[ XBridge hplc-säulen ] extreme. Flexibilität

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1 [ XBridge hplc-säulen ] extreme Flexibilität

2 XBridge hplc-säulen Verlässliche Leistung Für Wissenschaftler, die in Chromatographielaboren arbeiten, ist die Reproduzierbarkeit der Chromatographiesäule einer der wichtigsten Faktoren zur Entwicklung verlässlicher Methoden. Bei Waters wird jeder Schritt des Säulenherstellungsprozesses überwacht und genau kontrolliert, um die ausgezeichnete Reproduzierbarkeit unserer Produkte zu gewährleisten. Jeder Test, von der Charakterisierung der Rohstoffe bis zur Analyse der produzierten Charge, stellt sicher, dass die heute erhältlichen XBridge Säulen stets dieselbe Leistung erbringen werden ohne Ausnahme von Säule zu Säule, von Charge zu Charge und von Jahr zu Jahr.

3 Konkurrenzlose Vielseitigkeit Mit einem Ziel im Sinn entwickelt Ihre Produktivität zu maximieren. Ganz gleich, ob eine Qualitätskontrollmethode erstellt oder ein LC/MS-Assay der Spitzenklasse entwickelt werden soll XBridge Säulen unterstützen Ihr Vorhaben durch: Verbesserung der ph-stabilität Längere Säulenlebensdauer Verlässlichkeit der Säule Assayrobustheit Maximierung der Partikeleffizienz Unvergleichliche Peakform und Peakkapazität BEH C 8 BEH C 8 BEH Shield RP8 BEH Phenyl BEH HILIC BEH Amide BEH0 C 8 BEH00 C 8 BEH00 C BEH C 8

4 Höchste Qualität durchs Design XBridge Säulen sind der Maßstab für Robustheit und Langlebigkeit in LC-Methoden. Sie wurde speziell so entworfen, dass sie eine herausragende ph-stabilität über den größten ph-bereich ( - ), hohe Effizienzen und symmetrische Peakformen bieten. XBridge Säulenmaterialien (C 8, C 8, Phenyl, Shield RP8, HILIC und Amide) werden von Wissenschaftlern eingesetzt, da sie gleichbleibend genaue Ergebnisse bei Durchführung strengster Assays liefern. Mit ihrer Auswahl von 0 Universal- und anwendungsspezifischen Sorbentien in sehr vielen verschiedenen Partikelgrößen liefert diese HPLC Säulen-Produktfamilie die Werkzeuge, die die größten Herausforderungen in der Chromatographie erforderlich machen. Ganz gleich, ob eine robuste HPLC-Methode, ein nahtloser Transfer von UPLC Methoden oder eine präparative Skalierung zur Isolierung von Produkten benötigt wird Sie können sich auf die Vielseitigkeit der XBridge Säulen verlassen. Si Si Si Si Si CH Si CH Polare Gruppe Si Si CH Si CH Polare Gruppe Si XBridge C 8 C 8 Shield RP8 Phenyl HILIC Si CH Si CH Polare Gruppe CH Si CH Polare Gruppe Si Si Ligandentyp Trifunktionell, C 8 Si Trifunktionell, C 8 Monofunktionell, eingebettete polare Gruppe Trifunktionell, Phenyl-Hexyl Ungebundenes BEH-Partikel Ligandendichte*, µmol/m, µmol/m, µmol/m,0 µmol/m Entfällt Kohlenstoffgehalt* 8 7 unbonded Endcapping Firmeneigene Technik Firmeneigene Technik TMS Firmeneigene Technik Entfällt USP-Klassifizierung L L7 L L L ph-bereich Höchsttemp, niedriger ph- Bereich 80 C 0 C 0 C 80 C C Höchsttemp, hoher ph-bereich 0 C 0 C C 0 C C Porengröße* 0 Å 0 Å 0 Å 0 Å 0 Å berfläche* 8 m /g 8 m /g 8 m /g 8 m /g 8 m /g Partikelgröße,,,,, 0 µm,,,,, 0 µm,,,,, 0 µm,,,, µm,,,, µm * Voraussichtliche oder geschätzte Werte.

5 Auf BEH-Technologie basierend Mit Hilfe der Ethylene-Bridged-Hybrid (BEH)Technologie werden Partikel synthetisiert, die eine herausragende Leistung und eine lange Lebensdauer der Säule unter rauen Betriebsbedingungen gewährleisten. Die Partikel werden aus zwei hochreinen Monomeren hergestellt Tetraethoxysilan [TES] und Bis(triethoxysilyl)ethan [BTEE] und beziehen daraus ihre hohe Stabilität, ph Resistenz und mechanische Festigkeit. BEH-Technologie: Partikelsynthese Et CH CH E t Et Si Si Si Et Et Si Si Et Si Et Et n Polyethoxysilan (BPES) Et Si Et Et Et + Tetraethoxysilan (T ES) Et Et Si Et Et CH Si Et CH Et Bis(triethoxysilyl)ethan (BTEE) * US-Patente,8,0; 7,,7; 7,0, CH C H 9 Si Linker NH Si Si Si Si CH CH CH C H 9 Si Amide BEH0 C 8 BEH00 C 8 BEH00 C BEH C 8 Si Si Si Amide Peptide Separation Technology Trifunktionell, C 8 CH Si CH Polare Gruppe Si Peptide Separation Technology Trifunktionell, C 8 Protein Separation Technology Monofunktionell, C ligonucleotide Separation Technology Trifunktionell, C 8 7, µmol/m, µmol/m, µmol/m, µmol/m, µmol/m Nein Firmeneigene Technik Firmeneigene Technik Nein Firmeneigene Technik - L L L L CH Si CH Polare Gruppe Si CH Si CH Polare Gruppe Si 90 C 80 C 80 C 80 C 80 C 90 C 0 C 0 C 0 C 0 C 0 Å 0 Å 00 Å 00 Å 0 Å 8 m /g 8 m /g 90 m /g 90 m /g 8 m /g,,, µm,,, 0 µm,,, 0 µm, µm, µm

6 Maximierung der Effizienz und Lebensdauer der Säule Bei der Entwicklung des BEH-Partikels war einer der wichtigsten Parameter die deutliche Verbesserung der Chromatographieleistung des Grundpartikels. Die Ursprünge der Bandenverbreiterung, die die Trenneffizienz mindert, werden durch die van-deemter-gleichung beschrieben. Der c-term in der van-deemter-gleichung beschreibt die Massentransfercharakteristika eines Analyts bei dessen Wechselwirkung mit der Innenfläche der stationären Phase. Modernste Phasen auf Silikabasis demonstrieren einen hervorragenden Massentransfer; sie sind allerdings auf einen sehr kleinen Bereich von Chromatographiebedingungen beschränkt. Ein Vergleich von Silika mit dem BEH-Partikel offenbart, dass Hybridmaterialien ihre Effizienz beibehalten, während gleichzeitig der Bereich der anwendbaren Chromatographiebedingungen erweitert wird. Vergleich anhand einer van-deemter-kurve h Anwendung von N / Ht 0 8 Reduzierte Terme des van-deemter-plots a b c r XBridge C 8 µm,0 8,7 0,0 0,998 Symmetry C 8 µm 0,7 0, 0,0 0,999 SunFire C 8 µm 0,9, 0,00 0,997 Verbindung: Decanophenon Mobile Phase: Acetonitril:Wasser (70:0) Temperatur: 0 C Die reduzierte Bodenhöhe, h, ist eine Funktion der reduzierten Lineargeschwindigkeit, v (beide auf die Partikelgröße normiert), und a, b und c fassen die Beiträge der Eddy-Diffusion, der Längsdiffusion bzw. der Summe der Massentransferterme der stationären Phase und der mobilen Phase zusammen. h = a + b/u + cu u [u i d p /D m ] KNTRLLIERTES BNDING ZUR VERBESSERUNG DER PEAKFRM Die in der Synthese von BEH-Partikeln entstehende Ethylenbrücke spielt bei der Verbesserung der Form der Chromatographiepeaks eine entscheidende Rolle. Diese Brücke verbindet benachbarte Silanole und erhöht nicht nur die Partikelstabilität, sondern verringert auch die Anzahl freier Silanolstellen, um nachteilige Wechselwirkungen mit der injizierten Probe zu minimieren. Herkömmliche Methoden, wie übermäßiges Endcapping, sind auf die sterische Hinderung des Endcapping-Agens und des gebundenen Liganden an der aktiven Stelle beschränkt. Infolgedessen können freie Silanolstellen freigelegt werden, was zu breiten Chromatographiepeaks führt, die zudem Tailing-Merkmale aufweisen. Die Ethylenbrücke verringert die Anzahl freier Silanole und sorgt dadurch für ein sterisch günstiges Verhältnis beim Bonding und Endcapping des Liganden. Durch Steuerung dieses Prozesses sowie anderen Faktoren können XBridge Säulen eine unübertroffene Leistung in Bezug auf die Peakform liefern. Hervorragende Peakform Amitriptylin N USP = 900 T USP =,0 Zorbax SB Phenyl XBridge Phenyl Amitriptylin N USP = 90 T USP =, min Vergleichende Trennungen sind möglicherweise nicht für alle Applikationen repräsentativ. XBridge Phenyl-Säulen kombinieren trifunktionelle Anbindung des Phenyl- Hexyl-Liganden mit firmeneigener Endcapping-Technik, um eine branchenweit führende Stabilität und herausragende Peakformen zu erzielen.

