Material 77. Spezielle Chemikalien wurden von den unten aufgelisteten Firmen bezogen:
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- Chantal Blau
- vor 6 Jahren
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1 Material 77 5 Material 5.1 Chemikalien Salze und Puffersubstanzen wurden in analytischer Qualität von den Firmen Invitrogen (Karlruhe, D), Merck (Darmstadt, D), Roth (Karlsruhe, D) und Sigma (München, D) bezogen. Lösungen und Lösemittel wurden bei den Firmen J.T. Baker (Deventer, NL), Merck (Darmstadt, D), Roth (Karlsruhe, D) und Sigma (München, D) gekauft. Gase stammen von der Firma Linde (Berlin, D). Enzyme für die Molekularbiologie wurden von der Firma Invitrogen (Karlsruhe, D) gekauft. Spezielle Chemikalien wurden von den unten aufgelisteten Firmen bezogen: N-octanoylsphingosin (C 8 -Ceramid) Biotrend (Köln, D) N-octanoylsphinganin (C 8 -Dihydroceramid) Biotrend (Köln, D) Agarose Roth (Karlsruhe, D) Dioleoyl-Phosphatidylcholin Sigma (München, D) DNA-Marker (ΦX174 / Hae III Fragmente) Invitrogen (Karlsruhe, D) High DNA Mass TM Ladder Invitrogen (Karlsruhe, D) N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N'-(3-propanesulfonic Sigma (München, D) acid) (EPPS) Ethidiumbromid Biomol (Hamburg, D) Leupeptin Sigma (München, D) Pepstatin Sigma (München, D) Phenylmethylsulfonflourid (PMSF) Sigma (München, D) Super Signal Chemilumineszenz Reagenz Perbio (Weiskirchen, D) Sulfatide Sigma (München, D) UDP-[ 14 C]-Glukose (U) Biotrend (Köln, D)
2 Material Verbrauchsmaterialien Verbrauchsmaterialien wurden von den folgenden Firmen bezogen: Hochauflösende Dünnschichtchromatographie-Platten Merck (Darmstadt, D) Nitrozellulosemembran für Proteine Schleicher & Schüll (Dassel, D) Nitrozellulosemembran für RNA (GeneScreen Plus) Perkin Elmer Life Sciences (Zaventem, B) Turbo Blotter GB Set Schleicher & Schuell (Dassel, D) Wissenschaftlicher Film X-OMAT AR Kodak (Stuttgart, D) Röntgenfilm T-MAT Plus DL Kodak (Stuttgart, D) Szintillationscocktail (OptiPhase Supermix) PerkinElmer Wallac Szintillations-Röhrchen Perkin Elmer Wallac Whatman 3MM Filterpapier Schleicher & Schuell (Dassel, D)
3 Material Zellkulturmaterialien Die für die Kultivierung der Zellen benötigten Materialien wurden von folgenden Firmen gekauft: 6-Loch- / 24-Loch- / 96-Lochplatten Sigma (München, D) Basic fibroblast growth factor (bfgf) Roche Diagnostics (Mannheim, D) Choleratoxin Calbiochem (,D) Dulbecco s Modification of Eagles Medium Invitrogen (Karlsruhe, D) (DMEM) Fötales Rinderserum (FCS) Biochrom Seromed (Berlin, D) Geniticinsulfat (G418) Invitrogen (Karlsruhe, D) Hydrocortison Sigma (München, D) Hygromycin B Invitrogen (Karlsruhe, D) Insulin Sigma (München, D) Kochsalzlösung (0,9 % w/v) Boehringer Ingelheim (,D) MCDB 153 Biochrom Seromed (Berlin, D) Penicillin / Streptomycin Biochrom Seromed (Berlin, D) Serologische Pipetten Corning (Wiesbaden, D) Rinderhypophysenextrakt (BPE) Invitrogen (Karlsruhe, D) Spritzenvorsatzfilter (0,2 µm) B. Braun (Melsungen, D) Sterilfilter (0,2 µm) Roth (Karlsruhe, D) apo-transferrin Sigma (München, D) Trypsinpulver (1:250) Biochrom Seromed (Berlin, D) Trypsinlösung (0,25 %) Biochrom Seromed (Berlin, D) Zellkulturflaschen Nunc (Wiesbaden, D) Zentrifugenröhrchen Sarstedt (Nümbrecht, D)
4 Material Zellen Zellinien Die Zellinien A-375 (Giard et al., 1973), Bro (Lockshin et al., 1985) und Mel-HO (Holzmann et al., 1988) stammen von primären Tumoren. Die Zellinie Mel-2A (Bruggen et al., 1981) stammt von Metastasen. Bei der Zellinie 303AG7 handelt es sich um stabil ptet-on-transfizierte Bro-Zellen. Bei der Zellinie handelt es sich um stabil Bcl-2-überexprimierende Zellen. Das Bcl-2-Gen steht dabei unter der Kontrolle des Tet-On-Gen- Expressions-Systems (BD Biosciences Clontech, Heidelberg, D) Primäre Zellen Primäre Melanozyten wurden aus Vorhäuten isoliert und maximal zwei Passagen in Kultur gehalten. 5.5 Antikörper Der polyklonale Antikörper gegen die humane UDP-Glukose:Ceramid- Glukosyltransferase (SA-7061) wurde von der Firma Eurogentec (Köln, D) hergestellt. Hierfür wurden aus der Proteinsequenz zwei Peptide auswählt, die einem Bereich nahe des N-terminalen Endes (Aminosäuren 33 45, IRLHLNKKAIDKC) und dem C-terminalen Ende (Aminosäuren , ACGGTAEEILDV) des Proteins entsprechen. anti-aktin (Maus) Sigma (München, D) anti-hase gekoppelt mit Pferdeoxidase (Ziege) Dako (Hamburg, D) anti-maus Bcl-2 (Hase) Loxo (Dossenheim, D) anti-maus gekoppelt mit Pferdeperoxidase (Ziege) Dako (Hamburg, D) 5.6 Primer Alle Primer wurden bei Tib Molbiol (Berlin, D) synthetisiert. Sequenzen, Annealing Temperatur und Amplicon Länge und eingesetzte Konzentration sind in der Tabelle unten angegeben.
5 Material 81 Name Sequenz Annealing Temperatur GluC 5 - gta ATT CCA gat ACg CTT AC Amplicon Konzentration Zyklen 50 C 402 bp 0,6 µm 25 Ribo S9 5 - gtt ATT TCg TAg TTT ggt CC 5 - gag ACA ATC CAg CAg CCC Agg Agg gac A 5 -gat gag AAg gac CCA Cgg CgT CTg TTC 45 C 431 bp 0,4 µm Gene Das Gen für die human UDP-Glukose:Ceramid-Glukosyltransferase wurde bei ATCC (Manassas, VA, USA) gekauft. 5.8 Vektoren Die Vektoren ptet-on, ptre und ptk-hyg wurden von der Firma BD Biosciences Clontech (Heidelberg, D) bezogen.
