CAMPUS GROSSHADERN MED. KLINIK UND POLIKLINIK III DIREKTOR: PROF. DR. W. HIDDEMANN LABOR FÜR LEUKÄMIEDIAGNOSTIK
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1 CAMPUS GROSSHADERN MED. KLINIK UND POLIKLINIK III DIREKTOR: PROF. DR. W. HIDDEMANN LABOR FÜR LEUKÄMIEDIAGNOSTIK FB Versin: 1.0 Inkraftsetzung: Stand: Zytmrphlgie Die Zytmrphlgie ist die Basisdiagnstik bei dem Verdacht auf eine hämatlgische Erkrankung. Sie stellt die Weichen für den sinnvllen Einsatz vn speziellen Zusatzuntersuchungen wie Immunphäntypisierung, Zytgenetik und Mlekulargenetik. Entsprechend der Fragestellung und Verdachtsdiagnse kmmen die flgenden Methden zum Einsatz: panptische Färbung nach Pappenheim (Standartfärbung der Hämatlgie) Zytchemie Perxidase Esterase Eisenfärbung Tluidinblau Mnnuklese-Schnelltest Krankheitsbilder: Akute Leukämien (ALL/AML) Chrnische Leukämien (MPN) Myeldysplastische Syndrme (MDS) Lymphme (M. Hdgkin, Nn-Hdgkin-Lymphme, DLBCL, multiples Myelm) Andere hämatlgische Erkrankungen (Perniziöse Anämie, Ewing-Sarkm, etc.) Karzinsen/Atypien in Ergüssen/Liqur Veränderungen der Erythrzyten Untersuchbare Materialien: Knchenmark (EDTA) Peripheres Blut (EDTA) Körperhöhlenergüsse (nativ): Ascites Pleura Perikard Liqur (nativ) Erstellung: Prüfung: Freigabe: Zientara, Ewelina Schneider, Stephanie Dr Schneider, Stephanie Dr. Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J Seite 1 vn 8
2 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 2 vn 8 Immunphäntypisierung Die immunphäntypische Diagnstik hat besndere Relevanz bei der Klassifikatin und der Verlaufsbeurteilung vn Leukämien und Lymphmen. Ein weiterer derzeit nch überwiegend wissenschaftlicher Anwendungsbereich ist die Bestimmung des Leukämieassziierten-Immunphäntyps (LAIP), der den Nachweis und die Quantifizierung der minimalen Resterkrankung (MRD) bei Patienten mit AML erlaubt. Mittels Multiclr-Durchflusszytmetrie kann die Expressin mehrerer Antigene auf einzelnen Zellen durch die gleichzeitige Erfassung vn bis zu 10 Flureszenzsignalen untersucht warden. Typische Indikatinen zur Durchführung einer immunphäntypischen Diagnstik sind: Abgrenzung lymphatische/myelische AL/MPAL Identifikatin der Linienzugehörigkeit und Lymphm-Subentität (z.b. CLL vs. MCL vs. FL) Nachweis vn malignen Zellen in Liqur, Pleura- swie Aszites der Perikarderguss Identifikatin vn therapierelevanten Antigenen (z.b. CD20-Expressin bei ALL, MM) Identifikatin vn prgnserelevanten Markern (z.b. ZAP70-Expressin bei CLL) TCR-Analyse (TCR Vß-Repertire Kit) Identifikatin vn Markern zur Bestimmung einer minimalen Resterkrankung (minimal residual disease, MRD) Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
