"Inhomogen, Zonierung, oligoklonale Muster" Differenzierung der unklaren Immunfixation

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1 "Inhomogen, Zonierung, oligoklonale Muster" Differenzierung der unklaren Immunfixation PD Dr. med. Axel Regeniter Erste Proteinelektrophorese (1937) 2 1

2 Immunofixation. General principles and application to agarose gel electrophoresis. Ritchie RF, Smith R. Clin Chem Apr;22(4):

3 Unklare Immunfixation Unregelmässigkeiten (Inhomogen, oligoklonal) Immunkomplexe Unvollständige Differenzierung 5 3

4 Transient monoclonal gammopathies. Study of 34 cases Giraldo P, Rubio-Felix D, Delgado P, Giralt M. (Article in Spanish) Study 7-year follow up cases with "minimal" MG (< 10 g/l) Transitory: 5.7% of total, 8.6% of nonmyelomatous (34/ 592 ) Small monoclonal component small (mean 4.5 g/l). Pathology usually infectious (31/ 34) Conclusions 1) transitory monoclonal gammopathies are not unusual 2) This alteration does not have any prognostic significance. 3) The appearance of a small monoclonal component, especially in infectious diseases, should not elicit deeper studies. Monoclonal Gammopathies after Transplantation 28% Liver transplants (n=201) 10% Stem cell transplantation (n=550) 25% heart transplant (n=308) 30% kidney allograft (n=182) Monoclonal gammopathy of undetermined significance Robert A. Kyle and S.Vincent Rajkumar British Journal of Haematology, ,

5 Abklärung von Extragradienten Elektrophorese Bande Gamma Bande Nachweis Immunfixation / Immunotyping Immunfixation / Immunotyping IgM, IgA, IgG Bei klinischem Verdacht immer Immunfixation Die spezifische Färbung ist 50 mal empfindlicher! 9 Unklares Ergebnis Immunfixation / Immunotyping Probleme Atypische Lokalisation Monoklonal <-> poly, oligoklonal Freie Leichtketten Erkrankung <-> IgD / IgE Monoklonale Gammopathie <-> Immunkomplex 10 5

6 Anodisches IgG Lambda Monoklonale Gammopathien im Beta Bereich 12 6

7 Beta-Gamma-Verschmelzung («bridging»,»bloc») IgA Erhöhung, z. B. bei alkoholtoxische Leberschaden 14 7

8 15 Polyklonale Zunahme von Ig G mit darunterliegendem IgG Lambda 8

9 Monoklonales Protein oder polyklonale Zunahme? spitzzulaufend rund Basis schmal Monoklonal IT Polyklonale IT Basis breit Komplette Präzipitation mit einem Schwerketten Antiserum und einem Leichtketten Antiserum Komplette Präzipitation mit einem Schwerketten Antiserum und partielle Präzipitation mit den Leichtketten Antiseren Monoklonale Gammopathien: Leichtketten 18 9

10 Serum Ig light chain characterization with the Bence Jones program : IgG + free Free light chain IgG + isolated to further Characterize with an anti IgG lambda + free lambda Gel n 1: Kappa IgG + isolated kappa Gel n 2: free kappa detected using the BJ program. Polymerized free light chain 10

11 Mercaptoethanol ME Fluidil 1 2 Lambda IgD + polymerized free + ME Fluidil 3 11

12 IgE lambda + schwaches IgA lambda CRYOGLOBULINES Proteins, mainly immunoglobulins, that precipitate at cold temperature and are soluble at high temperature. Cryoglobulines are associated with: - Malignant hemopathies - Auto-immune diseases - Viral diseases Clinical and biological manifestations : - Cutaneous damages - Troubles of blood circulation ( cryo precipitation) - Temperature influency - Total protein or Ig concentration variable - Sedimentation rate unstable. 12