6 Material Geräte Brutschrank B15 Heraeus (Osterode, D) CO 2 Brutschrank BB16 Heraeus (Osterode, D) β-counter 1450 Microbeta Trilux Perkin Elmer Wallac (Freibunrg, D) Densitometer GS-700 BioRad (München, D) Elektrophoresekammern GNA-200 Amersham Bioscinces Mini Protean II Zelle BioRad (München, D) Mini Sub Zelle BioRad (München, D) ELISA-Photometer Model 550 BioRad (München, D) Gel Dokumentationseinheit Polaroid (offenbach, D) PCR-Gerät Gene Amp PCR Perkin Elmer (Weiterstadt, D) System 2400 Heizplatte CAMAG (Berlin, D) Inkubationsschüttler Aerotron AI 18 Infors (Bottmingen, CH) Magnetrührer MR 2000 Heidolph (Kehlheim, D) Mikroskop Diavert Leitz (Wetzla, D) Mikrowellenofen Privileg 8017 Quelle (Furth, D) Mixer Thermomixer comfort Eppendorf (Hamburg, D) Vortex IKA VF2 Jahnke & Kunkel (Staufen i. Br., D) Netzteile ECP 3000/150 Amersham Biosciences Probeneindampfer Reaktitherm III Perbio (Weiskirchen, D) Schüttler WT 17 Biometra (Göttingen, D) Sterile Werkbank BSB 4A Gelaire Flow Laboratories (Opera, I) Trockenofen T6 Heraeus (Osterode, D) Ultraschallstab Sonoplus Bandelin (Berlin, D) Waagen 474 Kern (Albstadt, D) 1419 Sartorius (Göttingen, D) Wasserbad 1002 GFL (Burgwedel, D)
7 Material 83 Zentrifugen Biofuge fresco Heraeus (Osterode, D) Biofuge pico Heraeus (Osterode, D) Labofuge 400E Heraeus (Osterode, D) J2-21 Beckmann (München, D)
3,58 g 0,136 g. ad 100 ml
9 Anhang 9.1 Rezepturen der Puffer und Lösungen 9.1.1 Vorbereitung der Proben zur Extraktion Coon s-puffer (0,1 M, ph 7,2-7,6) Na 2 HPO 4 x 12 H 2 O KH 2 PO 4 Aqua dest. 3,58 g 0,136 g 8,77 g 9.1.2 Aufbereitung
2 Materialien. Materialien 15. 2.1 Histondeacetylaseinhibitoren (HDIs) Sigma-Aldrich, Deutschland. 2.2 Zelllinien und Zellkultur.
Materialien 15 2 Materialien 2.1 Histondeacetylaseinhibitoren (HDIs) Substanz Butyrat Trichostatin A (TSA) Valproat Hersteller Sigma-Aldrich, Sigma-Aldrich, Sigma-Aldrich, 2.2 Zelllinien und Zellkultur
Material. 3 Material. 3.1 Reagenzien
3 Material 3.1 Reagenzien Tabelle 1: verwendete Reagenzien Substrat Hersteller Firmensitz Agarose (NEEO, Ultra-Qualität) Carl Roth Karlsruhe BPB (Bromphenolblau) Merck Darmstadt DEPC (Diethylpyrocarbonat)
Bezeichnung Sequenz Verwendung
8 ANHANG i 8 ANHANG I Oligonukleotide Bezeichnung Sequenz Verwendung D256 5 -ATGGCAGACGGTGAGGATATTCA-3 5 Aktin AC1 (neu) D257 5 -GCCTTTGCAATCCACATCTGTTG-3 3 Aktin AC2 (neu) D98 5 -AT CC ATG GCA ATG TCA
Dendrogramm der Primaten
Arbeitsblatt 1 Dargestellt ist ein Ausschnitt der DNA-Sequenz für das Enzym NAD- Polymerase, dass bei den Primatenarten Mensch(M), Schimpanse(S), Gorilla(G), Orang-Utan(O) und Gibbon(Gi) vorhanden ist.
