Labordiagnostik Tollwut
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- Alfred Rosenberg
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1 Labordiagnostik Tollwut Dr. Eveline Wodak AGES, Geschäftsfeld Tiergesundheit, IVET Mödling, Abteilung Virologie Österreich: 5 Jahre Tollwut-frei Wien, Österreichische Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit GmbH
2 Labordiagnostik Tollwut Zusammenfassung: Tollwut Situation Diagnostik - Material Diagnostik - Methoden Impfung - Füchse Überwachung Fallbeispiele
3 Tollwut-Rabies-Lyssa 7 Genotypen in 2 Gruppen - Genotyp 1: Rabiesvirus (RABV). Dieses Virus ist das klassische Tollwutvirus. - Genotyp 2: Lagos-Fledermausvirus = Lagos bat virus (LBV) - Genotyp 3: Mokola-Virus (MOKV) - Genotyp 4: Duvenhage-Virus (DUVV) - Genotypen 5 und 6: Europäisches Fledermaus-Lyssavirus = European bat lyssavirus (EBLV 1, 2) - Genotyp 7: Australisches Fledermaus-Lyssavirus = Australian bat lyssavirus (ABLV) Lyssa Gruppe 1: Genotyp 1/4/5/6/7 Lyssa Gruppe 2: Genotyp 2/3 Außer beim Genotyp 2 sind bei allen oben aufgezählten Genotypen Tollwutfälle beim Menschen beschrieben. Je nach Genotyp unterschiedliche Zellkulturlinien Foto: Dr. Susanne Richter
4 Tollwut Reservoir Mitteleuropa Füchse (silvatische Wut) Foto: Dr. Armin Deutz Fledermäuse Marderhund Foto: Dr. Armin Deutz Stinktier Hund (urbane Wut) de.wikipedia.org
5 Tollwut Wild- u. Haustier Europa
6 Fledermaus Tollwut Europa
7 Tollwut Diagnostik klinische Anzeichen einer Enzephalitis oder Myelitis gibt es bei vielen nervalen Erkrankungen Diagnose der Tollwut allein durch Laboruntersuchungen möglich Die ante mortem Diagnose der Tollwut beim Menschen ist schwierig. - Mehrere Untersuchungsverfahren empfehlenswert In Österreich werden derartige Laboruntersuchungen am nationalen Referenzlabor für Tollwut im Institut für veterinärmedizinischen Untersuchungen Mödling der Österreichischen Agentur für Gesundheit und Ernährungssicherheit GmbH (AGES), Geschäftsfeld Tiergesundheit, durchgeführt.
8 Tollwut NRL (Nationales Referenzlabor) Ernennung durch Bundesministerium auf Grundlage gemeinschaftlicher und nationaler Rechtsvorschriften Hoher Qualitätsstandard durch Akkreditierung (EN ISO 17025) Laufende Ringtests (AG, AK) durch EU-Referenzlabor Zusammenarbeit mit CRL und OIE Ansprechpartner: Abt. Pathologie: Dr. Elisabeth Vanek
9 Probenmaterial Natives Untersuchungsmaterial (keine Formalinfixierung!) sollte gekühlt oder bei Raumtemperatur transportiert werden. Antigennachweis: - Gehirn - Speichel, Nackenhautbioptat, Konjunktivalabstrich, Rachenabstrich - Liquor cerebrospinalis - Nach Möglichkeit mehrere Proben - Nur der positive Nachweis ist aussagekräftig!! Antikörpernachweis (Impftiter): - Serum
10 Untersuchungsmethoden Antigennachweis: Fluorescent Antibody Test (FAT) - Gehirnabklatsch Zellkulturtest (rabies tissue culture inoculation test; RTCIT) Real-Time RT-PCR, RT-PCR, Sequenzierung und Phylogenie Immunhistologie (Histologie: Nachweis von Negri Körperchen im Zytoplasma von Neuronen (geringe Sensitivität)) (Tierversuch mit Baby-Mäusen (mouse inoculation test; MIT)) nicht Routine! Antikörpernachweis (Impftiter): Fluorescent Antibody Virusneutralisationtest (FAVNT) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
11 Virusnachweis- FAT Fluorescent Antibody Test (FAT) WHO und OIE Goldstandard sensitiv, spezifisch, billig Abklatschproben Zellkultur Gewebeproben Foto: Dr. Z. Bago
12 Tollwut: Abklatschprobe vom Gehirn Gehirn: in Routinefall Stammhirn und Ammonshorn Foto: Dr. Z. Bago Foto: Dr. Z. Bago
13 Virusnachweis-Immunhistochemie Foto: Dr. Z. Bago Foto: Dr. Z. Bago
14 Virusnachweis-Histologie Nachweis von Negri Körperchen im Zytoplasma von Neuronen (geringe Sensitivität)
15 Virusnachweis-RTCIT Rabies Tissue Culture Inoculation Test (RTCIT) Virusanzucht in der Zellkultur OIE Methode für Proben von Tieren die einen Menschen gebissen haben Virusisolierung von FAT positiven Proben
16 Foto: Peter Kalaus
17 Virusnachweis- FAT in Zellkultur Foto: Peter Kalaus
18 Virusnachweis- FAT in Zellkultur Foto: Peter Kalaus
19 Virusnachweis- FAT in Zellkultur Foto: Peter Kalaus
