Nachweis zirkulierender Tumorzellen im Blut und Möglichkeiten der Therapieoptimierung
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- Birgit Kurzmann
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1 7. NZW Süd, Onkologisch-Pharmazeutischer Fachkongress Nachweis zirkulierender Tumorzellen im Blut und Möglichkeiten der Therapieoptimierung Ravensburg, September 2008 Dr. Eckart Schnakenberg
2 Konventionelle Tumordiagnostik Allgemeinzustand Laborparameter, biochemisch Bild gebende Verfahren histologische Diagnostik: Primärtumor, Lymphknoten Tumortherapie anhand biochemischer Tumormarker und Bild gebenden Verfahren
3 Monitoring Tumortherapie Bild gebende Verfahren Messung biochemischer Tumormarker Ausnahmen: zytogenetisches bzw. molekulargenetisches Monitoring bei Leukämien Nachweis disseminierter Zellen im Knochenmark
4 Verfahren zum Nachweis zirkulierender Tumorzellen im peripheren Blut Immunicon (FDA Zulassung): Kombination aus AK-basierter Tumorzellen Anreicherung und Nachweis von Zelloberflächenstrukturen AdnaGen (im FDA Zulassungsprozess): Kombination aus AK-basierter Tumorzellen Anreicherung und molekulargenetischer Nachweis spezifischer Tumorgene
5 Progression Zirkulierende Tumorzellen Progressionsfreies Intervall (%) Monate Monate Wochen Smerage JB, Hayes DF: The measurement and therapeutic implications of circulating tumour cells in breast cancer. Br J Cancer. 2006; 94 (1): 8-12.
6 Gesamtüberleben Zirkulierende Tumorzellen Gesamtüberlebensrate (%) Monate Monate Wochen Smerage JB, Hayes DF: The measurement and therapeutic implications of circulating tumour cells in breast cancer. Br J Cancer. 2006; 94 (1): 8-12.
7 Vor-Nach-Operation
8 Staging Zirkulierende Tumorzellen Anzahl der im Blut nachgewiesenen Marker AJCC Stadium Patienten (alle) I II III IV Total Taback B, Chan AD, Kuo CT, Bostick PJ, Wang HJ, Giuliano HJ, Hoon DS: Detection of occult metastatic breast cancer cells in blood by a multimolecular marker assay: correlation with clinical stage of disease. Cancer Res. 2001; 61 (24):
9 Zirkulierende Tumorzellen beim Mamma Karzinom Patienten: 100 Staging: I,II, IIIA Methode: RT-PCR Preselection: Ficoll Marker: CK-19 Giatromanolaki A et al. (2004) Int J Cancer 108,
10 Zirkulierende Tumorzellen bei Mamma Ca. - Erhöhtes Rezidivrisiko - Patienten: n=161, Staging: I-II, Preselection: Ficoll, Methode: RT-PCR, Marker: CK 19 CTC (+) <3 Lymphknoten CTC (-) Chemotherapie CMF: Ciclophosphamid, Methotrexat, 5-FU, FEC: 5-FU, Epirubicin, Ciclophosphamid, TAC: Docetaxel, Doxorubicin, Ciclophosphamid CTC (+) >3 Lymphknoten CTC (+) Chemotherapie Xenidis N. et al. (2003) Ann Oncol, 14,
11 Verfahren zum Nachweis zirkulierender Tumozellen
12 Prinzip der Analyse von Tumorzellen 1. Tumorzellenanreicherung
13 Prinzip der Analyse von Tumorzellen Ladder (-) RT control (-) PCR control Blood 10 cells Blood 10 cells 2. Nachweis der Expression tumorspezifischer Gene Without With Selection
14 Schematische Übersicht Breast Select Separation Cell lysis Incubation RNA BreastCancerSelect RNA RNA preparation with oligo-dt magnetic beads RNA RT / PCR DNA Blood cells Tumor cells Antibodycoated magnetic beads BreastCancerDetect
15 Optimiertes Antikörper-Gemisch
16 Analytische Sensitivität
17 Heterogenität der Tumormarker Zellkulturen Intra-Patient Variabilität
18 Inter-Patient Variabilität: Mamma Ca. Patienten
