Instrumentelle Dünnschicht-Chromatographie
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- Friedrich Weiss
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Transkript
1 Instrumentelle Dünnschicht-Chromatographie Weltweit führend in der Planar-Chromatographie
2 Chromatogramm Titelseite: Grüntee Druck auf FSC zertifiziertem Papier
3 CAMAG Ihr Partner für alle Bereiche der Planar-Chromatographie Seit 1961 steht CAMAG im Dienste der Planar-Chromatographie. CAMAG entwickelt und produziert hochwertige Geräte und dazugehörige Software für diese Analysenmethode und vertreibt sie weltweit, in der Schweiz direkt, in Deutschland und in USA durch Tochtergesellschaften, in den übrigen Ländern durch sorgfältig ausgewählte Vertretungen. Wir sehen uns als flexibles, kundenfreundliches und wissenschaftlich fundiertes Unternehmen, das sich als anerkannter Partner in allen Bereichen der Planar-Chromatographie profiliert. Zu unseren Leistungen gehören ausser kompetenter Beratung und Service für unsere Produkte die Aus- und Weiterbildung unserer Kunden sowie die Erarbeitung von Problemlösungen. Bei CAMAG finden Sie alles, was Sie für die Planar-Chromatographie in Ihrem Labor benötigen. Der vorliegende Katalog hilft Ihnen, sich schnell über die für Sie in Frage kommenden Produkte zu orientieren. Ausserdem können Sie ihn als kurzen Leitfaden für die Arbeitsschritte der Planar- Chromatographie benutzen. Methodologische Hinweise und produktspezifische Informationen sind deutlich unterscheidbar gekennzeichnet. Wir möchten Sie auch auf unsere Internet Homepage hinweisen, wo Sie ergänzende Erläuterungen sowie die aktuellsten Informationen finden. Für weitergehende Beratung steht Ihnen unser Team jederzeit zur Verfügung. Zur Terminologie Um daran zu erinnern, dass die moderne leistungsfähige Methode etwas anderes ist als die Dünnschicht-Chromatographie vergangener Zeiten, benutzen wir in diesem Katalog überwiegend den Begriff Planar-Chromatographie, verwenden aber auch Dünnschicht-Chromatographie sowie die Abkürzung DC/HPTLC (DC = Dünnschicht-Chromatographie HPTLC = Hochleistungs-Dünnschicht-Chromatographie). 1
4 Übersicht Arbeitsschritt Probenauftragen Was ist wichtig? Die Proben werden punkt- oder strichförmig auf die Trennschicht aufgetragen. Präzision der Volumendosierung, exakte Positionierung sowie minimale Ausbreitung der Auftragezone in Chromatographierichtung sind ausschlaggebend für die Qualität der Ergebnisse. Chromatogrammentwicklung Das Fliessmittel (mobile Phase) wandert in der Trennschicht (stationäre Phase) durch Kapillarwirkung über die vorgesehene Trennstrecke. Die Analyte werden dabei aufgetrennt und bleiben nach Abdampfen des Fliessmittels auf der Trennschicht gespeichert. Derivatisierung Ungefärbte bzw. nicht UV-aktive Substanzen können durch Derivatisierung in optisch detektierbare umgewandelt werden. Die dazu benötigten Reagenzlösungen werden durch Tauchen oder Sprühen gleichmässig auf das Chromatogramm aufgebracht. Chromatogrammauswertung Die Chromatogrammauswertung reicht von der visuellen Beurteilung, gegebenenfalls unter UV-Licht, bis zur densitometrischen Auswertung. Mittels UV-Licht werden UV-absorbierende bzw. fluoreszierende Substanzen auf der Schicht sichtbar gemacht. Chromatogramme können über elektronische Bilderfassung archiviert und quantifiziert werden. Die Chromatogrammauswertung mittels klassischer Densitometrie bietet ein Höchstmass an quantitativer Präzision und spektraler Selektivität. Die online Kopplung TLC-MS eröffnet neue Möglichkeiten der zuverlässigen Identifizierung. Software Mit der CAMAG TLC Software können alle Arbeitsschritte gesteuert bzw. dokumentiert werden. Entsprechende GXP-konforme Analysenprotokolle werden automatisch erstellt. Verbrauchsmaterial Zubehör Für den Einstieg in die DC/HPTLC stehen zweckmässig zusammengestellte Grundausrüstungen zur Verfügung. CAMAG Dienstleistungen CAMAG unterstützt Kunden bei der Methodenentwicklung und Anwendung der Geräte sowie Qualifizierung der Systeme vor Ort. Der CAMAG Literaturdienst»CBS«ist eine einzigartige Informationsquelle über Literatur zur Dünnschicht-Chromatographie. 2
5 Was bietet CAMAG dazu an? Wo finde ich was? Nanomat Seite 7 Probenauftragen Seite 5 10 DC-Probenautomat 4 Linomat 5 Seite 8 Seite 10 Entwicklungskammern Seite 14 Chromatogrammentwicklung Seite smartalert, smartcut Automatische Entwicklungskammer ADC 2 Automatisierte Mehrfachentwicklung AMD 2 HPTLC Vario-System Seite 15 Seite 16 Seite 17 Seite 18 Tauchvorrichtung Seite 21 Derivatisierung Seite DC/HPTLC Sprühgerät, Laborsprüher DC-Plattenheizer DC-Sprühkabinett Seite 21 Seite 22 Seite 22 Chromatogrammauswertung Seite UV-Lampen, UV-Kabinett Seite 24 UV-Inspektion Seite 24 TLC Visualizer Seite 26 Dokumentation/Bildauswertung Seite Bioluminizer TLC Scanner 4 Seite 30 Densitometrie Seite TLC-MS Interface Seite 28 Seite 32 wincats Seite 34 Software Seite visioncats Seite 36 Grundausrüstungen Fertigplatten Seite 38 Seite 39 Verbrauchsmaterial Seite Fertigplatten, Zubehör Labor, Schulung Qualifizierung Appl. Schriften CBS Seite 42 Seite 43 Seite 44 CAMAG Dienstleistungen Seite
6 HPTLC die Hochleistungsmethode in der Planar-Chromatographie Wichtige Einsatzgebiete Die HPTLC nimmt innerhalb der Planar-Chromatographie einen zentralen Platz ein. Wir sprechen von HPTLC beim Einsatz von Schichten hoher Trennleistung in Verbindung mit zeitgemässer Instrumentierung bei allen Arbeitsschritten. Das bedeutet präzises Probenauftragen, standardisierte Entwicklungsbedingungen und softwaregesteuerte Auswertung. Natürlich hat auch die konventionelle Dünnschicht-Chromatographie, die manuell und mit einfachstem technischen Aufwand betrieben wird, noch ihre Daseinsberechtigung bei entsprechend geringerem Anspruch an die Qualität der erzielten Resultate. Im Unterschied zur Säulenchromatographie (GC, HPLC) nutzt die DC/ HPTLC eine planare stationäre Phase und wird offline durchgeführt. Die Schritte Probenauftragen, Chromatogramm-Entwicklung und Auswertung sind zeitlich und örtlich entkoppelt, wodurch einerseits eine durchgängige Automatisierung erschwert ist, andererseits aber ein Höchstmass an Flexibilität erreicht wird. Da eine Vielzahl von Proben simultan getrennt wird, ist die Methode schnell und kostengünstig. Ausser der direkten Detektionsmöglichkeit im sichtbaren