13 Nach Isolierung: Type 1 Kryoglobulin IgM kappa 13

14 Sebia HiRes Gel 14

15 Interpretation : SERUM Better detection of faint concentration variations of individual or a group of proteins ( 1, 2 or ) Gamma zone more spread separation of Ig with very close isoelectric points (Pi) Abnormality detected on HR HYDRAGEL to be confirmed by complementaryl tests (specific protein quantification and / or immunofixation) 4er Gel Hi Res Gel IT Basel Abklärung weiteres Vorgehen kappa lambda Quot. IT Detmold IgG kappa IgG kappa IgG kappa IgG kappa IgG kappa IgG kappa? gamma niedrig k/l frei <2.7 < oligo IgG lambda? negativ? oligo IgG inhomogen IgG inhomogen? IgM kappa, kappa frei Folie, k/l frei oligo IgG kappa IgG kappa IgG kappa? oligo IgM lambda IgM lambda IgM lambda IgM lambda kappa frei kappa frei? oligo IgG inhomogen IgG inhomogen IgG kappa? IgGk, IgGl, lambda frei Folie, k/l frei ? IgG lambda? negativ negativ oligo IgG inhomogen negativ negativ oligo negativ negativ negativ poly negativ (Komplex) negativ nicht funktioniert fraglich negativ negativ poly IgG Schwerkette IgG Schwerkette nicht funktioniert fraglich negativ negativ kappa frei k/l frei beta/gamma 2 Banden? IgA kappa (nach Mercapto) IgA kappa 59.8 <2.6 >23 Iga kappa biklonal IgM kappa u. IgG lambda IgM kappa u. IgG lambda IgG lambda; IgM kappa? Folie, k/l frei IgG lambda IgA kappa u. IgG kappa IgA kappa u. IgG kappa IgG lambda? Folie, k/l frei oligo IgG inhomogen IgG inhomogen? oligo IgG lambda IgG lambda IgG Lambda? IgG lambda Folie, k/l frei oligo IgG inhomogen IgG inhomogen IgG kappa? fraglich negativ negativ poly fraglich negativ negativ poly IgG inhomogen IgG inhomogen IgG kappa? IgG lambda, lambda frei Folie, k/l frei oligo fraglich negativ negativ fraglich negativ IgA? oligo fraglich IgG inhomogen? IgM lambda Folie, k/l frei beta/gamma fraglich negativ negativ oligo IMk IMk IMk IMk 15

16 Unklare Immunfixation Vergleich von: Agarose, HiRes Agarose, Immunotyping, FLC 43 unklare Proben Mercapto: hilfreich bei Immunkomplexen Immunotyping: kaum Immunkomplexe Unklare Agarose <-> IT oligo/ polykonales Muster HiRes Folie eindeutig auch bei kleineren Fraktionen Fazit: unklare Immunfixation / -typing -> HiRes Folie 31 Differenzierung der unklaren Immunfixation im UBS Immunfixation Mercaptoethanol High Res Folie IgD / IgE Immunotyping Gesamt

17 mehrere fragliche Zonierungen 33 31/03/2014 IgM biklonal? Immunkomplexe finden sich kaum bei Immunotyping 34 17

18 Befundet als:igg inhomogen, unklar aufgrund von Überlagerung durch Hepatopathie 1:5 verdünnt 35 31/03/2014 Biklonale Gammopathie: IgM Lambda / IgM Kappa 18

19 Biklonale Gammopathie? Mercapthoethanol 37 Inhomogen oder monoklonal Lambda? 38 31/03/

20 Routine Gel: Alles auf gleicher Höhe HiRes Gel: Vorliegen IgG Lambda & IgM Kappa 39 31/03/2014 Abklärung monoklonaler Gammopathien 40 20

21 41 Verlauf 42 21

22 FAZIT Die Serumprotein-Elektrophorese ist eine kostengünstige, automatisierbare Methode zum nicht nur Screening auf monoklonale Gradienten sondern auch zum Nachweis von Dysproteinämien. Die diagnostische Sensitivität hängt von der analytischen Technik und von der Qualität der Befundung ab