7 Stabilität unter extremen ph-bedingungen VERBESSERTE LEISTUNG BEI NIEDRIGEN ph-werten Die Hauptursache einer kurzen Säulenlebensdauer bei Verwendung mobiler Phasen mit niedrigem ph-wert, ist die saure Hydrolyse der gebundenen Phase. XBridge Packungsmaterial wird mit modernsten, firmeneigenen Anbindungs- und Endcapping-Techniken hergestellt, wodurch Ligandenstabilität und Reproduzierbarkeit der Chromatographie bei niedrigen ph-werten erzielt wird. In einem Stresstest mit saurer mobiler Phase treten bei den XBridge C 8 Säulen im Vergleich zu herkömmlichen Materialien Retentionsverluste oder Verschlechterungen der Peakformen nur in geringem Maß auf; dahingegen wird eine hervorragende Säulenlebensdauer erreicht, ohne dass auf eine sterische Hinderung der stationären Phase zurückgegriffen werden muss. Stresstest in saurem Medium Vergleich verschiedener Säulen BEH C 8 (Waters) Zorbax SB-C8 (Agilent) XSelect CSH C 8 (Waters) InertSustain C8 (GL Sciences) DAUERHALTBARKEIT BEI HHEN ph-werten XBridge Säulen sind so konstruiert, dass sie sich im Vergleich mit den auf dem Markt erhältlicher Chromatographiephasen durch höchste ph-stabilität und Leistungsfähigkeit auszeichnen. Andere Produkte, die eine hohe ph-resistenz aufgrund von speziellen berflächenmodifikationen für sich beanspruchen, können sich in Bezug auf die Lebensdauer nicht mit den XBridge HPLC-Säulen messen. Diese branchenweit führende Stabilität wird durch die Kombination des BEH-Partikelsynthese-Prozesses mit fortschrittlichen Anbindungs- und Endcapping-Technologien erzielt. In einem Stresstest bei ph 0 zeigt ein direkter Vergleich mit einigen der gängigsten Chromatographiephasen, die nach eigenen Angaben verbesserter Stabilität bei hohen ph-werten aufweisen deutlich, dass die Lebensdauer von XBridge C 8 -Säulen die der nächstbesten Säule um mehr als 00 übersteigt, wobei die Chromatographieleistung in nur sehr geringem Maße abnimmt. Stresstest im hohen ph-bereich Vergleich verschiedener Säulen SunFire C 8 (Waters) Poroshell EC- C8 (Agilent) Accucore C8 (Thermo Scientific) 00 Luna C8 () (Phenomenex) YMC-Triart C8 (YMC) Kinetex,7 µm C8 (Phenomenex) Halo C8 (AMT) Gemini NX- C8 (Phenomenex) Retentionsverlust von Methylparaben Vergleichende Trennungen sind möglicherweise nicht für alle Applikationen repräsentativ. XBridge Packungsmaterialien werden mit modernsten Anbindungs- und Vergleichende Endcapping-Techniken Trennungen sind möglicherweise nicht für alle Applikationen repräsentativ. hergestellt, um Säulen herstellen zu können, die im Vergleich zu herkömmlich produzierten Säulen bei Verwendung saurer mobiler Phasen deutlich stabiler sind. des anfänglichen Retentionsfaktors PTIMALE NUTZUNG VN PHSPHATPUFFERN Stunden in der mobilen Testphase XBridge C 8 (0 mm TEA ph 0) XBridge C 8 (0 mm Ammoniumbicarbonat, ph 0) Phosphatpuffer besitzen eine ausgezeichnete UV Transparenz, gute Pufferkapazität bei mehreren pka Werten und führen zu einzigartigen Selektivitäten. Die aggressive chemische Beschaffenheit des Phosphats führt aber bei herkömmlichen Silikasäulen oftmals zu stark verkürzten Säulenlebensdauern. XBridge Säulen erzielen hervorragende Leistungen mit Phosphatpuffern über den gesamten ph-bereich dank der Nutzung fortschrittlicher Anbindungs- und Endcapping-Technologien (Säurestabilität) und der chemischen Resistenz (Basenstabilität) der BEH Partikel-Technologie. XSelect CSH C 8 (0 mm TEA ph 0) XSelect CSH C 8 (0 mm Ammoniumbicarbonat, ph 0) XTerra MS C InertSustain 8 (0 mm TEA ph 0) C8 (0 mm Ammoniumbicarbonat, ph 0) Luna C8 () (0 mm TEA ph 0) YMC-Triart C8 (0 mm Ammoniumbicarbonat, ph 0) Capcell Pak C8 MG III (0 mm TEA ph 0) TEA-Marker = Acenaphthen YMC-Pack Pro C8 (0 mm TEA ph 0) Ammoniumbicarbonat-Marker = Butylparaben Vergleichende Trennungen sind möglicherweise nicht für alle Applikationen repräsentativ. XBridge Säulen sind bei Verwendung mit mobilen Phasen mit hohen ph-werten gegen eine Auflösung der Basispartikel und eine Hydrolyse der Liganden resistent. Keine andere Säulenproduktfamilie hat bei höherem ph Wert die erweiterte Lebensdauer einer XBridge HPLC-Säule. Weitere Informationen zur BEH-Technologie finden Sie unter der Referenz 70009EN auf 7

8 Flexibilität in der Methodenentwicklung DIE UNIVERSELLE PRDUKTFAMILIE DER HPLC-SÄULEN Die Wahl der am besten geeigneten Säule und der Trennbedingungen kann sich sehr schwierig gestalten. XBridge HPLC-Säulen sind so entworfen, dass bei der Auswahl des Sorbens keine Kompromisse mehr gemacht werden müssen. Darüber hinaus bieten sie die Flexibilität, die zum Betrieb mit einer beliebigen mobilen Phase und beliebigen Temperatur- und ph-bedingungen erforderlich sind, um die gewünschte Trennung zu erzielen. Ein einfacher und effektiver Ansatz für die Entwicklung einer Umkehrphasenmethode besteht aus der Verwendung von XBridge Säulen, zwei mobile Phasen mit unterschiedlichen ph-werten und zwei organische Lösungsmittel. Die Verfügbarkeit von robusten Säulen mit breitem ph Anwendungsbereich kann für eine schnelle Definition der Ausgangsbedingungen einer robusten Methodenentwicklung sorgen. Durch optimierte Ansätze wird Ihr Zeit-, Arbeits- und Kostenaufwand verringert. Empfohlenes Methodenscreening unter Angabe von Säulenphase, ph-wert und organischen Modifiern C 8 XBridge, niedriger ph-wert, in Methanol Shield RP8, , ,9 C 8 XBridge, hoher ph-wert, in Methanol Shield RP , , Durch systematisches Screening der Standardbedingungen kann ein Wissenschaftler im Chromatographielabor schnell den besten Ausgangspunkt für eine weitere ptimierung der Methode bestimmen. Dank der Ergebnisse dieser Matrix brauchen Sie keine Mutmaßungen mehr anstellen und können die Produkivität Ihrer Methodenentwicklung maximieren. Phenyl 0 7,8 9 Phenyl min min XBridge, niedriger ph-wert, in Acetonitril XBridge, hoher ph-wert, in Acetonitril C ,0 C Shield RP Shield RP Phenyl, Phenyl, min min 8