und UV-Licht ist die prä- oder postchromatographische Derivatisierung leicht durchführbar, wofür eine grosse Auswahl an Reagenzien zur Verfügung steht. Man hat stets einen Überblick über die gesamte Trennstrecke, so dass auch anders als in der Säulenchromatographie Substanzen erkannt werden, die sich vom Startbereich nicht wegbewegt haben. Wegen der Einmal-Verwendung der stationären Phase kann die Probenvorbereitung meist erheblich vereinfacht werden. Die in der HPTLC ausgearbeiteten, standardisierten Methoden ob zur qualitativen oder quantitativen Analytik eingesetzt können validiert werden. Die eingesetzten Geräte sind IQ/OQ-qualifizierbar und sichern ein Höchstmass an Zuverlässigkeit und Reproduzierbarkeit der erzeugten Daten, so dass alle Anforderungen eines zertifizierten Labors erfüllt werden. Ein modernes Softwarekonzept sorgt für die zuverlässige Steuerung aller Geräte zur HPTLC-Analytik und gewährleistet die Dokumentation der Arbeitsparameter und Analysenergebnisse in dem vom Nutzer gewünschten Umfang. Die HPTLC wird auch im Bereich der wirkungsbezogenen Detektion (Biolumineszenz) erfolgreich eingesetzt. Durch die online Kopplung mit der Massenspektroskopie (TLC-MS) wird sie für jedes Analytik-Labor zu einer der wichtigsten chromatographischen Methoden. Pharma Qualitätskontrolle Content Uniformity Test (CUT) Identitäts- und Reinheitsprüfungen Klinische Anwendungen Lipide Metabolismusstudien Drogenscreening Dopingnachweis, etc. Kosmetik Identitätsprüfung Rohmaterial Konservierungsstoffe, Farbstoffe, etc. Screening auf illegale Inhaltsstoffe, etc. Heilpflanzen Identifizierung Stabilitätstests Nachweis von Verfälschungen Bestimmung von Leitsubstanzen Lebensmittel / Futtermittel Qualitätskontrolle Zusatzstoffe (z. B. Vitamine) Pestizide Haltbarkeitsprüfungen, etc. Industrielle Anwendungen Prozessentwicklung und -optimierung Prozessüberwachung Reinigungsvalidierung, etc. Umwelt Wasser Boden Rückstandsanalyse 4
7 Probenauftragen Der Arbeitsschritt Probenauftragen ist bestimmend für Qualität und Reproduzierbarkeit der Analyse 5
8 Probenauftragen Varianten Das Probenauftragen ist der erste Arbeitsschritt in der Planar-Chromatographie und beeinflusst somit ganz wesentlich das Trennergebnis. Die Wahl der Probenauftragetechnik und des entsprechenden Gerätes richten sich vor allem nach Anspruch an Präzision und Automatisierungsgrad, sowie Probenvolumen und Analysenzahl. Die einfachste Art des Probenauftragens ist die mit einer Festvolumen- Kapillare, punktförmig. Auf konventionelle DC-Schichten können 0.5 bis 5 μl in einem Zug ohne Zwischentrocknen aufgetragen werden, auf HPTLC-Schichten maximal 1 μl. Es ist empfehlenswert, die Kapillare dabei mit dem Nanomat präzise zu führen. Das Aufsprühen von Proben in Form schmaler Striche erlaubt das Aufbringen deutlich grösserer Probenvolumina. Strichförmige Startzonen gewährleisten ausserdem die bestmögliche Trennleistung mit dem gewählten chromatographischen System. Sehr grosse Probenvolumina bzw. stark Matrix beladene Proben können zunächst in Rechteckform aufgesprüht und vor der eigentlichen chromatographischen Trennung mit einem Fliessmittel hoher Elutionskraft zu schmalen Strichen fokussiert werden. Einfluss des Lösungsmittels und der Auftrageart auf das Chromatogramm Mobile Phase: Toluen; Detektion: Weisslicht Testfarbstoff (0.5 and 5 µl) gelöst in 1: Methanol 2: Toluol 3: Hexan Kontaktauftragung vor der Entwicklung Entwickelte Platte nach punktförmiger Kontaktauftragung Entwickelte Platte nach strichförmiger Sprühauftragung 6
9 CAMAG Nanomat 4 und Kapillardispenser Der Nanomat 4 dient zum punktförmigen Kontaktauftragen von Proben auf DC- und HPTLC-Schichten, positionsgenau und ohne Beschädigung der Schicht. Die eigentliche Probendosierung erfolgt mit der entsprechenden Festvolumen-Kapillarpipette, die im Universal-Kapillarhalter präzise geführt wird, was die Erfassung der Trennzonen mit einem Auswertegerät nach einem programmierten Muster ermöglicht. Der Nanomat 4 ist geeignet für Konventionelle DC-Platten bis zum Format 20 x 20 cm, einschliesslich selbstbeschichteter Platten HPTLC-Platten 10 x 10 cm und 20 x 10 cm DC- und HPTLC-Folien bis zum Format 20 x 20 cm Kapillarpipetten Die Kapillarpipetten werden dem Dispenser in nachfüllbaren Magazinen zugeführt. Lieferbar sind die Kapillargrössen 0.5, 1, 2 und 5 μl. Für jede Kapillargrösse steht ein entsprechendes Dispensermagazin zur Verfügung. Mit dem Universal-Kapillarhalter werden die Kapillarpipetten aus dem Dispenser aufgenommen, mit Probenlösung gefüllt und an den Auftragekopf des Nanomat angelegt. Bestellinformationen CAMAG Nanomat 4 und Kapillardispenser Nanomat 4 komplett, einschliesslich Kapillardispenser, Universal-Kapillarhalter, Dispensermagazin für 1µL Kapillarpipetten, Kapillarpipetten 1µL, Pkg. à 5 x Dispensermagazin für 0.5 µl Kapillarpipetten Dispensermagazin für 1.0 µl Kapillarpipetten Dispensermagazin für 2.0 µl Kapillarpipetten Dispensermagazin für 5.0 µl Kapillarpipetten Kapillarpipetten 0.5 µl Nachfüllpkg. à 5 x Kapillarpipetten 1.0 µl Nachfüllpkg. à 5 x Kapillarpipetten 2.0 µl Nachfüllpkg. à 5 x Kapillarpipetten 5.0 µl Nachfüllpkg. à 5 x 100 Weitere Informationen finden Sie bei Probenauftragen 7
10 CAMAG DC-Probenautomat (ATS 4) Automatisiertes Probenauftragen ist ein Schlüsselfaktor für die Produktivität im Routinebetrieb. Alle Anforderungen hinsichtlich Präzision, Robustheit und komfortable Bedienung werden vom DC-Probenautomat 4 vollumfänglich erfüllt. Das Gerät bietet vollautomatisches Probenauftragen für qualitative und quantitative Analysen sowie für präparative Trennungen und ist routinetauglich bei hohem Probendurchsatz in der Massenanalytik. Die Proben werden wahlweise punktförmig durch Kontaktübertragung (0.1 5 μl) oder strich- bzw. rechteckförmig (0.5 >50 μl) durch Sprühen aufgetragen. Strichförmig aufgesprühte Startzonen gewährleisten die bestmögliche Trennleistung, die mit dem gewählten chromatographischen System erreichbar ist. Aufsprühen in Rechteckform erlaubt ein präzises, schichtschonendes Aufbringen grösserer Volumina. Insbesondere bei wasser- und stark matrixhaltigen Lösungen hat sich diese Funktion bewährt. Die rechteckigen Auftragezonen werden vor der eigentlichen chromatographischen Trennung mit einem Fliessmittel hoher Elutionskraft zu schmalen Strichen fokussiert. Das sogenannte»overspotting«, d.h. sequenzielles Auftragen aus verschiedenen Probengläsern auf die gleiche Auftrageposition, z.b. für prächromatographische in-situ Derivatisierung, bzw.»spiking«, etc. ist ebenfalls möglich. Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Vollautomatisches Probenauftragen, routinetauglich Punkt-, strich- und rechteckförmiges Auftragen Dateneingabe und Überwachung via wincats Auftragen von Lösungen auf beliebige planare Medien Kontaktauftragung von 0.1 bis 5 μl Proben Aufsprühen von Probenvolumina von 0.5 bis > 50 μl Einfache und komfortable Bedienung Beheizbare Sprühdüse im ATS 4 (Option) Eine Erhöhung der Temperatur auf 60 C reduziert die Auftragezeit einer wässrigen Lösung auf knapp die Hälfte. Vor allem im Bereich der Spurenanalytik ist der Einsatz des ATS 4 mit beheizbarer Sprühdüse vorteilhaft, denn hier müssen meist grössere Volumina aufgetragen werden, um die Nachweisempfindlichkeit zu erreichen. 8
11 ATS 4 FreeMode-Software Freie Gestaltung von Auftragemustern auf planaren Medien beliebiger Formate auch ausserhalb der Planar-Chromatographie Anwendungsbeispiele Doppelseitiges Auftragen auf drei HPTLC-Platten 20 x 10 cm aus einem 66 Gläser Standardrack in einem Auftragevorgang ermöglicht in der Planar- Chromatographie einen hohen Probendurchsatz, z.b. High Throughput Screening in der kombinatorischen Chemie. Auftragen bestimmter Muster für die zweidimensionale Chromatographie nach der»4 x 4«Methode Die freie Gestaltungsmöglichkeit der Auftragemuster nutzen z.b. Hersteller von Testkits zur Produktion von Teststreifen für serologische Untersuchungen auf Nitrozellulose-Membranen. Je nach Testcharakteristik werden bioaktive Substanzen strichförmig im rechten Winkel zueinander, als Punktserien, oder auch als langgezogene Striche aufgesprüht. Durch Setzen farbiger Markierungspunkte wird ggf. das Zerschneiden der gewünschten Teststreifen erleichtert. Die sehr gute Reproduzierbarkeit hinsichtlich Auftragegeometrie, Strich- und Punktqualität sowie der Volumendosierung sichert die zuverlässige Beurteilung der Testergebnisse. Hinweis Der DC-Probenautomat 4 mit wincats entspricht den Anforderungen von GMP/GLP und kann IQ/OQ qualifziert werden. Soll das Gerät in einem 21 CFR Part 11 Umfeld eingesetzt werden, wird pro wincats Arbeitsplatz 1x die Option 21 CFR Part 11»compliance ready«benötigt. Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»DC-Probenautomat (ATS4)«und bei Bestellinformationen CAMAG DC-Probenautomat 4, komplett mit Standard Zubehör und Equilink, ohne Software, visioncats CAMAG DC-Probenautomat 4 mit beheizbarer Sprühdüse, komplett mit Standard-Zubehör und Equilink, ohne Software visioncats Dosierspritzen Starter Kit für DC-Probenautomat 4 bestehend aus Dosierspritze 25 µl für ATS 4, ohne Nadel Spritzennadel für Sprühauftragung Spritzennadel für Kontaktauftragung Probenauftragen 9
12 CAMAG Linomat 5 Mit dem Linomat 5 werden die Proben mittels Stickstoff (oder Druckluft) strichförmig auf die DC/HPTLC-Platte aufgesprüht. Der Auftragevorgang geschieht automatisch, lediglich das Wechseln der Proben (Füllen, Einsetzen und Reinigen der Spritze) erfolgt manuell. Das Gerät ist routinetauglich. Betrieb unter wincats Der Linomat 5 wird von wincats gesteuert. Die Plattendimension, Anzahl und Abstand der Bahnen, Namen, Volumen und Sequenz der Proben werden in wincats programmiert. Alle auf diese Weise eingegebenen Informationen stehen dann für die spätere densitometrische Auswertung zur Verfügung. Betrieb im stand-alone Modus Um den Bedürfnissen von Anwendern, die die Aufsprühtechnik nur selten einsetzen, Rechnung zu tragen, kann der Linomat 5 auch im stand-alone Modus betrieben werden. Bis zu 10 Methoden können manuell vom Bedienfeld programmiert oder über einen Rechner von einem lizenzierten wincats Programm in den Speicher geladen werden Probenauftragen strichförmig HTPLC Fingerprints (Flavonoide) von Grünteeproben unterschiedlicher geographischer Herkunft. Bahnbelegung 1 Referenzsubstanzen mit steigendem R F : Rutin, Chlorogensäure, Hyperosid, Gallussäure 2 8 Proben aus China 9 13 Proben aus Japan Proben aus Indien Zum Vergleich: Schwarztee aus Sri-Lanka Anmerkung Für diesen Vergleich wurden Bahnen von verschiedenen Platten verwendet. Hinweis Der CAMAG Linomat 5 mit wincats entspricht den Anforderungen von GMP/GLP und kann IQ/OQ qualifziert werden. Soll das Gerät in einem 21 CFR Part 11 Umfeld eingesetzt werden, wird pro wincats Arbeitsplatz 1x die Option 21 CFR Part 11»compliance ready«benötigt. Bestellinformationen CAMAG Linomat 5, komplett mit einer Dosierspritze 100 µl, Standardzubehör und Equilink, ohne Software, visioncats Probendosierspritze 100 µl für Linomat Probendosierspritze 500 µl für Linomat Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»Linomat 5«und bei 10
13 Hypericum Chromatogrammentwicklung Die Chromatogrammentwicklung unter reproduzierbaren standardisierten Bedingungen ist entscheidend für das Ergebnis 11
14 Chromatogrammentwicklung Die DC/HPTLC unterscheidet sich von HPLC dadurch, dass ausser stationärer und mobiler Phase auch eine Gasphase vorhanden ist, die das Trennergebnis massgeblich beeinflussen kann. Die folgenden Betrachtungen beziehen sich vor allem auf Kieselgel als stationäre Phase und Entwicklungsarten, die als Adsorptionschromatographie bezeichnet werden. In der geschlossenen Kammer spielen sich die folgenden Vorgänge ab: 1 Zwischen den Komponenten des Fliessmittels und der Gasphase stellt sich allmählich ein Gleichgewichtszustand ein, der zur Kammersättigung führt. Je nach Dampfdruck der einzelnen Komponenten kann sich die Zusammensetzung der Gasphase von der des Fliessmittels unterscheiden. 3 2 Auch von der bereits nassen Schicht gehen die Fliessmittelkomponenten in die Gasphase über und tragen zu der unter 1 beschriebenen Gleichgewichtseinstellung bei. 3 Die noch trockene stationäre Phase adsorbiert Moleküle aus der Gasphase, wobei vor allem die polaren Komponenten bevorzugt auf der Oberfläche der Schicht angelagert werden. Lässt man zwischen Einstellen der Platte und Start der Entwicklung Zeit verstreichen was nicht bei allen Kammertypen möglich ist so bezeichnet man das als Vorkonditionierung. Dieser Vorgang kann durch einen mit Fliessmittel getränkten Filterkarton beschleunigt werden. Ist die Vorkonditionierung nicht erwünscht, kann dies durch eine im Abstand von wenigen Millimetern zur Trennschicht angeordnete Gegenplatte weitgehend unterbunden werden so genannte Sandwich-Konfiguration Während der Migration können auch die Komponenten der mobilen Phase durch die stationäre Phase getrennt werden, was zur Ausbildung so genannter -Fronten führt und meist unerwünscht ist. 18 % 47 % 75 % Einfluss der relativen Feuchte (»Aktivität der Schicht«) auf das Trennergebnis bei gleicher Laufstrecke 12
