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- Reinhardt Klein
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1 Sächsische Landesbibliothek - Staats- und Universitätsbibliothek Dresden (SLUB) Zweigbibliothek Medizin Diese Dissertation finden Sie original in Printform zur Ausleihe in der Zweigbibliothek Medizin Nähere Angaben zu Standort, Öffnungszeiten usw. finden Sie auf der Homepage der SLUB. Auf den folgenden Seiten finden Sie Titelblatt und Inhaltsverzeichnis der Dissertation.
2 Assoziation des humanen Urattransporters huratl mit reduzierter renaler Harnsäureexkretion als Ursache der primären Hyperarikämie Dissertationsschrift zur Erlangung eines doctor medicinae (Dr. med.) der Medizinischen Fakultät Carl Gustav Carus der Technischen Universität Dresden vorgelegt von Susette Unger aus Chemnitz Dresden 2005
3 Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung und Zielstellung, 2 Theoretische Grundlagen Definition der Hyperurikämie und der Gicht Epidemiologie der Hyperurikämie und der Gicht Klinische Manifestationen der Hyperurikämie Asymptomatische Hyperurikämie Akute Gichtarthritis Interkritische Gicht Chronische Gicht Renale Manifestationen der Hyperurikämie Ätiologie und Pathogenese der Hyperurikämie Pathogenese der primären Hyperurikämie Pathogenese sekundärer Hyperurikämien Genetik der Hyperurikämie Harnsäureentstehung und -exkretion Harnsäureentstehung Harnsäureexkretion Renale Harnsäureexkretion Harnsäuretransportproteine und das Modell des tubulären Harnsäuretransports Der Urat-Kanal/Transporter UAT Organische Anion-Transporter Das Multidrug Resistance Associated Protein MRP4 (ABCC4) Der Organische Anion-Transporter 0AT Der Organische Anion-Transporter 0AT Der Urat/Anion-Transporter URAT Molekularbiologische Charakterisierung des URAT Funktionelle Charakterisierung des URAT Regulation des URAT Assoziation des URAT1 mit der Genese der Hypo- und Hyperurikämie 20 3 Material und Methoden Material Reagenzien und Lösungen 22
4 DNA-Präparation Polymerase-Kettenreaktion Reinigung der PCR-Produkte DNA-Sequenzierung DNA-Restriktion Agarosegelelektrophorese Polyacrylainidgelelektrophorese Geräte Verbrauchsmaterialien Software und Datenbanken Methoden Definition und Rekrutierung der Patienten- und der Kontrollgruppe DNA-Präparation DNA-Extraktion aus Vollblut Konzentrationsbestimmung und Verdünnung der DNA-Lösungen DNA-Amplifikation und Sequenzanalyse DNA-Amplifikation durch Polymerase-Kettenreaktion Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion Primerkonzeption und Optimierung der Reaktionsparameter Agarosegelelektrophorese Reinigung der PCR-Produkte DNA-Sequenzierung mit fluoreszenzmarkierten Primern Prinzip der DNA-Sequenzierung Primerkonzeption und Optimierung der Reaktionsparameter Polyacrylamidgelelektrophorese Detektionsverfahren und Sequenzdatenanalyse DNA-Amplifikation und Restriktionsfragmentanalyse DNA-Amplifikation durch Polymerase-Kettenreaktion Primerkonzeption und Optimierung der Reaktionsparameter Restriktion der PCR-Produkte Prinzip der Restriktionsfragmentanalyse Auswahl der Restriktionsendonucleasen und Optimierung der Reaktionsparameter Agarosegelelektrophorese Polyacrylamidgelelektrophorese Analyse der Restriktionsfragmentlängenpolymorphisrnen 47
5 3.2.5 Genetisch-statistische Auswertung Genotyp- und Allelfrequenzen der Polymorphismen Mathematische Konstruktion von Haplotypen Assoziation der Geno- und Haplotypen der Polymorphismen mit klinisch-chemischen Parametern Prädiktion der Sekundärstruktur und der Regulationsdomänen des Urat/Anion- AustauschersURATl 52 4 Ergebnisse Charakterisierung der Studienpopulation Detektion von Polymorphismen im URATl-Gen mittels DNA-Sequenzdaten- und Restriktionsfragmentanalyse Genotyp- und Allelfrequenzen der Polymorphismen des URATl-Gens Genotyp- und Allelfrequenzen des Polymorphismus P-788 T>A im Promotor; rsl Genotyp- und Allelfrequenzen des Polymorphismus T258C im Exon 1; rs Genotyp- und Allelfrequenzen des Polymorphismus C426T im Exon 2; rsl Genotyp- und Allelfrequenzen des Polymorphismus T1309C im Exon 8; rs Genotyp- und Allelfrequenzen des Polymorphismus IVS9+18 C>T im Intron 9; rsl Assoziation der Genotypen des URATl-Gens mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation des Polymorphismus P-788 T>A mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation des Polymorphismus T258C mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation des Polymorphismus C426T mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation des Polymorphismus T1309C mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation des Polymorphismus IVS9+18 C>T mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation der genetischen Varianten C274T, delcct und IVS9-11 T>A mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Mathematische Konstruktion von Haplotypen und Identifizierung von Risikohaplotypen Mathematische Konstruktion der Haplotypen T258C/C426T Frequenzen der Haplotypen T258C/C426T 67
6 Haplotypkombination T258C/C426T und -Verteilung in der Studienpopulation Assoziation der Haplotypkombinationen T258C/C426T mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Mathematische Konstruktion der Haplotypen P-788 T>A/T258C/C426T/T13O9C/ IVS9+18C>T Frequenzen der Haplotypen P-788 T>A/T258C/C426T/T1309C/ IVS9+18OT Haplotypkombination P-788 T>A/T258C/C426T/T1309C/IVS9+18 C>T und -Verteilung in der Studienpopulation Assoziation der Haplotypkombination P-788 T>A/T258C/C426T/T1309C/ IVS9+18 C>T mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Assoziation der Haplotypkombinationen 1 1, I 2, 1 3 mit klinisch-chemischen Parametern der Harnsäureexkretion Prädiktion der Sekundärstruktur und der Regulationsdomänen des Urat/Anion- Austauschers URAT1 und Zusammenfassung der Ergebnisse 75 5 Diskussion Methodenkritik Diskussion der Ergebnisse 81 6 Zusammenfassung Abkürzungsverzeichnis Literaturverzeichnis 107 Erklärung Danksagung Veröffentlichungen Thesen
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