19 Zeitnahe Therapieeffekte pt1c, N2a, M0; ER (IRS)2, PR (IRS)2; T: Epirubicin, Cyclophosphamid, Radiatio, Herceptin GA733-2 CA15-3 Her2
20 Therapieintervention Navelbine Taxotere Positive control Ga733-2 MUC1 Her2
21 Verlauf unter endokriner Erstlinien-Therapie ET Standard Ga Muc1 Her2 Aktin
22 Verlauf unter endokriner Zweitlinien- Therapie UK; GA733-2 Muc-1 Her-2 β-actin
23 Verlauf unter zytostatischer Therapie IJ * GA733-2 Muc-1 Her-2 β-actin
24 Verlauf unter zytostatischertherapie SB; GA733-2 Muc-1 Her-2 β-actin
25 Verlauf unter zytostatischer Therapie BK; : M1(hep, pul, oss); ER+; PR+; Her2+: T:Anthracyclin GA733-2 Muc-1 Her-2 β-actin
26 Perspektiven der Therapieoptimierung: Einsatz von Tyrosinkinasen Änderung der Signaltransduktion
27 Therapieoptimierung mittels TK Inhibitoren Phosphorylierung (reversible Übertragung einer Phosphatgruppe auf eine Aminosäuresäure) führt zur Aktivierung bzw. Inaktivierung eines Proteins Veränderung der Signalübertragung mit dem Ziel der Apoptose
28 Philadelphia-Chromosom
29 Zytogenetik vs. Molekulare Zytogenetik 95% der CML Patienten 25% der ALL Patienten 5% der kindlichen ALL Patienten Quelle:
30 Variable bcr/abl Transkripte RT PCR
31 Therapiekontrolle mit bcr abl Therapiemonitoring mittels RT PCR Messung unterhalb der hämatologischen und zytogenetischen Vollremission möglich Gute Prognose bei Abnahme der Tumorlast innerhalb eines Jahres um Faktor 1000 (bei first line Glivec) Frühzeitige Erkennung eines Rezidivs Charakterisierung von bcr/abl Varianten möglich
32 Wirkstoffe bcr abl Imatinib (Metabolismus via CYP450: Substrat von CYP3A4, Inhibitor des CYP2D6, CYP2C9; CAVE bei gleichzeitiger Gabe von CYP3A4 Induktoren: Therapieversagen möglich!) Dasatinib: stärkere Hemmung der TK, erste Therapieerfolge bei Imatinib Resistenz (seit 06/2006) Nilotinib: erkennt 32/33 bcr/abl Mutationen bcr/abl T315I (Threonin/Isoleucin) Mutation nicht therapierbar
33 Nächste Generation in der Tumortherapie: Kombination Zirkulierender Tumorzellen mit Pharmakogenetik
34 Tamoxifentherapie und CYP2D6 Varianten CYP2D6 Genotyp (n=80) CYP2D6 Genotyp normal (n=24) N-desmethyltamoxifen 78,0 nm normal 43,1 nm intermediate 20,0 nm poor N-desmethyltamoxifen 91,0 nm ohne Paroxetin 38,6 nm mit Paroxetin 1. Monat 4. Monat Tamoxifen 1. Monat 4. Monat Tamoxifen + Paroxetin Ref.: Jin et al., J Natl Cancer Inst Jan 5;97(1):30-9
35 Therapeutischer Erfolg mit Tamoxifen in Abhängigkeit von CYP2D6
36 Bestimmung von EGFR Mutationen in zirkulierenden Tumorzellen der therapeutische Erfolg bei Therapie mit Gefitinib ist abhängig von somatischen Mutationen im Tumorgewebe, die mittels Sequenzierung nachweisbar sind Rezeptor- Lig.-domaine Furin-artige Domaine Rezeptor- Lig. Domaine Catalytin Extrazelluläre Domaine Transmembran Region G719C del E746-A750 Intrazelluläre Kinase-domaine Y1068 L858R L861 Q del L747-A750insS del L747-A752insS STAT3 MAPK AKT
37 Progressionsfreies Intervall bei EGFR Mutation
38 Ziel: Individualisierte Tumortherapie
39 7. NZW Süd, Onkologisch-Pharmazeutischer Fachkongress Nachweis zirkulierender Tumorzellen im Blut und Möglichkeiten der Therapieoptimierung Ravensburg, September 2008 Dr. Eckart Schnakenberg
Nachweis zirkulierender Tumorzellen im Blut und Möglichkeiten der Therapieoptimierung
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