15 Auswahl der Entwicklungskammer Die Wahl der»richtigen«entwicklungskammer geschieht während der Methodenentwicklung, bei der man feststellen wird, welche Parameter wie Kammersättigung, Vorkonditionierung der Schicht, relative Feuchte etc. Einfluss auf das Ergebnis haben und die man deshalb unter Kontrolle halten muss. Häufig spielen aber auch sehr»pragmatische«aspekte eine Rolle, z.b. welcher Kammertyp von dem Labor benutzt wird, mit dem man die Ergebnisse vergleichen will. Auch ökonomische Gesichtspunkte wie Fliessmittelverbrauch, bestmögliche Nutzung der Schicht etc. können Entscheidungskriterien sein. Eine Vorkonditionierung der Schicht mit Fliessmitteldampf ist mit allen nachstehend beschriebenen Entwicklungskammern möglich mit Ausnahme der Flachbodenkammer. Eine kontrollierte Feuchte-Konditionierung ermöglicht am zuverlässigsten die ADC 2 mit der entsprechenden Option. Auch mit der Horizontal-Entwicklungskammer (HDC) ist eine Feuchte-Vorkonditionierung möglich sowie eingeschränkt mit der Doppeltrogkammer. Die Sandwich-Konfiguration kann bei der HDC gewählt werden. Hingewiesen sei auf das HPTLC-Vario-System (S. 18), mit dem die optimalen Entwicklungsbedingungen für ein Trennproblem zielstrebig erarbeitet werden können. Entwicklung ohne Vorkonditionierung Entwicklung mit Vorkonditionierung Plattenformate Handelsüblich sind die im Schema dargestellten Plattenformate. Es gibt auch Fertigplatten mit Konzentrierungszone oder GLP-Codierung, die nicht in beliebiger Richtung entwickelt werden können. 20 x 20 cm 20 x 10 cm 10 x 20 cm 10 x 10 cm Chromatogrammentwicklung 13
16 CAMAG Flachbodenkammer Die CAMAG Flachbodenkammer ist der klassische Entwicklungstank für die Dünnschicht-Chromatographie. Die Platte wird bei teilweiser oder annähernd vollständiger Gasraumsättigung entwickelt. Der Grad der Schichtvorbeladung kann ohne zusätzliche Hilfsmittel nicht beeinflusst werden. CAMAG Doppeltrogkammer Die CAMAG Doppeltrogkammer bietet eine Reihe von Möglichkeiten, die chromatographische Trennung gezielt zu beeinflussen und damit zu verbessern. Doppeltrogkammer Geringer Fliessmittelverbrauch Sofern die Entwicklung ohne Vorkonditionierung der Schicht erfolgen soll, genügt eine Einfüllmenge von 10 ml Fliessmittel für eine 20 x 20 oder 20 x 10 cm Platte, bzw. 5 ml für eine Platte 10 x 10 cm. Das bedeutet nicht nur Lösungsmitteleinsparung, es vermindert auch das Entsorgungsproblem. Reproduzierbare Vorkonditionierung Fliessmittel wird zunächst nur in den der Platte gegenüber liegenden Trog gefüllt; die Vorequilibrierung mit dem Fliessmittel erfolgt solange wie gewünscht. Die Entwicklung wird in Gang gesetzt, indem Fliessmittel in den Trog gegeben wird, in dem die Platte steht. Bestellinformationen CAMAG Flachbodenkammer Flachbodenkammer für Platten 20 x 20 cm, mit Edelstahldeckel Flachbodenkammer für Platten 20 x 20 cm, mit Glasdeckel Flachbodenkammer für Platten 20 x 20 cm, ohne Deckel Flachbodenkammer für Platten 10 x 10 cm, mit Edelstahldeckel Flachbodenkammer für Platten 10 x 10 cm, ohne Deckel Flachbodenkammer leicht für Platten 20 x 20 cm, mit Glasdeckel Flachbodenkammer leicht für Platten 20 x 10 cm, mit Glasdeckel CAMAG Doppeltrogkammer Doppeltrogkammer für Platten 20 x 20 cm, mit Edelstahldeckel Doppeltrogkammer für Platten 20 x 20 cm, mit Glasdeckel Doppeltrogkammer für Platten 20 x 20 cm, ohne Deckel Doppeltrogkammer für Platten 20 x 10 cm, mit Edelstahldeckel Doppeltrogkammer für Platten 20 x 10 cm, mit Glasdeckel Doppeltrogkammer für Platten 20 x 10 cm, ohne Deckel Doppeltrogkammer für Platten 10 x 10 cm, mit Edelstahldeckel Doppeltrogkammer für Platten 10 x 10 cm, ohne Deckel 14
17 CAMAG Horizontal-Entwicklungskammer Die Horizontal-Entwicklungskammer erlaubt es, eine HPTLC-Platte von beiden gegenüberliegenden Seiten zur Mitte hin zu entwickeln. Damit wird eine Verdoppelung der Probenzahl pro Platte gegenüber herkömmlichen Entwicklungstechniken erzielt, sofern die Trennstrecke 50 mm minus 5 mm unterer Randabstand = ca. 45 mm ausreicht. Wird eine längere Trennstrecke benötigt, erfolgt die Entwicklung nur von einer Seite. Die Horizontal-Entwicklungskammer kann sowohl in Sandwich- als auch in Tank-Konfiguration betrieben werden. CAMAG smartalert Laufstreckenmonitor CAMAG smartalert dient zur zuverlässigen Überwachung der Laufstrecke des Fliessmittels in einer konventionellen Entwicklungskammer. Es meldet akustisch und visuell, wenn die Fliessmittelfront die gewünschte Laufhöhe erreicht hat. Ersetzt Timer bzw. Stoppuhr Einsetzbar für Entwicklungskammern der Grössen 20 x 20, 20 x x 10 cm. Netzunabhängig batteriebetrieben HPTLC Platte (Schicht nach unten) 2 Glasplatte für Sandwichkonfiguration 3 Fliessmittelreservoir 4 Glasstreifen zur Fliessmittelübertragung durch Kapillarwirkung 5 Abdeckplatte 6 Konditioniertrog CAMAG smartcut Plattenschneider Einfaches und präzises Zuschneiden von DC/HPTLC-Glasplatten Geeignet für Glasplatten bis zu 3 mm Dicke Schont die empfindliche Schicht Die gewünschte Plattengrösse ist direkt von der Skala ablesbar Einfache Handhabung Bestellinformationen CAMAG Horizontal-Entwicklungskammer für Platten 20 x 10 cm CAMAG Horizontal-Entwicklungkammer für Platten 10 x 10 cm CAMAG smartalert Laufstreckenmonitor CAMAG smartcut Plattenschneider Chromatogrammentwicklung 15
