Calcitonin IRMA (CT)

Transkript

1 Arbeitsanleitung IRMA (CT) Immunoradioaktiver Assay zur quantitativen Bestimmung von in humanem Serum. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 VERWENDUNG Dieser Test von wurde für die quantitative Bestimmung von in Humanserum entwickelt. PHYSIOLOGIE ist ein Polypeptid das aus 32 Aminosäuren besteht und hauptsächlich von den parafolikullären C-Zellen sezerniert wird. Seine wichtigste biologische Funktion ist die Inhibierung der osteoklastischen Knochenresorption. Aufgrund dieser Eigenschaft wird bei Störungen eingesetzt, die sich durch erhöhte Resorption manifestieren, wie z.b. bei Paget- Erkrankung und bei einigen Patienten mit Osteoporose. Die Aminosäuresequenzen von Schwein, Rind, Lachs und Mensch sind bekannt und es sind biologisch aktive Moleküle synthetisiert worden. Die Strukturen sind ähnlich, wohingegen die immunologische Aktivität des s der verschiedenen Spezies sich deutlich unterscheiden. Das am stärksten ausgeprägte klinische Syndrom, das mit einer abnormal überhöhten Ausschüttung von einhergeht, ist das medulläre Schilddrüsen-Karzinom (MTC). MTC ist ein Tumor der produzierenden C-Zellen der Schilddrüse. MTC stellt 5-10% aller Schilddrüsen- Krebserkrankungen dar. MTC kann sporadisch auftreten oder in einer familiär vererbbaren Form, die von einer autosomalen Veranlagung bestimmt ist. Obwohl es sich um eine relativ seltene Tumorart handelt, besitzt MTC aufgrund seiner erblichen Weitergabe eine große klinische Bedeutung. Studien zeigen, dass sich MTC frühzeitig durch im Serum diagnostizieren lässt 1.. Die Bestimmung bestätigt dabei häufig andere klinische Symptome. Bei frühzeitiger Diagnose von MTC hat der Patient durch einen chirurgischen Eingriff gute Chancen auf vollständige Rekonvaleszenz. Obwohl es sich um einen seltenen Tumor handelt, kann er nach einem bestimmten familiären Muster als eine multiple endokrine Neoplasie vom Typ II auftreten. Diese Tumore produzieren normalerweise diagnostisch erhöhte Konzentrationen an in Serum; deshalb kann mit einem - Immunoassay das Auftreten von MTC mit einem Höchstmaß an Genauigkeit und Spezifität diagnostiziert werden. Bei einem kleinen aber ansteigenden Prozentsatz von Patienten sind basale Hormonspiegel nicht von normalen Hormonspiegeln zu unterscheiden. In einigen dieser Fälle handelt es sich um das Frühstadium der C-Zell-Neoplasie oder der Hyperplasie, die am ehesten durch einen chirurgischen Eingriff geheilt werden können. Um diese Patienten im Frühstadium zu diagnostizieren, sind Provokations-Tests zur -Sekretion notwendig. Damit können falsch negative Ergebnisse durch die alleinige Bestimmung im Basalbereich vermieden werden. Die meisten Tumore reagieren mit erhöhter -Ausschüttung auf die Verabreichung von entweder Kalzium 6. oder Pentagastrin oder deren Kombination 7.. Jedes dieser Präparate allein kann immer noch zu unklaren Ergebnissen führen. Deshalb sollten in Fällen mit klinischer Manifestation beide Präparate 8. bei der diagnostischen Bestimmung in Betracht gezogen werden. Die Bestimmungen von kann darüber hinaus auch für die Therapie-Verlaufskontrolle bei Patienten mit sezernierenden Tumoren verwendet werden. Neoplastische Veränderungen anderer neuroendokriner Zellen können auch zu