Aus dem Fachbereich Medizin der Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main
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- Katrin Schmitt
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1 Aus dem Fachbereich Medizin der Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Blutspendedienst des Deutschen Roten Kreuzes Institut für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie Direktor: Professor Dr. med. Dr. h.c. Erhard Seifried Untersuchungen zum Einfluss von NOD2/CARD15 Varianten auf den klinischen Verlauf nach allogener Blutstammzelltransplantation Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Medizin des Fachbereiches Medizin der Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main vorgelegt von Elena Widmann aus Stuttgart Frankfurt am Main,
2 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung Stammzelltransplantation Stammzellquellen Autologe Stammzelltransplantation Allogene Stammzelltransplantation Syngene Stammzelltransplantation Kriterien zur Auswahl des Spenders HLA-Typisierung Haploidentische Stammzelltransplantation Minorhistokompatibilitätsantigene (mhag) Killer-cell immunoglobulin-like receptors (KIR) Konditionierung des Patienten Myeloabiative Konditionierung Non-myeloablative Konditionierung Komplikationen der Stammzelltransplantation Therapieassoziierte Komplikationen Graft-versus-Host Erkrankung (GvHD) Graft-versus-Leukemia Effekt Akute GvHD (agvhd) Pathophysiologie der agvhd Chronische GvHD (cgvhd) Präventionsmaßnamen zur Verhinderung einer GvHD Risikofaktoren für die Entwicklung einer GvHD NOD2/CARD Aufbau und Funktion von NOD2/CARD NOD2/CARD15 Signalwege und Interaktionspartner Single Nucleotide Polymorphismen innerhalb NOD2/CARD Auswirkung der NOD2/CARD15 Polymorphismen NOD2/CARD15 Polymorphismen in der allogenen Stammzelltransplantation Zielsetzung der Arbeit und Methodisches Vorgehen 28 2 Materialien, Methoden und Patientenkollektiv Materialien Geräte Verbrauchmaterialien Nukleinsäuren, Oligonukleotide, Enzyme 31
3 2.1.4 Chemikalien & Reagenzien Puffer und Lösungen Software Methoden Isolierung genomischer DNA aus Leukozyten Photometrische Konzentrationsbestimmung von Nukleinsäuren Sequenzierung zur Typisierung der NOD2/CARD15 Polymorphismen Amplifikations-PCR Gelelektrophorese Sequenzierungs-PCR Aufreinigung der Proben Auswertung der Sequenzierung Real-Time PCR zur Typisierung der NOD2/CARD15 Polymorphismen Sonden- und Primerdesign für die Real-Time PCR Reaktionsansatz und PCR Programm Auswertung der Real-Time PCR Patientenkollektiv Ein- und Ausschlusskriterien Definition der Endpunkte Statistische Analyse 49 3 Ergebnisse Etablierung einer NOD2/CARD15 Sequenzierungsmethode NOD2/CARD15 Primersequenzen für Sequenzierung Darstellung der Sequenzen und der Sequenzierprimer SNP8 von NOD2/CARD SNP12 von NOD2/CARD SNP13 von NOD2/CARD Optimierung der Sequenzierungsergebnisse Real-Time PCR basierte Untersuchung der NOD2/CARD15 Polymorphismen Vergleich Real-Time PCR mit Sequenzierungsergebnissen Vergleich Real-Time PCR mit Sequenzierungsergebnissen bei gesunden Probanden (Hauspanel) Vergleich Real-Time PCR mit Sequenzierungsergebnissen in dem Patienten- und Spenderkollektiv Auswertung der Real-Time PCR Ergebnisse des Patienten- und Spenderkollektivs 59
4 Genotypfrequenz der NOD2/CARD15 Polymorphismen Allelfrequenz der NOD2/CARD15 Polymorphismen Genotyp-Kombinationen der Spender- und Patientenpaare Klinische Studienauswertung Outcome im Gesamtkollektiv in Abhängigkeit von NOD2/CARD15 Varianten Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Gesamtüberleben (OAS) Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Überleben in Abhängigkeit der Transplantatherkunft (FRD oder MUD) Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Oberleben in Abhängigkeit der Grunderkrankung Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten einer Transplantations-assoziierten Mortalität (TRM) Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten einer TRM in Abhängigkeit der Transplantatherkunft (FRD oder MUD) Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten einer TRM in Abhängigkeit der Grunderkrankung Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf die Entwicklung einer agvhd Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf den Schweregrad einer agvhd Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten pulmonaler Komplikationen Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten eines Rezidivs Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten eines Rezidivs in Abhängigkeit der Transplantatherkunft (FRD oder MUD) Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das Auftreten eines Rezidivs in Abhängigkeit der Grunderkrankung 84 Diskussion Methodenvergleich Real-Time PCR und Sequenzierung Variabilität der NOD2/CARD15 Polymorphismen in Bevölkerungsgruppen Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf den klinischen Verlauf nach allogener Stammzelltransplantation Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf das mediane Überleben und die TRM 88
5 4.3.2 Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf die Entwicklung eines Rezidivs Einfluss der NOD2/CARD15 Polymorphismen auf die Entwicklung einer agvhd Einfluss von NOD2/CARD15 Polymorphismen auf die Entwicklung pulmonaler und infektiöser Komplikationen Kofaktoren, die einen Einfluss auf die klinische Manifestation der NOD2/CARD 15 Polymorphismen haben Polymorphismenhäufigkett Grunderitrankung Konditionierung Darmdekontamination Ausmaß und Methode der T-Zell Depletion Donortyp Pathophysiologische Überlegungen, wie NOD2/CARD15 Polymorphismen das Outcome von allogenen Stammzelltransplantationen beeinflussen Bedeutung für die Transpiantationsmedizin Zusammenfassung Abstract Literaturverzeichnis Anhang Tabellenverzeichnis Abbildungsverzeichnis Abkürzungsverzeichnis Danksagung Ehrenwörtliche Erklärung Curriculum Vitae 136
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