18 CAMAG Automatische Entwicklungskammer ADC 2 Die Automatische Entwicklungskammer bietet Komfort, Sicherheit und Reproduzierbarkeit bei der isokratischen Entwicklung von DC/HPTLC-Platten und Folien im Format 20 x 10 cm. Die Automatischen Entwicklungskammer ADC 2 ist das Herzstück eines zeitgemässen DC/HPTLC-Systems. In ihr erfolgt die Chromatogrammentwicklung vollautomatisch und unter reproduzierbaren, von Umwelteinflüssen unabhängigen Bedingungen: Die Aktivität und Vorkonditionierung der Schicht, die Kammersättigung, die Laufstrecke und die abschliessende Trocknung können in der ADC 2 vorgegeben und automatisch überwacht werden. Es sind zwei Betriebsarten möglich: Stand-alone mit Eingabe der Programmparameter via Tastatur oder Remote-Betrieb inklusive Überwachung und Dokumentation der Betriebsparameter mittels wincats. Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Vollautomatische Entwicklung von DC/HPTLC-Platten der Grösse 20 x 10 cm Der Entwicklungsvorgang erfolgt in einer herkömmlichen 20 x 10 cm Doppeltrogkammer. Somit können für solche Kammern bestehende Analysenvorschriften problemlos übernommen werden. Schwankungen der chromatographischen Ergebnisse durch Umwelt und Bedienungseinflüsse sind ausgeschlossen. Betrieb im stand-alone Modus oder unter wincats Der Benutzer wird von sämtlichen Überwachungsfunktionen entlastet, der Ablauf bleibt in allen Einzelheiten nachvollziehbar. Die Option»Feuchtekontrolle«ermöglicht eine reproduzierbare Chromatographie bei definierter Aktivität der Schicht. Diese Option ist unverzichtbar, wenn bei der Methodenentwicklung ein Einfluss der relativen Feuchte geprüft werden soll. 15 % 30 % 47 % 60 % Einfluss der relativen Feuchte auf die Trennung von Polyphenolen in Grüntee Mobile Phase: Toluen Aceton Ameisensäure 9:9:2 Hinweis Die Automatische Entwicklungskammer ADC 2 mit wincats entspricht den Anforderungen von GMP/GLP und kann IQ/OQ qualifiziert werden. Soll das Gerät in einem 21 CFR Part 11 Umfeld eingesetzt werden, wird pro wincats Arbeitsplatz 1x die Option 21 CFR Part 11»compliance ready«benötigt. Bestellinformationen CAMAG Automatische Entwicklungskammer ADC 2 komplett mit Standardzubehör und Equilink, ohne Software, visioncats Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»Automatische Entwicklungskammer ADC 2«und bei 16
19 CAMAG AMD 2-System Automatisierte Mehrfachentwicklung, Gradientenelution Das AMD*-Verfahren ermöglicht die Lösung von Trennaufgaben, die mit den zuvor bekannten Techniken der HPTLC nicht angegangen werden konnten. AMD ist das einzige Verfahren, mit dem eine reproduzierbare Gradientenentwicklung an Kieselgel möglich ist. In der Säulenchromatographie ist Gradientenentwicklung praktisch nur in der Umkehrphase reversed phase anwendbar; Kieselgel erfordert einen zeitaufwendigen Konditionierungsschritt oder kann irreversibel verändert werden, was bei einer Technik, die auf die häufige Wiederverwendung der stationären Phase angewiesen ist, nicht tolerierbar ist. In der Planar-Chromatographie ist dieser Aspekt nicht relevant. *AMD = Automated Multiple Development Das Prinzip der CAMAG AMD-Methode Die HPTLC-Platte wird mehrfach in der gleichen Richtung entwickelt. Von Einzellauf zu Einzellauf wird ein Fliessmittel geringerer Elutionsstärke verwendet. Auf diese Weise wird ein Polaritäts-Stufengradient erzeugt. Jeder Einzellauf führt über eine grössere Strecke als der vorangegangene. Alle Laufstrecken der Einzelläufe werden mit einem CCD-Sensor überwacht. Zwischen den Einzelläufen wird das Fliessmittel vollständig aus der Entwicklungskammer entfernt und die Schicht mittels Vakuum getrocknet. Die jeweils benötigten Fliessmittelgemische werden erst kurz vor dem Einsatz aus den reinen Lösungsmitteln frisch hergestellt. Durch das Zusammenwirken von Fokussiereffekt und Gradientenentwicklung werden äusserst schmale Trennzonen erzielt. Typische Peakbreiten liegen bei 1 mm, so dass auf der zur Verfügung stehenden Trennstrecke von 80 mm bis zu 40 Komponenten vollständig getrennt werden können (Basislinien-Trennung). AMD 2 unter wincats AMD 2 kommuniziert wie die anderen rechnergesteuerten CAMAG Geräte mit der Software wincats. Der Gradient, der aus bis zu fünf Lösungsmittelflaschen aufbereitet werden kann, wird durch Eingabe in eine Tabelle in wincats definiert. Dabei können Gradient und Laufstrecken pro Einzellauf zwecks Plausibilitätskontrolle grafisch dargestellt werden. Anschliessend werden sämtliche Einzelläufe des Entwicklungsprogramms vollautomatisch ausgeführt und von wincats aufgezeichnet. Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Mehrfachentwicklung mittels Fliessmittelgradient Eine um den Faktor 3 gesteigerte Trennleistung gegenüber normaler HPTLC Dateneingabe und Überwachung via wincats Zeitnutzung auch ausserhalb der normalen Arbeitszeit Trennung verschiedener Rhabarberproben mittels AMD Detektion: UV 366 nm Mobile Phase: Gradient in 10 Schritten: Methanol Methylenchlorid (40:60) zu (10:90) in 9 Schritten, Entwicklungsstrecke 40 mm, dann ein isokratischer Schritt mit Methanol Methylenchlorid (10:90) über 70 mm Entwicklungstrecke Hinweis AMD2 mit wincats entspricht den Anforderungen von GMP/GLP und kann IQ/OQ qualifiziert werden. Soll das Gerät in einem 21 CFR Part 11 Umfeld eingesetzt werden, wird pro wincats Arbeitsplatz 1x die Option 21 CFR Part 11»compliance ready«benötigt. Bestellinformationen CAMAG AMD 2-System bestehend aus Entwicklungseinheit, Standardzubehör und Equilink, ohne Software Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»AMD 2-System«und bei Chromatogrammentwicklung 17
20 CAMAG HPTLC-Vario-System Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Die Entwicklung mit sechs verschiedenen Fliessmitteln kann in einem Lauf getestet werden. Sowohl die Entwicklungsbedingungen im Tank als auch die in Horizontalund Sandwich-Konfiguration lassen sich simulieren. Die Resultate werden unmittelbar vergleichbar. Sechs verschiedene Bedingungen der Schicht-Vorkonditionierung können nebeneinander untersucht werden, darunter auch der Einfluss der relativen Feuchte. Variationsmöglichkeiten unterschiedlicher Art lassen sich kombinieren. Zeitsparende Optimierung der Trennbedingungen: HPTLC-VARIO Kammer Anwendungsmöglichkeiten schematisch dargestellt: F 1 = Fliessmittel, C 1 = Konditionierflüssigkeiten Fliessmitteloptimierung Fliessmitteloptimierung Fliessmitteloptimierung bei einheitlicher Vorkonditionierung Optimierung der Vorkonditionierung Entwicklung mit 6 verschiedenen Fliessmitteln, ohne Vorkonditionierung = Bedingungen der Entwicklung in Sandwich-Konfiguration Entwicklung mit 6 verschiedenen Fliessmitteln in Gegenwart dieser Fliessmittel in den Konditioniertrögen = Simulierung der Bedingungen bei der Tank-Entwicklung Einheitliche Vorkonditionierung der Schicht, danach Entwicklung mit 6 verschiedenen Fliessmitteln in Sandwich-Konfiguration Vorkonditionierung mit 6 verschiedenen Flüssigkeiten, danach Entwicklung mit einem einheitlichen Fliessmittel Bestellinformationen HPTLC-VARIO System komplett, bestehend aus HPTLC-VARIO Kammer für 10 x 10 cm Platten und HPTLC Linienfräser 18