5,6- Carboxy- Rhodamin (Rox) TIB MolBiol, Berlin Desoxynukleosidtriphosphat (dntp)
8 Anhang 8.1 Chemikalien und Reagenzien Bromphenolblau Bromma, Schweden 5,6- Carboxy- Rhodamin (Rox) TIB MolBiol, Berlin Desoxynukleosidtriphosphat (dntp) Invitrogen TM, Karlsruhe Ethanol (RNase-frei)
MODUL 2.36 KLINISCHE CHEMIE UND LABORDIAGNOSTIK. TAG 6: HLA-Typisierung
MODUL 2.36 KLINISCHE CHEMIE UND LABORDIAGNOSTIK TAG 6: HLA-Typisierung Diese Anleitung bitte ausdrucken, vor dem Praktikumstag durcharbeiten und mitbringen! Inhalte der Einführungsvorlesung und der Anleitung
Material MATERIAL 3.1 Oligonukleotide
Material 13 3 MATERIAL 3.1 Oligonukleotide AGK34 LINE1 Ale1 Ale3 LIS1 LIS2 UR UL RA2 LS2 pbst7 sp6 DOP (6-MW) pcypac2-01 pcypac2-02 SD2 SA2 SA4 SD6 D11S2164 (CP5) forward D11S2164 (CP5) revers M16 forward
Tab. 2-1: TKZT-Zelllinien, Herkunft, histologische Eigenschaften und Referenzen
Material 28 2 MATERIAL 2.1 Zelllinien In der vorliegenden Studie wurden etablierte Zelllinien von nichtseminomatösen TKZT untersucht. Die Untersuchungen wurden zunächst an den drei Zelllinien H12.1, 2102EP
3 Materialien. 3.1 Geräte. Folgende spezielle Geräte wurden in dieser Arbeit verwendet. Invert-Mikroskop Axiovert 25. (Sonnenbühl-Genkingen)
3 Materialien 3.1 Geräte Folgende spezielle Geräte wurden in dieser Arbeit verwendet. Geräte Autoklav H+P Varioclav Typ 250 T Brutschrank Memmert INCO 2 Eppendorf Multipipette Plus Eppendorf Pipetten Reference
3 Materialien. 3.1 Verwendete Geräte. Begasungsbrutschrank Biolistic PDS1000/He. Coulter Counter Z1 Coulter Multisizer II
44 3 Materialien 3.1 Verwendete Geräte Gerät Babygelkammer Begasungsbrutschrank Biolistic PDS1000/He Cell Quest (Software) Counter Z1 Multisizer II Durchflußzytometer FACS-Calibur Elektrische Präzisionswaage
TCC CCA GTG AAG ACC TCC TCA GAG TCC GAC TCT. 56 C 67 siehe oben siehe oben siehe oben 56 C 66 CCG GCG CCA TTC TAT CC CGA GAA TCT GAC GCA GG 56 C 738
128 9. Anhang 9.1. Tabelle der verwendeten Primerpaare Nr. Name Sequenz 5 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 rcar. 981s rcar. 981s GAPDH. 682s GAPDH. 826a GAPDH. 381s GAPDH. 826a 18S-rRNA. 216s 18S-rRNA.
2. Material Material Chemikalien Radiochemikalien Restriktionsenzyme Enzyme (andere)
12 2. Material 2.1. Material 2.1.1. Chemikalien Alle verwendeten Chemikalien wurden in höchstem Reinheitsgrad von folgenden Firmen bezogen:, Difco Laboratories, FMC Bioproducts, Gibco BRL, Merck,, Sigma
2 MATERIAL. 2.1 Antikörper Polyklonale Antikörper Monoklonale Antikörper. 2 Material 28
2 Material 28 2 MATERIAL Falls nicht anders vermerkt, wurden alle Materialien aus Deutschland bezogen. 2.1 Antikörper 2.1.1 Polyklonale Antikörper Antikörper Thymoglobulin Serum immunisierter Kaninchen
Primer zum Nachweis eukaryoter DNA (Kontroll-PCR) Primer Sequenz Ziel-Gen Produktgröße T a
7 Anhang 7.1 Primersequenzen Alle Oligonukleotide sind in 5-3 -Orientierung aufgelistet. 7.1.1.1.1 Primer zum Nachweis eukaryoter DNA (Kontroll-PCR) 258 s CCA TCC AAC ATC TCA GCA TGA TGA AA GCC CCT CAG
2 Zielstellung der Arbeit
- 16-2 Zielstellung der Arbeit Ziel der vorliegenden Arbeit ist der Nachweis von Fas, FasL und CD97 und die Ermittlung deren Expressionsgrades mittels RT PCR und Immunhistochemie beim Schilddrüsenadenom
A- Zugabe von 180µl Pufferlösung und Proteinase K, Inkubation bei 56 C. B- Zugabe von 200µl einer zweiten Pufferlösung, Inkubation bei 70 C
3 Methoden 3.1 Extraktion der DNA aus den Paraffinschnitten 3.1.1 Extraktions-Kit Das QIAamp DNA Mini Kit- System beruht auf dem Prinzip der Auflösung der Eiweiße mit Proteinase K, DNA Bindung an eine
2 Material. Material und Methoden 17
Material und Methoden 17 2 Material Alle Chemikalien hatten mindestens den Reinheitsgrad pro analysii und wurden, sofern nicht anders angegeben, von den Firmen Sigma (München), Serva (Heidelberg) oder
