' Leu ' Tyr ' Phe ' Lys ' NH ' Arg ' His Chann Seite 19
23 Feedstuff number retention time [min] code Cya MetSON Asp Thr Ser Glu Pro Gly Ala (Cys) Val Met Ile Leu Tyr Phe His Lys NH Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 20
24 24 Amino Acids Feedstuff-short Equipment...: ARACUS Column...: Natrium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Natrium system - Eluent A to Eluent F Runtime...: 26.5 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 450 µl/min Column Temperature...: 50 C and 75 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 215 µl/min Reactor Temperature...: 130 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Feedstuff standard solution with additional: Diaminopimelic acid γ-amino-n-butyric Acid L-Ornithine and L-Tryptophan Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) mv ' Cya 7.851' MetSON 8.447' Asp 8.996' Thr 9.758' Ser ' Glu ' Pro ' Gly ' Ala ' (Cys) ' Val ' DAP ' Met ' Ile ' Leu ' Tyr ' Phe ' g-aba ' His ' Orn ' Lys ' NH ' Trp ' Phe 40 Channel A min Seite 21
25 24 Amino Acids Feedstuff-short number retention time [min] code Cya MetSON Asp Thr Ser Glu Pro Gly Ala (Cys) Val DAP Met Ile Leu Tyr Phe g-aba His Orn Lys NH Trp Arg Concentration: 100 nmol amino acid / ml ((Cys) 2 : 50 nmol / ml) Seite 22
26 Seite 23
27 Biogene amine and others Seite 24
28 Biogenic Amine Equipment...: ARACUS Column...: Potassium system, 118 mm BL x 2.0 mm ID Inline Filter, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Potassium system - Eluent A to Eluent D & Eluent F Runtime...: 40 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 220 µl/min Column Temperature...: 75 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 110 µl/min Reactor Temperature...: 130 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Biogenic Amine Standard solution Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm) 8.588' Dopamine ' Histamine ' Putrescine ' Cadaverine ' Spermidine ' Spermine ' Agmatine ' Tyramine Seite 25
29 Biogenic Amine number retention time [min] code Dopamine Histamine Putrescine Cadaverine Spermidine Spermine Agmatine Tyramine Seite 26
30 Glyphosate and AMPA Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 118 mm x 3.0 mm ID and Ammonium Absorber, 40 mm x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent A and Eluent F Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 180 µl/min Column Temperature...: 60 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 90 µl/min Reactor Temperature...: 130 C Detection...: Visible 570 nm Sample...: Glyphosate AMPA (Aminomethylphosphonic acid) Standard Solution with 100 nmol/ml mv AMPA Glyphosate min Seite 27
31 Glyphosate and AMPA Standard Solutions with 100 nmol/ml, 25 nmol/ml and 5 nmol/ml mv GA_5 GA_ GA_ Glyphosate AMPA min Standard Solution of Amino Acids with 100 nmol/ml mv Tau 210 P-Ser PEA Urea min Seite 28
32 Stress factors plants Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm BL x 2.0 mm ID Eluents...: Lithium system - Eluent B to Eluent F Runtime...: 23 min Gradient...: Program in Steps Eluent Flow...: 450 µl/min Column Temperature...: 50 C and 70 C Injection Volume...: 20 µl Reagent...: Ninhydrin (Post-Column Derivatization) Reagent Flow...: 225 µl/min Reactor Temperature...: 125 C Detection...: Visible 570 nm (Channel A) / 440 nm (Channel B) Sample...: Physiological Standard Equipment...: ARACUS Column...: Lithium system, 125 mm BL x 4.0 mm ID Ammonium Absorber, 40 mm BL x 2.0 mm ID Seite 29
33 Stress factors plants Standard Solution with 100 nmol/ml (Channel A / 570nm an Channel B /440nm) ' Pro ' Arg ' Pro Channel A Channel B number retention time [min] amino acid code L- Proline Pro L-Arginine Arg Seite 30
34 Definitions of abbreviations amino acid code S-Sulfocysteine Taurine o-phosphoethanolamine Urea D-Glucosaminic Acid L-Aspartic Acid Hydroxy-L-Proline SULFO TAU Seite 31 PEA Urea GLUA ASP HYP L- Threonine THR L-Serine SER L- Asparagine ASN L-Glutamic Acid L-Glutamine GLU GLN L- Sarcosine SAR L- α-aminoadipic Acid AAA L- Proline PRO Glycine L-Alanine L-Citrulline L-α-Amino-n-butyric Acid GLY ALA CIT ABU L- Valine VAL L-Saccharopine L-Cystine Argininosuccinic acid L-Pipecolic Acid Cystathionine L-Methionine L-Allo-Isoleucine L-Isoleucine L-Leucine Norleucine(internal standard) L-Tyrosine L-Phenylalanine H-Cystine ß-Alanine SAC CYS2 ASA PIP CYSTA MET AILE ILE LEU NORLE TYR PHE HCY2 BALA
35 Succinic anhydride ß-Aminoisobutyric Acid Amino-Levulinic Acid γ-amino-n-butyric Acid Kynurenine L-Histidine 1-Methyl-L-Histidine 3-Methyl-L-Histidine L-Tryptophan L-Carnosine Homocarnosine L-Anserine S-Aminoethyl-L-cysteine Hydroxylysine L-Ornithine L-Lysine Ammonium Chloride Ethanolamine L-Arginine ANHYD ASA BAIB ALEVA GABA KYN HIS 1MHIS 3MHIS TRP CAR HCAR ANS AEC HYL ORN LYS Ammonia ETH ARG Seite 32
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