9 VRTEILE EINES GRÖSSEREN ph-bereichs ZUR STEIGERUNG DER SELEKTIVITÄT Systematische Änderungen über einen größeren ph-bereich der mobilen Phasen ermöglichen eine bessere Kontrolle der Analytenretention und Selektivität. Um eine optimale Retention zu erzielen, sollte der ionisierbare Analyt in seiner neutralen Form vorliegen; so wird z. B. eine saure Verbindung die maximale Retention in saurer mobiler Phase ergeben. Wenn der ph-wert der mobilen Phase ansteigt, nimmt die Retention der sauren Verbindung ab. Das Gegenteil gilt für die Retention einer basischen Verbindung. Mobile Phasen mit hohen ph-werten werden die höchste Retention ergeben, während saure mobiler Phasen am wenigsten retardiert. Für neutrale Komponenten hat der ph-wert der mobilen Phase hat nur eine geringe Auswirkung. Säule: XBridge C 8,, x 00 mm,, µm Mobile Phase A: 0 mm Kaliumphosphatpuffer (ph, 7, ) Mobile Phase B: Acetonitril Flussrate:, ml/min Gradient: Zeit Profil (min) A B 0, , , Gerät: Alliance 9 mit 99 PDA Verbindungen:. Doxylamin. Benzamid. Hydroxyisophthalsäure. Doxepin. Flavon. Fenoprofen ph ph 7 ph min Das Besondere der XBridge Säulen ist ihre Stabilität bei diesen aggressiven Bedingungen (sogar bei ph ), die Ihnen absolute Flexibilität bei der Methodenentwicklung lässt. Gleichzeitig zeigen sie extrem hohe Effizienzen ähnlich wie Silikasäulen. IDEALE SÄULEN FÜR LC/MS Bei Trennungen in der Bioanalytik mit der höchsten Empfindlichkeit bauen Wissenschaftler auf Geräte für die Massenspektrometrie (MS) zur Erzielung der für diese Assays erforderlichen niedrigen Nachweisgrenzen. Bei geringen Konzentrationen des Analyts ist die Nachweismethode sehr viel empfänglicher für nachteilige Säulenwechselwirkungen wie Ligandenbluten und Partikelablösung, die beide die MS-Signale stören. Die BEH Technology der XBridge Säulen sorgt durch erhöhte Hydrolysestabilität und Partikelstabilität dafür, dass bei LC/MS praktisch kein Bluten mehr auftritt. Das folgende Beispiel zeigt die chromatographischen Ergebnisse einer Analyse von Neurotransmittern in einer Plasmaprobe. Dabei ist zu beachten, dass die Signalintegrität bei sowohl HILIC- als auch Umkehrphasenbedingungen ohne Unterdrückung von MS-Signalen aufrechterhalten wird. 00 XBridge C 8 XP 0 0,00 0, 0,0 0,7,00,,0,7,00,,0,7 min 00 XBridge Amide XP Methodenbedingungen (RP-Analyse) Säule: XBridge C 8 XP,, x 7 mm,, µm Artikelnummer: Mobile Phase A: 0, Ameisensäure in Wasser Mobile Phase B: 0, Ameisensäure in Acetonitril Flussrate: 0, ml/min Gradient: Zeit Profil (min) A B Start , 00 70,0 70 0, 00 0, Injektionsvolumen: µl Probendiluent: Wasser:Acetonitril (0:0) mit 0, Ameisensäure Säulentemp,: 0 C Methodenbedingungen (HILIC-Analyse) Säule: XBridge Amide XP,, x 7 mm,, µm Artikelnummer: Mobile Phase A: 0 mm Ammoniumformiat, ph,0 Mobile Phase B: Acetonitril:Wasser (9:) mit 0 mm Ammoniumformiat, ph,0 Flussrate: 0, ml/min Gradient: Zeit Profil (min) A B Start 0 00, 0 70, 0 00, Injektionsvolumen: µl Säulentemp,: 0 C H H H NH H H NH H H N NH 0 0, 0,0 0,7,00,,0,7,00,,0,7 min ) Norepinephrin ) Dopamin ) Serotonin 9

10 XBridge HILIC ERGÄNZENDE SELEKTIVITÄT FÜR DIE METHDENENTWICKLUNG VERSTÄRKTE RETENTIN PLARER BASEN Ein effektiver Ansatz der Methodenentwicklung ist der Einsatz sowohl einer XBridge HILIC-Säule als auch einer XBridge Reversed Phase Säule, um die Analytenselektivität und die Kapazität zu prüfen. In manchen Fällen werden die Ergebnisse dieses Ansatzes eine Umkehrung der Elutionsreihenfolge oder eine verbesserte Kapazität offenbaren, was für die Entwicklung von Methoden zur Trennung polarer Analyte von Vorteil sein kann. Die Retentionsmechanismen der HILIC sind eine komplexe Mischung aus Verteilungs- und Ionenaustauschmechanismen und Wasserstoffbrückenbindungen, die zur verstärkten Retention polarer Analyte führen. Bei Verwendung einer polaren stationären Phase in Kombination mit mobilen Phasen aus Acetonitrilkonzentrationen wird eine Retention von mehr als 80 erzielt. H N + Verbindungen:. -Acetylmorphin. Morphin. Morphin--β-glucuronid Cholin XBridge C 8 Reversed-Phase Retentionsfaktor = 0 XBridge C 8 Reversed-Phase V 0 = 0, min V 0 = 0, min XBridge HILIC Retentionsfaktor =,8 XBridge HILIC 0, 0, 0, 0,8,0,,,,8,0 min 0 min XBridge HILIC-Säulen bietet im Vergleich zu Umkehrphasen-HPLC-Säulen eine orthogonale Selektivität. Wie hier zu erkennen ist, werden die polaren Metaboliten von Morphin unter HILIC-Bedingungen (im Vergleich zu einer Umkehrphasentrennung) länger retardiert. XBridge HILIC-Säulen ermöglichen die Retention polarer Verbindungen, die mit einer herkömmlichen Umkehrphasenmethode zu schwach retardiert werden. 0 ERHÖHTE EMPFINDLICHKEIT IN DER MASSENSPEKTRMETRIE Die Anwendung der HILIC hat in letzter Zeit an Bedeutung gewonnen, vor allem durch den weit verbreiteten Einsatz der Massenspektrometrie als Detektionsmethode und die Notwendigkeit zur Verbesserung der Sensitivität zur Quantifizierung polarer Analyte. Im Unterschied zu Umkehrphasenmethoden, in denen zur Retention polarer Verbindungen mobile Phasen mit hohem Wasseranteil eingesetzt werden, wird bei HILIC-Methoden eine mobile Phase mit hohem Acetonitrilanteil verwendet. Diese stark organische Phase erleichtert die Desolvatisierung, so dass die Ionisierungseffizienz und das Signal in der Massenspektrometrie erhöht werden. Weitere Informationen zur hydrophilen Interaktionschromatographie finden Sie unter der Referenz 700 auf Intensität,0 x 0 7,0 x 0 7,0 x 0 7 Intensität,0 x 0 7,0 x 0 7,0 x 0 7 0, x Signal 8, x Signal N + N + H. Acetylcholin. Cholin XBridge C 8 Reversed-Phase XBridge HILIC 0,,0,0 min XBridge HILIC liefert stärkere Signale im Massenspektrometer und führt damit zu niedrigeren Nachweisgrenzen.

11 XBridge Amide XBridge Amide-Säulen arbeiten mit einer chemisch stabilen, trifunktionell gebundenen Amidphase, was bei HILIC-Trennungen neue Möglichkeiten in Bezug auf Stabilität und Vielseitigkeit eröffnet. Neben der verstärkten Retention stark polarer Verbindungen sind XBridge Amide-Säulen ebenso gut für die Analyse von Zuckern (Sacchariden) geeignet. Dabei erschließen sich u. a. die folgenden Vorteile: Partikelgröße von, μm für eine hochauflösende, extrem schnelle Analyse von Kohlenhydraten in komplexen Probenmatrices bei Bewahrung oder Verbesserung der chromatographischen Auflösung. Erhöhte chemische Stabilität bei Bedingungen mit hohen ph- Werten und Temperaturen zur Spaltung von Anomeren ohne Verlust von reduzierenden Zuckern. Hervorragende Säulenlebensdauern und Methodenrobustheit dank der Kombination einer trifunktionell gebundenen Amidphase mit der BEH-Technologie. Verbesserte Quantifizierungsgenauigkeit, da XBridge Amide- Säulen (im Gegensatz zu Säulen auf Aminbasis) nicht für die Bildung von Schiff-Basen anfällig sind. Als Waters 00 mit der Entwicklung von HILIC-Phasen begann, hatten alle Sorbentien ein Merkmal gemein: ungebundene Partikel. Der Haupttrennmechanismus für ungebundene HILIC-Phasen wird von einem Austausch schwacher Ionen bestimmt, wobei einige als sekundäre Wechselwirkung eingestuft werden. Dadurch wird die Retention basischer Analyte begünstigt und gefördert. Bei einer stark polaren Verbindung, die sauer oder neutral ist oder keine bedeutende positive Ladung aufweist, kann eine ungebundene HILIC-Säule jedoch nicht für die gewünschte Retention sorgen. Der Mangel an gebundenen Phasen für HILIC-Trennungen hat Waters dazu veranlasst, die Amidphase so zu entwickeln, dass eine verstärkte Retention saurer und neutraler Verbindungen erzielt wird. Trennung von wasserlöslichen Vitaminen Säule: XBridge Amide,, x 0 mm,, μm Artikelnummer: Mobile Phase A: Acetonitril:Wasser (0:0) mit 0 mm Ammoniumacetat, ph 9,0 Mobile Phase B: Acetonitril:Wasser (90:0) mit 0 mm Ammoniumacetat, ph 9,0 Flussrate:, ml/min Gradient: Zeit Profil (min) A B 0,0 0, 99,9,0 70 0, 0, 99,9,0 0, 99,9 AU 0, 0,0 0, 0,0 0, 0,0 0, 0,0 0,0 0,00 Injektionsvolumen: 0 µl Probendiluent: Acetonitril:Methanol (7:) mit 0, Ameisensäure Säulentemp.: 0 C Nadelwaschlösung: Acetonitril:Wasser (9:) Kolbenhinterspülung: Acetonitril:Wasser (0:0) Detektion: UV bei nm Abtastrate: 0 Punkte/s Filterzeitkonstante: 0, Gerät: Alliance mit 998 PDA , 8 0 min Verbindungen:. Nikotinamid ( µg/ml). Pyridoxal (0 µg/ml). Riboflavin ( µg/ml). Nikotinsäure (0 µg/ml). Thiamin (0 µg/ml). Ascorbinsäure ( µg/ml) 7. B (0 µg/ml) 8. Folsäure (0 µg/ml) Stark polare Verbindungen, wie wasserlösliche Vitamine, können mit einer XBridge Amide-HPLC-Säule leicht retardiert und getrennt werden. Die mobile Phase mit hohem ph-wert ionisiert die sauren Verbindungen und sorgt damit für mehr Wechselwirkungen zwischen dem Amidliganden und dem Analyt. 7 8 ZUCK ERANALYSE Die Kombination von mobilen Phasen mit hohen ph-werten mit der XBridge Amide-Phase ermöglicht Analysen von Kohlenhydraten unter Anwendung von negativer Elektrospray-Ionisierung (ESI), wobei die Empfindlichkeit im Vergleich zum Nachweis durch Verdampfungslichtstreuung (ELS) oder über den Brechungsindex (RI) Mal höher ist. Es ist keine Metallzugabe, Derivatisierung oder Nachsäulenzugabe erforderlich. Diese Vorteile können bei sauren ph- Werten nicht erzielt werden. Säule: XBridge Amide,, x 0 mm,, μm Artikelnummer: Mobile Phase A: Acetonitril:Wasser (80:0) mit 0, Triethylamin (TEA) Mobile Phase B: Acetonitril:Wasser (0:70) mit 0, Triethylamin (TEA) Flussrate:,0 ml/min Flussprofil: 90 A/0 B (7 Acetonitril mit 0, TEA) Injektionsvolumen: µl Probenkonzentration: je mg/ml Säulentemp.: C Gerät: Alliance mit ELSD LSU LSU LSU 000,0 0,0 000,00 0,00 000,0 0,0 Verbindungen:. p-toluamid. Fruktose. Glukose. Saccharose. Maltose. Laktose Erdbeersmoothie Rosinenbrötchen Weißbrot LSU 000,0 0,0 Lammcurry LSU 000,0 Lebensmittelzuckerstandard mg/ml 0, min