21 Derivatisierung Die Möglichkeit der problemlosen prä- und postchromatographischen Derivatisierung ist ein besonderer Vorteil der Dünnschicht-Chromatographie 19
22 Prä- und postchromatographische Derivatisierung Die Möglichkeit, die nach ihrer Trennung auf der Platte gespeicherten Fraktionen derivatisieren zu können, ist ein besonderer Vorteil der Dünnschicht-Chromatographie. Durch Derivatisierung können ungefärbte und nicht UV-aktive Substanzen in optisch detektierbare umgewandelt werden. Für viele Substanzen gibt es spezifische bzw. klassenspezifische Derivatisierungsreaktionen, mit denen eine selektive Detektion ermöglicht wird. Eine prächromatographische Derivatisierung ist möglich durch Übersprühen der Auftragezone mittels Linomat oder ATS 4. Die zur postchromatographischen Derivatisierung benötigten flüssigen Reagenzien werden durch Tauchen oder Sprühen gleichmässig auf das Chromatogramm aufgebracht. Sofern sich das Reagenz dazu eignet und insbesondere, wenn eine quantitative Auswertung erfolgen soll, ist Tauchen dem Sprühen vorzuziehen. Auf Reagenzübertragung durch Sprühen kann im allgemeinen dann nicht verzichtet werden, wenn zwei flüssige Reagenzien nacheinander ohne Zwischentrocknen aufgebracht werden müssen (z.b. Diazotierung/Kupplung). Beim Sprühen ist darauf zu achten, dass auftretende Reagenznebel durch eine wirksame Abzugsvorrichtung aus der Laboratmosphäre herausgehalten werden. In den meisten Fällen erfolgt die eigentliche Derivatisierungs-Reaktion erst bei erhöhter Temperatur. Es ist vorteilhaft, die DC-Platte mit einem dazu konstruierten Plattenheizer auf die gewünschte Temperatur zu erhitzen. Ein zum Derivatisieren eingesetzter Trockenschrank wird meist infolge Verschleppung von Reagenzien nachhaltig kontaminiert. Ausser chemischen können auch mikrobiologische Detektionsverfahren eingesetzt werden, z.b. mit dem Leuchtbakterium Vibrio fischeri und Auswertung im BioLuminizer (Seite 28). Vergleich Reagenzübertragung durch Sprühen und Tauchen Derivatisierung von Capsaicin mit Dichlorchinon-Chlorimid-Reagenz durch Sprühen (li) und Tauchen (re) Konzentrationen: 1 g/l (Sprühreagenz), 0.25 g/l (Tauchreagenz) 20
23 CAMAG Chromatogramm- Tauchvorrichtung Sowohl das Eintauchen als auch das Herausheben der Platte erfolgen mit gleichmässiger Geschwindigkeit. Dadurch werden fliessmittelfront-ähnliche Tauchlinien vermieden, die bei der densitometrischen Auswertung stören würden. Durch Einstellung einer definierten Tauchgeschwindigkeit und der Verweilzeit lassen sich die Tauchbedingungen standardisieren. Die Tauchvorrichtung ist auch für das Vorwaschen von Platten geeignet. Die CAMAG Chromatogramm-Tauchvorrichtung bietet: Gleichmässige Vertikalgeschwindigkeit, die zwischen 30 und 50 mm/s stufenlos wählbar ist Verweilzeit wählbar zwischen 0 und 8 s sowie unendlich die Aufwärtsbewegung erfolgt dann auf eine zweite Schaltbetätigung. Eintauchtiefe einstellbar für 10 cm und 20 cm hohe Platten Das Gerät ist batteriebetrieben CAMAG DC/HPTLC-Sprühgerät Das DC-Sprühgerät arbeitet elektropneumatisch. Es erzeugt einen sehr feinen Sprühnebel mit Partikeln im Bereich von 0.3 bis 10 µm. Damit lässt sich bei minimalem Reagenz-Verbrauch eine homogene Verteilung auf der Schicht erzeugen. Das Gerät besteht aus Ladestation und Pumpenteil. Dazu gehören zwei Arten Sprühköpfe: Sprühkopf A für Flüssigkeiten niederer Viskosität, z.b. alkoholische Reagenzlösungen und Sprühkopf B für viskose Flüssigkeiten, z.b. Schwefelsäure-Reagenzien CAMAG Laborsprüher Der Laborsprüher aus Glas ist eine preisgünstige Alternative zum DC- Sprühgerät. Er wird mit einem Gummigebläse geliefert, kann aber auch mit Druckluft oder Stickstoff betrieben werden. Der Erlenmeyerkolben hat Normalschliff und kann mit einem entsprechenden Glasstopfen verschlossen werden. Bestellinformationen Chromatogramm-Tauchvorrichtung für Platten bis 20 x 20 cm, ohne Tauchkammern Tauchkammer für Platten bis 20 x 20 cm, mit Deckel Tauchkammer für Platten bis 20 x 10 cm, mit Deckel Ständer für drei Tauchkammern DC/HPTLC-Sprühgerät bestehend aus Ladestation, Pumpenteil, je ein Sprühkopf A und B, je eine Reagenzienflasche 100 ml und 50 ml Pkg. à 5 Sprühköpfe Typ A und 1 Typ B Pkg. à 6 Sprühköpfe Typ B Reagenzienflaschen 100 ml mit Verschluss, Pkg. à 6 Stk Reagenzienflaschen 50 ml mit Verschluss, Pkg. à 6 Stk Service-Kit für DC-Sprühgerät Laborsprüher aus Glas mit 100 ml Erlenmeyerkolben Derivatisierung 21
24 CAMAG DC-Plattenheizer Der DC-Plattenheizer hat die Aufgabe, eine einzelne DC/HPTLC-Platte nach Aufbringen des Derivatisierungs-Reagenz einer definierten Temperatur auszusetzen, die gleichmässig über die ganze Platte eingehalten wird. Der CAMAG DC-Plattenheizer hat eine Heizplatte aus CERAN -Keramik. Sie ist beständig gegenüber allen üblichen Reagenzien und leicht zu reinigen. Sie ist mit einem Raster versehen, das die richtige Platzierung der DC-Platte erleichtert. Die Handhabung ist komfortabel. Soll- und Ist-Temperatur werden digital angezeigt. Der Temperatur-Regelbereich beträgt C. Der Plattenheizer ist mit einem Überhitzungsschutz ausgestattet. CAMAG DC-Sprühkabinett Das CAMAG DC-Sprühkabinett dient zum Abführen von Reagenznebeln beim Besprühen von Dünnschicht-Chromatogrammen. Es ist so konstruiert, dass sowohl vom Sprüher ausgehender Streunebel als auch von der Platte zurückprallende Partikel einwandfrei abgeführt werden, ohne dass Teile des Sprühstrahls schon vor Erreichen der Platte abgesaugt werden, was bei einem normalen Laborabzug häufig passiert. Das Sprühkabinett eignet sich auch vorzüglich für das Abtrocknen gelaufener Chromatogramme, gleichgültig ob zusätzlich ein Fön benutzt wird. Das Radialgebläse, dessen Motor ausserhalb des Absaugkanals liegt, hat eine Saugleistung von 3 m 3 /min. Der untere Teil des Sprühkabinetts ist als Auffangwanne gestaltet, die zum Reinigen leicht herauszunehmen ist. Das Sprühkabinett ist aus PVC gefertigt. Abmessungen: 470 x 490 x 490mm (Breite x Höhe x Tiefe) Bestellinformationen CAMAG DC-Plattenheizer CAMAG DC-Sprühkabinett mit Ventilator und 1.5 m Abluftschlauch CAMAG DC-Sprühkabinett mit 1.5 m Abluftschlauch, ohne Ventilator zum Anschluss an bestehende Saugleitung Abluftschlauch-Verlängerung 1.5 m mit Verbindungsstück Weitere Informationen finden Sie bei 22