erhöhten - Werten führen. Das beste Beispiel dafür ist das kleinzellige Bronchial-Carcinom. Andere Tumore, wie Carcinoide und Inselzell-Tumore der Bauchspeicheldrüse können ebenfalls zu erhöhten Serum- -Werten führen. Erhöhungen von Serum- wurden auch bei akutem und chronischem Nierenversagen, Hypercalciurie und Hypercalcämie festgestellt. TESTPRINZIP Bei dem Immunoassay handelt es sich um einen immuno-radiometrischen Test (IRMA) der auf zwei unterschiedliche Epitope des Moleküls zugreift. Dazu wurden zwei polyklonale Ziegenantikörper gegen humanes affinitätschromatographisch aufgereinigt. Jeder dieser Antikörper reagiert spezifisch mit einem Epitop des Moleküls. Die enthaltende wird gleichzeitig mit einem Fänger-Antikörper (beschichtetes Röhrchen) und einem Detektions-Antikörper ( 125 I-markiert) inkubiert. Das in der vorhandene wird sowohl von dem an der Röhrchenwand immobilisierten wie auch von dem 125 I- markierten Antikörper gebunden und bildet so einen Sandwich - Komplex: Anti--Röhrchenfestphase Intaktes (1-32) 125 I Anti-. Nach Abschluss der Inkubation wird das Röhrchen gewaschen, um die unspezifisch gebundenen Antikörper zu entfernen. Die Radioaktivität wird in einem Gamma-Counter gemessen. Da die Bildung Version

3 eines Sandwich -Komplexes nur bei Anwesenheit von -Molekülen erfolgt, ist die Radioaktivität des an der Röhrchenwand gebundenen Komplexes der Menge des in der vorhandenen s direkt proportional. Die erhaltenen cpm-werte der Standards werden gegen deren Konzentration auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm. Die Konzentrationen der Kontrollen und Patientenproben können von der Standardkurve abgelesen werden. Um ein falsch positives Ergebnis auszuschließen, sollte eine positive Patientenprobe in einem spezifischen Procalcitonin Kit überprüft werden. REAGENZIEN Der -Kit enthält Reagenzien zur Durchführung von 100 Einzelbestimmungen. Der Kit ist bei 2-8 C bis zu dem angegebenen Verfallsdatum stabil. CALCITONIN-STANDARDS Ein Standardsatz besteht aus sechs Fläschchen, die lyophilisiertes Humanserum mit unterschiedlicher Konzentration an Humancalcitonin und 0,1 % Natriumazid enthalten. Die Standardfläschchen sind bei 2-8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum zu lagern. CALCITONIN KONTROLLSEREN Diese bestehen aus zwei Fläschchen, die lyophilisiertes Humanserum mit humanem und 0,1 % Natriumazid enthalten. Beachten Sie das Fläschchen-Etikett bezüglich der chargenspezifischen Konzentrationsbereiche der Kontroll-seren. Die Fläschchen sind bei 2-8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum zu lagern. 125 I-ANTI-CALCITONIN Der Tracer besteht aus zwei Fläschchen, die jeweils 5,0 ml an 125 I-markiertem Anti- in einer gepufferten Proteinlösung enthalten. Der Tracer ist bei 2-8 C bis zu dem angegebenen Verfallsdatum zu lagern. Jedes Fläschchen enthält weniger als 10 µci (<370 kbq) an 125 I. Der Kit enthält 125 I mit einer Halbwertzeit von 60 Tagen. ANTI-CALCITONIN BESCHICHTETE RÖHRCHEN Der Kit enthält zwei Packungen mit je 50 Antikörper beschichteten Polystyrol-Röhrchen. Die Röhrchen sind mit einem polyklonalen Ziege-Antikörper gegen humanes beschichtet. Die vor Feuchtigkeit geschützten Röhrchen können bei 2-8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum gelagert werden. Die Röhrchen sollten Zeit haben Raumtemperatur zu erreichen. Nach Entnahme der benötigten Röhrchen ist die Packung sofort wieder zu verschließen. Das Trockenmittel darf nicht entfernt werden. WASCHLÖSUNGKONZENTRAT (30FACH KONZENTRIERT) 1 Flasche enthält 30 ml eines oberflächenaktiven Agenzes in phosphatgepufferter Kochsalzlösung mit 1,5% Natriumazid als Konservierungsmittel. VORBEREITUNG DER REAGENZIEN CALCITONIN STANDARDS Die Standards enthalten synthetisches (1-32) und normales humanes Serum. Den Inhalt jedes Fläschchens mit 2,0 ml destilliertem oder entsalztem Wasser rekonstituieren. Den Null- Standard mit 4,0 ml destilliertem oder entsalztem Wasser rekonstituieren. Anschließend die Standards 30 Minuten bei Raumtemperatur (15-30 C) inkubieren. Leicht schütteln um ein vollständiges durchmischen sicherzustellen. Die Standards in einem Eisbad bis zur weiteren Verwendung zwischenlagern. Reste aliquotiert bei -20 C lagern. Nicht mehr als dreimal Auftauen und Einfrieren. CALCITONIN KONTROLLSERUM Den Flascheninhalt mit 2 ml destilliertem oder entsalztem Wasser rekonstituieren. Die Kontrolle 30 Minuten bei Raumtemperatur (15-30 C) inkubieren. Anschließend leicht schütteln um ein vollständiges Durchmischen sicherzustellen. Kontrolle in einem Eisbad bis zur weiteren Version

4 Verwendung zwischenlagern. Reste aliquotiert bei -20 C lagern. Nicht mehr als dreimal Auftauen und Einfrieren. WASCHLÖSUNG KONZENTRAT (30FACH KONZENTRIERT) Das Konzentrat in 870 ml destilliertem oder entsalztem Wasser aufnehmen und die Lösung gründlich mischen. Der gebrauchsfertige Waschpuffer kann dann bei Raumtemperatur bis zum angegebenen Verfallsdatum des Kits gelagert werden. Das Waschlösungs-Konzentrat besteht aus einer hochkonzentrierten Salzlösung. Daher kann bei niedrigen Temperaturen ein Niederschlag auftreten. Die Lösung nimmt dabei aber keinen Schaden. Bei Raumtemperatur löst sich der Niederschlag unter kräftigem mischen wieder auf. HINWEISE UND VORSICHTSMAßNAHMEN FÜR DEN ANWENDER Verwendung des Tests Die Reagenzien sind zu Zwecken der in-vitro-diagnostik einzusetzen. Vorsichtsmaßnahmen beim Umgang mit Humanseren Alle Reagenzien dieses Kits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, ergaben bei der Prüfung auf HCV, HBsAg bzw. Antikörper gegen HIV I/II-Virus (FDA cleared kits) ein negatives Ergebnis. Trotzdem kann das Vorhandensein solcher infektiöser Erreger nicht mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden. Die Reagenzien sollten deshalb wie potentiell infektiöses Material behandelt werden. Vorsichtsmaßnahmen beim Umgang mit Radioaktivität Jedes radioaktive Material muss nach den Vorschriften (Vorschriften sind von Land zu Land verschieden) und Richtlinien der Ämter, die rechtlich für das Labor zuständig sind, entsorgt werden. In Bereichen, in denen radioaktives Material angewandt wird, darf nicht gegessen, getrunken, geraucht werden noch dürfen Kosmetika angewandt werden. Der Zugriff auf radioaktives Material sollte nur dem dafür zuständigen und geschulten Personal ermöglicht werden. Pipettieren Sie radioaktive Lösungen nicht mit dem Mund. Vermeiden Sie den direkten Kontakt mit radioaktivem Material, indem Sie Schutzkleidung wie Labormäntel und Einweg-Handschuhe tragen. Radioaktive