12 SKALIERBARKEIT UPLC-Technologie Die BEH-Technologie ist eines der Kernelemente für UPLC-Trennungen Das ACQUITY UPLC BEH-Säulen und XBridge HPLC-Säulen Design basiert auf dem gemeinsamen, skalierbaren Basispartikel. Die mechanische Festigkeit und Partikelintegrität von stationären BEH-Phasen liefert Säulen, die für nahtlose Transfers zwischen UPLC- und analytischen sowie präparativen HPLC-Trennungen geeignet sind. Chromatographieanwender können unter einer großen Anzahl von Partikelgrößen wählen (d. h.,7,,,,, und 0 µm) und dabei die Wirksamkeit ihrer Methode beibehalten. 0,09 0,08 0,07 Galantamin HPLC-Analyse auf einem Alliance HPLC-System XBridge C 8 -Säule,, x 00 mm,, µm Flussrate:, ml/min Galantamin, Prüfung auf verwandte Substanzen Name RT Auflösung (USP) RT- Verhältnis Peak 0,7 8,97 0, 0,0 Peak,78, 0,88 AU 0,0 0,0 Galantamin,08 7, Peak 8, 7,,0 Peak,87,07,0-0,0 0,0 0,0 0, min 0,09 0,08 0,07 0,0 Galantamin HPLC-Analyse auf einem ACQUITY UPLC H-Class System XBridge C 8 -Säule,, x 00 mm,, µm Flussrate:, ml/min Direkttransfer von Methoden RT- Name RT Auflösung (USP) Verhältnis Peak 9,, 0,0 Peak, 9,08 0,80 AU 0,0 0,0 0,0 Galantamin,70 8,7 Peak 8,87 8,,8 Peak,00 9,8,99-0,0 0,0 0, min AU 0,09 0,08 0,07 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00 Galantamin UPLC-Analyse auf einem ACQUITY UPLC H-Class System ACQUITY UPLC BEH C 8 -Säule,, x 0 mm,,7 µm Flussrate: 0, ml/min Injektionsvolumen:, µl Skalierte Methode Name RT Auflösung (USP) min RT- Verhältnis Peak,99, 0,7 Peak,0,8 0,79 Galantamin,7 9,9 Peak,80 7,, Peak 8,00 9,,9 - Übertragen Sie Methoden mit XBridge HPLC- und ACQUITY UPLC BEH-Säulen nahtlos von HPLC auf UPLC.

13 XBRIDGE XP.,-µm-Säulen Die Verfügbarkeit mehrerer Partikelgrößen und Abmessungen ermöglicht die ptimierung der Gesamtzyklusdauer ohne Beeinträchtigung der Auflösung. Methoden können leicht von HPLC auf UPLC und von UPLC auf HPLC übertragen werden. XBridge extended Performance [XP], µm Säulen bieten eine herausragende Trennleistung und Robustheit sowie einen hohen Durchsatz bei HPLC-Assays und sind mit allen HPLC-, UHPLC- und UPLC-Technologieplattformen voll kompatibel. Steigern Sie Ihre derzeitige HPLC-Produktivität um das - bis -fache dank unübertroffener Selektivität und Flexibilität: Direkt skalierbar auf,7-μm-acquity UPLC BEH-Säulen und größere,/-μm-xbridge HPLC-Säulen Kann höheren Drücken von 9000 psi (ID von, mm) und 8000 psi (ID von, und,0 mm) standhalten Auswahl von Säulenlängen (0, 0, 7 und 00 mm) für ein korrektes Gleichgewicht zwischen Auflösung und Durchsatz Hoher Durchsatz. Niedrigerer Rückdruck. Gesteigerte Produktivität. 0,0 0,00 0,0 XBridge C 8, x 0 mm, µm Alliance 9 HPLC XBridge C 8 XP, x 7 mm,, µm ACQUITY UPLC H-Class,,0,9 0 min Steigern Sie mit XP,-µm-Säulen die Produktivität Ihres HPLC-Systems. Im Gegensatz zu Core-Shell-Säulen können auf extended Performance,-µm-Säulen entwickelte Methoden skaliert und auf größere,- und -µm-hplc-säulen oder kleinere Sub--µm-UPLC- Säulen übertragen werden, so dass Flexibilität und Einheitlichkeit der Methoden zwischen Labors erreicht werden. 0,00,0,97,7 0 min 0,0 ACQUITY UPLC BEH C 8, x 0 mm,,7 µm ACQUITY UPLC I-Class 0,00,9,8 0,00 0,87,7,8, min Weitere Informationen zu XP Säulen finden Sie unter der Referenz 70009EN auf NAHTLSER TRANSFER VN HPLC-METHDEN AUF UPLC MIT DEM ACQUITY UPLC CLUMNS CALCULATR Der ACQUITY UPLC Columns Calculator, der für alle ACQUITY UPLC- Systeme zur Verfügung steht, macht Schluss mit Mutmaßungen beim Methodentransfer auf Basis des Gradienten, der Säulenabmessungen und der Partikelgröße.

14 Ein Partikel für die präparative Chromatographie Präparative XBridge HPLC-Säulen enthalten dieselben Packungsmaterialien, die für UPLC- und analytische HPLC-Phasen erhältlich sind, um Wissenschaftlern die ideale Säulenproduktfamilie für die schnelle Durchführung von Screening und Entwicklung präparativer Methoden mit hoher Beladung zur Verfügung zu stellen. Für diese Wissenschaftler sind präparative XBridge-Säulen die erste Wahl als eine hoch effiziente, ph-stabile Säule mit niedrigen Rückdrücken und außerordentlich langen Säulenlebensdauern. Das Design präparativer XBridge Säulen umfasst: - und 0-µm-BEH-Partikel, die höchste Beladbarkeit mit niedrigsten Rückdruck bereitstellen Die BD Säulenstabilität gewährleistet eine hohe Säulenlebensdauer und verhindert den Kollaps des Säulenbettes Verbesserter Massentransfer, der eine Partikeleffizienz von analytischen,7-µm- bis präparativen 0-µm-Packungsmaterialien aufrechterhält. Der Faktor ph-wert bei Isolierung und Aufreinigung XBridge Prep C 8 BD, 9 x 0 mm Saure mobile Phase (ph,) Beladungsmenge:, mg Säule: XBridge Prep C8 BD, 9 x 00 mm, µm Mobile Phase A: Niedriger ph-wert (0, TFA (ph,)) Hoher ph-wert (0 mm Ammoniumbicarbonat (ph 0)) Mobile Phase B: Acetonitril Gradient: B auf 00 B in 0 Minuten Detektion: UV bei 0 nm min XBridge Prep C 8 BD, 9 x 0 mm Alkalische mobile Phase (ph 0) Beladungsmenge: 0 mg Cl N N Cl Cl Cl Cl N N Cl Cl. Econazol. Miconazol min Die Säulenbeladungsmenge basischer Verbindungen kann oftmals durch Verwendung von mobilen Phasen mit hohen ph-werten erhöht werden. Wie dieses Beispiel zeigt, werden bei herkömmlichen Methoden mit sauren mobilen Phasen Ionenpaarreagenzien verwendet, die im Vergleich zu derselben Methode mit einer mobilen Phase mit hohem ph-wert eine geringere Beladung, Retention und Auflösung erzielen.