7 Anhang. Tabelle I: Zusammensetzung der Restriktionsansätze.
7 Anhang Tabelle I: Zusammensetzung der Restriktionsansätze. Reagenz Konzentration Volumen je Endkonzentration der Stammlösung Reaktionansatz Reaktionspuffer 10x NEB-Puffer 2 1.50 µl 1x MseI 4 U/µl 0.30
2. Herstellung von embryonalenstammzellen
2. Herstellung von embryonalenstammzellen 2.1. Die Entstehung von Stammzellen im Laufe der Ontogenese 2.1.1. Die frühe Embryonalentwicklung der Eutheria (Placentales) am Beispiel der Maus (später 2.1.2.
Anhang. Bedeutung Bezeichnung Rs + Nukleotidsequenz (5-3 ) Mutationsprimer Asp 29 Glu
AHAG 115 Anhang Tab. 13: Konstruktion der Primer zur Generierung der EcIPDC-Mutanten. Ausgetauschte ukleotide sind unterstrichen. Das ukleotidtriplett, welches für die mutierte Aminosäure codiert, ist
7. Anhang. 7. Anhang. Abbildung 7.1: Aminosäuresequenz AtMYC2 im Wildtyp und in jin1. Unterschiede zwischen den Sequenzen sind rot unterlegt.
7. Anhang 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 jin1 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV AtMYC2 MTDYRLQPTMNLWTTDDNASMMEAFMSSSDISTLWPPASTTTTTATTETTPTPAMEIPAQAGFNQETLQQRLQALIEGTHEGWTYAIFWQPSYDFSGASV
Zielstellung der Arbeit
- 13-2 Zielstellung der Arbeit Ziel der vorliegenden Arbeit ist der Nachweis der Matrixmetalloproteasen MMP-2 und MMP-9 und deren Inhibitoren TIMP-1 und TIMP-2 mittels RT-PCR und Immunhistochemie in malignen
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, München Merck Biosciences, Darmstadt. Thermo Hybaid GmbH, Ulm Roche Diagnostics GmbH, Mannheim
3 Materialien 28 3 Materialien 3.1 Chemikalien Acrylamid Agar Agarose Ammoniumsulfat Ampicillin, Natriumsalz L-Arabinose Bradford-Reagenz Bromphenolblau Caseinhydrolysat Chloramphenicol Chloroform Coomassie-Brillant-Blau
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1. EINLEITUNG Der eukaryontische Translationsinitiationsfaktor 5A (eif5a) Der Polyaminbiosyntheseinhibitor Agmatin...
1. EINLEITUNG... 14 1.1 Lebenszyklus der Malaria Erreger Plasmodium falciparum und Plasmodium vivax... 16 1.2 Molekulares Targeting... 18 1.2.1 Die alternative Fettesäurebiosynthese II in Plasmodium falciparum...
kanr camr F trad36, lac I q lacz M15 proab/supe thi (lac-proab), λimm434 (P1)
Material 12 2. Material 2.1 Tierstämme CD-1(ICR)BR, Auszucht-Maus Dll1-Knockout-Mäuse Hühnereier, Gallus gallus Charles River, Deutschland GSF, München Geflügelanstalt, Kitzingen Brüterei Mahler, Rimpar
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