Stoffe müssen in den dafür ausgewiesenen Bereichen in ihren ursprünglichen Behältern oder in Behältern, die den gleichen Strahlenschutz gewährleisten, gelagert werden. Es müssen Aufzeichnungen über den Verbleib von allem radioaktiven Material aufbewahrt werden. Verschüttete Lösungen müssen sofort aufgenommen und kontaminierte Geräte dekontaminiert werden. Laborausrüstung und Glasgeräte sind regelmäßig zu überprüfen, um eine Kontamination mit radioaktiven Isotopen festzustellen. Radioaktives Material darf nur von Ärzten, Klinischen Laboratorien oder Kliniken in Empfang genommen, bezogen, aufbewahrt oder verwendet werden; es darf nur für die Durchführung von in vitro- Tests in Kliniken oder Laboratorien eingesetzt werden, ohne dass dieses Material, noch die davon ausgehende radioaktive Strahlung mit einer internen oder externen Anwendung bei Mensch oder Tier verbunden ist. Der Empfang, der Bezug, der Besitz, die Verwendung und die Weiterleitung dieses radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und einer allgemeinen Erlaubnis des entsprechenden Landes in welches das Produkt geliefert wird. Warnhinweis für den Umgang mit Natriumazid (NaN 3 ) Einige Reagenzien des Kits enthalten Natriumazid. Dieses kann mit Blei- und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Wenn Sie Natriumazid Lösungen in den Ausguss gießen, spülen Sie mit ausreichend viel Wasser nach, um eine Anreicherung von Azid zu verhindern. Vermeiden Sie den direkten Kontakt mit der Haut oder den Schleimhäuten. PROBENVORBEREITUNG UND AUFBEWAHRUNG Die Bestimmung von humanem sollte in Serum erfolgen. Für eine Doppelbestimmung werden 400 µl Serum benötigt. Das Vollblut wird in ein Röhrchen ohne Zusatzstoffe aufgenommen. Blut 1 4 Stunden in einem Eisbad oder im Kühlschrank gerinnen lassen. Anschließend Röhrchen abzentrifugieren (vorzugsweise in einer Kühlzentrifuge) und Serum abtrennen. Sollte das Serum nicht sofort verwendet werden muss die Serumprobe bei -20 C gelagert werden. Keine stark hämolytischen oder stark lipämische n verwenden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden. Version

5 TESTDURCHFÜHRUNG Gelieferte Reagenzien: Der gelieferte Kit (Produkt-Nr.: 3KG556) enthält folgende Reagenzien: Bezeichnung Standards Produkt-Nummern: 3CA090, 3CB090, 3CC090, 3CD090, 3CE090, 3CF090 Kontrollseren Produkt-Nummern: 3CA091, 3CB091 Anti- beschichtete Röhrchen Produkt-Nr.: 3KT I-Anti- Produkt-Nr.: 3KL008 Waschreagenz Konzentrat Produkt-Nr.: 3KW001 Beschreibung der Testdurchführung Produkt-Nr.: 3KI062 Benötigte Reagenzien und Geräte, die nicht geliefert werden: Polystyrol- oder Polypropylenröhrchen, 12 x 75 mm Präzisionspipettiervorrichtung: 200 µl Mehrfachdispensiervorrichtung: 100 µl Röhrchengestell Parafilm oder gleichwertige Folie zur Röhrchenabdeckung Destilliertes oder entsalztes Wasser Vortex-Schüttler Zeitschaltuhr zur 24 Stunden Einstellung Schüttler, geeignet für 180 ± 20 U/Min.