15 BD-TECHNLGIE EIN NEUES NIVEAU DER SKALIERBARKEIT PRÄPARATIVER SÄULEN Nach vielen Jahren der Forschung im Bereich der Packung von präparativen Säulen hat Waters das ptimum-bed- Density-Design (BD) für präparative Säulen* entwickelt, durch das die Säulenlebensdauer und Packungsbettstabilität effektiv verbessert werden konnte. Das BD-Format hat die Industrie durch die Bereitstellung präparativer Säulen mit optimaler Stabilität, Effizienz und Reproduzierbarkeit revolutioniert. Die Kombination der robusten XBridge Packungsmaterialien mit dem BD-Säulendesign bringt die Leistung präparativer Säulen auf ein neues Niveau und garantiert direkte Skalierbarkeit, maximale Effizienz und längstmögliche Säulenlebensdauer. Direkte Skalierbarkeit Ergebnis eines analytischen Screenings ACQUITY UPLC BEH C 8, x 0 mm,,7 µm * 0,0 0,,0,,0,,0,,0,,0 min Zur Bewahrung der Auflösung skalierte präparative Methode XBridge Prep C 8 BD 9 x 0 mm, µm * 0,00,00 0,00,00 0,00,00 0,00,00 0,00, min UPLC-Methode Gradient: Zeit A B 0,0 9,0 8,0 0 0,0 0 90, 9 0,0 9 Flussrate: 0,8 ml/min Injektionsvolumen: µl Direkt skalierte präparative Methode Gradient: Zeit A B 0,0 9 0,9 9 9,7 8, 0 0, , 9 88, 9 Flussrate:, ml/min Injektionsvolumen: 7 µl Säulen: ACQUITY UPLC BEH C8,, x 0 mm,,7 µm (Artikelnummer: 8000) XBridge Prep BD C 8, 9 x 0 mm, µm (Artikelnummer: ) Mobile Phase A: 0 mm Ammoniumbicarbonat, ph 0 Mobile Phase B: Acetonitril Gradienten: Wie in den Chromatogrammen angegeben Probenkonzentration:,0 mg/ml Abbauprobe Detektion: UV bei nm Gerät: ACQUITY UPLC mit ACQUITY UPLC PDA, AutoPurification mit 99 PDA und ZQ Skalierung und ptimierung präparativer Trennungen mit XBridge Preparative BD-Säulen. Dieses Beispiel der Isolierung eines Abbauprodukts von Ranitidin (API) (Abbauprodukt blau hervorgehoben) zeigt, dass durch Aufrechterhalten des Verhältnisses von Säulenlänge zu Partikelgröße (L/dp) die Trennung geometrisch skaliert werden kann, um eine hohe Probenbeladung ohne Auflösungsverlust zu erzielen. Weitere Informationen zur BD-Technologie finden Sie unter der Referenz EN auf * GB-Patent Nr. GB089, US-Patent Nr. 7,99,0 BD-SÄULENDESIGN Die Prep BD-Säule wurde so konzipiert, dass zwei speziell entworfene Verteiler und chemisch resistente Dichtungen Leckagen bei hohen Betriebsdrücken verhindern. Explosionsdarstellung der Bestandteile einer leeren BD-Säule.

16 Peptide Separation Technology Peptide Separation Technology (PST) Säulen von Waters werden eigens auf Ihre Qualität mit einer Peptid-Map geprüft, um stabile Methoden zur Peptidtrennung und ein vorhersagbares Verhalten mit der Vielfalt von Proben sicherzustellen, die in Proteomforschung, Proteincharakterisierung und Peptidsynthese vorkommen. Die mit Porengrößen von 0 Å oder 00 Å und Partikelgrößen von,7 µm bis 0 µm erhältlichen XBridge PST-Säulen zeichnen sich durch Folgendes aus: Schmale, symmetrische Peaks für höchste Auflösung Ausgezeichnete Trennung einer Vielzahl verschiedenster Peptide Hervorragende Peakform und Retention in mobilen Phasen aus Ameisensäure und Trifluoressigsäure für eine optimale Chromatographie Nahtlosen Methodentransfer von der Sub--µm-UPLC-Technologie zu präparativen 0-µm-HPLC-Trennungen. Peptid-Mapping in höherer Auflösung 0,0 0, 0,0 0, 0,0 T T Säule: XBridge BEH0 C 8,, x 0 mm,, µm Mobile Phase A: 0,0 TFA in Wasser Mobile Phase B: 0,0 TFA in Acetonitril Gradient: 0 auf B in 9 Minuten; auf B in 0 Minuten Flussrate: 0,9 ml/min Säulentemp.: C Detektion: UV bei nm AU 0, 0,0 0, 0,0 0, 0,0 0,0 T TT T T T9T0 T0 T9C T8 T T9 TT Verbindungen: T N-AcGDVEK T-T KYIPGTK T YIPGTK T IFVQK T9-T0 KTGQAPGFSYTDANK T0 TGQAPGFSYTDANK T9C EDLIAY T8 TGPNLHGLFGR T MIFAGIK T CAQCHTVEK (Häm angelagert) T9 EDLIAYLK T-T GITWGEETLMEYLENPKK T GITWGEETLMEYLENPK 0, min Bei der Wahl einer für ein Peptid-Mapping geeigneten Säule sind Retentionszeit und Methodenreproduzierbarkeit wichtige Kriterien. Alle XBridge PST C 8 Säulen werden einem strengen QC-Test mit einer Probe eines Trypsinverdaus aus Bovin Cytochrom c unterzogen. Dadurch wird sichergestellt, dass die Säulen Peptidtrennungen ermöglichen, die ein großes hydrophobes Spektrum und einen weiten Bereich isoelektrischer Punkte umfassen. Weitere Informationen zu Säulen für die Trennung von Biomolekülen finden Sie unter der Referenz 70008EN auf

17 ligonucleotide Separation Technology Säulen mit der ligonucleotide Separation Technology (ST) sind mit sowohl,7-µm-uplc- als auch,-µm-hplc-partikeln erhältlich, um Flexibilität zu gewährleisten, die für die Isolierung und große Vielfalt analytischer Anforderungen erforderlich ist. Die herausragende Auflösung und Säulenlebensdauer werden dabei nicht beeinträchtigt. XBridge ST-Säulen zeichnen sich durch Folgendes aus: Trenneffizienzen gleichwertig oder besser als PAGE, Kapillargelelektrophorese oder Ionenaustausch-HPLC Die Fähigkeit, aufgrund der erhöhten Trennleistung der Sub--µm-Partikel lange ligonukleotidsequenzen aufzutrennen Skalierbare Säulengrößen für Isolierungen im Labormaßstab Außergewöhnlich lange Säulenlebensdauern für geringere Kosten pro Analyse. Herausragende Lebensdauer der XBridge ST-Säule Auftrennung einer detritylierten ligodeoxythymidin-leiter (- bis -mer) Injektion Nr. Injektion Nr. 00 Artikelnummer: 8009 Mobile Phase: A: 0 Methanol/90 (8 mm HFIP +, mm TEA) B: Methanol/7 (8 mm HFIP +, mm TEA) TEA-Säulentemp.: 0 C Gradient: 0 auf 00 B in 0 min (0 - Methanol) Flussrate:,0 ml/min Detektion: UV bei 0 nm, Scans pro Sekunde Gerät: Alliance HPLC Bioseparations e79 mit PDA min min Protein Separation Technology 00Å C -Säulen für die Proteinchromatographie Für die Analyse und Charakterisierung von Proteinproben ist der Nachweis kleiner chemischer Unterschiede zwischen großen Molekülen erforderlich. Proteinanalysen setzen ein Spektrum von chromatographischen Techniken ein, einschließlich Umkehrphasenund Größenausschlusschromatographie (SEC), die für eine jeweils andere Eigenschaft des Proteins empfindlich sind. XBridge BEH00 C -Säulen zeichnen sich durch Folgendes aus: Säule: XBridge BEH00 C,, x 0 mm,, µm Artikelnummer: Mobile Phase A: 0, TFA in Wasser Mobile Phase B: 0,07 TFA in 7,-igem Acetonitril Flussrate: 0, ml/min Gradient: 8 auf 00 B in min Säulentemp.: 0 C Injektionsvolumen: µl Detektion: UV bei 0 nm 0, Probe: MassPREP Proteinstandard (Teilenummer ) 0, TFA in -igem Acetonitril. Ribonuclease A (0,0 mg/ml). Cytochrom c (0,0 mg/ml). Rinderserumalbumin (0,0 mg/ml). Myoglobin (0, mg/ml). Enolase (0, mg/ml). Phosphorylase b (0,9 mg/ml) 0,0 Proteintrennungen auf Basis der Größe, Hydrophobien und isoelektrischen Punkte,-µm-Packung für HPLC-Methoden und,7-µm-packung für UPLC-Methoden Deutliche Verringerung der Proteinverschleppung Qualitätskontrolltests mit einer bekannten Proteinmischung ESI-MS-Kompatibilität zur Proteinidentifizierung. AU 0,0 0,00 8 min XBridge BEH00 C -Säulen können mit Proteinen unterschiedlichster Eigenschaften verwendet werden. Diese Proteinmischung wurde so gewählt, dass sie eine Auswahl von isoelektrischen Punkten, Molekulargewichten und Hydrophobizität repräsentiert. 7

