Untersuchungen zur Bedeutung viraler Infektionen bei frei lebenden. und in menschlicher Obhut beflndlichen Greifvögeln und Eulen in

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Lieselotte Stieber
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1 Aus dem Institut für Geflügelkrankheiten der Justus-Liebig-Universität Gießen Betreuer: Prof. E. F. Kaleta Untersuchungen zur Bedeutung viraler Infektionen bei frei lebenden und in menschlicher Obhut beflndlichen Greifvögeln und Eulen in Spanien (und Portugal) sowie Vergleich von Falken- und Tauben- Herpesvirusisolaten geographisch unterschiedlicher Herkunft mittels Restriktionsendonukleasen INAUGURAL-DISSERTATION zur Erlangung des Doktorgrades beim Fachbereich Veterinärmedizin der Justus-Liebig-Universität Gießen Eingereicht von URSULA HÖFLE Tierärztin aus Freiburg im Breisgau (Baden-Württemberg) Gießen 2002

2 Inhaltsverzeichnis INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 2 LITERATURÜBERSICHT Virusnachweise bei Greifvögeln und Eulen Virusinfektionen von aktueller Bedeutung bei Greifvögeln und Eulen Aviäre Paramyxoviren bei Greifvögeln und Eulen Aufbau und Eigenschaften der aviären Paramyxoviren Epidemiologie Klinische Symptome Pathologie Diagnose durch Erregernachweis Diagnose durch Antikörpernachweis Herpesviren bei Greifvögeln und Eulen (Falken-, Acciprid- und Eulen-Herpesvirus) Aufbau und Eigenschaften der aviären Herpesviren Klassifizierung der aviären Herpesviren Epidemiologie Klinische Symptome Pathologie Diagnose durch Erregernachweis Diagnose durch Antikörpernachweis Einsatz von Restriktionsendonukleasen zur Differenzierung von Virusisolaten 32

3 Inhaltsverzeichnis Differenzierung von Herpesviren mittels Restriktionsendonukleasen Auswertung der Restriktionsmuster Aviäre Adenoviren bei Greifvögeln und Eulen Aufbau und Eigenschaften der Aviadenoviren Epidemiologie Klinische Symptome Pathologie Diagnose durch Erregernachweis Diagnose durch Antikörpernachweis Reoviren bei Greifvögeln und Eulen Aufbau und Eigenschaften der Reoviren Epidemiologie Klinische Symptome Pathologie Diagnose durch Erregernachweis Diagnose durch Antikörpernachweis Greifvögel und Eulen Allgemeines zu Taxonomie, Verbreitung und Ernährung Frei lebende Greifvogel- und Eulenarten und Ihre Verbreitung in Spanien Status und Bedeutung der Greifvogel- und Eulen-Populationen in Castilla - La Mancha Situation der Falknerei in Spanien 53

4 Inhaltsverzeichnis 3! 2.4 Aviäre Viren in Spanien Information zur Situation der viralen Infektionen beim Hausgeflügel in Spanien Information zur Situation der viralen Infektionen bei Wildvögeln in Spanien Seroprävalenz verschiedener aviärer Viren unter Wildvögeln in Spanien Fragestellungen der eigenen Untersuchungen 58 3 MATERIAL UND METHODEN Zellkulturmedien, Pufferlösungen und Reagenzien Test- und Referenzviren Antiseren Geräte Zellkulturen Herstellung von Hühner-Embryo-Fibroblasten (HEF)-Kulturen Subkulturen Herstellung von Hühner-Embryo-Leberzell (HELZ)-Kulturen Infektion der Zellkulturen und Virusvermehrung Ausgewachsene Zellkulturen Zellsuspension Zur Herkunft der untersuchten Proben aus Greifvögeln und Eulen Herkunft der Leukozyten-, Tupfer- und Organproben aus Greifvögeln und Eulen Herkunft der Blutplasmaproben aus Greifvögeln und Eulen 73