-Einstellung Gammazähler, auf 125 I kalibriert Anzahl 6 Fläschchen 2 Fläschchen 2 Packungen zu je 50 Röhrchen (insgesamt 100) 2 Fläschchen 1 Flasche 1 Beipackzettel Testvorbereitung Bereiten Sie für jeden Testansatz die folgenden Gruppen an Teströhrchen vor und setzen Sie diese in einen Teströhrchen-Halter (Doppelbestimmung): [Anmerkung: bei ausreichender Erfahrung sind Einzelbestimmungen möglich] 2 Teströhrchen für die Gesamtradioaktivität (Verwenden Sie unbeschichtete Röhrchen) 2 Röhrchen für jede Standardkonzentration 2 Röhrchen für jedes Kontrollserum 2 Röhrchen für jede Patientenprobe Pipettier- und Inkubationsschritte 1. Pipettieren Sie 200 µl Standards, Patientenproben und Kontrollseren in die entsprechenden Teströhrchen; pipettieren Sie direkt auf den Röhrchenboden. 2. Pipettieren Sie in jedes Teströhrchen 100 µl 125 I-Anti-. 3. Schütteln Sie alle Röhrchen sachte mit dem Vortex-Mixer. 4. Bedecken Sie das Röhrchengestell mit Parafilm oder gleichwertiger Folie. 5. Inkubieren Sie die Röhrchen bei Raumtemperatur über Stunden auf einem Schüttler bei 180 ± 20 U/Min. 6. Saugen oder dekantieren Sie den Inhalt von allen Röhrchen (außer der Gesamtaktivität) ab und fügen Sie 2 ml die verdünnte Waschlösung zu. Saugen oder dekantieren Sie die Waschlösung ab. Führen Sie diesen Waschvorgang insgesamt 3 Mal durch. Anschließend auf einer saugfähigen Unterlage ablaufen lassen. 7. Messen Sie die gewaschenen Röhrchen 1 Minute in einem Gammazähler. Version

6 Immunoassay Fließschema Röhrchen Standards/ 125 I- Kontroll seren/ Antikörper- n Lösung Inkubation Wasch reagenz Null standard 200 ul 100 ul 2mL 10 pg/ml 30 pg/ml 100 pg/ml Absaugen 300 pg/ml Röhrchen vortexen Stunden schütteln 1000 pg/ml 180 ± 20 U/Min. Waschen 3 Mal Radio aktivitätsmessung Messen 1 Minute Kontroll serum I Kontroll serum II 1 2 Falls das Auswerteprogramm Röhrchen mit Gesamtaktivität erfordert, kennzeichnen Sie 2 Röhrchen (bzw. eines) entsprechend, pipettieren Sie 100 µl 125 I- Antikörperlösung in jedes Röhrchen und verschließen Sie diese. ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN Bekannte Interferenzen: Stark hämolytische oder lipämische n. n von Patienten, die Radioaktivität zu diagnostischen oder therapeutischen Gründen verabreicht bekamen. Kontamination der oder der Teströhrchen mit 125 I oder anderen Radioisotopen. Reagenzien aus verschiedenen Chargen dürfen nicht ausgetauscht werden. Alle Reagenzien, die in die Röhrchen pipettiert werden, werden am besten direkt auf den Röhrchenboden pipettiert. Damit wird vermieden, dass beim Herablaufen an der Röhrchenwand Flüssigkeit verloren geht. Der Waschschritt ist ein wichtiger Schritt im Testablauf. Das genaue Dispensieren der Waschreagenzlösung und das vollständige Absaugen des Röhrcheninhaltes tragen wesentlich zur Testempfindlichkeit, einer niedrigen unspezifischen Bindung und einer hohen Präzision bei. Es wird empfohlen, Standards und Patientenproben in Doppelbestimmung zu messen. Für die Datenauswertung und die Ergebnisberechnung wird der Mittelwert (cpm) einer jeden Doppelbestimmung verwendet. Vermeiden Sie eine Kontamination von zu, indem Sie für jede eine neue Pipettenspitze verwenden. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Auswertung Die Standardkurve wird anhand der -Standards erstellt. Für die genaue Konzentration beachten Sie bitte die Etiketten der einzelnen Standard-fläschchen (flexible Standards). Erstellen Sie die Standardkurve wie folgt: *.) 1. Berechnen Sie die Durchschnittsimpulsrate (cpm-mittelwert) für jede Doppelbestimmung. 2. Die Nullstandardröhrchen fungieren als Blank welche die unspezifische Bindung des Assays darstellen. Subtrahieren Sie die cpms der Nullstandardröhrchen von jedem Mittelwert cpm der Standards, Kontrollen und n. Dies sind die korrigierten cpm. 3. Die Standardkurve wird erstellt durch Auftragen der korrigierten Impulsraten eines jeden Standards auf der Ordinate gegen die jeweilige Standardkonzentration auf der Abszisse unter Verwendung von Doppellogarithmischem Papier (log-log). Version