18 Bestellinformationen Analytische XBridge Säulen Abmessungen Typ Partikelgröße Menge C 8 C 8 Shield RP8 Phenyl HILIC Amide,0 x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Vorsäule, µm Stück , x 0 mm IS Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm XP Säule, μm Stück , x 0 mm XP Säule, μm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm XP Säule, µm Stück , x 0 mm XP Säule, µm Stück , x 7 mm Säule, µm Stück , x 7 mm XP Säule, µm Stück , x 7 mm XP Säule, µm Stück , x 00 mm XP Säule, µm Stück , x 00 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Vorsäule, µm Stück ,0 x 0 mm IS Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 0 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 0 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 7 mm Säule, µm Stück ,0 x 7 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 7 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 00 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 00 mm XP Säule, µm Stück , x 0 mm Vorsäule, µm Stück , x 0 mm IS Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm XP Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm XP Säule, µm Stück , x 7 mm Säule, µm Stück , x 7 mm XP Säule, µm Stück , x 00 mm XP Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 00 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Vorsäule, µm Stück , x 0 mm IS Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 00 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Vorsäule, µm Stück ,0 x 0 mm IS Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück ,0 x 00 mm Säule, µm Stück ,0 x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Vorsäule, µm Stück , x 0 mm IS Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 7 mm Säule, µm Stück , x 00 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Säule, µm Stück , x 0 mm Vorsäule µm Stück , x 0 mm IS Säule µm Stück Vorsäulenhalter Universal Sentry,, x 0 mm, Artikelnr: WAT09798, erforderlich Vorsäulenhalter Universal Sentry,,0 x 0 mm/, x 0 mm, Artikelnummer: WAT090, erforderlich 8

19 Analytische XBridge Säulen Abmessungen Typ Partikelgröße Menge C 8 C 8 Shield RP8 Phenyl HILIC Amide, x 0 mm Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück , x 00 mm Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück ,0 x 0 mm Vorsäule µm Stück ,0 x 0 mm IS Säule µm Stück ,0 x 0 mm Säule µm Stück ,0 x 0 mm Säule µm Stück ,0 x 00 mm Säule µm Stück ,0 x 0 mm Säule µm Stück ,0 x 0 mm Säule µm Stück , x 0 mm Vorsäule µm Stück , x 0 mm IS Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück , x 7 mm Säule µm Stück , x 00 mm Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück , x 0 mm Säule µm Stück Vorsäulenhalter Universal Sentry,, x 0 mm, Artikelnr: WAT09798, erforderlich Vorsäulenhalter Universal Sentry,,0 x 0 mm/, x 0 mm, Artikelnr: WAT090, erforderlich Präparative XBridge Säulen Abmessungen Typ Partikelgröße C 8 C 8 Shield RP8 Phenyl HILIC 0 x 0 mm Vorsäule µm x 0 mm Säule µm x 00 mm Säule µm x 0 mm Säule µm x 0 mm Säule µm x 0 mm Vorsäule µm BD 9 x 0 mm Säule µm BD 9 x 00 mm Säule µm BD 9 x 0 mm Säule µm BD 9 x 0 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm BD 0 x 7 mm Säule µm BD 0 x 00 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm BD 0 x 00 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm BD 0 x 0 mm Säule µm x 0 mm Vorsäule 0 µm x 0 mm Säule 0 µm x 0 mm Säule 0 µm x 0 mm Vorsäule 0 µm BD 9 x 0 mm Säule 0 µm BD 9 x 00 mm Säule 0 µm BD 9 x 0 mm Säule 0 µm BD 9 x 0 mm Säule 0 µm BD 0 x 7 mm Säule 0 µm 8007 BD 0 x 00 mm Säule 0 µm BD 0 x 0 mm Säule 0 µm BD 0 x 0 mm Säule 0 µm BD 0 x 0 mm Säule 0 µm BD 0 x 00 mm Säule 0 µm BD 0 x 0 mm Säule 0 µm BD 0 x 0 mm Säule 0 µm Vorsäulenhalter (präparativ), 0 x 0 mm, Artikelnummer: , erforderlich Vorsäulenhalter (präparativ), 9 x 0 mm, Artikelnummer: , erforderlich