5 IV Inhaltsverzeichnis Bearbeitung und Lagerung der Proben Bearbeitung der Organproben Bearbeitung der Leukozyten-und Blutplasmaproben Bearbeitung der Kloaken-und Rachentupferproben Virusisolierungen Virusidentifikation Beobachtung des Virus-induzierten zytopathischen Effekts Kultivierung mit Jod-Desoxy-Uridin (IUDR) Chloroformbehandlung Elektronenmikroskopische Untersuchung Hämagglutinations (HA)-Test Virustitration Restriktionsenzymahalyse Herkunft der untersuchten Isolate Extraktion und Reinigung viraler DNA Enzymatische DNA-Spaltung und elektrophoretische Auftrennung Serologische Untersuchungen Hämagglutinationshemmungs (HAH)-Test Virusneutralisations (VN)-Test Statistische Analyse 95

6 Inhaltsverzeichnis 4 ERGEBNISSE Virusisolation Eigenschaften der 11 Virusisolate Art und Auftreten eines zytopathischen Effekts in HEF-Kulturen IUDR-Empfindlichkeit Chloroformbehandlung Hämagglutinations-Test Elektronenmikroskopische Untersuchung Weitere Charakterisierung des Isolats 262/ Einordnung der untersuchten Isolate Vergleich von Falken- und Tauben-Herpesviren von geographisch unterschiedlicher Herkunft mittels Restriktionsenzymanalyse Ergebnisse der Vorversuche Bandenmuster nach der Restriktionsendonukleasenspaltung und elektrophoretischen Auftrennung der Fragmente Ergebnisse der serologischen Untersuchungen apmv-l,-2und apmv Artspezifische Unterschiede Altersabhängige Unterschiede Geschlechtsabhängige Unterschiede Unterschiede hinsichtlich geographischer Herkunft Unterschiede im Zusammenhang mit der Lebensform der Vögel 142

7 VI Inhaltsverzeichnis Unterschiede im Zusammenhang mit dem Gesundheitszustand der Vögel Jahreszeitlich bedingte Unterschiede Aviäres Paramyxovirus 2 (apmv-2) Aviäres Paramyxovirus 3 (apmv-3) Vergleich der Antikörpertiter der apmv-1, -2 und -3 positiven Vögel Falken-Herpesvirus (FHV) Artspezifische Unterschiede Altersspezifische und weitere Unterschiede Eulen-Herpesvirus (OHV) Artenverteilung der untersuchten und der seropositiven Proben Altersstruktur der untersuchten und der seropositiven Vögel Lebensform der untersuchten und der seropositiven Tiere Gesundheitszustand der untersuchten und der seropositiven Vögel Aviadenovirus Serotyp DISKUSSION Virusisolationen Zusammenhang der Ergebnisse mit der Herkunft der untersuchten Tiere Bedeutung der isolierten Viren Aviäres Paramyxovirus Herpesviren Reoviren Restriktionsendonukleasenanalyse 165

8 Inhaltsverzeichnis Relevanz der Analyse mehrerer Isolate geographisch unterschiedlicher Herkunft Diskussion des Vergleichs der untersuchten Isolate Serologische Untersuchungen Interesse vergleichender serologischer Untersuchungen Aviäres Paramyxovirus 1 oder NDV Aviäres Paramyxovirus Aviäres Paramyxovirus Kreuzreaktionen zwischen apmv-1, -2 und Falken-Herpesvirus (FHV) Eulen-Herpesvirus (OHV) Aviäres Adenovirus Zur Bedeutung viraler Infektionen bei frei lebenden und in menschlicher Obhut befindlichen Greifvögeln und Eulen in Zentralspanien ZUSAMMENFASSUNG SUMMARY RESUMEN LITERATURVERZEICHNIS VERZEICHNIS DER VERWENDETEN ABKÜRZUNGEN ANHANG 236

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