7 Für die Berechnungen des Immunassays können auch computergestützte Datenverarbeitungs-programme für IRMA-Tests verwendet werden. Das 4-Parameter-Logistik- Programm nach Rodbard und das Cubic-Spline-Verfahren sind zwei beispielhafte Programme 9. Beispiel für Standard-Impulsraten Berechnung: Durchschnitts CPM des Nullstandards = 442 Durchschnitts CPM für 10 pg/ml Standard =1087 CPM (10 pg/ml) CPM (0 pg/ml) = Korrigierte CPM = 645 BEISPIELDATEN RÖHRCHEN CPM DURCHSCHN. KORRIGIERTE CALCITONIN CPM CPM (PG/ML) Gesamt Aktivität Null Standard pg/ml pg/ml pg/ml pg/ml pg/ml Kontroll Serum I 1673 Kontroll- Serum II ANMERKUNG: Die hier verwendeten Daten dienen nur Demonstrationszwecken und dürfen nicht anstelle der zum Zeitpunkt der Testdurchführung erhaltenen Werte verwendet werden. Representative Standard Curve Corrected CPM Zur Erstellung der -Standard-kurve kann auch eine automatische Datenverarbeitung herangezogen werden. Um eine automatische Daten-verarbeitung zu programmieren oder um ein Version

8 existierendes Programm anzupassen, wird die Rücksprache mit einem Lieferanten für Datenverarbeitungsprogramme oder einem Programmierer empfohlen. QUALITÄTSKONTROLLE Bei jedem Ansatz müssen Kontrollseren geführt werden. Die Ergebnisse der Kontrollseren müssen auf Akzeptanz überprüft werden. Hier ist die Zuhilfenahme von geeigneten statistischen Methoden empfohlen. Wenn bei Testansätzen die Ergebnisse für ein oder mehrere Kontrollseren außerhalb des zulässigen Bereichs liegen, können die Ergebnisse für die Patienten-n ungültig sein. GRENZEN DES VERFAHRENS Wie bei jedem Analyten der als diagnostisches Hilfsmittel dient, müssen die -Ergebnisse im Zusammenhang mit dem gesamten klinischen Befund und anderen unterstützenden diagnostischen Tests genau interpretiert werden. Immunoassays sind optimiert und kalibriert hinsichtlich der Bestimmung von Antigenen in ihrem intakten und unveränderten Zustand. Genetische Varianten oder der Abbau von Antigenen zu Untereinheiten oder anderen Fragmenten können die Antikörper-Bindungs-eigenschaften verändern und das Endresultat beeinträchtigen. Diese n können abweichende Ergebnisse zwischen unterschiedlichen Testverfahren zeigen, da die Auswirkung derart veränderter Strukturen für jeden einzelnen Antikörper-Test spezifisch ist. Die Einflussnahme von Medikamenten auf die Testergebnisse wurde nicht untersucht. ZU ERWARTENDE WERTE IBL-International empfiehlt, dass jedes Prüflabor seinen eigenen Bereich der zu erwartenden Werte erstellt. Unter Verwendung des Immunoassays wurden von 125 offenbar gesunden erwachsenen Probanden die -Spiegel in Serum bestimmt.