3 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 3 vn 8 Klassische und mlekulare Zytgenetik Die klassische und mlekulare Zytgenetik (FISH) wird kmmisarisch vn Frau Dr. Stephanie Schneider in Zusammenarbeit mit dem Institut für Humangenetik (Prf. Dr. O. Steinlein) des KUM betreut. Die Chrmsmenanalyse ist heutzutage ein wichtiger Bestandteil der initialen Diagnstik bei allen hämatlgischen Krebserkrankungen. Die Identifikatin vn Veränderungen der Chrmsmen ermöglicht eine prgnstische Einteilung dieser Erkrankungen. Die klassische Zytgenetik hat bis heute den größten Beitrag zum Verständnis der genetischen Grundlage der Leukämien erbracht und die mlekulargenetische Diagnstik und Frschung auf diesem Gebiet bestimmt. Die Untersuchungen der Chrmsmen werden bei Bedarf durch FISH-Analysen ergänzt. In unserem Labr steht auch die Methde der Multi-Clr FISH zur Verfügung. Diese erlaubt es, jedes Chrmsm mit einer eigenen Farbe darzustellen. Klassische Chrmsmenanalyse* Eine Chrmsmenanalyse kann bei flgenden Erkrankungen durchgeführt werden: akute myelische Leukamie (AML) akute lymphatische Leukämie (ALL) mixed phentype acute leukemia (MPAL) Blastenkrise einer CML myeldysplatische Neplasien (MDS, CMML) myelprliferative Neplasien (MPN: CML, OMF, PV) hyperesinphiles Syndrm (HES) chrnische lymphatische Leukämie (CLL, nur auf Anfrage) PHA-stimulierte Lymphzytenkulturen bei z.b. V.a. heriditäre hämatlgische Erkrankungen Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
4 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 4 vn 8 Mlekulare Zytgenetik (FISH)* Die meisten der unten aufgeführten Snden werden bei den jeweiligen Erkrankungen standardmäßig eingesetzt, viele andere nur bei Bedarf der auf Anfrage. Chimärismus-Bestimmung nach allgener gegengeschlechtlicher Transplantatin X/Y FISH Akute Lymphatische Leukämie (ALL) CRLF2 Rearrangements (Xp22.33) P2RY8-Deletin (Xp22.33) 8q24 (MYC) Rearrangements Translkatin t(9;22) (BCR-ABL1) CDKN2A Deletin (p16) (9p21) KMT2A (MLL) Rearrangements (11q23) ETV6 (TEL) Rearrangement (12p13) T-Zell Rezeptr Alpha/Delta Rearrangement (14q11) Akute Myelische Leukämie (AML) MECOM (EVI1) Rearrangement (3q26) Mnsmie 5 5q31 Deletin Mnsmie 7 7q31 Deletin Trismie 8 Translkatin t(8;21) (RUNX1-RUNX1T1) 11q23 (KMT2A) Rearrangements Translkatin t(15;17) (PML-RARA) Inversin inv(16) / t(16;16) (MYH11-CBFB) TP53 Deletin (17p13) Myeldysplastisches Syndrm (MDS) MECOM (EVI1) Rearrangement (3q26) Mnsmie 5 Deletin 5q31 Mnsmie 7 Deletin 7q31 Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
5 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 5 vn 8 Trismie 8 TP53 Deletin (17p13) Mnsmie 20 Deletin 20q Chrnisch Lymphatische Leukämie (CLL) BCL6 Rearrangements (3q27) Deletin 6q21 MYC Rearrangements (8q24) ATM Deletin (11q22.3) Trismie 12 Deletin 13q (13q14.3) TP53 Deletin (17p13) Chrnisch Myelische Leukämie (CML) Translkatin t(9;22) (BCR-ABL1) Myelprliferative Neplasien (MPN) Translkatin t(9;22) (BCR-ABL1) Myelide und lymphide Neplasien mit Esinphilie Deletin 4q (FIP1L1-PDGFRA) PDGFRB Rearrangements (5q33) FGFR1 Rearrangements (8p12) Plasmzytm/MGUS CKS1B Zugewinn (1q21) CDKN2C Deletin (1p32.3) IGH Rearrangements (14q32) Translkatin t(4;14)(fgfr3/mmset-igh) Translkatin t(11;14)(ccnd1-igh) Translkatin t(14;16)(igh-maf) Deletin 17p13 (TP53-Deletin) Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