25 Rosmarin Chromatogrammauswertung Visuelle Beurteilung und UV-Licht UV-Lampen Dokumentation / Bildauswertung Visualizer Wirkungsbezogene Detektion Bioluminizer Klassische Densitometrie TLC Scanner 4 TLC/MS-Kopplung TLC-MS Interface 23
26 Visuelle Beurteilung unter UV-Licht CAMAG UV-Lampe für zwei Wellenlängen Das Lampengehäuse besteht aus eloxiertem Aluminium und schlagfestem Kunststoff. Ein abnehmbares UV-durchlässiges Filter blendet die sichtbaren Anteile der Röhrenabstrahlung wirksam aus. Das Stativ hält die Lampe in der für DC/HPTLC-Platten bis 20 x 20 cm optimalen Position. Fremdlicht wird auf drei Seiten abgeschirmt. Die Lampe kann vom Stativ abgehoben und auf beliebige Objekte gerichtet werden. Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Zwei Wellenlängen, 254 und 366 nm (2 Leuchtröhren mit je 8 W) Gehäuseabmessungen 442 x 76 x 43 mm Die Netzspannung wird in KHz Wechselspannung konvertiert, wodurch verzögerungsfreies Zünden, hohe Leuchtdichte und flimmerfreies Betrachten gewährleistet werden. Ein Timer schaltet die Lampe nach 10 Min ab, wodurch das Strahlungsrisiko für den Anwender minimiert wird. CAMAG UV-Kabinett Das CAMAG UV-Kabinett gestattet die Begutachtung von DC/HPTLC- Chromatogrammen und anderen Objekten unter UV-Licht im nicht abgedunkelten Raum. Nach vorn ist es mit einem Rollladen abgeschlossen. Der Einblickschacht ist mit einem Glasfilter versehen, das die Augen des Benutzers vor reflektierter UV-Strahlung schützt. Die richtigen Abstände zwischen UV-Strahlungsquelle, Objekt und Auge des Betrachters sind optimal eingehalten. Gute Ausleuchtung und ruhiges Betrachten sind so gewährleistet. Arbeitsfläche 400 x 260 mm, äussere Abmessungen 400 x 350 x 290 mm. Die UV-Lampe kann abgehoben und auf beliebige Objekte gerichtet werden. Auf die Möglichkeit, Chromatogramme unter UV-Licht zu inspizieren, wird ein DC-Labor nicht verzichten können. In der Dünnschicht-Chromatographie werden zwei Arten UV-Licht eingesetzt: Langwelliges UV 366 nm: Unter langwelligem UV-Licht erscheinen fluoreszierende Substanzen als helle, oft unterschiedlich farbige Zonen auf dunklem Untergrund. Diese Detektionsmethode ist umso empfindlicher, je höher die UV-Leuchtdichte ist, je wirksamer die sichtbaren Lichtanteile ausgefiltert sind und je wirksamer Fremdlicht abgeschirmt wird. Kurzwelliges UV 254 nm: Unter UV 254 nm erscheinen Substanzen, die UV-Licht dieser Wellenlänge absorbieren, als dunkle Zonen auf hellem Untergrund, sofern die Schicht einen entsprechenden Fluoreszenzindikator F 254 enthält. Bestellinformationen UV-Lampe für zwei Wellenlängen, 254 und 366 nm, je 8 W CAMAG UV-Kabinett mit UV-Lampe für zwei Wellenlängen 254 und 366 nm, je 8 W Röhre für kurzwelliges UV 254 nm, 8 W Röhre für langwelliges UV 366 nm, 8 W Ersatz UV-Filter 24
27 Dokumentation/Archivierung Die elektronische Bilderfassung erfolgt grundsätzlich im polychromatischen sichtbaren Licht. Wird zur Objektbeleuchtung langwelliges UV verwendet, erfasst die Kamera emittiertes Fluoreszenzlicht im sichtbaren Bereich. Erfolgt die Objektbeleuchtung mit kurzwelligem UV, erfasst die Kamera wie das menschliche Auge die Fluoreszenzminderung von Trennzonen, sofern die Schicht einen Fluoreszenzindikator enthält. Aus den Bilddaten ist eine Quantifizierung über die so genannten Grauwerte möglich. Eine spektrale Selektivität ist auf die visuelle Farberkennung beschränkt. Die Stärke der elektronischen Bilderfassung liegt in der Vermittlung des gesamten Chromatogrammbildes. Chromatogramm unter Weisslicht Chromatogramm unter UV 254 nm Chromatogramm unter UV 366 nm Chromatogrammauswertung 25
28 CAMAG TLC Visualizer Die digitale Bilderfassung und -auswertung eröffnet neue Dimensionen für die HPTLC, vor allem für anspruchsvolle qualitative Analytik. Das komplette System TLC Visualizer besteht aus Beleuchtungseinheit und Digitalkamera mit der zugehörigen Software. Es zeichnet sich aus durch ergonomisches Design und einfache, intuitive Bedienung mit wincats. Die Beleuchtungseinheit gewährleistet homogene Ausleuchtung der Platte mit UV 254, UV 366 und Weisslicht, letzteres sowohl im Auflichtals auch im Transmissionsmodus und beide kombiniert. Die Leuchtröhren werden mit Hochfrequenz (60 khz) betrieben, um Synchronisationsprobleme mit der Digitalkamera auszuschliessen. Eine Abschaltautomatik schützt den Benutzer vor UV-Strahlung. Die Digitalkamera vereinigt hervorragende Ortsauflösung (0.1 mm) mit ausgezeichneter Farbtreue. Durch die lineare 12 bit Digitalisierung wird ein geringer Rauschpegel erreicht. Hervorzuheben ist die Reproduzierbarkeit dank automatisierter Bildoptimierung und fester Aufnahmeparameter für alle Beleuchtungsarten. Die wincats Software gewährleistet eine einfache und intuitive Handhabung, schnelle Übertragung der Bilddaten (< 1 s) sowie automatische Bildoptimierung mit Untergrundkorrektur. Die Archivierung sämtlicher Bilder einer Platte erfolgt in einer Datei zusammen mit allen Daten der entsprechenden Analyse. Die Option»Erweiterte Bildaufnahme«(Professional Image Enhancement) bietet weitere Optimierungsmöglichkeiten wie den Einsatz von Farbprofilen, Untergrundsubtraktion sowie die Möglichkeit von Serienaufnahmen. Die Option»Bildvergleich«(Image Comparison Viewer) erlaubt den visuellen Vergleich mehrerer Proben von verschiedenen Platten auf einem Bildschirm. Bildvergleich Die ausgewählten Bahnen einer Platte unter UV 254 nm (20, 25), Weisslicht (35, 40) und UV 366 nm können verglichen werden Erweiterte Bildaufnahme: Beispiel unter Weisslicht Keine Korrektur Standard Korrektur Individuelle Korrektur mit»professional Image Enhancement«26