(nccls Richtlinien C28-A) An der Studie waren 72 Frauen und 53 Männer beteiligt. Im Einklang mit der Literatur wurde festgestellt, dass der - Normalwertbereich allgemein bei Frauen niedriger liegt als bei Männern. Der ermittelte Bereich für die 53 Männer lag bei 3-21pg/mL während die zu erwartenden Werte für Frauen bei 1 bis 8 pg/ml lagen. LEISTUNGSPROFIL-TESTCHARAKTERISTIKA Präzision und Reproduzierbarkeit Die Präzision (Intra-Assay) des IRMA Assays wurde anhand von fünf n mit unterschiedlichen -Konzentrationen bestimmt. Die n wurden in 20-fach-Wiederholung gemessen. Die Reproduzierbarkeit (Interassay) der Ergebnisse wurde anhand von verschiedenen Testansätzen bestimmt: Intra-Assay Variation Kit Charge Mittelw ert Std. Abw. Variationskoeffizient % E E E E E E E E E ANMERKUNG: Studien haben gezeigt, dass sich die Präzision am Ende der Haltbarkeit um weniger als 10% verändert. Version

9 Inter-Assay Variation Kit Charge Mittelw ert Std. Abw. Variationskoeffizient % E E E E E E E E E Sensitivität Die Empfindlichkeit des Tests ist definiert als der kleinste gemesse Einzelwert (95 % Perzentile), der von Null unterschieden werden kann. Der Test hat eine berechnete Sensitivität von 0,7 pg/ml; die Messungen wurden mit einem 3 1/2 Wochen alten Tracer durchgeführt. Die funktionale Sensitivität eines Analyten entspricht derjenigen Konzentration, welche mit einem Interassay Variationskoeffizienten von weniger als 20% gemessen werden kann. Sie wurde mit 1 pg/ml bestimmt. Die höchste Konzentration an die ohne nverdünnung im Assay messbar ist, ist die Konzentration des höchsten Standards (~1000 pg/ml). High Dose Hook-Effekt Es wurde kein High Dose Hook-Effekt bis 1000 pg/ml festgestellt. Dieser Wert wurde mit einer durch synthetisches (1-32) auf pg/ml aufgestockten, die in einer Serienverdünnung bis unter den niedrigsten Standard verdünnt wurde, ermittelt. Bei pg/ml ergaben die Impulsraten immer noch größere Ergebnisse als der höchste Standard. Es wird empfohlen, dass alle n, die ein Ergebnis von höher als 100 pg/ml haben 1:10 mit dem Nullstandard verdünnt werden und die Messungen gegebenenfalls bis zu 10 Mal wiederholt werden, bis das Ergebnis reproduzierbar ist. Version

10 CA IRMA (CT) (RE13031) Kreuzreaktivitätsstudie Kreuzreagierende Substanz PTH TSH genverwandt es Peptid (CGRP) Schweine- Lachs- Konzentration der KreuzreagierendenSubstanz 100,000 pg/ml 25,000 pg/ml 10,000 pg/ml 5,000 µiu/ml 500 µiu/ml 50 µiu/ml 1,000,000 pg/ml 100,000 pg/ml 1,000,000 pg/ml 100,000 pg/ml 1,000,000 pg/ml 100,000 pg/ml ohne Kreuzreagi erende Substanz mit Kreuzreagieren der Substanz Änderung der Konzentra tion Kreuz- Reaktivität (%) Zusammenfassung: Jede kreuzreagierende Komponente wird zu einer enthaltenden hinzugefügt. Die -Konzentration wird vor und nach der Zugabe gemessen. Schlussfolgerung: Es besteht kein Zusammenhang zwischen dem Anstieg der zum Aufstocken verwendeten Konzentration der kreuzreagierenden Substanz und der auftretenden Änderung der gemessenen Konzentration. Daraus kann geschlossen werden, dass keine der kreuzreagierenden Substanzen in den gemessenen Konzentrationen den IRMA stört. Wiederfindung: Zu drei verschiedenen Patientenproben wurden unterschiedliche Mengen an hinzugefügt, um die Wiederfindung zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle wiedergegeben: ID Endogenes (pg/ml) gespikt (pg/ml) Theoretisches Ergebnis (pg/ml) Gemessenes Ergebnis (pg/ml) Wieder-findung (%) Version

