5. Geräte, Chemikalien und Material 45
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1 5. Geräte, Chemikalien und Material Geräte, Chemikalien und Material 5.1. Geräte ELISA-Reader (Spectra) MALDI-TOF-Massenspektrometer Biflex, Fa. Bruker (Bremen/ Deutschland) TRI-CARB Flüssigkeitsszintillationszähler 1900 CA, Fa. Canberra-Packard (Frankfurt a.m./ Deutschland) Millipore-Filteranlage, Fa. Millipore (Bredford/ USA) Gradientenmischer, Fa. Kontron Heizblock Pistill-Homogenisator Ultraschallbad Sonorex TK52, Fa. Bandelin (Berlin/ Deutschland) Pyrex-Filtrationsgerät, Fa. Millipore (Eschborn/ Deutschland) Zentrifugen: Univapo-Evaporationszentrifuge 150 H, Fa. Uni Equip Kühlzentrifuge Centricon H-401, Fa. Kontron Ultrazentrifuge Centricon T-2070, Fa. Kontron Biofuge A Heraeus Sepatech, Fa. Heraeus Instruments GmbH (Hanau/ Deutschland) Medifuge Heraeus, Fa. Heraeus Instruments GmbH (Hanau/ Deutschland) Spektophotometer: Spektrophotometer Ultrospec 3000, Fa. Pharmacia Biotech (Cambridge/ England) Halbmikroquarzküvette, Fa. Carl Zeiss (Jena/ Deutschland) Inkubatoren: Thermomixer comfort (Eppendorf) Wärmeschrank Kelvitron, Fa. Heraeus Instruments GmbH (Hanau/ Deutschland)
2 5. Geräte, Chemikalien und Material 46 HPLC-Anlagen: Anlage I Säulen: APS-2 Hypersil, 4 x 250 mm, Korngröße 3 µm, Fa. Bischoff (Leonberg/ Deutschland) ODS-Hypersil, 4 x 250 mm, Korngröße 5 µm, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) HR 5/ 5 MonoQ,10 x 0,5 cm, Fa. Pharmacia Biotech (Cambridge/ England) HPLC-Pumpen, Fa. Bischoff (Leonberg/ Deutschland) Mischkammer, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Injektionsventil, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Injektionsspritze TP , 100 µl, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Zweikanalschreiber, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Detektor RF-551, Fa. Shimadzu (Duisburg/ Deutschland) Steuerung der Anlage: Chromatography Workstation Modell 700, Fa. Bio-Rad Anlage II Säule: Parti Sphere SAX, 125 x 4,6 mm, Korngröße 5 µm, Fa. Whatman (New Jersey/ USA) HPLC Pumpen, Fa. Bischoff (Leonberg/ Deutschland) Mischkammer, Fa. Kontron 3-Wege-Injektionsventil, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Injektionsspritze TP ,100 µl, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) High-Temperature-Oven, Fa. Knauer (Berlin/ Deutschland) Detektor: Uvicon 720 LC-Spectrophotometer, Fa. Kontron Fraktionssammler: Fraction-Collector Frac-100, Fa. Pharmacia (Freiburg/ Deutschland) Zweikanalschreiber, Fa. Bio-Rad Pumpensteuerung: Instrumental-Interface, Fa. Bio-Rad Software: Value Chrom 4,0, Fa. Bio-Rad
3 5. Geräte, Chemikalien und Material Chemikalien Gebräuchliche Laborchemikalien wurden von den Firmen Merck (Darmstadt/ Deutschland), Roth (Karlsruhe/ Deutschland), Serva (Heidelberg/ Deutschland) und Sigma bezogen. Alle verwendeten Chemikalien sind von p.a. Qualität Enzyme und Substrate Von der Fa. Boehringer Mannheim (Mannheim/ Deutschland) wurden bezogen: Uridin-5 -diphospho-glucose-dehydrogenase (UDPG-DH), aus Rinderleber Uridin-5 -diphospho-glucose-pyrophosphorylase (UDPG-Pyrophosphorylase), aus Rinderleber Nucleosid-monophosphate-Kinase (NMPK), aus Rinderleber Peptide-N4-(N-acetyl-ß-glucosaminyl-)asparagin-amidase F aus Flavobacterium meningo-septicum (PNGase F), rekombinant Neuraminidase (Sialidase) aus Arthrobacter ureafaciens Trypsin aus Rinderpankreas, TPCK-behandelt Nicotinsäureamid-adenin-dinucleotid Glucose-1 -phosphat Adenosin-5 -triphosphat Von der Fa. Sigma (Deisenhofen/ Deutschland) wurden bezogen: Nucleosid-5 -diphosphat-kinase (NDPK), aus Bäckerhefe Uridin-5 -diphospho-galactose-4 -Epimerase (UDP-galactose 4 -epimerase), aus Galaktose-adaptierter Hefe
4 5. Geräte, Chemikalien und Material Lösungsmittel Acetonitril, HPLC Grade S, Fa. Rathburn (Walkerburn/ Scotland) Methanol p.a., Fa. Roth (Karlsruhe/ Deutschland) Chloroform p.a., Fa. Roth (Karlsruhe/ Deutschland) Ethanol p.a., Fa. Roth (Karlsruhe/ Deutschland) Aqua bidest Radioaktivität Guanosin-5 -diphospho-l-[1-14 C]-fucose, Fa. Amersham Pharmacia Biotech (Freiburg/ Deutschland) Standardsubstanzen Die Standardsubstanzen wurden von der Firma Sigma bezogen. Uridin-5 -diphospho-glucose Cytidin-5 -triphosphat Uridin-5 -diphospho-galactose Cytidin-5 -diphosphat Uridin-5 -diphospho-glucuronic acid Guanosin-5 -diphospho-mannose Uridin-5 -diphospho-xylose Guanosin-5 -triphosphat Uridin-5 -diphospho-n-acetylglucosamin Guanosin-5 -diphosphat Uridin-5 -diphospho-n-acetylgalactosamin Adenosin-5 -triphosphat Uridin-5 -monophosphat Adenosin-5 -diphosphat Uridin-5 -diphosphat Uridin-5 -triphosphat 5.3. Material Austauscherharze Kationenaustauscher: AG 50W-X12, Hydrogen-form, mesh, Fa. Bio-Rad Anionenaustauscher: AG 3-XA4, Hydroxid-form, mesh, Fa. Bio-Rad
5 5. Geräte, Chemikalien und Material Weitere Materialien Centricon -concentrators 10, Fa. Millipore (Eschborn/ Deutschland) PolyPrep-Chromatography-Columns, 4 x 0,8 cm, Fa. Bio-Rad (München/Deutschland) Szintillatorflüssigkeit: Ultima Gold XR, Fa. Canberra-Packard (Frankfurt a.m./ Deutschland) Signal -2-AB-Labelling-Kit K-404, Fa. Oxford Glyco Sciences (Oxford/ Großbritannien) BCA Protein Assay, Fa. Pierce (Rockford/ USA) Futtermittel Altromin 1321, Fa. Altromin GmbH (Lage/ Deutschland) Vitamin B6-Mangelfutter (< 0,6 mg Pyridoxin/kg), Fa. Roche (Schweiz)
3,58 g 0,136 g. ad 100 ml
9 Anhang 9.1 Rezepturen der Puffer und Lösungen 9.1.1 Vorbereitung der Proben zur Extraktion Coon s-puffer (0,1 M, ph 7,2-7,6) Na 2 HPO 4 x 12 H 2 O KH 2 PO 4 Aqua dest. 3,58 g 0,136 g 8,77 g 9.1.2 Aufbereitung
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