HLA-SSP. HISTO TYPE SSP Typisierungskits HLA Klasse I + II. HISTO MATCH Software KIR TYPE EXTRA GENE DNA Extraktionskit CYCLER CHECK. New!

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1 September 2013 HLA-SSP HISTO TYPE SSP Typisierungskits HLA Klasse I + II HISTO MATCH Software KIR TYPE EXTRA GENE DNA Extraktionskit CYCLER CHECK New!

2 HISTO TYPE SSP-Kits für die HLA Typisierung Produkt Größe REF HISTO TYPE A low 23 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle erforderliche Taq 20 Tests µl HISTO TYPE B low 47 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE C low 23 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE DR low 24 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE DQB low 8 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE A/B/C 95 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE A/B/DR 95 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE DR/A/B 95 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE DR/DQB 32 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE DQB high 47 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests 7099CN 164 µl 20 Tests µl 10 Tests µl HISTO TYPE Kits für krankheitsassoziierte HLA Allele Produkt Größe REF erforderliche Taq HISTO TYPE B27 low 1 PCR Mix 48 Tests 96 Tests µl 10 µl HISTO TYPE B57 7 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE Celiac Disease 23 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle HISTO TYPE Narcolepsy 8 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle 20 Tests µl 20 Tests µl 20 Tests µl

3 SSP Testkits für die KIR Typisierung Produkt Größe REF erforderliche Taq KIR TYPE 21 PCR Mixe + Positive / negative Kontrolle EPITOP TYPE 5 PCR Mixe + Kontaminationskontrolle 10 Tests µl 10 Tests µl Zubehör Produkt Größe REF EXTRA GENE I Kit für die Extraktion genomischer DNA (Aussalzumgsmethode) 50 Extraktionen 7059 HISTO TAQ Taq Polymerase für HISTO TYPE Kits DNA-Längenstandard (φx174/hae III; bp) 50 µl ,5 ml 7097 Wischtest Kontaminationskontrolle für HLA-Klasse I+II CYCLER CHECK Kit zur Evaluation der Temperaturuniformität in Thermocyclern HISTO MATCH Software Interpretationssoftware mit SSP Modul 40 Reaktionen 10 Tests 4 Tests

4 Eigenschaften und Vorzüge HISTO TYPE SSP Kits Bequeme und zuverlässige niedrig auflösende Typisierung für HLA-A, B, C, DR und DQ Gleiches Protokoll für alle Genorte Vorgetropfte Primer und gebrauchsfertige Reagenzien Optimale Auflösung mit wenig Ambiguitäten Optimiertes Protokoll für hohe Stringenz und wenig unspezifische Reaktionen Einfache Interpretation der Gele Ergebnisse in weniger als 3 Stunden mit einem einfachen Arbeitsablauf: 1. Mastermix aus PCR Puffer, DNA und Taq erstellen 2. Mastermix auf die vorgetropften Primer verteilen 3. PCR durchführen 4. Gel-Elektrophorese durchführen 5. Gelphoto analysieren HISTO MATCH SSP Auswertesoftware Die benutzerfreundliche und bequeme HISTO MATCH SSP Software ermöglicht die Eingabe der Ergebnisse in virtuelle Gele und eine einfache Auswertung Dateneingabe und Auswertung erfolgen im gleichen übersichtliche Bildschirm. Die Software kann auch zum Datenmanagement verwendet werden. Ergebnisse aus der HISTO TYPE SSP und der HISTO SPOT SSO können in den Ergebnisberichten kombiniert werden.

5 KIR TYPE / EPITOP TYPE Natürliche Killerzellen (NK) und Subpopulationen von T-Lymphozyten (CD8+ memory Phänotyp) exprimieren inhibierende als auch aktivierende killer-cell immunoglobulinlike Rezeptoren (KIRs). Aufgrund von Unterschieden in der Genanzahl sowie eines ausgeprägten Polymorphismus einzelner Gene ist die Genregion der KIR Rezeptoren durch eine hohe Variabilität innerhalb einzelner Individuen gekennzeichnet. Als Liganden für einzelne KIR Rezeptoren konnten mittlerweile definierte HLA-Klasse I Moleküle identifiziert werden. DInsbesondere bei der Knochenmarktransplantation haben umfangreiche Untersuchungen gezeigt, dass eine gewisse KIR/HLA Disparität zu einer Donor versus Empfänger NK Zell-Alloreaktivität führt, welche in einer Reduktion der Graft versus Host Disease (GvHD) sowie in eine Minimierung von Rezidiven resultiert. Ferner können definierte KIR Genotypen mit Autoimmunerkrankungen (z.b. Psoriasis), mit einer verlangsamten Progression einer AIDS Erkrankung in HIVinfizierten Patienten, mit dem Risiko einer Präklampsie sowie mit einer akuten Abstoßung nach allogener Nierentransplantation assoziiert werden. Der KIR-TYPE Kit erlaubt die Genotypisierung von 14 KIR Genen plus 2 Pseudogenen. Dagegen erkennt der Epitop-TYPE Kit die Allele der HLA-Spezifitäten HLA-Cw Asn 80, HLA-Cw Lys 80, HLA-B Bw4 Threo, HLA-B Bw4 Iso und HLA-A Bw4. KIR-TYPE REF Tests EPITOP-TYPE REF Tests Ruggeri L, Capanni M, Mancusi A, Martelli MF, Velardi A. The impact of donar natural killer cell alloreactivity on allogeneic hematopoietic transplantation. Transpllmmunol Aug;14(3-4): Review Martin MP, Nelson G, Lee JH, Pellett F, Gao X, Wade J, Wilson MJ, Trowsdale J, Gladman D, Carrington M. Cutting edge: suseeptibility to psoriatic arthritis: influence of activating killer Ig-like receptor genes in the absence of specific HLA-C alleles. J Immuno! Sep 15;169(6): Martin MP, Nelson G, Lee JH, Pellett F, Gao X, Wade J, Wilson MJ, Trowsdale J, Gladman D, Carrington M. Cutting edge: suseeptibility to psoriatic arthritis: influence of activating killer Ig-like receptor genes in the absence of specific HLA-C alleles. J Immuno! Sep 15;169(6): Hiby SE, Walker JJ, O'shaughnessy KM, Redman CW, Carrington M, Trowsdale J, MoHett A. Combinations of maternal KIR and fetal HLA-C genes influenee the risk of preeelampsia and reproduetive sueeess. J Exp Med Oet 18;200(8):