20 Kits zur Methodenvalidierung für XBridge Säulen Jedes Kit enthält VanGuard Vorsäule er-packung (Guard Columns) Säulen, die jeweils aus verschiedenen Chargen stammen. Phase Partikelgröße Dimension Teilenr. er-pack XBridge BEH C8, µm, x mm 8009 XBridge BEH Shield RP8, µm, x mm 8009 XBridge BEH C8, µm, x mm 8009 XBridge BEH Phenyl, µm, x mm 8009 XBridge BEH HILIC, µm, x mm 8009, µm, x mm 8009 Abmessungen Partikelgröße C8 C8 Shield RP8 Phenyl, x 00 mm, µm ,0 x 00 mm, µm ,0 x 0 mm, µm , x 00 mm, µm XBridge BEH Amide, x 0 mm, µm , x 0 mm µm ,0 x 00 mm µm ,0 x 0 mm µm , x 00 mm µm , x 0 mm µm , x 0 mm µm LIT ERATURHINW EISE Beschreibung Artikelnummer: Poster der analytischen Säulen 7000EN Technisches Dokument: A Review of Waters Bonded Phase Shield Technology and Its Use in High Performance Liquid Chromatography (HPLC) EN Technisches Dokument: A Review of Waters Hybrid Particle Technology. Part. EthyleneBridged [BEH Technology] Hybrids and T heir Use in Liquid Chromatography 70009EN Beginner s guide to Liquid Chromatography PTIMUM BED DENSITY PREPARATIVE CLUMNS 700 Bridging the Performance Gap from Analytical to Prep Broschüre: Bioseparations and Analyses 70008EN Mass Loading Many factors affect the mass capacity of preparative columns. T he listed capacities represent an average estimate. Approximate Mass Loading Capacity (mg) for Prep BD Columns (Gradient Mode) Diameter (mm) Length (mm) Reasonable Flow Rate (ml/min).. 0 Reasonable Injection Volume (µl) Capacity is: Higher for strongly retained material Higher for simple mixtures Lower where higher resolution is required Very strongly dependent on loading conditions - Limited by loading volume - Limited by diluent solvent strength 0 Comprehensive guide to HILIC 700 ptimum Bed Density (BD) Technisches Dokument: Enabling Technology for LaboratoryScale Isolation and Purification EN a Reasonable injection volumes are based on column diameter at a length of 0 mm with relatively strong solvents. Increased length is compatible with larger injection, but not proportionately so. Weaker solvents significantly increase injection volume. LC CoLumnS designed For SuCCESSFuL method development and method TranSFEr. Formula Buffering Equilibrium 0 mm Concentration Mobile Phase Preparation** ph Adjustment (Acid or Base) CHCNH CHCH CHC g CHCH or NHH Ammonium Acetate pka g CHCH or NHH g HCH or NHH pka* Ammonium Acetate pka CHCNH NH+ NH.-7. NHHC HC HC NHHC NH+ NH NHHC HC- C- NHCH HCH HC Ammonium Formate pka NHCH NH+ NH Triethylammonium Acetate (TEAA) pka (CHCH)N:CHCNH (:) CHCH CHC- Triethylammonium Acetate (TEAA) pka (CHCH)N:CHCNH (:) Triethylammonium Formate (TEAF) pka (CHCH)N:NHCH (:) (CHCH)N:NHCH (:) Triethylammonium Formate (TEAF) pka Acetic Acid (glacial) Ammonium Hydroxide Formic Acid N-Methylpyrrolidine 7000EN Buffer Range Ammonium Bicarbonate pka Ammonium Bicarbonate pka HCH or NHH HCH or NHH 0. g HCH or NHH 0. g HCH or NHH 0.70 ml TEA (99 conc.) (CHCH)N 0.70 ml TEA (99 conc.) X ml (97 conc.) CH9N CH9NH+00 CH9N 0.8 ml (99. conc.) (CHCH)N (CHCH)NH+ (CHCH)N. ml (99 conc.) CFCH Trifluoroacetic acid (TFA) CFCH CF C- 0.7 ml (00 conc.) X ph..0 ph 7 BEH Amide keep the same k loadability values High phadjusted for basicgradient analytestoresults in the best 8.00 ph. Bases. Nordoxepin. Doxepin. Amitriptyline ph., -, X ph 0 ph 0 X X X X Low ph for acidic analytes results in the highest loadability Si CH Si Si (ligonucleotide Separation Tec hnology) (ligonucleotide Separation Technology) Si (Glycan Separation Technology) Si acquity Columns XSelect Columns CSH C8 CSH C8 Si CSH Phenyl-Hexyl CSH Phenyl-Hexyl Si CSH Fluoro-Phenyl CSH Fluoro-Phenyl Si HSS C8 HSS C8 Si C H9 CH BEH Glycan.0 BEH C8-0. BEH C8 BEH00 SEC.X higher loading DMS + 0 mm FA NH H H H H Non-ionic loading of ionizable compound can improve peak shape and increase loading Linker NH. Adjusted gradient to keep the same k values Adjusted gradientph to keep 00 mg/ml Mobile Phase: the same k Econazole 00 00, X 00 X ph ph X higher loading - DMS + 0 mm FA DMS + 0 mm NHH X X Key Scaling 0 mg/ml 00 mg/ml performance 00 Mobile Phase: ph X higher loading DMS + 0 mm FA M = Mass on Column L = Length of Column M = Mass on Column L = Length of Column Flow Rate Proportional to column volume - 00 Limited by solubility in mobile phase.x higher loading L DMS + 0 mm FA DMS + 0 mm NHH M = M x L.00. x.0 d d = Diameter of Column t = Gradient Duration for Column F = Flow Rate for Column d = Diameter of Column t = Gradient Duration for Column F = Flow Rate for Column d.7.00 Gradient Duration Proportional to cross-sectional area for constant linear velocity d L Increased x M =linear M velocity x gives shorter runsl dl df x by flow x and t x restricted t =Ultimately d F L of system pressure limits Injection Volume Slope is change/column volume, not time Resolution is constant with L the samednumber off column volumes x conditions x x initial to final t = tfrom the dsystem F Must include initial hold tolmimic delay, expressed as number of column volumes, observed on small-scale separation Approximately proportional to column volume Approximately proportional to both length and cross-sectional area Most strongly dependent on sample solvent F = F x d F F F F F F F F F HSS C8 SB Si HSS T HSS T Si HSS PFP HSS PFP Si HSS CN HSS CN Si L dd M = MF =x F x x L dd t = t x L L x d d x atlantis Columns particle F F F CN F = F x Si Recommended Method for Measurement d Programmed time =.00 minutes Use Acetonitrile as mobile phase A, and Acetonitrile with 0.0 mg/ml uracil as mobile phase B (eliminates non-additive mixing and viscosity problems)..9 minutes -.00 minutes 0.9 minutes AU 0. Time =.9 minutes System Volume: 0.9 min. x. ml/min. =.0 ml HILIC. Remove column. Flow Rate =. ml/min d 8.00 C8 Si. Set UV detector at nm.. Use the flow rate in the original method and the intended flow rate on the target instrument Sunfire HPLC Columns particle. Collect 00 A baseline for minutes.. Program a step change at minutes to 00 B, and collect data for an additional minutes. Si 7. Measure absorbance difference between 00 A and 00 B. ptimum Bed Density (BD) Preparative Columns Bridging the Performance Gap from Analytical to Prep 9. Calculate time difference between start of step and 0 point. C8 Si 0. Multiply time difference by flow rate. Scale-up can be carried out using the equations shown above Convenient scale-up tools on the Waters Prep Calculator provide: - Mass load scaling - Gradient scaling with appropriate flow rate scale-up and predicting volume consumption - Calculations for split flow ratios for those using mass spectrometer driven chromatography ph range (room Temp.) Temperature Limits Carbon Load particle Size (Spherical) Low ph = 80 C L - High ph = C.7 µm.,., µm Selectivity Features: General purpose alternative selectivity ligand that provides pi-pi interactions with polyaromatic compounds, while maintaining excellent reproducibility at ph extremes. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds. Bonding: Trifunctional C Phenyl ligand, fully end-capped, bonded to a CSH particle substrate. Low ph = 0 C L -8 0 High ph = C.7 µm.,., µm Selectivity Features: General purpose column that provides a very high degree of analyte selectivity, especially when using low-ph mobile phases. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds. Low ph = C L -8 7 High ph = C.8 µm.,., µm Selectivity Features: A general purpose column designed to maximize selectivity differences for Lewis bases through pi-pi interactions. T he rigid aromatic ring provides additional selectivity based on shape, dipole moment and hydrogen bonding interactions. Bonding: Trifunctional pentafluorophenyl ligand, non-endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) substrate. Low ph = C L0-8 High ph = C.8 µm.,., µm Selectivity Features: A general purpose column that shows contrasting analyte selectivity when compared to C8 phases. T his column can be used for both reversed-phase and normal-phase separations. Bonding: Sterically hindered, mono-functional cyano-propyl ligand, non-endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) substrate. usp Class no. ph range (room Temp.) Temperature Limits Carbon Load usp Class no. ph range (room Temp.) Temperature Limits (Spherical) Carbon Load Waters Corporation has been awarded the following registrations and certifications: Waters owns and controls every step of the process, from raw materials to final particle Size (Spherical) Column selection made easy with Waters ipad App. - US Food and Drug Administration registered: cgmp s & Class medical devices Primary Manufacturer of Chromatographic Media To downlaod, go to particle Size Low ph = 0 C L -8 High ph = 0 C.,.,, 0 µm Selectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low ph mobile phases. Ideally suited for purification and impurity profile assays. Bonding: Difunctional C8, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. Low ph = 0 C L7-8 High ph = 0 C.,.,, 0 µm Selectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low ph mobile phases. Less hydrophobic, therefore, less retentive than C8 for most analytes. Bonding: Difunctional C8, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. C8 8. Measure time at 0 of that absorbance difference. Prep Calculator Low ph = 90 C - High ph = 90 C.7 µm Selectivity Features: A HILIC UPLC column (0Å pore size) for the LC and LC/MS analysis of fluorescently labeled glycans. Specifically QC tested with -AB labeled human mab IgG derived glycans. Bonding: Trifunctional amide bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = C L -8 High ph = C,, 0 µm Selectivity Features: Retention of polar compounds, compatible with 00 aqueous mobile phases, superior stability under low ph conditions. Specifically designed for enhanced retention of polar analytes. Bonding: T (C8) bonding and endcapping, bonded to high purity silica substrate. Low ph = C L - unbonded High ph = C, µm Selectivity Features: Excellent for retention of very polar, basic, water soluble analytes. Specifically designed and tested for HILIC separations using mobile phases containing high concentrations of organic solvent. Bonding: Unbonded high purity silica substrate. Low ph = C L -7 High ph = C,, 0 µm Selectivity Features: Retention of polar compounds. Designed for compatibility with 00 aqueous mobile phases. Bonding: Difunctional C8 bonding, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. T d System Volume System volume is important in scaling separations because it creates an isocratic hold at the start of every run. T his hold is often several column volumes on a small scale, but a fraction of the volume of a prep column. Compensation for this volume must be included in planning a scaling experiment to avoid distorting the chromatography. Bonding: Trifunctional amide bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 80 C L - 8 High ph = 0 C.7 µm.,, 0 µm Selectivity Features: ph and temperature stable, small pore (0Å), C8 LC column for peptides. Specifically QC tested with peptide map. Bonding: Trifunctional C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 80 C L - High ph = 0 C.7 µm.,, 0 µm Selectivity Features: ph and temperature stable, wide pore (00Å), C8 LC column for peptides. Specifically QC tested with peptide map. Bonding: Trifunctional C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 80 C L 8 High ph = 0 C.7 µm. µm Selectivity Features: ph and temperature stable, wide pore (00Å), C LC column for proteins. Specifically QC tested with protein mixture. Bonding: Proprietary monofunctional C bonding to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 0 C L -8 High ph = 0 C.7 µm Selectivity Features: A UPLC SEC column (00Å pore size) for proteins from 0,000 to 0,000 daltons. Specifically QC tested with protein standards. Bonding: Diol bonded to a high pore