29 VideoScan Die VideoScan Software erlaubt die Auswertung der mit dem TLC Visualizer aufgenommenen und elektronisch gespeicherten Bilder. Das Programm ist einfach zu beherrschen und schnell. Es bietet flexible Anwendungen, z.b. Vergleich von Bahnen verschiedener Chromatogramme, Auswertung von Bahnen mit variierendem Abstand, Auswertung schräg liegender Messbahnen, usw. Die Chromatogramme können jederzeit auch noch Jahre nach der Bilderfassung ausgewertet werden. Die quantitative Auswertung erfolgt wahlweise über Peakhöhe und/oder Peakfläche mittels Einstandard- oder Mehrbereichs-Kalibrierung linear oder polynom. Hinweis TLC Visualizer mit wincats entspricht den Anforderungen von GMP/GLP und kann IQ/OQ qualifiziert werden. Soll das Gerät in einem 21 CFR Part 11 Umfeld eingesetzt werden, wird pro wincats Arbeitsplatz 1x die Option 21 CFR Part 11»compliance ready«benötigt. Bestellinformationen CAMAG TLC Visualizer komplett mit hochauflösender 12 bit CCD-Kamera mit 12 mm Objektiv, mit Equilink für wincats, ohne Software CAMAG TLC Visualizer komplett mit hochauflösender 12 bit CCD-Kamera mit 16 mm Objektiv, mit Equilink für wincats, ohne Software CAMAG VideoScan mit erweiterter Auswertung Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»CAMAG TLC Visualizer«und bei Chromatogrammauswertung 27
30 Wirkungsbezogene Analytik CAMAG BioLuminizer Das System besteht aus einer jedes Fremdlicht ausschliessenden Kammer mit Klimakontrolle für erhöhte Stabilität der Platte und einer gekühlten 16 bit CCD Digitalkamera mit hoher Auflösung und Quanteneffizienz. Es zeichnet sich aus durch ergonomisches Design und einfache, intuitive Bedienung im stand-alone Modus oder mit der BioLuminizer Software. Mit Hilfe dieser Methode kann kostengünstig und schnell eine biologische Aktivität nachgewiesen werden. Besondere Schutzvorkehrungen sind beim Umgang mit diesen für den Menschen apathogenen Leuchtbakterien nicht erforderlich. Gekühlte 16 bit CCD Kamera mit hoher Auflösung und Quanteneffizienz Spezielle Klimakontrolle für erhöhte Stabilität der Platte Bedienerfreundlich, Platz sparend, einfach zu reinigen Die Kopplung von DC/HPTLC mit dem Nachweis von Bioaktivität ist ein ausgezeichnetes Mittel zur Identifizierung einzelner toxischer Komponenten in komplexen Probengemischen. Die Methode ist geeignet für den Nachweis von toxischen Verunreinigungen in Nahrungsmitteln, Getränken, Kosmetika, Abwasser und Brauchwasser sowie zum Nachweis bioaktiver Bestandteile in Naturprodukten. Die komplexe Probe wird zuerst mittels HPTLC in Einzelsubstanzen getrennt. Anschliessend wird die HPTLC-Platte in eine Suspension von Leuchtbakterien (Vibrio fischeri) getaucht. Die Reaktion findet innerhalb kürzester Zeit statt: Alle Zonen mit hemmender bzw. toxischer Wirkung erscheinen als dunkle Zonen auf dem lumineszierenden Plattenhintergrund. UV-Bestrahlungen (min) Praxisbeispiel Für die Reinigung von Abwasser wird für spezielle Probleme die Bestrahlung mit UV-Licht eingesetzt. Man sieht, dass die Abbauprodukte eine bioaktive Wirkung zeigen. Mit zunehmender Bestrahlungszeit entstehen Substanzen mit einer deutlichen Hemmwirkung gegenüber Leuchtbakterien. Im Küvettentest wäre die im Chromatogramm erkennbare Hemmwirkung maskiert worden. Das Beispiel entstammt einer Praktikumsarbeit am Zweckverband Landeswasserversorgung, Langenau, Deutschland. Bestellinformationen CAMAG BioLuminizer zur Detektion der Lumineszenzlöschung im Anschluss an eine chromatografische Trennung auf HPTLC-Platten, inkl. Software Weitere Informationen finden Sie im Spezialprospekt»CAMAG BioLuminizer «und bei 28
31 Klassische Densitometrie Bei der klassischen Densitometrie wird das Chromatogramm vom TLC Scanner mit einem Spalt monochromatischen Lichts bahnweise abgetastet. Beim TLC Scanner 4 beträgt der Messbereich nm. Erfasst werden wahlweise die remittierten Signale in Absorption oder Fluoreszenz. Daraus können quantitative Ergebnisse mit höchstmöglicher Präzision und Selektivität ermittelt werden. Es können Absorptionsspektren und Fluoreszenzanregungsspektren aufgenommen werden. Die Stärke der klassischen Densitometrie gegenüber der elektronischen Bildauswertung liegt in der quantitativen Präzision und vor allem in der spektralen Selektivität. Empfehlungen Werden die Proben in Form schmaler Striche aufgetragen, so kann die densitometrische Auswertung durch Aliquotmessung des homogenen Mittelteils erfolgen, d.h. mit einem Messspalt von ca. 2 /3 der beim Auftragen gewählten Strichlänge. Das ergibt eine wesentliche Verbesserung der Reproduzierbarkeit gegenüber der Abtastung punktförmig aufgetragener Proben mit einem notwendigerweise grösseren Spalt. Auch wird ein Positionierfehler vermieden. Es empfiehlt sich, die Absorptionsmaxima der zu bestimmenden Trennzonen zu ermitteln und dann die Quantifizierung bei diesen Wellenlängen durchzuführen. Die Ermittlung kann durch Aufnahme der Spektren erfolgen oder durch Mehrwellenscan. Weitere Empfehlungen sind in der Betriebsanleitung des TLC Scanner 4 enthalten. Chromatogrammauswertung unter Weisslicht Analogkurven der detektierten Peaks mit Substanznamen Lineare Kalibrierung Chromatogrammauswertung 29
32 CAMAG TLC Scanner 4 Der TLC Scanner 4 in Verbindung mit der wincats Software ist der fortschrittlichste Messplatz zur densitometrischen Auswertung von Dünnschicht-Chromatogrammen. Das System kann auch zur densitometrischen Auswertung von anderen planaren Objekten eingesetzt werden. Sämtliche Funktionen des Scanners werden über die wincats Software gesteuert. Manuell erfolgen lediglich das Einlegen des Messobjekts und, sofern vom Benutzer gewünscht, das Einschalten der Innenraumbeleuchtung zwecks Kontrolle/Positionierung des Messobjekts in der Scan-Ausgangsposition. Die optimale Einstellung der elektronischen Verstärkung geschieht automatisch, sowohl bei Absorptions- als auch bei Fluoreszenz- Messungen. Der 16-bit A/D-Wandler gewährleistet dabei stets die optimal angepasste Auflösung des Messsignals. Die wichtigsten Eigenschaften in Kürze Messung in Remission, wahlweise Absorption oder Fluoreszenz Objektformat bis 200 x 200 mm Spektralbereich nm Automatische Schaltung von Deuterium-, Halogen-Wolfram und Hg-Hochdrucklampe gemäss der in wincats getroffenen Wahl Messschrittauflösung μm Messgeschwindigkeit mm/s Spektrenaufnahme mit bis zu 100 nm/s Automatische Einstellung der elektronischen Verstärkung Schnelle Datenübertragung Das Messobjekt, hier eine 20 x 10 cm HPTLC-Platte, wird benutzerfreundlich auf der ausgefahrenen Positionierplatte fixiert und danach automatisch in die Scanposition gefahren. Betätigt der Benutzer die manuelle Positionierung, so werden die Koordinaten auf dem Display angezeigt und auf entsprechenden Befehl vom Programm übernommen. 30
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