6 CYCLER CHECK Entsprechend der EFI (P2.1313) und ASHI Richtlinien muss die Genauigkeit und Zuverlässigkeit der spezifierten Temperaturen von Thermocyclern regelmäßig überprüft werden.regelmäßige Überprüfungen von Thermocylern bei den Herstellern sind teuer und führen zu Störungen im Laborablauf, da die Geräte weggeschickt werden müssen. Eine Überprüfung aller einzelnen Gefäße ist sehr arbeitsaufwändig. Der BAG-Cycler Check ermöglicht eine zuverlässige und kostengünstige Überprüfung des gesamten 96er Blocks im Thermocycler. Der BAG Cycler Check besteht aus einem Reaktionsmix, der in allen Positionen eines 96er Thermoblocks getestet wird. Dieser Mix enthält ein Primerpaar zur Überprüfung der Denaturierungstemperatur (540 bp Bande) und ein Primerpaar zur Überprüfung der Annealingtemperatur (1040 bp Bande). Mit diesen beiden Primerpaaren kann getestet werden, ob die Denaturierungstemperatur nach unten oder die Annealingtemperatur nach oben abweicht. Gerade bei GC reichen Sequenzen, die zu Sekundärstrukturen neigen, kann das Nichterreichen der Denaturierungstemperatur (96 C) zu falsch negativen Ergebnissen führen. Bei korrekten Temperaturen und einem einheitlichen Temperaturprofil sollten in allen 96 Positionen zwei Banden erscheinen (Abb. 1). Wenn die Temperaturen vom Soll abweichen, so fallen Banden in einzelnen Positionen oder in allen Positionen aus. Korrektes Temperaturprofil Zu niedrige Denaturierungstemperatur BAG Cycler Check REF 7104 (10 Tests) / REF (4 Tests).

7 Wischtest Entsprechend der EFI (L1.2200) und ASHI Richtlinien müssen insbesondere die Prä- PCR Bereiche eines Labors (DNA ExtraKtion, PCR Ansatz) regelmäßig (etwa alle zwei Monate) auf mögliche Kontaminationen mit Amplifikaten oder genomischer DNA überprüft werden. Es ist ebenfalls empfehlenswert, Arbeitsgeräte und einzelne Reagenzien (z.b.. Taq Polymerase) zu überprüfen, um die Qualität der Ergebnisse sicher zu stellen und Kontaminationen zu vermeiden, die zu falsch positive Reaktionen führen würden. Der Wischtest gewährleistet eine zuverlässige und schnelle Überprüfung auf Kontaminationen mit Amplifikaten der HLA Klasse I + II Gene und mit genomischer DNA. Der Wischtest besteht aus 5 x 8 PCR Streifen, die in allen Positionen denselben vorgetropften Testmix enthalten. Der Testmix enthält eine Mischung von Primern für den Nachweis von Amplifikaten der HLA Klasse I + II Gene, sowie von genomischer DNA. 1:Amplifikat 2: genomische DNA (40 ng/µl) 3: genomische DNA (10 ng/µl) 4: negativer Wischtest I 5: Inhibitionskontrolle zu Wischtest I 6: negativer Wischtest II 7: Inhibitionskontrolle zu Wischtest II Wischtest REF Tests

8 Kontakt zur BAG Auftragsannahme: Telefon +49 (0) 6404 / Fax +49 (0) 6404 / verkauf@bag-healthcare.com Kundendienst: Telefon +49 (0) 6404 / Fax +49 (0) 6404 / service@bag-healthcare.com Addresse: BAG Health Care GmbH Amtsgerichtsstrasse Lich / Germany Telefon +49 (0) Fax +49 (0) Website info@bag-healthcare.com