S-Dis Hotstart Polymerase

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1 Datenblatt Artikel-Nr. BS Artikel-Nr. BS Units 1000 Units (Nur für Forschung und in vitro-anwendungen) Chargen-Nr.: Mindestens haltbar bis: Aussehen: Farbe: 1

2 Beschreibung Die S-Dis-Polymerase ist eine thermostabile Polymerase mit starker Strand Displacement Aktivität. Die S-Dis-Polymerase erzielt hervorragende Ergebnisse in allen Methoden der DNA-Amplifikation (LAMP, PCR, PCDR). Denn anders als die natürlich vorkommenden Enzyme mit einer starken Strand Displacement Aktivität (Bst oder Phi29-Polymerase) die nur bis 68 C aktiv sind, ist diese neuartige Polymerase stabil bis 93 C. Die Aktivität der S-Dis Hotstart Polymerase ist durch einen Antikörper geblockt, erst durch ein Erhitzen über 90 C wird der Antikörper inaktiviert und die Reaktion startet. Zusammensetzung S-Dis Polymerase Reaktionspuffer (10x) Komplett KCl Reaktionspuffer (10x) MgCl 2 -Lösung (100 mm) (Empfohlene MgCl 2 -Endkonzentration 3 4 mm ) 2

3 Lieferumfang 200 Units 1000 Units 5000 Units S-Dis Polymerase Reaktionspuffer* (10x) 1.8 ml 2 x 1.8 ml 5 x 1.8 ml Komplett KCl Reaktionspuffer** (10x) 1.8 ml 2 x 1.8 ml 5 x 1.8 ml MgCl 2 -Lösung*** (100 mm) 1 ml 1 ml 3x 1 ml * S-Dis Polymerase Reaktionspuffer (10x): Zusammensetzung vertraulich ** KCl Reaktionspuffer (10x): Zusammensetzung vertraulich *** empfohlene MgCl 2 -Endkonzentration 3-4 mm 3

4 Anwendungs- & Qualitätskontrolle Die S-Dis-Polymerase eignet sich zur Amplifikation von sehr langen DNA-Fragmenten (bis zu kb) Das Enzym besitzt keine Endonuklease- oder Nickase- Aktivität Zur Qualitätssicherung wird jede Charge an S-Dis- Polymerase folgenden Tests unterzogen: Strand Displacement-PCR mit verschiedensten Templates (genomische DNA vom Menschen und Rind, Phagen Lambda DNA) Test auf Exo- und Endonuklease Kontamination no primer -Test mit Lambda DNA Cycling ohne Primer no template -Test mit Primern komplementär zur konservierten 16S Region der bakteriellen ribosomalen Gene 4

5 Anwendungen LAMP Die Strand Displacement Aktivität der S-Dis-Polymerase ist temperaturabhhängig; mit einem Optimum für LAMP Anwendungen zwischen C. Durch die hohe Thermostabilität des Enzyms kann ein initialer DNA Denaturierungsschritt der LAMP (92 C für 2min) durchgeführt werden, welcher die Reaktion meist deutlich verbessert. Die LAMP kann mit Units S-Dis-Polymerase pro 50µl Reaktionsvolumen durchgeführt werden. PCR Die S-Dis-Polymerase eignet sich sowohl zur Amplifikation kurzer (ab 100 bp) als auch sehr langer (bis zu kb) DNA Fragmenten aller Art. Von einfachen (Plasmiden) bis zu komplexeren Templates (genomische DNA) ist keine spezielle Optimierung nötig. Im Vergleich zu einer herkömmlichen Taq- Polymerase wird in PCR Anwendungen eine verbesserte Produktivität durch den Einsatz der S-Dis-Polymerase erzielt: mehr Erträge, höhere Schnelligkeit, bessere Effizienz. Selbst single copy -Templates werden mit sehr guten Ergebnissen amplifiziert. 5

6 PCDR: (Polymerase Chain Displacement Reaction) Die PCDR bietet eine sehr viel höhere Effizienz und Sensitivität als eine herkömmliche PCR, hier ist die S-Dis-Polymerase das Enzym der Wahl um die PCDR zu optimieren. Denn innerhalb der PCDR vereint das Enzym seine beiden einzigartigen Vorteile: die Strand Displacement Aktivität und die hohe Thermostabilität. Empfohlenes PCR-Protokoll (normale PCR und PCDR) Temperatur: 92 C für den Denaturierungsschritt, 68 C für die Elongation Menge an S-Dis-Polymerase: 1,5-15 Units S-Dis-Polymerase pro 50µl PCR-Ansatz Anwendungsbeispiel (PCR oder PCDR) Ein 50µl Reaktionsansatz beinhaltet: 20 Units an S-Dis- Polymerase, 1x KCl Reaktionspuffer, 3 mm MgCl 2, 0,375 mm dntps (jeweils) 20 pmol Primer (jeweils) und ca. 0,05 ng einer cdna Bibliothek als Template. PCR/ PCDR Protokoll: Vorheizen auf 92 C für 2min. Denaturierung 92 C 30 sek. Elongation 65 C 1min bei 20 Zyklen 6

7 Notiz: Der Thermocycler sollte nach Gebrauchsanweisung des Herstellers programmiert werden. Jedes Programm sollte mit einem initialen Denaturierungsschritt bei 92 C für 2 min gestartet werden. Empfohlene Elongationszeit entspricht sek. pro 1 kb Target DNA. Für eine maximale Ausbeute und Spezifität sollte jede Temperatur (Annealing) und Zeit für jedes neue Template und Primer Paar neu angepasst werden. Technische Daten Enzymaktivitäten: Die S-Dis-Polymerase besitzt eine 5-3 Polymerase sowie eine 5-3 Strand Displacement Aktivität. Das Enzym hat keine Exonukleaseaktivität. Thermostabilität: Die S-Dis-Polymerase ist thermostabil bis zu 93 C. Für den Denaturierungsschritt der LAMP oder PCR-Methoden, wird 92 C empfohlen. Bitte lesen Sie das Standardprogramm dieses Datenblattes unter PCDR. ph Optimum: liegt bei Temperaturoptimum: C Konzentration: 10 Units/μl oder 50 Units/μl Unitdefinition: Ein Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dntp in 30 min bei 74ºC in eine säureunlösliche Form umzuwandeln. Versand: bei Raumtemperatur Lagerung: bei -20 Celsius Sicherheitshinweis: Dieses Produkt sollte nur von Personen verwendet werden, die Routine in Laboranwendungen haben. Es sollte laborübliche Schutzkleidung wie Kittel, Handschuhe und Schutzbrillen getragen werden. Bei Kontakt mit Haut und Augen sollten die betroffenen Stellen umgehend mit Wasser gewaschen bzw. ausgespült werden. 7

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