6 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 6 vn 8 Nn Hdgkin Lymphme der B-Zell-Reihe (B-NHL) Fllikuläres Lymphm FL Translkatin t(14;18) (IGH-BCL2) Mantelzell Lymphm MCL Translkatin t(11;14) (CCND1-IGH) Diffus grßzelliges B-Zell Lymphm DLBCL Translkatin t(14;18) (IGH-BCL2) Deletin 17p13 (TP53-Deletin) BCL6 Rearrangements (3q27) Marginalznen Lymphm vm MALT-Typ Translkatin t(14;18) (IGH-MALT1) Burkitt und Burkitt-like Lymphme Translkatin t(8;14) (MYC-IGH) Translkatin t(2;8) (MYC-IGL) Translkatin t(8;21) (MYC-IGK) Nn Hdgkin Lymphme der T-Zell-Reihe (T-NHL) T-Zell Rezeptr Alpha/Delta Rearrangement (14q11) Deletinen 13q14.3 Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
7 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 7 vn 8 Mlekulargenetik Die Mlekulargenetik ist heute ein unverzichtbarer Bestandteil in der Diagnstik bösartiger Erkrankungen des blutbildenden Systems. Sie stellt eine wichtige Ergänzung der Chrmsmenanalyse dar. Eine ständig zunehmende Anzahl vn prgnstisch und therapeutisch relevanten genetischen Veränderungen sind ausschließlich mittels mlekulargenetischer Methden identifizierbar. Bei vielen Erkrankungen kann die Bestimmung der minimalen Resterkrankung (MRD) mit einer hhen Sensitivität ein wichtiger Wegweiser bei der Therapiesteuerung sein. Ein grßer Frschungsschwerpunkt stellen die Etablierung und Validierung neuer diagnstischer Methden dar. Dazu wurden in den letzten Jahren neue Technlgien etabliert die es erlauben den genetischen Cde vn Tumrzellen zu entschlüsseln. Hiervn erhfft man sich neue Erkenntnisse zur Bekämpfung vn Krebserkrankungen. Akute Lymphatische Leukämie (ALL) Translkatin t(9;22)(bcr-abl1) ABL-Sequenzierung (bei Tyrsinkinase Hemmer-Resistenz) 11q23 (KMT2A) Rearrangements: KMT2A-AFF1, - MLLT4, -MLLT3, -MLLT10, -ELL, -MLLT1 Akute Myelische Leukämie (AML) Translkatin t(9;22)(bcr-abl1) 11q23 (KMT2A) Rearrangements: KMT2A-AFF1, - MLLT4, -MLLT3, -MLLT10, -ELL, -MLLT1 KMT2A (MLL)-partielle Tandemduplikatin MLL-PTD Translkatin t(8;21)(runx1-runx1t1) Translkatin t(15;17)(pml-rara) Inversin inv(16)(myh11-cbfb) NPM1-Mutatinen NPM1-Mutatin Typ A,B und D quantitativ* C/EBPA-Mutatinen FLT3-interne Tandemduplikatin (ITD) # FLT3-Thyrsinkinase Dmäne (TKD) KIT-Mutatin D816V* Translkatin t(6;9)(dek-nup214)* Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
8 KLINIKUM DER UNIVERSITÄT MÜNCHEN Seite 8 vn 8 Translkatin t(6;10)(calm-af10)* # Die interne Tandemduplikatin vn FLT3 (FLT3-ITD) muss aus patentrechtlichen Gründen bei der Fa. LabPMM durchgeführt werden. Chrnisch Lymphatische Leukämie (CLL) IgVH - Mutatinsstatus mit der Möglichkeit zur MRD-Diagnstik (nur auf Anfrage) TP53 - Mutatinsanalyse Chrnisch Myelische Leukämie (CML) Translkatin t(9;22)(bcr-abl1) ABL1-Sequenzierung (bei Tyrsinkinase-Resistenz)* Myelprliferative Neplasien (MPN) Translkatin t(9;22)(bcr-abl1) JAK2-Mutatin V617F (PV,ET,OMF)* Deletin 4q (FIP1L1-PDGFR) (Hyperesinphilensyndrm)* KIT-Mutatin D816V (Mastzytse)* Analyse des Calmdulin-Rezeptrs mittels Fragmentanalyse* W515L, W515K und W515A im Myelprliferativen-Leukämie-Virus-Onkgen (MPL) (Thrmbpetin Rezeptr) mittels Sequenzanalyse* Angaben zur Messunsicherheit aller Untersuchungen können auf Anfrage zur Verfügung gestellt werden. Dkumenten ID:ANVDMCMHR44J
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