volume Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 0 C L -8 High ph = 0 C.7 µm Selectivity Features: A UPLC SEC column (0Å pore size) for proteins from,000 to 80,000 daltons. Specifically QC tested with protein standards. Bonding: Diol bonded to a high pore volume Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 80 C L - 8 High ph = 0 C.7 µm. µm Selectivity Features: ph and temperature stable, small pore (0Å), C8 LC column for synthetic DNA and RNA. Specifically QC tested with synthetic DNA ladder. Bonding: Trifunctional propyl fluorophenyl ligand, non-endcapped, bonded to a CSH particle substrate. Low ph = C L -8 High ph = C.8 µm.,., µm Selectivity Features: Ultra performance C8 chemistry, increased retention, superior peak shape, resists acid hydrolysis at low ph. Designed for UPLC separations where silica-based C8 selectivities are desired. Bonding: High coverage trifunctional C8, fully endcapped, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate. Low ph = C L -8 8 High ph = C.8 µm.,., µm Selectivity Features: Unique, non-endcapped C8 chemistry designed specifically for method development scientists. ffers unique Selectivity for Bases (SB) when operating under low ph conditions. Bonding: Intermediate coverage trifunctionally bonded C8, no endcapping, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate. Low ph = C L -8 High ph = C.8 µm.,., µm Selectivity Features: Aqueous mobile-phase compatible column designed for exceptional polar compound retention. Bonding: T (C8) bonding and endcapping, bonded to High Strength Silica (HSS) particle substrate.. Mobile Phase: ph 00.. MassSample Load Diluent: DMS Sample Diluent: DMS HSS C8 SB extended X Mobile Phase: ph Sample Diluent: DMS - ph 7 DMS + 0 mm NHH X ph 7 00 Sample Diluent: DMS. Cloxacillin. Dicloxacillin Sample Diluent: DMS ph. (Spherical) Bonding: Trifunctional C8 ligand, fully end-capped, bonded to a CSH particle substrate. 0 mg/ml Mobile Phase: ph Acids 00 Sample Diluent: DMS Mobile Phase: ph. xacillin particle Size Low ph = 80 C L - High ph = C.7 µm.,., µm Selectivity Features: General purpose reversed-phase column that offers excellent ph stability and rapid mobile-phase re-equilibration for method development. Charged Surface Hybrid (CSH) technology enables superior peak shape and increased loading capacity for basic compounds. 00 Bases. Nordoxepin. Doxepin. Amitriptyline ph. Carbon Load Bonding: Trifunctional C Phenyl, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = C L -9 unbonded High ph = C.7 µm.,., µm Selectivity Features: Excellent for retention of very polar, basic, water soluble analytes. Specifically designed and tested for HILIC separations using mobile phases containing high concentrations of organic solvent. Bonding: Unbonded Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 90 C - High ph = 90 C.7 µm.,. µm Selectivity Features: Rugged HILIC stationary phase designed to separate a wide range of very polar compounds. Especially good at separating carbohydrates (saccharides) using high concentrations of organic modifier, elevated temperature and high ph. Compatible with all modern detectors including MS, ELSD, UV and Fluorescence. usp Class no. particle 00 [ XP columns ] Temperature Limits Bonding: Trifunctional C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. 0 mg/ml 00 mg/ml (Protein Separation Technology) BEH00 SEC Acids [ ACQUITY UPLC SYSTem ACCeSSorIeS ] (Protein Separation Technology) (Protein Separation Technology) Mobile Phase: ph Sample Diluent: DMS Si BEH00 C - - DMS + 0 mm NHH - Si BEH00 C8 (Peptide Separation Technology) BEH00 C 00 ph X 00 ph BEH0 C8 (Peptide Separation Technology) BEH00 C8 (Peptide Separation Technology) Linker (Protein Separation Tec hnology) 00.7X mg/ml X X ph 7. Cloxacillin. Dicloxacillin Sample Diluent: DMS ph 7 X Acids 00 mg/ml ph. Mobile Phase: ph. xacillin 00 ph. X ph 7 Acids. xacillin. Cloxacillin. Dicloxacillin 00 Adjusted gradient to keep the same k values 00 X ph BEH0 C8.00 (Peptide.00 Separation Technology) 0.00 to keep the same k values Non-ionic loading ofadjusted ionizablegradient compound can improve peak shape and increase loading Bases. Nordoxepin. Doxepin. Amitriptyline Adjusted gradient to keep the same k values Si X Bases 00 BEH Amide ph 0 Sample Diluent Effect Polar Group CH 00 X Mobile Phase ph Effect 70009EN CH Si Si BEH HILIC - ph 0 Broschüre: X P Columns BEH Phenyl ph range (room Temp.) Low ph = 80 C L - 8 High ph = 0 C.7 µm.,.,, 0 µm Selectivity Features: General purpose column ideally suited for method development due to extreme ph stability and applicability to the broadest range of compound classes. Bonding: Trifunctional C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 0 C L7 - High ph = 0 C.7 µm.,.,, 0 µm Selectivity Features: General purpose column ideally suited for method development due to extreme ph stability and applicability to the broadest range of compound classes. Bonding: Trifunctional C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 0 C L - 7 High ph = C.7 µm.,.,, 0 µm Selectivity Features: Alternate selectivity as compared to straight chain C8, particularly with phenolic analytes. Compatible with 00 aqueous-phase composition. Bonding: Monofunctional embedded polar C8, fully endcapped, bonded to Ethylene Bridged Hybrid (BEH) substrate. Low ph = 80 C L - High ph = 0 C.7 µm.,., µm Selectivity Features: Excellent method development column for alternate selectivity, particularly in regard to polyaromatic compounds. Unique level of ph stability for a Phenyl bonded phase..7x usp Class no. particle BEH Shield RP8 X BEH HILIC ph 7 * pka and Buffer Range determined in aqueous solution. Addition of organic modifiers may change the apparent pka value. **Addition of volume or mass per Liter. Silica-based columns (SunFire Prep and Atlantis Prep) should not be operated at high ph. Please refer to reverse side. Si Acids. xacillin BEH Phenyl. Cloxacillin. Dicloxacillin 00. Amitriptyline 0. ml (88 conc.).0. Triethylamine (TEA) Si BEH C8 BEH Shield RP8 Adjusted gradient to keep the same k values TEA or HCH Bases 0.7 ml (00 conc.). Nordoxepin. Doxepin 0. ml (9 as NH conc.), Pyrrolidine - BEH C8 BEH C8 TEA or HCH 0. ml Formic Acid (88 conc.) ph. NH+ NH HCH HC CHNH+ CHN XBridge Columns BEH C8 TEA or CHCH 0.9 ml Acetic Acid (00 conc.) CHCH CHC- CHN Waters complete family of UPLC and HPLC columns offer scientists the most diverse range of c hromatographic selectivity and particle sizes providing exceptional scalability between UPLC, HPLC and preparative formats. acquity Columns TEA or CHCH. ml TEA (99 conc.). ml TEA (99 conc.) Adjusted to keep the same k values (CHCH)NH+ (CHCHgradient )N 0.0 ml Formic Acid (88 conc.) NHH HCH 0.79 g 0.79 g 0.7 ml Acetic Acid (00 conc.) HCH HC- CHCH 0. (CHCH) NH+ Featuring CSH Technology HSS Technology Featuring BEH Technology Mass loading capacities for peptide purifications depend strongly on the sequence and may be estimated at of listed values. Ammonium Bicarbonate pka Mobile Phase Chemical 70007EN Broschüre: Preparative ptimum Bed Density (BD) Columns Peptide Separation Technology Reasonable flow rates are based on column diameter. Systems will be limited by increasing backpressure with increasing length and decreasing particle size. Mobile Phase Chart Ammonium Formate pka Poster der präparativen BD-Säulen - IS 900:008 - IS 8:00 product (few suppliers are capable of doing this). Understanding and controlling our processes makes the difference in product performance in your laboratory. 0 Waters Corporation. Waters, XBridge, Atlantis, SunFire, BEH Technology, XSelect, CSH, ACQUITY UPLC, UPLC, and The Science of What s Possible are trademarks of Waters Corporation. ipad is a registered trademark of Apple. ctober EN KK-PDF [ ] 0 Waters Corporation. Waters, XBridge, Atlantis, SunFire, BEH Technology, XSelect, CSH, ACQUITY UPLC, UPLC, and The Science of What s Possible are trademarks of Waters Corporation. ipad is a registered trademark of Apple. ctober EN KK-PDF [ ] our processes makes the difference in product performance in your laboratory. Chromatographic Media Primary Manufacturer of To downlaod, go to product (few suppliers are capable of doing this). Understanding and controlling Waters owns and controls every step of the process, from raw materials to final Waters Corporation has been awarded the following registrations and certifications: Waters ipad App. made easy with Column selection - IS 8:00 - IS 900:008 - US Food and Drug Administration registered: cgmp s & Class medical devices Bridging the Performance Gap from Analytical to Prep ptimum Bed Density (BD) Preparative Columns - Calculations for split flow ratios for those using mass spectrometer driven chromatography - Gradient scaling with appropriate flow rate scale-up and predicting volume consumption - Mass load scaling Convenient scale-up tools on the Waters Prep Calculator provide: Scale-up can be carried out using the equations shown above 0. Multiply time difference by flow rate. Prep Calculator 9. Calculate time difference between start of step and 0 point. C8 Bonding: Difunctional C8, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. phases. Less hydrophobic, therefore, less retentive than C8 for most analytes. Selectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low ph mobile.,.,, 0 µm High ph = 0 C L7-8 Low ph = 0 C Bonding: Difunctional C8, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. phases. Ideally suited for purification and impurity profile assays. Selectivity Features: General purpose method development column. Very high loading capacity, particularly for basic analytes in low ph mobile.,.,, 0 µm High ph = 0 C L -8 Low ph = 0 C Si 8. Measure time at 0 of that absorbance difference. 7. Measure absorbance difference between 00 A and 00 B. for an additional minutes.. Program a step change at minutes to 00 B, and collect data. Collect 00 A baseline for minutes. the chromatography. scaling experiment to avoid distorting this volume must be included in planning a volume of a prep column. Compensation for volumes on a small scale, but a fraction of the of every run. T his hold is often several column because it creates an isocratic hold at the start System volume is important in scaling separations System Volume F = F x min. x. ml/min. =.0 ml System Volume: rate on the target instrument.. Use the flow rate in the original method and the intended flow AU 0. 0 mixing and viscosity problems). 0.0 mg/ml uracil as mobile phase B (eliminates non-additive. Use Acetonitrile as mobile phase A, and Acetonitrile with Time =.9 minutes F = F x d d Programmed time =.00 minutes 0.9 minutes -.00 minutes.9 minutes Flow Rate =. ml/min L dd M = MF =x F x x L dd Si C8 particle Si HILIC. Remove column. Recommended Method for Measurement d d C8 Sunfire HPLC Columns. Set UV detector at nm. 0.0 t = t x L L x d d x F F T Si Class no. usp (room Temp.) ph range Limits Temperature Load Carbon (Spherical) particle Size Bonding: Difunctional C8 bonding, fully endcapped, bonded to high purity silica substrate. Selectivity Features: Retention of polar compounds. Designed for compatibility with 00 aqueous mobile phases.,, 0 µm High ph = C L -7 Low ph = C Bonding: Unbonded high purity silica substrate. using mobile phases containing high concentrations of organic solvent. Selectivity Features: Excellent for retention of very polar, basic, water soluble analytes. Specifically designed and tested for HILIC separations, µm High ph = C L - unbonded Low ph = C Bonding: T (C8) bonding and endcapping, bonded to high purity silica substrate. Specifically designed for enhanced retention of polar analytes. Selectivity Features: Retention of polar compounds, compatible with 00 aqueous mobile phases, superior stability under low ph conditions.,, 0 µm High ph = C L -8 Low ph = C