11 Verdünnungsechtheit von Patientenproben: Parallelität Fünf Patientenseren wurden mit dem Nullstandard verdünnt. Die Ergebnisse in pg/ml sind der nachfolgenden Tabelle wiedergegeben: ID Verdünnung Gemessener Wert 1 unverdünnt : : unverdünnt 1:2 1:4 1:8 1:16 unverdünnt 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 unverdünnt 1:2 1:4 unverdünnt 1:2 1:4 1:8 1:16 undiluted 1:2 1:4 1:8 1:16 1: Errechnetes Ergebnis Linearität (%) Methodenvergleich: 248 Seren von normalen gesunden Blutspendern wurden für den Methodenvergleich verwendet. Die Seren wurden teilweise mit aufgespikt. Die Seren wurden einmal im IRMA und in einem kommerziell erhältlichen Konkurrenzprodukt gemessen. Die Messung wurde für beide Tests am gleichen Tag durchgeführt. Der Methodenvergleich zeigt einen Korrelationskoeffizient (R) von 0,98. Die Steigung der Geraden betrug 1,06 und der Schnittpunkt mit der y-achse lag bei -1,48. Das Konkurrenzprodukt repräsentiert die Werte der X-Achse wohingegen der IRMA die Werte der Y-Achse repräsentiert. Die verwendeten Seren hatten eine - Konzentration zwischen 1 951pg/mL. Version

12 CALCITONIN IRMA IRMA (CT) (RE13031) D Chemische Kennzeichnung: Gefährliche Stoffe: 1) Antikörper Beschichtete Kugeln (oder Röhrchen). 2) Ziegen 125 I Antikörper enthält Jod-125 Aktivität <10 µci und 0.1%. 3) Standards und Kontrollseren Humanserum enthält 0.1% 4) Waschpuffer Konzentrat enthält 1.5%. Radioaktivität Isotop <10 µci/vial (<370 kbq) CAS Nummer: Symbol: Schädlich Xn R-Sätze: R22, R52/53 S- Sätze: S28, S45, S53, S60, S61 0.1% CAS Nummer: Symbol: N/A R- Sätze: N/A S- Sätze: N/A 1.5% CAS Nummer: Symbol: Sehr giftig T+; N R- Sätze: R28, R32, R50/53 S- Sätze: S28, S45, S53, S60, S61 CALCITONIN REFERENZLISTE 1. Deftos, L.J., Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, (edited by Favus, N.J.), 1st Edition, American Society for Bone and Mineral Research, Deftos, L.J., Secretion in Humans. In: Cooper, C.W. (ed). Current Research on Calcium Regulating Hormones. Univ. Of Texas Press, Austin, TX, pp , Deftos, L.J., Weisman, M.H., Williams, G.H., Karpf, D.B., Frumar, A.M., Davidson, B.H., Parthemore, J.G., Judd, H.L., Influence of age and sex on plasma calcitonin in human beings. N. Engl. J. Med. 302: , Travis, J.C., (ed) Clinical Radioimmunoassay... State-of-the-Art, Scientific News Letters, Inc. Radioassay - Legend Assay Publishers, Anaheim, CA 92803, 1980, 1st Edition. 5. Austin, L.A., and Heath, H., III, Medical Progress, Physiology and Pathophysiology, N. Engl. J. Med. 304:269, Parthemore, J.G., Bronzert, G.R., and Deftos, L.J., A short calcium infusion in the diagnosis of medullary thyroid carcinoma, J. Clin. Endocrinal. Metab. 39:108, Hennedssy, J.F., Wells, S.A., Ontjes, D.A., and Cooper, C.W., A comparison of pentagastrin injection and calcium infusion as provocative agents for the detection of medullary carcinoma of the thyroid, J. Clin. Endocrinol. Metab. 39:487, Wells, S.A., Baylin, S.B., Linehan, W.M. et al, Provocative agents and the diagnosis of medullary carcinoma of the thyroid gland. Ann. Surg. 188:139, Malan, P.G. et al. Curve-fitting to Radioimmunoassay Standard Curves: Spline and Multiple Binding-Site Models. Ann. Clin. Biochem. 15: 132, Version

13 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /