Nachweis bakterieller Kontaminationen in Thrombozytenkonzentraten
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- Helene Adler
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Transkript
1 Nachweis bakterieller Kontaminationen in Thrombozytenkonzentraten mit der BactiFlow- Durchflusszytometrie: Ergebnisse einer multizentrischen Studie und eines Ringversuches KOLT, Langen, Mai 2011 Tanja Vollmer
2 Verlängerung der Haltbarkeit Genehmigung der Änderungsanzeige beim Paul-Ehrlich Institut ab 08/2009 Bakterien-Screening in TKs mittels BactiFlow Durchflusszytometrie PRINZIP: nicht-fluoreszentes Substrat wird der Probe zugesetzt bei lebenden Zellen mit Enzymaktivität und Membranintegrität passiert das Färbesubstrat passiv die Zellen und wird im Zellinnern durch zytoplastische Enzyme (Esterase) gespalten. fluoreszierendes Material bleibt in der Zelle und wird durchflusszytometrisch quantifiziert BactiFlow-Technologie (AES-Chemunex)
3 MULTIZENTRISCHE STUDIE Verlängerung der TK-Haltbarkeit seit 08/2009
4 Studienprotokoll: Multizentrische Studie Tag 2 + Tag 4 Bad Oeynhausen Vollmer et al Transfusion Medicine Auswertung: Multizentrische Studie Gesamtzahl getestete Produkte: 2939
5 Kultur-positive TK (Testung Tag 2) Sekundärkontamination Titer unterhalb der Nachweisgrenze bestätigt positiv, Titer unterhalb der Nachweisgrenze Kultur-positive TK (Testung Tag 4/6) bestätigt positiv, Titer unterhalb der Nachweisgrenze Sekundärkontamination Titer unterhalb der Nachweisgrenze
6 Transfusion kultur-positiver TK (n = 7) es wurden keine transfusionsassoziierten Reaktionen gemeldet Nachverfolgung des Patienten ergab keinen Hinweis auf ein inflammatorisches Geschehen kein transfusionsmedizinisch relevanter Bakterientiter im Produkt (<10E+04 CFU/mL) Wachstumsversuch TK-Isolate Inokulation von 0,2 CFU/mL Fazit: Konzentration der Isolate zum Zeitpunkt der BactiFlow-Testung wahrscheinlich unterhalb der Nachweisgrenze von 150 CFU/mL
7 Bilanz 2010: Verlängerung der TK-Haltbarkeit durch BactiFlow Testung im Uni.Blutspendedienst OWL Gesamtanzahl hergestellte Produkte: n = 5702 Gesamtanzahl getestete Produkte mit Verlängerung der Haltbarkeit: n = 474 Transfusion Tag 4: n = 281 Transfusion Tag 5: n = 79 Qualitätskontrolle: n = 114 Fazit 1. die BactiFlow-Durchflusszytometrie ist eine robuste, sensitive Methode zum Nachweis bakterieller Kontaminationen in TKs 2. keine Übertragung transfusionsmedizinisch-relevanter Bakterientiter 3. durch Verlängerung der TK-Haltbarkeit auf 5 Tage kein Verfall im Jahr 2010
8 RINGVERSUCH
9 Ziel des Ringversuches: Ringversuch Methodenvergleich Schnellmethoden (BactiFlow, Pan Genera Detection System, RT-PCR) J Clin Microbiol, 2010, Ringversuch Konzept: Detektionsvergleich unterschiedlicher Stämme (gram-negativ, gram-positiv) in unterschiedlichen Konzentrationen (4,5*10E+03 bis 4,5*10E+08 CFU/mL) Herstellung von aliquotierten Probensets (randomisiert für die verschiedenen Methoden) Sicherstellung der Bakterienkonzentration (Temperaturkontrolle, zeitlich begrenzte Transportzeit)
10 Ringversuch 3 Blutspendezentren Methodenverteilung: Platelet PGD Test (VeraxBiomedical Fenwal) TK: negativ TK: positiv Gram-positive TK: positiv Gram-negative untere Nachweisgrenze nach Herstellerangabe: 8,2 x 10 3 bis 8,6 x10 5 CFU/ml
11 Fazit 1. Keine falsch positiven Ergebnisse mit allen Methoden
12 Fazit 1. Keine falsch positiven Ergebnisse mit allen Methoden 2. BactiFlow, PCR und Kultur detektieren alle positiven Proben korrekt (12/12)
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14 Fazit 1. Keine falsch positiven Ergebnisse mit allen Methoden 2. BactiFlow, PCR und Kultur detektieren alle positiven Proben (>10E+03) korrekt (12/12) 3. PGD erfasst einige Stämme gram-negativer Bakterien erst in hohen Konzentrationen, insgesamt wurden nur 4/12 positiven Proben richtig detektiert
15 Vielen Dank K. Tapernon W. Sibrowski V. Schottstedt J. Bux J. Dreier J. Diekmann K. Kleesiek C. Knabbe und allen weiteren Beteiligten Tanja Vollmer Georgstraße Bad Oeynhausen Tel.: +49 (0) / Fax: +49 (0) / tvollmer@hdz-nrw.de
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