20 Virusnachweis-RT-PCR Polymerase Chain Reaction (PCR) Ante mortem Diagnose Klassifikation von Isolaten in Kombination mit RTICT Tollwut Virus RT-PCR Nachweis in menschlicher Hautbiopsie und Rachentupfer Schnelles Nachweisverfahren Nicht als Einzeldiagnostik empfohlen Dr. S. Revilla-Fernandez Foto: Peter Kalaus
21 Virusnachweis-RT-PCR 1) Screening mit 3 Real-Time RT-PCRs: GT1, GT5 und GT6 (Nukleokapsidprotein) 2) (nicht in der Routine) ABLV-GT7 Real-Time RT-PCR 3) Bestätigung mit 3 konv. Pan-Tollwut nested RT-PCRs (NP): -hemin. RT-PCR nach Heaton (1F, 6R) -n.rt-pcr mit EBLV- Primer nach Echevarria (3F, 3R) -n.rt-pcr nach Vazquez-Morón (2F, 2R)
22 Antikörpernachweis-FAVNT Fluoreszenz Antikörper Virusneutralisationstests (FAVNT) Zur Ermittlung des Immunstatus Foto: Peter Kalaus
23 Serumneutralisationstest-Prinzip Verdünnungsreihe von Test-Seren Zugabe von bekannter Menge Tollwut Virus Erste Inkubation = Neutralisationsphase Zugabe von bestimmter Menge an virusempfänglichen Zellen Zweite Inkubation = Zellwachstumsphase Bei zytopathischem Effekt Zellzerstörung oder Immunfluoreszenz-Färbung der Viren Ablesung (wenn Ak- kein Virus- keine IF; wenn keine AK -Virus vermehrt sich, wird sichtbargemacht)
24 Antikörpernachweis-FAVNT Ablesung: WHO legte 1985 fest: 0,5 IU (international Units)/ml ist die mindeste Antikörpermenge für einen Infektionsschutz WHO Standard Serum von Mensch als Referenz gilt für Mensch und Tier (Hund, Katze, )
25 Virusnachweis-ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Nützlich für große epidemiologische Untersuchungen In Kombination mit anderen Untersuchungsmethoden Nicht zugelassen für Impftiterkontrollen Eingesetzt für Impfkontrolle bei der Fuchsimpfung-> ja/nein Aussage Foto: Peter Kalaus
26 Tollwut Impfgebiete Fuchs 2012
27 Fuchs Tollwutuntersuchung Foto: Dr. Z. Bago
28 Fuchs Tollwutuntersuchung Foto: Dr. Z. Bago
29 Tollwut Fuchs-Impfung Köder mit attenuiertem Lebendimpfstoff Köderaufnahme wird überprüft mittels Fluoreszenz von Tetrazyklinen im Knochen Foto: Dr. Z. Bago Foto: Dr. Z. Bago
30 Tollwut Überwachung, Impfung : Bundesländerprogramme (außer Wien und NÖ) Ab 1991: BGBl II Nr. 358/1991; bundeseinheitliche Koordination Seit 1992: Umstellung auf Flugzeugauslage der Impfköder 2003: letzter Tollwutfall in Österreich 2008: Offizielle Erklärung der Tollwutfreiheit
31 Tollwut Überwachung, Impfung Seit 2013: keine ORV (orale Vakzinierung der Füchse) mehr Monitoring von Verdachts- und Indikatortieren: Füchse, Dachse, Marderhunde, Waschbären, tot aufgefunden im Straßenverkehr, tot gefunden oder verhaltensauffällig getötet
32 Tollwut-Untersuchungen Anzahl der FAT-Untersuchungen von Tieren zwischen am IVET MOE Jahr Anzahl der Untersuchungen Tollwutfälle (1 Mensch) Positiv getestete Tiere zwischen 1985 und 2011
33 Tollwut Fuchsimpfung Kosten 1991 bis 2011: 16 Millionen Kofinanzierung: 3 Millionen Kostenaufteilung 2011: Kosten pro Fuchs 2013: 54,26
34 Tollwut Fuchs Impfvirus-Nachweis 2 Füchse (Juni 2004 und August 2006): - Gehirnprobe RT-PCR positiv (IF-positiv) - Aufnahme vom Impfvirus (attenuierte Lebendvakzine) - Virus 99.9% ident zum verwendeten Impfstamm
35 Tollwut Fallbericht Infektion bei einem Mensch (Graz, Sept. 2004) - Infektion nach einem Hundebiss in Marocco - Hautbiopsie und Rachentupfer positiv in RT-PCR - Virus 97% ident zu Viren aus Nordafrika (Agadir)
36 Tollwut Therapie: keine möglich! Prophylaxe: Schutzimpfung! Mensch und Haustier Fuchsimpfungen (Reduktion der Fuchspopulation)
37 Danksagung AGES: Abteilung Pathologie: Dr. Zoltán Bagó, Dr. Elisabeth Vanek, Dr. Hubert Weinberger Abteilung Molekularbiologie: Dr. Sandra Revilla-Fernández, Dr. Adolf Steinrigl, Dr. Maria Fink Abteilung Elektronenmikroskopie und Virologie: Dr. Susanne Richter Labormitarbeitern Geschäftsfeldleiter Tiergesundheit und Institutsleiter IVET MOE Prof. Dr. Friedrich Schmoll BMG: Dr. Ulrich Herzog, CVO Dr. Elisabeth Marsch Dr. Andrea Höflechner-Pölt
38 Danke für die Tollwutfreiheit Foto: Dr. Armin Deutz
39
AVN Nr. 1/Jänner 2014 vom 25. Februar 2014
3. Kundmachung zu Erhebungen über das Vorkommen von Influenza-Viren in Hausgeflügel- und Wildvogelbeständen in Österreich im Jahr 2014 gemäß 3 der Geflügelpestverordnung, BGBl. II Nr. 209/2007 GZ. 74.600/0012-II/B/11/2014
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