Bakterienscreening von Thrombozytenkonzentraten im DRK BSD West. Wie kommen die Bakterien in das Präparat?
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- Jobst Raske
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1 Bakterienscreening von Thrombozytenkonzentraten im DRK BSD West Schottstedt, V., Zentrallabor Hagen, DRK BSD West Wie kommen die Bakterien in das Präparat? aus Hof, Dörries (2005) Symptomlose Bakteriämien Defekte des Beutelsets 1
2 Bakterienscreening notwendig? Hautdesinfektion standardisiert 2000, Leukozytendepletion 2001 und predonation sampling 2002 Verkürzung der Haltbarkeit um 1 Tag 2008 Nach TK-Gabe 9 Todesfälle Risiko ca. 1 : Hämovigilanzbericht PEI 2010 Goldstandard: Kulturmethode Wir brauchen Schnellmethoden ebds (Sauerstoffverbrauchsmessung) Prüfung zum Zeitpunkt des Verkaufs Keine Anaerobier PCR (Nachweis bakterienspezischer RNA) technisch sehr anspruchsvoll, höherer Zeitbedarf BacDetect (DNA-Fluoreszenzfarbstoff) schnell, jedoch nicht automatisierbar in Entwicklung BacTX (Peptidoglycannachweis = Membranbestandteil) schnell, (noch) nicht automatisierbar, FDA zugelassen (Apherese) PGD-Test (immunchromatografischer Test) einfach, schnell zu unempfindlich 2
3 Fruchtkonzentrate & Getränke Molkereiprodukte Kosmetik Keimzahlbestimmungen Wasser 3
4 Quantitative Microbial Counting Flow Cell : Linear fluid stream Labelled Sample Cells Separated into single entities Sensitive detectors Laser Detector 1 Detector 2 Sample Thrombozytenlysebei gleichzeitigem Schutz vor Proteindenaturation PBS und Tensid zur Solubilisierung Zelldebrisentfernung Überstand verwerfen + 1 ml PBS BactiFlow ALS Zeitbedarf für 24 Proben: 2,5 Std. 3 ml ChemChromeV23 in Puffer(Bakterienfärbelösung) Durchmischung Inkubation 12 min. 30 C 140 µl CS26A (Beads + Backgroundfloureszensreduktion) 90 µl CSR6 in Lösungsmittel (Reduktion von freiem Flourescin) Durchmischung Inkubation 3 min. 30 C Messung von (max.) 100 µl Ergebnis 4
5 Interne Qualitätssicherung Positive Kontrolle in jedem run Interne Zählkontrolle (Beads) in jeder Probe Tägliche Kalibration negativ Auswertung Valid.-beads positiv Thrombozyten(debris) Bakterien Sensitivität Bakteriotoxische Todesfälle mit TKs häufig gegen Ende der Laufzeit Bakterienscreening = Sterilitätstestung Soll: Mindestsensitivität cfu/ml IST: 300 cfu/ml Dreier et al. Clinical Chemistry 55:8 (2009) 5
6 Durchführung Ca. 10 ml TK ab Uhr des 3. Tages der Laufzeit in Beutel aseptisch überführen, deklarieren in das Zentrallabor transportieren TKs mit elektronischem Quarantänekennzeichen Untersuchung mit BactiFlow-System im Zentrallabor negativ EDV TK zur Ausgabe frei 1 x Wdhlg. 1 x neg. > 1 x pos. Screening initial reaktiv EDV TK gesperrt Screening nicht bestätigt Screening bestätigt reaktiv TK-Untersuchg. im BacTAlert BacTAlert negativ Verkauf Verfall BacTAlert positiv* Keimanzucht/diff. erfolgreich = BacTAlert bestätigt pos. Keimanzucht neg. = BacTAlert nicht bestätigt pos. * Wdhlg. zur Bestätigung Datentransfer Untersuchungen abgeschlossen LIS pos. kein Befund neg. TK gesperrt TK optional mit ursprüngl. Laufzeit verwendbar TK frei Ergebnisübermittlung an Zentren bis spätestens 6.00 Uhr 6
7 Weihnachten 2012 Ergebnisse ( ) Entnahme Probenahme Verfall Verfall Tag 1 Tag 2 Tag 3 Tag 4 Tag 5 (seit ) untersucht: Thrombozytenkonzentrate davon: Thrombozytapheresen (23,7 %) gepoolte Thrombozytenkonzentrate (76,3 %) Positiv (bestätigt aus Originalpräparat im BacTAlert inkl. Keimdifferenzierung) 1 gepooltes Thrombozytenkonz. (Staphylococcus epidermidis) 1 gepooltes Thrombozytenkonz. (Streptococcus dysgalactiae) 2 gepoolte Thrombozytenkonz. (Bacillus cereus) 1 Thrombozytapherese (Staphylococus aureus) 1 (Doppel)thrombozytapherese (Staphylococcus epidermidis)* * Zwillingspräparat am Tag 3 ohne Transfusionsreaktion transfundiert Falsch reaktiv (BactiFlow reaktiv/originalpräparat im BacTAlert neg.): 122 Thrombozytenkonzentrate (0,62%) davon: 28 Thrombozytapheresen (0,60 %) 94 gepoolte Thrombozytenkonzentrate (0,62%) 7
8 100 27,1 %% 62,7 % (noch) am Ende Tag 4 Anzahl zu prüfender Thrombozytenkonzentrate bei täglicher Testung % (72.814) 80% (58.113) ab Tag 1: % ( ) ab Tag 2: % ( ) ab Tag 3: + 38 % ( ) 50% (36.409) 27% (19.757) 10% (7.542) 0 hergestellt Tag 1 Tag 2 Tag 3 Tag 4 8
9 Zusammenfassung Bakterienscreening Senkt Risiko von TBI verändert nicht Produktqualität erleichtert Versorgung Testung ab Ende 3. Tag möglich BactiFlow ALS ausreichend sensitiv schnell/teilautomatisiert robust einfach klare Ergebnisse Danksagung Zentrum Bad Kreuznach Gisela Dietz Monika Kalus Maria Schnöckel Zentrum Münster Brigitte Unnerstall Dr. Gabriele Walther-Wenke Zentrallabor Hagen Malgorzata Krzos Jana Martens Margarethe Rogowski Institut für Laboratoriums- und Transfusionsmedizin - Herz- und Diabetes- Zentrum NRW, Bad Oeynhausen Jens Dreier Tanja Vollmer 9
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